방법 논문

카나비노이드 전임상 연구를 위한 곤충 모델 시스템으로 담배 혼웜

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DOI:

10.3791/63228

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2021년 12월 29일

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1Institute of Cannabis Research, Colorado State University-Pueblo, 2Department of Biology, Colorado State University-Pueblo, 3Department of Chemistry, Colorado State University-Pueblo, 4Chuncheon Bioindustry Foundation

교신 저자: Sang-Hyuck Park <sanghyuck.park@csupueblo.edu>

이 논문에서

요약

본 프로토콜은 카나비노이드 연구에서 담배 혼웜 만두카 sexta 를 사용하기위한 교육 정보를 제공합니다. 여기에 설명된 방법은 칸 나비 디올 (CBD) 치료에 대한 응답으로 곤충 모델의 생리적 및 행동 변화를 모니터링하는 모든 필요한 공급 및 프로토콜을 포함한다.

초록

의학에서 카나비노이드에 대한 관심이 증가함에 따라 여러 포유류 모델 유기체가 알려지지 않은 제약 기능을 해명하는 데 사용되었습니다. 그러나, 많은 어려움은 카나비노이드 연구를 위한 비 포유류 모형 유기체의 발달을 필요로 하는 포유류 연구에 남아 있습니다. 저자는 담배 뿔벌레 만두카 sexta 새로운 곤충 모델 시스템으로 제안한다. 이 프로토콜은 다양한 양의 칸 나비 디올 (CBD)으로 인공 식단을 준비하고, 재배 환경을 설정하고, CBD 치료에 대한 응답으로 생리적 및 행동 적 변화를 모니터링하는 방법에 대한 정보를 제공합니다. 간략하게, 뿔벌레 알을 수신하는 즉시, 계란은 12:12 광어두운 주기에 25°C에서 1-3 일을 허용하였고, 무작위로 제어에 분배되기 전에 부화하였다(밀 배아 계 인공 식단; AD), 차량(AD + 0.1% 중형 체인 트리글리세라이드 오일; MCT 오일) 및 치료 그룹 (AD + 0.1 % MCT + 1 mM 또는 CBD2 mM). 미디어가 준비되면, 1 번째 인스타 애벌레는 나무 꼬치 스틱이있는 50 mL 테스트 튜브에 개별적으로 배치 된 다음 시험관은 치즈 천으로 덮여있었습니다. 측정은 CBD 관리에 대한 생리적 및 행동 적 반응을 위해 2 일 간격으로 수행되었습니다. 이 간단한 재배 절차는 연구원이 주어진 실험에서 큰 표본을 시험할 수 있게 합니다. 또한, 상대적으로 짧은 수명 주기는 연구원이 더 높은 포유류 모형 유기체에 있는 실험적인 디자인을 지원하는 데이터를 허용하는 동질적인 인구의 다세대에 칸 나비노이드 처리의 충격을 연구하는 것을 가능하게 합니다.

서론

지난 몇 년 동안, 대중의 관심은 간질 1, 파킨슨 병2, 다발성 경화증 및 칸 나비 디올 (CBD)을 가진 다양한 형태의 암4,5,6의 치료를 포함하여 치료 잠재력으로 인해 카나비노이드에 중점을 두었습니다. 대마초는 2018 년 농업 개선법에서 농업 상품으로 합법화되기 때문에, 공법 115-334 (2018 농장 법안), 대마초와 식품, 화장품 및 제약 산업의 카나비노이드 유도체는 기하 급수적으로 증가했습니다. 또한, 단일 카나비노이드 및 카나비노이드 혼합물의 임상 등급 분리는 인간 과목7, 세포주 5,8 및 다양한 동물 모델 시스템에서 성공적으로 테스트되었습니다9,10.

