소 초유는 갓 태어난 송아지를 위한 영양소이자 면역학적 지원의 주요 공급원입니다. 치료용 단백질(락토페린 및 IgG)의 수준에 대한 이해는 소 초유 투여 및 인체 섭취를 위한 표준화에 중요합니다.
방법 논문
Determining Total Protein and Bioactive Protein Concentrations in Bovine Colostrum(소 초유의 총 단백질 및 생체 활성 단백질 농도 측정)
이 논문에서
요약
초록
초유는 분만 직후 포유류가 생산하는 복잡한 생물학적 액체입니다. 그것은 다량 영양소 및 미량 영양소, 생체 활성 펩타이드 및 성장 인자의 좋은 공급원으로서 신생아에 대한 모든 영양 요구 사항을 충족합니다. 또한 소초유는 면역글로불린 G(IgG)와 락토페린을 포함한 풍부한 단백질 함량으로 인해 영양 및 생체 활성의 잠재적인 공급원입니다. 그러나 소 초유의 락토페린과 IgG 수치는 수유 기간 동안 현저하게 변합니다. 따라서 소 초유를 단백질 공급원으로 사용하기 위해 IgG 및 락토페린의 농도를 모니터링하는 것은 연구해야 할 중요한 질문입니다. 이 기사의 방법은 단백질 함량을 측정하는 방법과 락토페린 및 IgG의 특정 농도를 설명합니다. 이러한 방법에는 소 초유 단백질 분리, Bicinchoninic acid assay(BCA)를 통한 단백질 농도 측정, SDS-PAGE를 통한 단백질 시각화, lactoferrin 측정 및 ELISA 분석을 사용한 IgG 농도 측정 단계가 포함됩니다.
서론
초유는 분만 직후 포유류가 생산하는 유선의 초기 분비물입니다. 초유는 다량 영양소 및 미량 영양소, 항균 펩타이드, 성장 인자 1,2,3,4가 풍부합니다. 조성은 성숙한 우유로의 전환을 통해 시간이 지남에 따라 점진적으로 변하지만5,6,7 가장 두드러지게 분만 후 24시간 이내에 변화합니다8. 초유의 구성은 또한 연령, 동등성, 품종, 건강 및 영양 상태를 포함한 모계 요인뿐만 아니라 계절, 조기 분만, 조기 수유, 초유 처리 요인(초유 및 보관 온도 웅덩이) 및 분만 유도를 포함한 외적 요인에 의해서도 영향을 받습니다 9,10,11....
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프로토콜
초유 샘플은 7월에서 8월 사이에 걸쳐 터키 차나칼레(Çanakkale)에 있는 울루오바 우유 무역 회사(Uluova Milk Trading Company)의 홀스타인 젖소 28마리에서 정오에 분만한 후 6일 동안 채취하여 급속 냉동했습니다. 당일에 수집된 샘플은 각 샘플의 날짜에 따라 통합되고 총 단백질, 락토페린 및 IgG 농도를 분석했습니다. 모든 샘플은 중복으로 분석되었습니다.
1. 시료 준비
- 200μL의 소 초유와 400μL의 dH2O를 혼합하여 분석을 위한 희석된 샘플을 얻습니다. 그에 따라 모든 샘플을 희석하십시오.
- 원심분리기 희석 및 희석되지 않은 시료를 4°C, 1000 x g 에서 30분 동안 사용합니다.
- 중간 단계를 적절하게 라벨링된 새 튜브로 분리합니다. 1.2단계를 반복합니다. 명확한 중간 단계를 얻기 위해. 즉시 사용하지 않는 경우 전체 중간상과 희석된 샘플을 -20°C에서 보관하십시오.
- 희석된 샘플에서 얻은 중간상을 BCA, SDS-PAGE 및 락토페린 분석에 사용합니다. IgG 분석을 위해 희석되지 않은 샘플에서 중....
