괴사 장염 (NEC)은 미숙아, 특히 매우 낮은 출생 체중 유아에서 자주 발생하는 가장 심각한 위장 (GI) 질병이며 사망률이 높고 불분명한 병인. NEC의 원인은 염증성 면역 규제 시스템 이상과 관련이 있을 수 있습니다. NEC 동물 모델은 NEC 질병 면역 연구를 위한 필수 도구입니다. NEC 동물 모델은 일반적으로 C57BL/6J 신생아 마우스를 사용; BALB/c 신생아 마우스는 거의 사용되지 않습니다. 관련 연구는 마우스가 감염될 때, Th2 세포 분화는 C57BL/6J 마우스에 비해 BALB/c 마우스에서 우세하다는 것을 보여주었습니다. 연구 결과는 NEC의 발생 그리고 발달이 T 도우미 타입 2 (Th2) 세포의 증가와 연관되고 일반적으로 감염을 동반한다는 것을 건의했습니다. 따라서, 본 연구는 신생아 BALB/c 마우스를 사용하여 NEC를 가진 아이들에서 관찰된 것과 유사한 임상 적 특성 및 장 병병리학적 변화를 가진 NEC 모델을 유도하였다. 추가 연구는 이 동물 모형이 NEC에 있는 Th2 세포 반응을 공부하기 위하여 이용될 수 있었다는 것을 결정하기 위하여 보증됩니다.
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방법 논문
괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
정오 공지
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요약
초록
괴사 장염 (NEC)은 미숙아, 특히 매우 낮은 출생 체중 유아에서 자주 발생하는 가장 심각한 위장 (GI) 질병이며 사망률이 높고 불분명한 병인. NEC의 원인은 염증성 면역 규제 시스템 이상과 관련이 있을 수 있습니다. NEC 동물 모델은 NEC 질병 면역 연구를 위한 필수 도구입니다. NEC 동물 모델은 일반적으로 C57BL/6J 신생아 마우스를 사용; BALB/c 신생아 마우스는 거의 사용되지 않습니다. 관련 연구는 마우스가 감염될 때, Th2 세포 분화는 C57BL/6J 마우스에 비해 BALB/c 마우스에서 우세하다는 것을 보여주었습니다. 연구 결과는 NEC의 발생 그리고 발달이 T 도우미 타입 2 (Th2) 세포의 증가와 연관되고 일반적으로 감염을 동반한다는 것을 건의했습니다. 따라서, 본 연구는 신생아 BALB/c 마우스를 사용하여 NEC를 가진 아이들에서 관찰된 것과 유사한 임상 적 특성 및 장 병병리학적 변화를 가진 NEC 모델을 유도하였다. 추가 연구는 이 동물 모형이 NEC에 있는 Th2 세포 반응을 공부하기 위하여 이용될 수 있었다는 것을 결정하기 위하여 보증됩니다.
서론
가장 심한 위장(GI) 질환인 괴사 장염(NEC)은 대부분의 미숙아(>90%)에서 발생하며, 특히 출생체중(VLBW)1이 매우 낮은 것으로 발생합니다. VLBW 유아에서는 질병의 부각이 10%에서 12%까지 다양하며 NEC로 진단된 어린이의 사망률은 20%에서 30%2,3사이입니다. NEC의 원인은 점막 손상, 병원성 박테리아에 의한 침입 및 장 수유와 관련이 있을 수 있으며, 이는 염증 반응및 민감성 호스트에서 장 손상의 유도로 이어질 수 있습니다3. 선관위의 병기는 불분명하다. 관련 연구는 영향을받는 유아의 면역 반응이 비정상이며 유전 적 감수성, 미세 혈관 긴장 및 장 세균 변화가 질병에 중요한 역할을 할 수 있음을 보여줍니다3.
NEC 동물 모델은 NEC의 발병기에 대한 연구를 위한 필수 도구입니다. NEC 모델에 사용되는 동물 종은 돼지, 쥐 및 마우스입니다. 그러나, 긴 임신 기간, 성장 주기 및 높은 비용으로 인해, 최근 몇 년 동안, 돼지는 NEC 모델에 대한 첫 번째 선택이 되지 않았으며 쥐 또는....