임상 시험은 특정 질병에 카나비노이드의 효능과 부작용을 검증하는 데 이상적입니다. 그러나, 임상 시험에 있는 수많은 도전이 있습니다, 윤리적/IRB 승인, 모집 및 과목의 보유를 포함하여 11. 이러한 장애물을 극복하기 위해, 인간 유래 세포주는 비용 효율적이고, 다루기 쉽고, 윤리적 문제를 우회할 수 있고, 세포주로서 일관되고 재현 가능한 결과를 제공하기 때문에 다양한 인간 세포주를 사용하였다.12 다른 세포 및 화학 물질의 교차 오염이 없는 세포의 순수한 집단이다.

Alves et al. (2021)13 은 태반의 특수 세포인 태반 트로포블라스트에서 투여 의존형 방식으로 CBD를 테스트했는데, 이는 태아 이식 및 열화된 모성 자궁과의 상호 작용에 필수적인 역할을 하는 태반의 전문 세포입니다14. 그들의 결과는 CBD가 세포 생존 가능성 손실, 세포 주기 진행 중단 및 세포 세포 흡입 유도를 일으키는 원인이 되었다는 것을 보여주었습니다. 이러한 관측은 임산부에 의해 대마초 사용의 잠재적 인 부정적인 영향을 보여줍니다13. 마찬가지로, 일련의 세포주들은 또한 인간 질병, 특히 다양한 형태의 암에서 CBD의 약리학적 효과를 검사하는 데 사용되었습니다. 시험관 내 연구는 성공적으로 췌장15, 유방8 및 대장암 세포16에서 항암 효과를 입증했습니다. 그러나, 널리 이용 가능하고 취급하기 쉬운 동안, HeLa와 같은 특정 세포주, HEK293는 그들의 성장 조건 또는 취급17에 있는 변경 때문에 유전및 표현적인 변경에 경향이 있습니다.

대마초 연구에서는 마우스18, 기니 피그19 및 rabbit19와 같은 작은 동물에서 개20, piglet21, monkey22, horse23과 같은 큰 동물에 이르기까지 다양한 동물 모델 시스템이 알려지지 않은 치료 효과를 탐구하는 데 사용되었습니다. 마우스는 인간에 대한 해부학적, 생리적, 유전적 유사성으로 인해 카나비노이드 연구를 가장 선호하는 동물 모델 시스템이었습니다24. 가장 유의하게, 마우스는 인간에 있는 그들의 신경계에 있는 CB1/2 수용체가 있습니다. 그(것)들은 또한 더 쉬운 유지 보수 및 풍부한 유전 자원을 가진 인간 적인 과목 보다는 더 짧은 수명 주기가, 따라서 전체 수명 주기 내내 칸 나비 노이드의 효력을 감시하는 것이 훨씬 쉽게 만듭니다. 포유류 시스템은 널리 사용되며 CBD가 발작 장애1, 외상 후 스트레스 장애9, 구강 궤양 25 및 치매와 같은 증상을 완화한다는 것을 성공적으로 입증했습니다10. 마우스 모델은 또한 큰 동물과 인간26에서 매우 어려운 지역 사회 내에서 개인의 사회적 상호 작용 연구를 가능하게했다26.

동물 모델 시스템의 모든 장점에도 불구하고 여전히 비용이 많이 들며 약물 투여 및 데이터 수집 중에 집중 치료가 필요합니다. 추가적으로, 실험 디자인 및 엄격27에 있는 한계 때문에 불변성 및 인간 조건의 가난한 회수 때문에 연구에서 마우스를 사용하는 감시가 있습니다.

카나비노이드의 의료/전임상 연구에 대한 수요가 증가함에 따라 비 포유류 모델 시스템이 필요합니다. 무척추 동물 모델은 전통적으로 척추 동물 모델에 비해 독특한 이점을 부여했습니다. 중요한 이득은 많은 견본을 양육하고 연구원이 유전적으로 균일한 인구의 다세대 를 감시하는 가능하게 하는 용이하고 낮은 비용을 포함합니다28. 최근 연구는 과일 비행을 입증, Drosophila 멜라노가스터, 공급 행동을 변조에 칸 나비 노이드의 약리적 기능을 조사하는 효과적인 곤충 모델 시스템으로29. 곤충 모델 시스템 중, 저자는 담배 뿔벌레에 초점을 맞추고, 만두카 sexta, 또한 캐롤라이나 스핑크스 나방 또는 매 나방으로 알려진, 칸 나비 노이드 연구를위한 새로운 곤충 모델 시스템으로.

