우리는 두 가지 등반 섬유 의존적 연관 학습 작업 중에 동물의 행동을 추적하는 단일 플랫폼을 개발했습니다. 저비용 설계는 섬유 관련 소뇌 활동을 등반하기위한 광유전학 또는 이미징 실험과 통합 할 수 있습니다.
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우리는 두 가지 등반 섬유 의존적 연관 학습 작업 중에 동물의 행동을 추적하는 단일 플랫폼을 개발했습니다. 저비용 설계는 섬유 관련 소뇌 활동을 등반하기위한 광유전학 또는 이미징 실험과 통합 할 수 있습니다.
Purkinje 세포에 대한 등반 섬유 입력은 소뇌 의존적 연관 학습에 중요한 유익한 신호를 제공합니다. 머리가 고정된 마우스에서 이러한 신호를 연구하면 이미징, 전기 생리학 및 광유전학 방법의 사용이 용이합니다. 여기에서는 저비용 행동 플랫폼 (~ $ 1000)이 개발되어 달리기 바퀴에서 자유롭게 로코모티를 만드는 머리 고정 마우스에서 연관 학습을 추적 할 수 있습니다. 이 플랫폼은 두 가지 일반적인 연관 학습 패러다임, 즉 아이블링크 컨디셔닝과 지연된 촉각 깜짝 컨디셔닝을 통합합니다. 동작은 카메라를 사용하여 추적되고 감지기에 의한 휠 이동이 추적됩니다. 우리는 구성 요소와 설정을 설명하고 교육 및 데이터 분석을위한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 이 플랫폼은 광유전학적 자극 및 형광 영상화의 혼입을 허용한다. 이 설계를 통해 단일 호스트 컴퓨터가 여러 동물을 동시에 훈련시키기 위해 여러 플랫폼을 제어 할 수 있습니다.
조건화 된 반응을 이끌어 내기 위해 자극 사이의 초 미만의 연관성의 파블로프 컨디셔닝은 소뇌 의존성 학습을 조사하기 위해 오랫동안 사용되어 왔습니다. 예를 들어, 고전적 지연 눈 깜박임 조절 (DEC)에서, 동물들은 중립적 인 조건부 자극 (CS; 예를 들어, 빛 또는 청각 톤의 플래시)에 반응하여 잘 정해진 보호 깜박임을 만드는 법을 배웁니다.이 자극은 무조건적인 자극 (미국; 예를 들어, 각막에 적용되는 공기의 퍼프)과 반복적으로 짝을 이룰 때 항상 반사 깜박임을 유발하며, 그리고 CS의 끝 또는 그 근처에 온다. 학습된 응답을 조건화 응답(CR)이라고 하고, 반사 응답을 무조건 응답(UR)이라고 합니다. 토끼에서 소뇌 특정 병 변은 이러한 형태의 학습 1,2,3,4을 방해합니다. 또한, 퍼킨제 세포 복합체 스파이크는 등반 섬유 입력(5)에 의해 구동되며, 적절한 타이밍의 CR을 획득하기 위해 필요한 6,7 및 충분한 8,9 신호를 제공한다.
보다 최근에, 등반 섬유 의존적 연관 학습 패러다임이 머리 고정 마우스를 위해 개발되었다. DEC는 이 구성10,11에 적응된 최초의 연관 학습 패러다임이었습니다. 머리-고정 마우스에서의 DEC는 소뇌 영역 11,12,13,14,15,16,17 및 회로 소자 11,1 2,13,14,15,18,19를 식별하는데 사용되어 왔다. 그것은 작업 획득 및 멸종에 필요합니다. 이 접근법은 또한 과제 파라미터의 세포 수준 생리학적 표현이 학습13,15,16과 함께 어떻게 진화하는지를 입증하는데 사용되었다.
눈깜짝할 사이에 지연된 깜짝 촉각 컨디셔닝(DTSC) 패러다임은 최근 머리 고정 마우스(20)에 대한 신규한 연관 학습 과제로서 개발되었다. 개념적으로 DEC와 유사하게, DTSC는 중립 CS를 미국으로 제시하는 것을 포함하며, UR로서 깜짝 놀랄만한 반사(21,22)를 참여시키기에 충분한 강도로 얼굴에 탭한다. DTSC 패러다임에서 UR과 CR은 모두 바퀴에서 후진 운동으로 판독됩니다. DTSC는 이제 연관 학습이 소뇌 활성과 유전자 발현20의 패턴을 어떻게 변화시키는지를 밝히기 위해 사용되어 왔다.
