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방법 논문

비리오크크레아티드 덕트에 타우로콜레이트 나트륨의 역행 주입을 사용하여 마우스 심각한 급성 췌장염 모델의 설립

4.6K 조회수

DOI:

10.3791/63129

2022년 4월 1일

이 논문에서

요약

중증 급성 췌장염의 마우스 모델은 본원에 기재된다. 여기에 제시된 절차는 매우 빠르고 간단하며 접근 가능하므로 잠재적으로 분자 메커니즘및 급성 췌장염의 다른 치료 내정간섭에 대한 연구가 편리한 방법으로 허용됩니다.

초록

급성 췌장염의 보급 (AP), 특히 심한 급성 췌장염 (SAP), 매년 젊은 연령 그룹에서 증가. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료의 부족이 있다. 형질 전환 및 녹아웃 균주의 쉬운 접근성과 생체 내 평가에 필요한 약물의 최소 용량을 허용하는 작은 크기로, 마우스에서 잘 확립 된 실험 모델은 AP 연구에 선호됩니다. 더욱이, 타우로콜레이트 나트륨(TC)을 통해 유도된 SAP는 현재 가장 널리 사용되고 가장 잘 특징적인 모델 중 하나입니다. 이 모형은 AP의 프로세스 도중 새로운 치료 및 가능한 분자 사건을 위해 조사되었습니다. 여기서는 타우로콜레이트 나트륨과 간단한 수제 현미경을 이용한 AP 마우스 모델의 생성을 소개합니다. 또한, 우리는 또한 후속 조직학 및 세로가지 시험을 위한 방법론을 제공합니다.

서론

급성 췌장염 (AP)은 비정상적으로 활성화 된 효소에 의해 후속 덕트 팽창 및 췌장 자가 소화를 가진 주요 췌장 덕트의 방해를 특징으로하는 췌장의 급성 염증입니다. 그것의 임상 표현은 현지 또는 전신 염증, 복통 및 혈청 아밀라세1,2의 고도를 포함합니다. 심각도 분류3에 따르면 AP는 경미하고, 온건하고, 심한 형태로 존재할 수 있으며, 그 중 심각한 급성 췌장염(SAP)은 30%4 이상의 높은 사망률로 인해 가장 심각한 급성 췌장염(SAP)이 가장 우려되는 상태입니다. 미국에서 AP는 200,000명 이상의 환자에 영향을 미치는 입원의 가장 흔한 이유 중 하나입니다5. 더욱이 AP, 특히 SAP는 매년 증가하고 젊은 연령집단에 영향을 미치고 있다6. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료 옵션의 부족이있다6,7. 따라서 AP에 관련된 분자 메커니즘을 탐구하여 치료 개선을 촉진할 필요가 있습니다.

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프로토콜

동물과 관련된 모든 실험은 소오하우 대학의 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 모든 수술 절차는 완전한 마취하에 수행되었습니다. 진통제는 이전 문학에 따라 질병의 자연적인 과정에 간섭을 피하기 위하여 이용되지 않았습니다28,29. 진통제의 부족에 대한 승인은 또한 소오하우 대학의 동물 윤리위원회에 의해 부여되었다.

1. 준비

  1. 수술 전 C57BL/6 야생형 마우스 8-12h를 빠르게 합니다.
  2. 5% (w/v) TC 용액(93mMM)을 0.9%의 염화나트륨으로 희석한다. 0.22 μm 필터를 통해 용액을 필터링합니다.
  3. 30분 동안 121°C의 온도에서 압력 멸균기를 사용하여 집게, 가위, 블레이드 홀더, 바늘 홀더, 혈전 성 클립, 혈관 클램프 및 멸균 드레이프를 포함한 수술 기구 및 재료를 자동 클랩합니다.
  4. 수제 마이크로시링을 준비합니다. 이렇게 하려면 일회용 인슐린 팁과 25 μL 플랫 팁 마이크로리터 주사기에 장기간 플라스틱 파이펫 팁을 수동으로 설치합니다. 조사를 통해 살균.

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결과

위의 지시에 따라 약 40분의 평균 수술 기간을 얻었습니다. 마우스는 약간 비활성 상태였으며 각각 24시간, 48h 및 72h에서 약 0.5-1.75g, 0.85-1.85g 및 0.5-4.73g의 무게를 잃었습니다(그림 2).

수술 이완 시점부터 수술 후 24시간까지, 질병이 발달함에 따라 마우스는 비활성 상태가 되어 반응이 느리고 행동하였다.