만두카 섹스타는 스핑기다의 가족에 속한다. 곤충은 미국 남부에서 가장 흔한 식물 해충으로, 그들은 천체 식물을 먹입니다. 곤충 모델은 곤충 생리학, 생화학, 신경 생물학 및 약물 상호 작용 연구에 오랜 역사를 가지고 있습니다. Manduca sexta의 연구 포트폴리오에는 필수 세포 프로세스의 분자 수준 이해를 허용하는 초안 게놈 서열이 포함되어 있습니다30. 이 모델 시스템의 또 다른 중요한 이점은 18-25일 동안 의 길이가 100mm 이상, 무게는 10g에 달하는 큰 크기입니다. 큰 크기는 연구원이 CBD 치료에 대한 응답으로 실시간으로 형태학적 및 행동 변화를 쉽게 모니터링 할 수 있습니다. 또한, 크기 때문에, 전기 생리학적 반응은 고해상도 현미경 설정 없이 애벌레에서 해부된 신경을 포함하여 복부 신경계로 검토되었다. 독특한 기능을 통해 연구자들은 투여된 카나비노이드(들)에 대한 급성 및 장기 반응을 쉽게 조사할 수 있습니다.

이러한 다양성에도 불구하고, M. sexta는 최근에 대마초와 카나비노이드 연구에 대한 실험 모델로의 적합성에 대한 탐구되었습니다. 2019년, 저자는 대마초가 곤충 초식 동물30,31로부터 자신을 보호하기 위해 Cannabidiol을 생산하기 위해 진화했다는 가설을 해결하기 위해 처음으로 곤충 모델 시스템을 사용했다. 그 결과 식물이 CBD를 먹이 억제책으로 악용하고 해충 곤충 M. sexta 애벌레의 성장을 억제하고 사망률 증가를 유발하는 것으로 나타났습니다31. 이 연구는 또한 CBD의 캐리어로서 에탄올의 잠재적 인 차량 효과를 식별하는 술에 취한 에탄올 애벌레에 CBD의 구출 효과를 입증했습니다. 도시된 바와 같이, 곤충 모델 시스템은 다른 동물 시스템에 보다 적은 인건비와 비용으로 3-4 주 이내에 칸 나비 노이드의 치료 효과를 효과적으로 조사했다. 곤충 모델은 카나비노이드 수용체 (즉, CB1/2 수용체 없음)가 부족하지만, 모델 시스템은 카나비노이드 수용체 독립적 인 방식을 통해 칸 나비 노이드의 약리적 역할을 이해하는 귀중한 도구를 제공합니다.

이 연구의 저자는 이전에 카나비노이드 연구를위한 모델 시스템으로 담배 hornworm와 함께 일했습니다31. M. sexta를 사용하는 이점과 위험을 신중하게 고려한 후, 우리는 미래의 전임상 실험실 사용을 위한 기회를 허용하는 전임상 시험을 위한 식단의 적절한 관리 및 준비와 관련된 방법을 제공했습니다.

