발달 심장 독성 평가에 강력한 도구로 닭 배아를 사용

Summary

닭 배아는 고전적인 발달 모델로서, 다양한 환경 오염 물질에 노출 된 후 발달 심장 독성을 평가하기 위해 실험실에서 사용됩니다. 확립된 노출 방법 및 형태학적/기능 적 평가 방법은 이 원고에 설명되어 있습니다.

Abstract

닭 배아는 발달 연구의 고전적인 모델입니다. 닭 배아의 발달 도중, 심장 발달의 시간 창은 잘 정의되고, 다중 방법을 통해 정확하고 적시 노출을 달성하기 위하여 상대적으로 쉽습니다. 더욱이, 닭 배아에 있는 심장 발달의 과정은 포유동물과 유사합니다, 또한 발달 심장 독성의 평가에 있는 귀중한 대안 모형을 만드는 4 개의 실내 심장귀착되는 귀착됩니다. 우리의 실험실에서, 닭 배아 모형은 일상적으로 당 및 polyfluoroalkyl 물질 (PFAS), 미립자 물질 (PMs), 디젤 배기 (DE) 및 나노 물질을 포함하여 각종 환경 오염 물질에 노출된 후에 발달 심폐제의 평가에 일상적으로 이용됩니다. 노출 시간은 개발 의 시작부터 (배아 일 0, ED0)부터 부화 전 날까지필요에 따라 자유롭게 선택할 수 있습니다. 주요 노출 방법은 공기 세포 주입, 직접 미세 주입 및 공기 세포 흡입 (원래 우리의 실험실에서 개발), 현재 사용 가능한 종점은 심장 기능 (전기 장학), 형태학 (조직학적 평가) 및 분자 생물학적 평가 (면역 조직 화학, qRT-PCR, 서쪽 블로팅 등)를 포함한다. 물론, 닭 배아 모델은 항체의 제한된 가용성과 같은 자체 제한이 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 더 많은 실험실이 모델을 활용 하기 시작, 그것은 개발 심장 독성의 연구에 중요 한 기여를 하는 데 사용할 수 있습니다.

Introduction

닭 배아는 200 년 이상 사용 된 고전적인 발달^{모델입니다 1.} 닭 배아 모델은 전통적인 모델에 비해 다양한 장점을 가지고 있습니다. 우선, 70여 년 전, 햄버거-해밀턴 스테이징 가이드^2에서닭배아의 정상적인 발달이 매우 명확하게 설명되었으며, 닭배아 발달 시 총 46단계가 정확한 시간과 형태학적 특성으로 정의되어 비정상적인 발달의 검출을 용이하게 했습니다. 또한, 닭 배아 모델은 상대적으로 저렴한 비용과 중복수량, 비교적 정확한 노출량 조절, 쉘 내의 독립적이고 폐쇄된 시스템, 개발 배아의 간편한 조작 등 다른 특징을 가지고 있으며, 이 모든 것들은 강력한 독성 평가 모델로 사용될 수 있는 잠재력을 보장한다.

심장 독성에서 닭 배아는 포유류 심장과 비슷하지만 두꺼운 벽으로 4 개의 챔버 심장을 특징으로하여 쉽게 형태학적 평가를 할 수 있습니다. 추가적으로, 닭 배아는 포유류 모형에서 가능하지 않은 발달 흡입 노출을 허용합니다: 발달의 후반 단계에서, 닭 태아는 외부 호흡으로 내부 호흡에서 (폐를 통해 산소를 얻는); 후자는 배아가 부리를 사용하여 공기 세포막을 관통하고 공기^3을호흡하기 시작하여 공기 세포를 미니 ....

Protocol

설명된 모든 절차는 칭다오 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 우리 실험실에서 계란은 두 개의 인큐베이터에서 배양되었습니다. 계란은 인큐베이터에서 똑바로 들고 무작위로 선반에 놓였습니다. 계란에 대한 잠복 조건은 다음과 같이: 인큐베이션 온도는 37.9°C에서 시작되고, 잠복이 진행됨에 따라 37.1°C로 점진적으로 감소; 습도는 50%에서 시작하여 점차 70%로 증가했습니다.

1. 노출 방법

참고: 닭 배아에 환경 오염 물질의 노출은 여러 가지 방법으로 달성 될 수있다. 이 섹션에서는 정기적으로 사용되는 세 가지 메서드가 자세히 설명되어 있습니다.