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결과
프로토콜에 따라 소 초유 샘플을 분석하여 단백질, 락토페린 및 IgG 농도를 측정했습니다. 소 초유의 단백질, 락토페린 및 IgG 분석 결과는 표 4에 나와 있습니다.
표 4: 단백질, 락토페린 및 소 초유의 IgG 농도.
| 소 초유 | |||
| 일 | 단백질 (mg/mL) | 락토페린(mg/mL) | IgG (m....... |
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토론
이 연구는 성숙한 우유로 전환하는 동안 초유의 단백질, 락토페린 및 IgG 농도의 상당한 변화에 대한 정보를 제공합니다. 락토페린과 IgG 농도의 변화는 샌드위치 ELISA로 검출하고, 총 단백질 농도는 BCA 분석법으로 분석하였다. 연구 결과에 따르면 초기 초유는 단백질, 락토페린, IgG 농도가 가장 높았으며, 이후 3일 동안 감소한 것으로 나타났습니다. 이러한 단백질의 정확한 측정은 요구르트 50,51, 우유 음료 및 버터52, 아이스크림53 및 발효유54와 같은 유제품 생산에서 초유의 사용과 관련이 있습니다. 소 초유의 생리 활성 단백질(예: 락토페린, 라이소자임, Igs)도 제약 산업에서 활용되고 있다
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공개 사항
저자는 공개할 내용이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 Uluova Süt Ticaret A.Ş(Uluova Milk Trading Co.)의 지원을 받았습니다. RMD와 BMH는 유아 마이크로바이옴 복원에 중점을 둔 회사인 Evolve BioSystems의 직원입니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 10X 실행 버퍼 (트리스 - 글리신 - SDS) | ClearBand | TGS10 | SDS - 페이지 분석 |
| 2- 메르 캅토 에탄올 | gibco | 31350-010 | SDS - 페이지 분석 |
| 아세트산 빙하 | Isolab | 901,013,2500 | SDS - 페이지 분석 |
| 소 IgG ELISA 키트 | Aviva 시스템 생물학 | OKIA00005 | IgG 농도 |
| 측정 소 LF / LTF / 락토페린 ELISA 키트 | LSBio Lifespan Biosciences | LS-F4884 | 락토페린 농도 결정 |
| Coomassie Brillant Blue R 250 | amresco | 0472-25G | SDS-Page 분석 |
| 염산 발연 37% | Isolab | 932,103,2501 | SDS-Page 분석 |
| Isopropanol | Isolab | 961,023,2500 | SDS-Page 분석 |
| Laemmli 샘플 Buffer (2X) | ClearBand | LSB-2x | SDS-Page analysis |
| Methanol | Isolab | 947,046,2500 | SDS-Page analysis |
| PageRuler Plus Prestained Protein Ladder 10 to 250 | Thermo Scientific | 26619 | SDS-Page 분석 |
| Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23225 | 단백질 농도 측정 |
| Sodium dodecyl sulfate (SDS) | BioShop | SDS001.500 | SDS-Page 분석 |
| SureCast 아크릴아미드 용액 40% (w/v) | Invitrogen | HC2040 | SDS-Page 분석 |
| SureCast 과황산암모늄 (APS) | Thermo Scientific | 17874 | SDS-Page 분석 |
| SureCast Tetramethylethylenediamine (TEMED) | Invitrogen | HC2006 | SDS-Page 분석 |
| TECAN Infinite M200 플레이트 리더 | Tecan | 30035094 | 흡광도 Tris |
| base | 측정 BioShop | TRS001.1 | SDS-Page 분석 |
참고문헌
- Kehoe, S. I., Jayarao, B. M., Heinrichs, A. J. A survey of bovine colostrum composition and colostrum management practices on Pennsylvania dairy farms. Journal of Dairy Science. 90 (9), 4108-4116 (2007).
- Levieux, D., Ollier, A.
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