경화 중 치과용 시멘트의 수축은 베이스 플레이트를 대체합니다. 이 프로토콜은 베이스 플레이트를 시멘트로 만들 공간을 남기는 치과용 시멘트의 초기 기초를 만들어 문제를 최소화합니다. 몇 주 후, 베이스 플레이트는 새 시멘트를 거의 사용하지 않고 이 비계의 위치에 접합될 수 있으므로 수축을 줄일 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
신경 과학자들은 미니어처 현미경 (미니 스코프)을 사용하여 자유롭게 행동하는 동물의 신경 활동을 관찰합니다. 캘리포니아 대학교 로스앤젤레스(UCLA) 미니스코프 팀은 연구원들이 미니스코프를 직접 만들 수 있는 개방형 리소스를 제공합니다. V3 UCLA 미니스코프는 현재 사용 중인 가장 인기 있는 오픈 소스 미니스코프 중 하나입니다. 표재성 피질에 이식 된 대물 렌즈 (1 렌즈 시스템)를 통해 유전자 변형 뉴런에서 방출되는 형광 과도 현상의 이미징을 허용하거나 심부 뇌에 이식 된 릴레이 렌즈와 중계 된 이미지를 관찰하기 위해 미니 스코프에 미리 고정 된 대물 렌즈의 조합을 통해 깊은 뇌 영역에서 이미징 할 수 있습니다 (2 렌즈 시스템). 최적의 조건(뉴런이 형광 지표를 발현하고 릴레이 렌즈가 적절하게 이식된 경우)에서도 시멘트 경화 시 베이스 플레이트와 두개골에 부착된 시멘트 사이의 치과용 시멘트의 부피 변화로 인해 대물 렌즈와 릴레이 렌즈 사이의 거리가 변경되어 정렬 불량이 발생하여 이미지 품질이 저하될 수 있습니다. 베이스 플레이트는 미니스코프를 두개골에 장착하고 대물 렌즈와 릴레이 렌즈 사이의 작동 거리를 고정하는 데 도움이 되는 플레이트입니다. 따라서 베이스 플레이트 주변의 치과용 시멘트 부피의 변화는 렌즈 사이의 거리를 변경합니다. 본 프로토콜은 치과용 시멘트의 부피 변화로 인한 오정렬 문제를 최소화하는 것을 목표로 한다. 이 프로토콜은 릴레이 렌즈 이식 중에 치과 용 시멘트의 초기 기초를 구축하여 정렬 불량을 줄입니다. 이식 후 회복 시간은 치과용 시멘트의 기초가 베이스 플레이트를 완전히 경화시키기에 충분하므로 가능한 한 적은 새 시멘트를 사용하여 베이스 플레이트를 이 비계에 접합할 수 있습니다. 이 기사에서는 미니스코프에 고정된 대물 렌즈로 신경 활동의 이미징을 가능하게 하기 위해 마우스의 베이스플레이팅 전략을 설명합니다.
서론
형광 활동 리포터는 민감하고 큰 동적 범위 1,2,3을 갖기 때문에 신경 활동의 이미징에 이상적입니다. 따라서 형광 현미경을 사용하여 신경 세포 활동 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15를 직접 관찰하는 실험이 증가하고 있습니다.<....
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프로토콜
이 연구에서 수행 된 모든 절차는 국립 대만 대학 동물 관리 및 사용위원회 (승인 번호 : NTU-109-EL-00029 및 NTU-108-EL-00158)의 승인을 받았습니다.
1. 치과용 시멘트의 체적 변화 평가
참고: 치과용 시멘트의 부피 변화는 경화 과정에서 발생합니다. 이식 및 베이스 도금 전에 치과용 시멘트의 부피 변화를 테스트합니다. 연구원은 모든 브랜드의 치과용 시멘트를 테스트하고 부피 변화가 가장 적은 브랜드를 사용하여 베이스 플레이트를 시멘트로 만들 수 있습니다. 그림 3에 예가 나와 있습니다.