프로토콜

1. 혼웜 제제 및 칸나비디올 치료

  1. 150-200 실행 가능한 M을 가져옵니다. sexta 계란과 밀 배아 기반 인공 식단 ( 재료의 표 참조).
  2. 혼웜 알을 밀 배아 기반 인공 식단(AD) 층으로 폴리스티렌 페트리 접시에 넣고 달걀을 40%-60%의 상대 습도로 25°C에서 유지한 곤충 사육챔버( 재료표 참조)로 옮긴다.
  3. 담배 뿔벌레 알을 1-3일 동안 허용하여 상대 습도가 40%-60%로 25°C에서 유지되는 곤충 사육실 내부를 부화시도록 한다.
  4. 칸 나비 디올 (CBD) 재고 솔루션 (200 mM)을 추가하여 1.26 g의 >98 % 순도 CBD는 EtOH (200 증거) 또는 100 % 중형 체인 트리글리세라이드 (MCT) 오일 ( 재료 표 참조)의 20mL로 분리합니다.
    참고 : CBD 격리는 빛에 민감하므로 어두운 에서 처리하십시오.
  5. 200mM CBD 주식 솔루션의 5 mL 및 10 mL을 AD 1,000 g에 추가하여 각각 CBD의 다이어트 1 mM 및 2 mMM의 최종 농도를 가져옵니다.
    참고 : 완전히 균일 한 혼합물이 형성 될 때까지 식이 요법과 CBD 주식 솔루션이 잘 혼합되어 있는지 확인하십시오. CBD 의 재고가 들어있는 AD를 비닐 봉지에 45 분 이상 손으로 혼합하십시오.
    주의: 커피 믹서 또는 다른 금속 분쇄기 는 효과가 없는 것으로 나타났습니다.
  6. 3개의 미디어, 제어(AD), 차량(EtOH 또는 MCT 오일의 AD + 0.1%) 및 CBD(EtOH 또는 MCT 오일의 0.1% + CBD의 1mM/2 mMMM)를 50mL 튜브 의 바닥으로 분배합니다.
  7. 50mL 테스트 튜브에 개별적으로 1번째 인스타 애벌레(~2mm 길이)를 무작위로 분배하고 천공된 뚜껑이나 치즈클로스로 덮 습니다(재료표 참조).
    참고: 튜브를 거꾸로 놓고 곤충을 40%-60%의 상대 습도로 25°C 유지한 곤충 사육실에서 재배합니다.
  8. 12h 빛/어두운 주기로 25°C에서 유지되는 곤충 사육실 내부( 재료 표 참조)에서 자랍니다.

2 . M. sexta 애벌레 성장, 다이어트 소비 및 사망률 측정

  1. 포이션이 강화된 외피성 층의 어두운 갈색 색으로 인식될 때까지 개별 용기로 옮겨진 후 2일 간격으로 분석 밸런스 및 사망률로 애벌레 성장(즉, 크기 및 중량)을 측정한다.
    1. 각 애벌레 그룹의 초기 질량(그램)을 각각의 식단에 도입하기 전에 유충의 질량을 기록하고 애벌레가 새끼 단계를 완료할 때까지 애벌레 발달 단계 사이의 질량 이득을 결정하기 위해 초기 질량에서 각 측정에서 애벌레의 질량을 빼는다.
    2. 각 식단에 새끼까지 애벌레 성장 단계 사이의 발달 기간의 차이를 이해하기 위해 인스타 발달 단계 사이의 일 수를 기록합니다.
      참고: 금형 오염을 방지하기 위해 용기에서 배설물을 긁어냅니다. 실험 목적에 따라 향후 테스트(예: CBD 누적 비율 계산, 미생물 프로파일링)에 따라 문제를 수집합니다. 다각증 또는 자궁 근증의 깨지기 쉬운 기간 동안 곤충을 조심스럽게 처리하는 것이 중요합니다. 용기에서 애벌레를 꺼내는 경우, 곤충의 본체를 평평한 끝과 넓은 집게로 부드럽게 잡고 곤충이 흘리는 과정에서 피부의 외부 층을 제거하도록 강요하지 않습니다.
  2. 1차 내항애와 새끼 사이의 용기의 다이어트 손실을 계량하여 다이어트 소비31을 측정합니다. 실험 의 시작 부분에 다이어트의 초기 그램을 기록하고 애벌레가 완전한 새끼 단계에 들어갔을 때 다이어트의 나머지 양에서 초기 금액을 빼.
    참고: 대변은 식단 측정에서 제외되어야 합니다. 배설물 및 기타 파편(즉, 피부 창고)은 용기를 거꾸로 배치하여 미디어에서 쉽게 제거할 수 있습니다.
  3. 이동성 측정을 위해, 대상 곤충이 챔버 환경을 최소 5분 이상 수용하고 5번째 인스타 곤충(길이 80-100mm)의 3개 그룹이 자동화된 전산화된 공포 컨디셔닝 챔버를 사용하여 이동한 거리31을 추적할 수 있도록 허용한다(재료표 참조).
  4. 모션 인덱스를 생성하는 모션 감지 소프트웨어(재료 표 참조)를 사용하여 60프레임/s의 비디오 녹화를 통해 이동성 반응을 분석합니다.