1. 공기 세포 주입(그림 1)
   참고: 이것은 닭 배아^4,5,6에대한 고전적인 노출 방법이며, 광범위한 재료에 적합하며, 개발 의 시작부터 매우 넓은 시간 창에서 수행 될 수있다 (배아 일 제로, ED0) 해치 (ED20) 전날까지 모든 방법을. 해바라기 기름은 차량으로 ....

Results

노출 결과
공기 세포 주입
공기 세포 주입은 효과적으로 다양한 에이전트에 개발 닭 배아를 노출 할 수 있습니다, 이는 이후 배아 / 부화 닭의 수집 샘플 (혈청, 조직 등)에서 검출 될 수있다. 다음은 퍼플루오로옥타노산(PFOA)이 공기세포를 주입하고 혈청 PFOA 농도가 그 후 초고성능 액체 크로마토그래피 질량 분석법으로 결정된 예입니다. 혈청 농도는 주입된 투여량에 대응하여 이 절차의 효과를나타낸다(도 6).

미세 주입
미세 주입은 내부 막을 효과적으로 관통하지 않을 수 있는 제제또는 렌티바이러스와 같은 짧은 작용 기간으로 개발 중인 배아를 노출시킬 수 있다. 여기에 렌티바이러스가 배아일 2일째에 주입된 다음 배아일 15배의 심장부에서 상당한 녹색 형광이 관찰된 예로, 렌티바이러스 트랜스페션의 효과를나타낸다(도 7).

Discussion

닭 배아는 200 년 동안 발달 연구에서 고전적인 모델이었다^1. 본 원고에 제시된 당사의 방법은 퍼플루오로옥타노산, 미립자 물질 및 디젤 배기^기간을포함한 여러 환경 오염 물질의 평가에 사용되어^{5,7,8,9,10,11,12.} 이러한 방법으로, 발달 심장 독성비용 효과적이고 명확하게 표시되었다. 게다가, 다른 화합물로 닭 배아를 노출하고 잠재적인 발달 심폐소독을 평가하는 것은 어렵지 않습니다.

상기 공기세포주입.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4 % 인산염 완충 포름 알데히드 고정 성	Biosharp, Hefei, China	참조 : BL539A
75 % 에탄올	Guoyao, 상하이, 중국	CAS : 64-17-5
생체 신호 모니터 BL-420E +	Taimeng, Chengdu, China	BL-420E + < / sup>
Candling lamp	Zhenwei, Dezhou, China	WZ-001
일회용 주사기	Zhiyu, Jiangsu, China
계란 인큐베이터	Keyu, Dezhou, China	KFX
Electrical balance	OHAUS, Shanghai, China	AR 224CN
Electro-thermal incubator	Shenxian, Shanghai, China	DHP-9022
에탄올 절대	Guoyao, Shanghai, China	CAS : 64-17-5
비옥 한 닭고기 달걀	Jianuo, Jining, 중국
Hematoxylin 및 Eosin 염색 키트	Beyotime, Bejing, 중국	C0105
조직학 파라핀	알라딘, 상하이, 중국	P100928-500g	용융점 52 ~ 54 °C; C
조직학 파라핀	알라딘, 상하이, 중국	P100936-500g	용융점 62 ~ 64 °C; C
IV 카테터	KDL, 저장성, 중국		카테터는 부드럽고 플라스틱이어야 합니다.
Lentivirus	Genechem, Shanghai, China		렌티바이러스는 Genechem에서 개별적으로 설계/합성했습니다.
Masson의 삼색 염색 키트	Solarbio, 베이징, 중국	G1340
금속 프로브	Jinuotai, 베이징, 중국
Microinjector (5 uL)	Anting, Shanghai, China
현미경	CAIKON, 상하이, 중국	XSP-500
Microtome	Leica, Germany	HistoCore BIOCUT
Microtome 블레이드	Leica, 독일	Leica 819
Pentobarbitual sodium	Yitai Technology Co. Ltd.,  우한, 중국	CAS : 57-33-0
Pipetter (10ul)	Sartorius, 독일
포비돈 요오드화물	Longyuquan, Taian, 중국
가위	Anqisheng, 쑤저우, 중국
멸균 식염수	Kelun, Chengdu, 중국
해바라기 기름	Mighty Jiage, Jiangsu, China		인간적인 소비를 위한 어떤 commerical 해바라기 기름든지 테이프 M&를 작동해야 합니다
	; G, 상하이, 중국
Tedlar PVF 가방 (5L)	Delin, 다롄, 중국
소용돌이 믹서	SCILOGEX, 록키 힐, 코네티컷, 미국	MX-F
크실렌	Guoyao, 상하이, 중국	CAS : 1330-20-7