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방법 논문

외상성 뇌 손상 다음 성인 쥐에서 공간 작업 메모리를 평가 하기 위한 메트릭 테스트

3.2K 조회수

DOI:

10.3791/62291

2021년 5월 7일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

외상성 뇌 손상 (TBI) 일반적으로 메모리 손상과 관련 된. 여기서는 메트릭 작업을 통해 TBI 후 공간 작업 메모리를 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 메트릭 테스트는 TBI 후 공간 작업 메모리 장애를 연구하는 유용한 도구입니다.

초록

감각에 장애, 단기, 그리고 장기 메모리 외상성 뇌 손상 후 일반적인 부작용 (TBI). 인간 연구의 윤리적 한계로 인해 동물 모델은 치료 방법을 테스트하고 조건의 메커니즘 및 관련 합병증을 연구하기 위해 적절한 대안을 제공합니다. 실험설치류 모델은 접근성, 저렴한 비용, 재현성 및 검증된 접근 법으로 인해 역사적으로 가장 널리 사용되었습니다. 서로 다양한 거리와 각도에서 두 오브젝트의 배치를 기억하는 기능을 테스트하는 메트릭 테스트는 TBI 후 공간 작업 메모리(SWM)에서 손상을 연구하는 기술입니다. 메트릭 작업의 중요한 장점은 동적 관찰, 저비용, 재현성, 상대적 구현 용이성 및 낮은 응력 환경의 가능성을 포함합니다. 여기서는 TBI 후 성인 쥐에서 SWM의 손상을 측정하는 메트릭 테스트 프로토콜을 제시합니다. 이 시험은 뇌 기능의 생리학 및 병리 생리학을 보다 효과적으로 평가하는 실행 가능한 방법을 제공합니다.

서론

중등도 외상성 뇌손상(TBI) 후주의, 집행기능, 특정 기억력 결핍 등의 신경학적 결핍의 유병률은 50%이상1,2,3,4,5,6,7,8이다. TBI는 공간 단기, 장기 및 작업 메모리9에심각한 손상을 초래할 수 있습니다. 이러한 메모리 장애TBI의 설치류 모델에서 관찰 되었습니다. 설치류 모델은 메모리를 테스트하는 기술의 개발을 가능하게하여 TBI가 신경 메모리 시스템의 메모리 처리에 미치는 영향에 대한 심층적인 검사를 가능하게 했습니다.

각각 토폴로지 및 메트릭 공간 정보 처리와 관련된 두 가지 테스트는 공간 작업 메모리(SWM)를 측정하는 데 도움이 됩니다. 토폴로지 테스트는 개체 주변의 환경 공간 또는 관련 연결 공간 또는....

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프로토콜

이 실험은 헬싱키와 도쿄 선언의 권고와 유럽 공동체의 실험 동물 사용에 대한 지침에 따라 수행되었습니다. 실험은 네게브의 벤 구리온 대학의 동물 관리 위원회에 의해 승인되었다. 프로토콜 타임라인은 그림 1에설명되어 있습니다.

1. 외과 적 절차 및 유체 타악기 TBI

  1. 1 ±2-1°C의 실온에 수용된 남성과 여성 성인 Sprague-Dawley 쥐를 선택하고 습도는 40%-60%이며 12-12h의 밝은 어두운 주기를 선택합니다.
  2. 차우와 물 광고 리비툼으로음식을 제공합니다. 아침 시간, 즉, 6:00 a.m 및 12:00 p.m 사이에 실험을 수행합니다.
  3. 실험 시작 전에 대조군과 TBI 그룹에 대한 기준선 신경 평가를 수행합니다(아래 섹션 2 참조).
  4. 흡입된 4% 이소플루란으로 쥐를 마취를 위한 1.5%를 마취를 마취합니다. 자극제에 대한 응답으로 페달 반사 또는 움직임을 테스트하여 쥐가 고정되었는지 확인합니다.
    참고: 마취를 위해 연속 이소플루란 관리 시스템을 사용합니다. 무균 조건에서 모든 절차를 수행합니다.
  5. 이전에 설명된 바와 같이 기생유체 타악기 손상을

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결과

그룹 간의 비교의 중요성은 Mann-Whitney 테스트를 사용하여 결정되었습니다. 결과의 통계적 유의성은 P < 0.05에서 고려되었다, 통계적으로 높은 관련성은 P < 0.01에서 측정되었다.

결과는 내정간섭 의 앞에 모든 단 과 TBI 후에 28 일 사이 NSS에 있는 다름을 보여주지 않았습니다. 각 그룹은 12명의 암컷 또는 12개의 수컷 쥐로 구성되었습니다. TBI가 표 1에제시된 후 48h를 획득한 NSS 점수. 부상 후 28일에 상당한 신경 적자를 보인 TBI 단에서 쥐는 실험에서 제외되었습니다. 데이터는 카운트로 측정되고 중앙값 ± 범위로 표시됩니다.

sham 운영 대조군은 연구 첫날 (NSS-0)의 첫 날 이후 48 h에서 신경 학적 적자를 나타내지 않았습니다. TBI 후 48 h에서 신경 적자는 남성 sham 조작 쥐에 대 한 보다 남성 TBI 쥐에 대 한 중요 한 더 큰.......