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프로토콜
이 연구는 광저우 여성 및 아동 의료 센터의 의료 윤리위원회 (NO. 174A01)와 광저우 포에버겐 생명 과학 실험실 동물 센터 (IACUC-G160100)의 동물 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. 모든 동물은 특정 병원체없는 (SPF) 환경에서 같은 방에서 사육되었고, 실험은 기존의 환경에서 수행되었다. 사육에 사용되는 마우스는 7-8 주 오래되었습니다. NEC(n=72)를 유도하기 위한 마우스는 4일째 댐에서 분리되었고, 댐(n=14)은 원래 케이지에 보관되어 대조군(Cont.) 그룹 마우스(n=24)를 간호하였다.
1. 시약 및 장치 준비
- 해당 비율로 BALB/c 마우스용 우유 대용품을 준비합니다(미숙아 분유: 염소 분유 = 2:1).
참고: 분유12 의 최종 영양 조성물은 표 1에 표시됩니다. - LPS 용액 (2.5 mg/mL)
- 총 10 mg의 LPS 분말을 멸균 된 이중 증류수 4mL에 녹이고 잘 섞고 알리 쿼팅 후 -20 °C의 냉장고에 보관하십시오.
참고: LPS 용액은 2-8°C의 어둠 속에서 즉시 사용하거나 장기 저장을 위해 -20°C에 저장됩니다.
- 총 10 mg의 LPS 분말을 멸균 된 이중 증류수 4mL에 녹이고 잘 섞고 알리 쿼팅 후 -20 °C의 냉장고에 보관하십시오.
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결과
BALB/c 마우스 NEC 모델은 수식 공급, LPS 공급, 저산소증 및 감기 자극에 의해 유도되었다. 유도 기간 동안, 마우스는 장 병리학, 대변 특성, 체중 변화 및 일일 생존을 위해 관찰되었다. NEC 유도 중 소장의 대표적인 이미지; 그림의 숫자는 0(정상 상피)에서 4(가장 심한) 장 병리 점수를 나타낸다(그림 3A). 장 병리학 점수는 CONt. 그룹(그림 3B)보다 NEC 그룹에서 상당히 높았다. 그림의 숫자는 0(잘 형성된 펠릿)에서 3(액체 의자)(그림 3C)의 대변 점수를 나타냅니다. 10일 선관위 그룹의 대변 점수는 NEC 그룹에서 현저히 높았으며, 이는 NEC 그룹의 장기능 장애가 더 심각하다는 것을 나타낸다(그림 3D). NEC 모델 의 유도 첫날인 5일째에는 두 그룹 간의 신체 크기에 큰 차이.......
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토론
NEC는 신생아를 위한 일반적인 위장 시스템 비상사태입니다, 높은 부각및 사망, 특히 미숙아1,2,3에서. 그러나, 그것의 병인은 아직도 불분명합니다. 현재 점막 손상, 병원균 침범 및 장내 수유가 NEC3의 고위험 요인이라고 여겨지고 있습니다. 현재까지 NEC 모델에 사용되는 동물은 주로 돼지, 쥐 및 마우스입니다. 대부분의 연구는 NEC13,14,15,16을 유도하기 위해 신생아 C57BL/6 마우스를 사용했으며, 아주 소수의 연구가 NEC를 유도하기 위해 BALB/c 신생아 마우스를 사용한 적이 거의 없다.
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공개 사항
저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
저자는 광저우 여성 및 어린이 의료 센터의 임상 생물 자원 은행과 쥐를 제공하기위한 광저우 포에버겐 생물 과학 실험실 동물 센터를 제공한 것에 대해 감사드립니다. 이 연구는 중국 보조금 81770510 (R.Z.)의 국립 자연 과학 재단에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 절대 에탄올 | Sinopharm 화학 시약 Co., LTD. | ||
| 염소 분유 | 페태그 | ||
| HE 염료 용액 | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
| Isoflurane | RWD, 심천 보상 생활 기술 Co., LTD. | R510 | |
| LPS | 시그마-애드리치 | L2880 | |
| 의료용 산소 | 다양한 | ||
| 현미경 | 니콘 | 니콘 이미징 시스템(DS-Ri2) | |
| 중성 수지 | 시노팜 화학 시약 Co., LTD. | ||
| 파라핀 | 다양한 | 조 | |
| 산 분유 | Abbott | 57430 | |
| Xylene | Sinopharm 화학 시약 Co., LTD. | ||
| 1% 염산 | 다양한 | 10 | |
| % 포르말린 | LEAGENE | DF0110 |
참고문헌
- Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
- Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonat....
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재인쇄 및 허가
정오
Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 3/07/2022. Citeable Link.
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