3. 통계 분석

  1. Tukey의 사후 테스트32를 통해 애벌레 성장(즉, 크기 및 중량)과 모션 인덱스의 차이를 일방적으로 ANOVA로 분석합니다.
  2. 서바이벌 곡선 비교를 위해 로그 랭크(Mantel-Cox) test33 을 사용합니다.
    참고: 모든 통계 분석은 통계 분석 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다( 재료 표 참조).

결과

칸 나비 노이드 독성을 검사하는 모델 시스템으로 만두카 sexta
그림 1 은 담배 혼벌레 만두카 sexta를 사용하여 CBD 실험의 주요 구성 요소를 묘사한다. 곤충의 큰 숫자 (>20)는 개별적으로 12 시간 :12 h = 빛 : 어두운 주기에 25 ° C에서 사육되었다. 곤충의 크기, 무게 및 사망률은 고용량 CBD (2 mM) 치료 후 단기 및 장기 응답을 모니터링하기 위해 2 일 간격으로 측정되었습니다.

그림 2 는 곤충의 성장과 발달에 CBD의 부작용을 보여줍니다. 인공 식단(AD)에 사육된 곤충은 최고의 성장 성과를 보였습니다. CBD 분리용 용해제로서 0.1% 중간사슬 트리글리세라이드(MCT) 오일을 사용한 차량 제어도 해로운 영향 없이 정상적인 성장을 보였다. 그러나, CBD (2 mM)의 고용량은 체중 감소를 유도 (도 2C) 제어 및 차량 그룹의 것보다 높은 사망률을 주도 (도 2D).

24일, AD에 공급된 애벌레의 평균 크기는 63.9mm(n=20-22)였다. 그러나, CBD의 2 mM을 포함하는 AD에 사육 된 애벌레의 크기는 50.7mm였으며, 이는 AD ( 도 2C의 빨간색 선)31에서 자란 애벌레보다 21 % 작았다. 24일, AD에서 사육된 애벌레의 평균 체중은 6.5g으로, 2mM의 CBD(n = 12-16, p < 0.00001)31로 AD에서 자란 애벌레보다 2.2배 더 컸다. 특히, CBD (2 mM)의 고용량은 사망률을 40 %까지 크게 증가시켰으며, 제어 및 차량 그룹은 20 %의 사망률 (그림 2D)31을 보였습니다. 결과는 규정식에 있는 CBD (2 mM)의 고용량이 곤충 발달에 해롭고 증가한 사망과 상관관계가 있다는 것을 표시했습니다.

칸 나비 노이드의 알 수없는 치료 기능을 탐구하는 모델 시스템으로 만두카 sexta
도 2 는 곤충 모델 시스템이 형태학적 및 생리적 변화를 모니터링하여 CBD의 해로운 효과를 효과적으로 모니터링하는 것으로 나타났습니다. 예비 결과는 >1% 에탄올 (EtOH)이 그들의 성장, 이동성, 규정식 소비 및 생존율과 부정적으로 관련된다는 것을 표시했습니다. CBD가 EtOH-취한 M. sexta 애벌레에서 곤충의 이동성과 먹이 행동을 향상시키는지 여부를 조사하기 위해 곤충이 소비하는 총 식단과 10 분 동안 여행 한 거리는 세 가지 먹이 조건 (AD, AD + 1 % EtOH 및 AD + 1 % EtOH + 1mM CBD)에서 재배 된 곤충에서 측정되었습니다. 그림 3A는 M을 보여줍니다. CBD의 1 mM을 포함하는 AD에 사육 된 sexta 애벌레는 EtOH 가 추가 된 diet31에 기르는 것보다 적어도 3.1 배 더 큰 다이어트 질량을 소비했습니다. 그러나 CBD 첨가 미디어의 2 mM에 사육 된 곤충의 식단 소비는 EtOH 전용 식단 (p > 0.05)31에서 자란 애벌레의 곤충과 크게 다르지 않았습니다.