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토론

메트릭 공간 정보 프로세스를 구체적으로 타겟팅하여 이 메트릭 테스트는 TBI 후 메모리 결핍을 이해하는 데 필요한 도구를 제공합니다. 이 백서에 제시된 프로토콜은 이전에 설명된 동작작업(11)을수정한 것입니다. 이전에 설명한 메트릭 작업 중 하나는 각각 세 개의 습관 세션과 하나의 테스트 세션으로 구성된 두 개의 서로 다른 패러다임을 사용했습니다. 첫 번째 패러다임은 습관화 후 친숙한 물체를 더 가깝게 옮기는 것으로 구성되었으며 두 번째 패러다임은 물체를11로더 멀리 이동시켰습니다.

14일 5일 또는14일 이상 수행되는 반즈 미로와 비교하여, 여기에 제시된 메트릭 작업은 2일 이내에 수행되며, 습관의 첫날과 작업9의둘째 날. 이 프로토콜의 작업은 미로에서 수영하여 유도.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

올레나 세브리노프스카 교수에게 감사드립니다. 메리나 쿠체리아바 M.Sc; 막심 크리보노소프 M.Sc; 다리나 야쿠멘코 M.Sc; 예브게니아 곤카리크 M.Sc; 그리고 올하 샤포발, 생리학과박사 후보, 생물학 학부, 생태학 및 의학, 올레스 혼차 드니프로 대학, 드니프로, 우크라이나의 지지와 유용한 공헌. 데이터는 드미트리 프랭크박사 논문의 일환으로 입수되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
70% 알코올 용액에 2% 클로르헥시딘SIGMA - ALDRICH500 cc수술 분야에서의 피부 일반 방부제용
  부피바카인 0.1 %
두께가 다른 4개의 보드(1.5cm, 2.5cm, 5cm 및 8.5cm)이것은 신경학적 결함을
4-0 나일론 봉합4-00
TechniplastACBT0262SU100ml의 물과 100ml 1%(w/v) 자당 용액으로 채워진 150ml 병
Bottlses (4) 토폴로지 메트릭 작업을사용 된 물체의 경우 두 개의 작은 병, 첫 번째 원형 (높이 13.5cm) 및 두 번째 패싯 (높이 20cm) 모양과 두 개의 큰 패싯 병, 첫 번째 9x6cm (높이 21cm) 및 두 번째 7x7cm (높이 21cm).
다이아몬드 홀 소 드릴 3mm 지름유리 홀 소 키트선택 사항입니다.
디지털 체중계SIGMA - ALDRICHRs 4,000
해부 가위SIGMA - ALDRICHZ265969
에탄올 99.9 %  장비를 청소하고 냄새를 제거하는 데 사용되는 약국 5%-10% 용액
  특정 브랜드는 권장되지 않습니다.
거즈 스폰지Fisher22-362-178
장갑 (얇은 실험실 장갑)선택 사항.
온도계가 있는 히터Heatingpad-1모델: HEATINGPAD-1/2    특정 브랜드는 권장되지 않습니다.
Horizon-XLMennen Medical Ltd
Isofluran, USP 100%Piramamal Critical Care, IncNDC 66794-017흡입용 마취액
Office 365 ProPlusMicrosoft-MicrosoftOffice Excel
Olympus BX 40 현미경Olympus
운영 체제  펜치SIGMA - ALDRICH
운영  가위SIGMA - ALDRICH
PC 컴퓨터 USV 기록 및 데이터 분석IntelIntel® core i5-6500 CPU @ 3.2GHz, 16 GB RAM, 64비트 운영 체제
좁은 통로두 개의 투명한 30 cm × 20 cm × 20 cm 플렉시글라스 상자는 좁은 15 cm × 15 cm × 60 cm 통로
Purina ChowPurina쥐, 생쥐, 햄스터에게 주어진 5001 설치류 실험실 차우는 5개 이상의 쥐 케이지를 위한 생물 의학 연구에서 사용된 생명 주기 영양제입니다
  (쥐 집 케이지 또는 다른 인클로저)Techniplast2000P특정 브랜드는 권장되지 않습니다
메스 블레이드 11SIGMA - ALDRICHS2771
SPSSSPSS Inc., Chicago, IL, USA  20 패키지
Stereotaxic Instrument대학 워크샵    특정 브랜드는 권장되지 않습니다
타이밍 장치간격 타이머: USV의선택 사항입니다. 여러 쥐를 간지럽히는 경우 간격 타이머를 사용하는 것이 편리하지만
토폴로지 및 미터법 작업 장치벤 구리온 네게프직경 200cm, 두께 1cm 테이블
비디오 카메라로지텍C920 HD PRO WEBCAM플러스 미로 테스트에서 쥐 행동의 고화질 기록을위한 디지털 비디오 카메라
Windows 10마이크로소프트
평가하는 것입니다 사 위한 것입니다.EthoVision XT (비디오 소프트웨어)Noldus, Wageningen, Netherlands 대학 워크숍에서 맞춤 제작된 선택적 유체 타악기 장치 로 연결된 플렉시글라스 상자 . 에서 맞춤 제작 기록을 위한 타이밍 대학교에서 자체 제작

참고문헌

  1. Binder, L. M. Persisting symptoms after mild head injury: A review of the postconcussive syndrome. Journal of Clinical and Experimental Neuropsychology. 8 (4), 323-346 (1986).
  2. Binder, L. M. ....

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