대조군과 SAP 마우스의 생존율은 각각 100%(8/8) 및 72.7%(8/11)였으며, 72h 수술 후(그림 3)이었다.

H&E 염색(그림 4) 및 병리학 점수(그림 5)에 따르면 췌장 섹션에서 발생하며, 명백한 부종 (.......

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토론

TC 유도 SAP 모델은 우수한 연구 도구입니다. 이 연구에서 와 같이,이 모델은 특정 장치를 사용하지 않고 일반 실험실에서 매우 쉽게 실현됩니다. 조직학 및 생화학적 분석과 함께 사용될 경우 AP를 유도하고 평가하기 위한 비용-(저렴한 시약) 및 시간 절약(24h 시간 창) 접근법을 제공합니다. TC의 농도조정은 또한 SAP를 유도하기 위해 TC를 고용하여 마우스20에 SAP를 유도할 수 있는 가능성을 제공하며, 주요 차이점은 TC주입에 사용되었다. 더 정확한 주입 복용량을 제공할 수 있습니다.

우리의 경험에 따르면, 모델 설립의 수술 과정에서 가장 중요한 요인은 이중 성 덕트의 전체 노출, 마이크로 인젝터의 부드러운 천자, 비교적 일정한 속도로 biliopancreatic 덕트 및 췌장 덕트에 TC의 주입을 포함했다. 수술 중 다음 사항에주의를 기울여야 합니다. 첫째, 십이지장 괴사귀가 발생할 수있는 과도한 힘의 적용을 피하기 위해.......

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감사의 글

NCRCH [2020WSA01]의 번역 연구 보조금, 소주건강위원회(KJXW20200002)의 KJXW 과학교부금, 소주시 과학기술계획(SKY2021038 및 SKJY2021050), 장쑤고등교육기관(PAPD)의 우선학술프로그램 개발 보조금, 1차 연구사회개발계획(PAPD)을 지원한다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.5% 요오드포Shanghai Likang 소독제3101024mL/마우스
0.9% 염화나트륨Sinopharm Group Co., Ltd.100193180.8 mL / 마우스
1 % 펜토 바르비탈 나트륨시그마P37610.2 -0.25 mL / 마우스
25 μ L 플랫 팁 마이크로 리터 주사기Gaoge, 상하이A124019
4 % 파라 포름 알데히드Beyotime, Nantong, ChinaP0099-500ml
5 % 타우로 콜산 나트륨 (TC)알라딘S100834-5g10 μ L/SAP 마우스
6-0 나사산 바늘이 있는 멸균 나일론 미세 봉합사(1/2 원)Cheng-He20093
75% 알코올Sinopharm Group Co., Ltd.100092184 mL / 마우스
8-0 실 바늘이있는 멸균 나일론 미세 봉합사 (3/8 원)Cheng-He19064
ALT Activity Assay KitEPNK, Anhui, ChinaALT0012
Amylase Assay KitEPNK, Anhui, ChinaAMY0012
12mm 턱 (3cm)이있는 각진 작은 불독 클램프Cheng-HeHC-X022
아스펜 부스기 또는 마우스 침구용 파쇄Beijing Vital River Laboratory Animal TechnologyVR03015
AST Activity Assay KitEPNK, Anhui, ChinaAST0012
Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay KitEPNK, Anhui, ChinaBUN0011
C57BL/6 마우스Beijing Vital River Laboratory Animal Technology213
크레아틴 분석 키트EPNK, 안후이, 중국
특징 마이크로톰 블레이드Beyotime, Nantong, ChinaE0994
지혈 겸자(9.5cm, 곡선형)JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.JC3901
리파제 분석 키트Jiancheng, Nanjing, ChinaA054-2-1
MicrotomeLeica biosystem, 독일RM2245
Mindray 생화학 분석기Mindray, Shenzhen, ChinaBS-420
MPO 분석 키트Jiancheng, Nanjing, ChinaA044-1-1
Normal mouse chowTrophic, Nantong, ChinaLAD 1000
인산염 완충 식염수Beyotime, 난퉁, 중국C0221A
5mm 턱(1.5cm)이 있는 스트레이트 마이크로 불독 클램프JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.W40130
직선 또는 곡선 겸자(11.0cm)Cheng-HeHC-X091A 또는 HC-X090A
스트레이트 가위(10.0cm)Cheng-He, 닝보, 중국HC-J039102
Thermo Scientific 원심분리기Thermo Scientific, 미국Multifuge X1R
CRE0012

참고문헌

  1. Lee, P. J., Papachristou, G. I. New insights into acute pancreatitis. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).
  2. Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis. F1000Research.....

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