Larval 이동성은 또한 CBD가 EtOH와 술에 취했을 때 이동성에 영향을 미쳤는지 조사하기 위해 추적되었습니다. 모바일 지수는 동결의 백분율(%)으로 표시됩니다. 그림 3B 는 M의 모바일 인덱스를 비교합니다. 다른 조건에서 자란 sexta 애벌레. 결과는 1% EtOH 처리한 애벌레가 이동성에 영향을 미치지 않았다는 것을 보여줍니다 (p > 0.05). 1 mM CBD 관리는 이동성 (p > 0.05)31에 영향을 미치지 않았습니다. 2% EtOH 치료는 M. sexta 애벌레에 치명적인 것으로 밝혀졌다; 따라서 모빌리티 인덱스가 기록되지 않았습니다. CBD (2 mM)의 고용량이 AD에 2 % EtOH를 함유하면서 이동성은 낮은 (80 % 동결)31을 유지했습니다.

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그림 1: 칸 나비디올 연구에서 담배 혼벌레 만두카 sexta 애벌레를 사용하는 요약 된 과정. (A) 혼웜 계란은 인공 식단의 층과 별도의 큰 용기에 부화. (B) 주사기는 어떤 식단이 용기의 측면에 달라붙지 않도록 용기를 채우는 데 사용되었습니다. (C) 치즈천이 있는 50mL 테스트 튜브에서 제2의 인스타 담배 혼웜. (D) 제3의 인스타 담배 혼웜. (E) 호른웜 길이(mm) 및 무게(g)는 스케일로 측정하였다. (F) 제5회 인스타 담배 혼벌레는 자궁절제술을 받고 새끼를 먹을 준비를 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 2: 담배 혼두사 섹스타의 성장과 사망에 칸 나비 디올 (CBD)의 효과. (A) 담배 뿔 벌레 애벌레 5, 3 인스타, 초기 새끼. M의 크기(B), 체중(C), 사망률(D) 인공 식단 (AD), AD + 중간 사슬 트리글리세라이드 (MCT) 및 AD + 0.1 % MCT + CBD2 mM에 공급 할 때 sexta. 곤충 증가율 및 생존율에 대한 통계 분석을 위해, 투키의 다중 비교 테스트(n = 20-22, p < 0.05)와 맨텔 콕스 테스트(n= 20-22, p < 0.05)를 사용한 단방향 ANOVA가 각각 사용되었다. 그림은 Reference31에서 조정됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 3: 칸 나비 디올 (CBD)의 효과 곤충 먹이 행동과 이동성에. (A) 인공 식단에 양육 담배 혼벌레 애벌레의 다이어트 소비 (A), A +1-2% 에탄올 (EtOH), AD + 1-2% CBD의 1-2m (편도 ANOVA, 투키 의 < 비교 에서 0.0). (B) 곤충 이동성. 이동성은 동결 %로 묘사됩니다. p < 0.01을 나타냅니다. 그림은 Reference31에서 조정됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