이 작업에서는 DEC 또는 DTSC를 단일 플랫폼에 유연하게 적용하기 위한 방법이 개발되었습니다. 자극 및 플랫폼 속성은 그림 1에 개략적으로 설명되어 있습니다. 이 설계에는 카메라로 동물의 행동을 추적할 수 있는 기능과 바퀴 위의 마우스 움직임을 추적하는 회전식 엔코더가 통합되어 있습니다. 데이터 로깅 및 시험 구조의 모든 측면은 쌍을 이루는 마이크로 컨트롤러 (Arduino)와 단일 보드 컴퓨터 (SBC; 라즈베리 파이). 이러한 장치는 제공된 그래픽 사용자 인터페이스를 통해 액세스할 수 있습니다. 여기에서는 설정, 실험 준비 및 실행을 위한 워크플로와 데이터 시각화를 위한 사용자 지정 분석 파이프라인을 제시합니다.
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여기에 설명 된 동물 프로토콜은 프린스턴 대학의 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다.
1. SBC 설정
2. 배선 자극 하드웨어 및 조립 단계
3. 행동 실험 준비 및 실행
4. 데이터 내보내기 및 분석
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DEC 실험 및 분석을 위한 워크플로우
적절한 실험 파라미터 선택은 성공적인 지연 아이블링크 컨디셔닝(DEC) 훈련에 중요하다. 여기에 제시된 데이터의 경우, GUI를 사용하여 350ms의 CS 지속 시간 및 50ms의 미국 지속 시간을 선택했습니다. 이러한 짝짓기는 300ms의 인터-자극 간격을 초래한다: 낮은 진폭 CR 생산(10 )을 방지하기에 충분히 길고, 열악한 학습 또는 추적 컨디셔닝의 체제로 들어가는 것을 피하기에 충분히 짧은, 추가적인 뇌 영역(11)을 관여시키는 과정이다. 시험 사이의 시간은 ITI 낮음과 높은 필드를 사용하여 5-15 초 범위에서 무작위로 균일하게 선택되도록 설정되었습니다. 시험 간 간격의 무작위화는 동물 피험자가 작업 수행을 위해 CS 및 미국 이외의 타이밍 신호를 사용하는 것을 불가능하게 만듭니다.
CS 또는 미국을 생략하...
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여기에 설명 된 관련 프로토콜이있는 플랫폼은 두 가지 감각 연관 학습 작업에서 동물의 행동을 안정적으로 추적하는 데 사용할 수 있습니다. 각 작업은 등반 섬유 경로를 통한 온전한 의사 소통에 달려 있습니다. 여기에 설명 된 디자인에서 우리는 소뇌 반응의 학습 및 기록 / 교란을 용이하게하는 요소를 통합합니다. 여기에는 자유로운 운동11,18뿐만 아니라 머리 고정을 허용하는 바퀴가 포함됩니다. 휠은 마우스 피험자가 자유롭게 로코모티를 할 수 있게 하며, 이는 DEC 획득(18)에 중요한 것으로 관찰되었다. 마우스에서의 두부 고정은 연구자들이 다른 모델 종에서 또는 자유롭게 움직이는 조건 하에서 사용하기가 더 어려운 유전적, 전기생리학적, 영상화, 광유전학적 접근법을 이용할 수 있게 한다(12). 우리는 이러한 각 응용 프로그램에 대한 우리의 ...
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저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.
이 작업은 국립 정신 건강 연구소 NRSA F32 MH120887-03 (G.J.B.) 및 R01 NS045193 및 R01 MH115750 (S.S-H.W.)의 보조금으로 지원됩니다. DEC 설정 최적화를 위한 유용한 토론을 해주신 Bas Koekkoek 박사와 Henk-Jan Boele 박사님과 DTSC 설정 최적화를 위한 유용한 토론을 위해 Yue Wang과 Xiaoying Chen 박사님께 감사드립니다.
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