- 각 치과 용 시멘트 분말 0.5g의 무게를 달아 적절한 용액 (1mL)과 혼합하십시오.
알림: 치과 용 시멘트 지침에서 권장되는 분말 / 액체 비율은 고체 형태를 얻기 위해 0.5g의 분말 대 0.25mL의 용액입니다. 이 테스트 프로토콜은 피펫 팁의 부피 변화를 측정하기 위해 혼합물을 액체 형태로 흡인할 수 있도록 비율을 0.5g/mL로 희석합니다. - 0.1-10μL 피펫 팁을 사용하여 2.5μL의 치과용 시멘트 혼합물을 제....
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결과
치과용 시멘트 부피 변화 평가
경화 과정에서 치과용 시멘트의 부피가 변하기 때문에 GRIN 렌즈의 작동 거리가 약 50-350μm인경우 이미징 품질에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다4,8. 따라서이 경우 Tempron과 Tokuso라는 두 개의 시판 치과 용 시멘트가 이식 및베이스 도금 절차 전에 테스트되었습니다 (그림 5). 비디오를 먼저 평가하여 시멘트가 수축되었는지 확인한 다음 완전히 건조되었을 때 시멘트의 부피를 비교했습니다. 치과용 시멘트의 초기 혼합물의 동일한 농도와 부피를 피펫 팁에 로딩하고 비디오테이프로 녹화하였다(보충 비디오 S1). 비디오 S1은 건조 과정에서 두 시멘트가 모두 수축되었음을 보여주었습니다. Tokuso는 Tempron보다 더 나은 성능을 보였습니다 (즉, 수축 후에도 Tem.......
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토론
본 보고서는 2 렌즈 UCLA 미니 스코프 시스템을 사용하는 연구자를위한 상세한 실험 프로토콜을 설명합니다. 당사 프로토콜에서 설계된 도구는 생체 내 칼슘 이미징을 시도하려는 모든 실험실에 비교적 저렴합니다. 바이러스 주입, 렌즈 이식, 더미 베이스 도금 및 베이스 플레이팅과 같은 일부 프로토콜은 칼슘 이미징의 성공률을 향상시키기 위해 미니스코프 시스템의 다른 버전에도 사용할 수 있습니다. 바이러스 주입과 관련된 일반적인 문제 및 미니스코프 버전에 관계없이 수정해야 하는 렌즈 이식 외에도 UCLA 베이스 플레이트의 구조로 인해 위치 이동이 발생하여 대물 렌즈와 릴레이 렌즈 간의 작동 거리가 일치하지 않을 수 있습니다(그림 1C). 두 렌즈의 위치 이동을 최소화하기 위해 수정된 실험 프로토콜이 개발되었습니다(그림 2, 그림 4, 그림 5
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공개 사항
이것은 업계에서 지원하는 연구가 아닙니다. 저자는 재정적 이해 상충이 없다고보고합니다.
감사의 글
이 작업은 대만 과학 기술부 (108-2320-B-002 -074, 109-2320-B-002-023-MY2)의 지원을 받았습니다.
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재료
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| 20 G IV cathater | #SR-OX2032CA | Terumo Corporation; 일본 도쿄 | 수술 |
| 27G 바늘 | AGANI, AN*2713R | Terumo Corporation; | 수술을 위한 |
| AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE | #104487-AAV9;1.5*10^13 | Addgene 바이러스 준비; MA, 바이러스 | 주사 |
| 아트로핀 황산염 | ; Hsinchu, 수술 | /더미 베이스플레이트/베이스플레이트 | |
| 베이스플레이트 V3 | http://miniscope.org | 더미 베이스플레이트/베이스플레이트용 | BLU |
| TACK# | 30840350 | Bostik; 첼시, 매사추세츠, 미국 | 재사용 가능한 접착 점토; 수술 / 더미베이스 도금 / 베이스 플레이트 |
| Bone Rongeur Friedman | 13cm | Diener; Tuttlingen, | |
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참고문헌
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