토론

수유 연구는 CBD (2 mM)의 고용량이 곤충의 성장을 억제하고 사망률을 증가시켰다는 것을 보여 주었다31. 곤충 모델은 또한 에탄올에 대한 민감성을 보였다; 그러나 CBD는 에탄올 독성을 효과적으로 취화하여 생존율, 식이 소비 및 식품 검색 행동을 대조군과 유사한 수준으로 증가시켰습니다(그림 3A, B)31. 설명된 곤충 모델 시스템은 세 가지 중요한 단계로 구성됩니다: (1) M. sexta의 계란이 크기와 타이밍에 균일하게 부화되도록 보장하고, (2) 카나비노이드와 균일하게 혼합되는 성장 매체를 표적 농도로 준비하고, (3) 40%-60%의 이상적인 습도 수준을 유지하면서 곰팡이 오염이 없도록 성장 매체를 유지한다. 곤충 모델 시스템을 통해 미디어 준비부터 데이터 수집 및 해석에 이르기까지 25일 이내에 연구 문제를 해결할 수 있었습니다. 가장 중요한 것은 곤충 계통이 대형 표본에서 일관된 결과를 낳았다는 것입니다.

경작 M. sexta 애벌레의 성공을 보장하기 위해, 용기 내부의 상대 습도를 40%-60%로 유지하는 것이 필수적이다. 용기가 높은 습도를 유지하지 못하면 카나비노이드를 함유 한 인공 식단이 급속히 건조되어 곤충의 죽음으로 인해 조기 실험 종료가 발생합니다. 그러나, 폐쇄 된 시스템에서, 높은 습도는 근절하기 어려운 곰팡이 발생에 대한 이상적인 조건을 제공합니다. 저자는 천공 뚜껑이나 치즈 천을 사용하여 미디어의 물 손실을 최소화하면서 충분한 공기 순환을 공급할 것을 제안합니다. 자연 환경에서 애벌레는 잎의 표면적보다 더 적은 트리홈을 제시하면서 습도가 높은 잎의 축축측을 공급하는 것을 선호합니다34. 따라서, 용기를 거꾸로 놓는 것은 피난처 지역을 제공하거나 나무 막대기를 기어 다니는 동안 매우 도움이되었습니다. 이것은 또한 미디어 영역에서 배설물을 제거하는 데 도움이되며 추가 적인 약에 대한 폐기물을 쉽게 수집 할 수 있습니다.

칸 나비 노이드 수용체가 invertabrates35에 없기 때문에, 담배 hornworm M. sexta는 엔도 칸 나비 노이드 시스템에 의해 중재 된 치료 연구에 적합하지 않을 수 있습니다. 그러나, 우리의 파일럿 연구에서 입증 된 수많은 혜택으로, 곤충은 칸 나비 노이드의 약리 기능을 조사하는 새로운 모델 시스템으로 간주되어야한다, 특히 비 CB 수용체 매개 약동과 관련된 연구. M. sexta의 상대적으로 짧은 수명 주기는 연구원이 더 높은 포유류 모형 유기체에 있는 실험적인 디자인을 허용하는 다세대에 있는 칸 나비노이드 를 함유하는 규정식의 충격을 이해할 수 있습니다.

공개 사항

저자는 이해상충이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 콜로라도 주립 대학 - 푸에블로와 과학 ICT부 (2021-DD-UP-0379)와 춘천시 (대마 R&D 및 산업화, 2020-2021)의 대마초 연구 연구소에 의해 지원되었다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
분석 저울Mettler Instrument Corp.AE100S
칸나비디올 분리물(>99.4%)Lilu's Garden
CheeseclothVWR INTERNATIONAL470150-438
Corning 50mL 투명 폴리프로필렌(PP) 원심분리기 튜브VWR89093-192
에틸 알코올, 200 프루프Sigma-AldrichEX0276-1
공포 컨디셔닝 챔버Coulbourn 악기
: 곤충 사육 챔버: Darwin ChambersINR034
중쇄 트리글리 세라이드 (MCT) 오일, 월마트
모션 감지 소프트웨어 (Actimetrics) :Coulbourn Instruments
폴리스티렌 페트리 접시 (120mm x 120mm x 17mm)VWR INTERNATIONAL688161
담배 호름 웜 인공 다이어트Carolina Biological Supply Company항목 # 143908바로 사용할 수 있는 뿔벌레 다이어트
담배 호름웜 알Carolina Biological Supply Company항목 # 14388030-50 단위

참고문헌

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