여기에 제시된 것은 실제 현장 환경 온도 및 조명 조건에서 미생물 매트의 1차 생산성을 측정하기 위한 비용 효율적이고 운송 가능한 방법/시설입니다. 실험 설정은 널리 사용 가능한 재료를 기반으로하며 실험실 기반 모델의 장점을 제공하면서 다양한 조건에서 사용할 수 있습니다.
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여기에 제시된 것은 실제 현장 환경 온도 및 조명 조건에서 미생물 매트의 1차 생산성을 측정하기 위한 비용 효율적이고 운송 가능한 방법/시설입니다. 실험 설정은 널리 사용 가능한 재료를 기반으로하며 실험실 기반 모델의 장점을 제공하면서 다양한 조건에서 사용할 수 있습니다.
성장기 구배 동안 페리피톤의 현장 1차 생산성을 측정하면 환경 동인(주로 인 농도 및 광도)과 종 구성이 1차 생산성에 미치는 정량적 효과를 설명할 수 있습니다. 1 차 생산성은 주로 광도, 온도, 영양소의 가용성 및 유포 영역의 각 깊이에서 탄산염 시스템의 이온 종의 분포에 의해 좌우됩니다. 실험실에서 시뮬레이션하기가 매우 어려운 복잡한 시스템입니다. 이 저렴하고 운송 가능하며 건조하기 쉬운 플로팅 바지선을 사용하면 실제 자연 조건에서 직접 1차 생산성을 정확하게 측정할 수 있습니다. 이 방법론은 단단히 밀봉된 유리병에 통합된 비침습적 산소 센서를 사용하여 실시간으로 1차 생산성을 측정하여 온라인 산소 플럭스 모니터링을 가능하게 하고 대사 활동에 대한 새로운 통찰력을 제공하는 것을 기반으로 합니다. 미생물 매트(또는 기타 저서 생물)의 총 1차 생산성에 대한 상세한 계절적 현장 측정은 렌틱 수역에서 1차 생산성 역학을 제어하는 공정에 대한 현재 지식을 향상시킬 수 있습니다.
1 차 생산성은 전체 시스템 먹이 그물을 형성하는 수생 시스템으로 자동 탄소가 들어가는 유일한 항목입니다1. 따라서 1 차 생산성의 정확한 추정은 수생 생태계의 기능을 이해하는 데 필수적인 단계입니다. 연안 지역은 1 차 생산성과 생물 다양성이 높은 지역입니다. 식물성 플랑크톤 외에도 페리피톤(이하 미생물 매트라고 함)과 거대조류는 연안 지역2의 1차 생산성에 크게 기여하는 것으로 추정됩니다. 그들의 정착 생활 방식과 상당한 공간적 이질성으로 인해 1 차 생산성의 정량화는 쉽지 않습니다.
1 차 생산성은 주로 광도, 온도, 영양소의 가용성 및 유포 영역 3,4의 각 깊이에서 탄산염 시스템의 이온 종의 분포에 의해 주도됩니다. 깊이는 미생물 매트의 공간 분포에 현저한 영향을 미칩니다. 미생물 군집은 얕은 깊이에서 높은 조사와 뚜렷한 계절적 온도 변화의 부작용에 대처하고 더 깊은 깊이에서 더 낮은 광도에 대처해야 합니다. 깊이 구배 외에도 동적 영양 상호 작용은 서로 다른 스케일5에서 여러 개의 복잡한 공간 패턴을 생성합니다. 이 복잡한 시스템은 실험실에서 시뮬레이션하기가 복잡합니다. 연안 지역에서 개별 1 차 생산자의 대사 활동을 추론하는 가장 정확한 방법은 현장 실험을 설정하는 것입니다.
이 백서에 소개된 방법론은 기존의 챔버 방법 2,6,7과 운송 가능하고 건설하기 쉬운 저비용 부유식 바지선을 기반으로 합니다. 이를 통해 자연광 스펙트럼, 온도 및 깊이에 따른 탄산염 시스템의 이온 종의 상이한 분포 하에서 상이한 깊이에서의 1차 생산성의 측정이 가능해진다. 이 방법은 식물성 플랑크톤 광합성6을 측정하기 위해 처음 사용되었으며 여전히 일반적으로 사용되는 6,7인 밝은 병 대 어두운 병 산소의 원리를 기반으로 합니다. 빛 속에 보관된 병의 산소 변화율(1차 생산성 및 호흡의 영향 포함)과 어둠 속에 보관된 병(호흡만 해당)을 비교합니다.8. 이 방법은 산소 발생 (광합성)을 1 차 생산성의 대용으로 사용합니다. 측정 된 변수는 순 생태계 생산성 (NEP, 조명 조건에서 시간에 따른 O 2 농도의 변화) 및 생태계 호흡 (RE, 어둠 속에서 시간에 따른 O2 농도의 변화)입니다. 총 생태계 생산성 (GEP)은 둘 사이의 차이를 계산 한 것입니다 (표 1). 여기서 "생태계"라는 용어는 페리피톤이 독립 영양 및 종속 영양 유기체로 구성되어 있음을 나타내는 데 사용됩니다. 이 전통적인 챔버 방법의 가장 중요한 개선은 비침습적 산소 광학 센서를 사용하고 주변 1차 생산성을 측정하기 위해 주로 플랑크톤 방법을 최적화하는 것입니다.
이 기술은 체코-밀라다, 모스트, 메다르에서 새로 등장한 광산 후 호수의 연안 지역에서 미생물 매트를 측정하는 예에 설명되어 있습니다. 미생물 매트의 대사 활성은 연구 된 군집이 자연적으로 발생하는 특정 깊이에서 직접 수행되는 O2 플럭스의 직접 현장 측정을 사용하여 결정됩니다. 종속영양 및 광영양 활동은 비침습적 광학 산소 센서가 장착된 밀폐된 유리병에서 측정됩니다. 이 센서는 빛에 민감한 염료의 형광을 사용하여 산소 분압을 감지합니다. 미생물 매트가있는 병은 적절한 깊이의 부유 장치에 매달려 배양됩니다. 병 내부의 산소 농도는 작은 보트에서 낮 기간 동안 지속적으로 측정되었습니다.
온전한 미생물 매트의 샘플을 수집하여 스쿠버 다이버가 지정된 깊이의 기밀 배양 병에 넣습니다. 각 병에는 시간 경과에 따른 O2 생산성 / 소비를 모니터링하는 비 침습적 광학 산소 마이크로 센서가 장착되어 있습니다. 모든 측정은 각 깊이에서 5개의 반복 어두운/밝은 쌍으로 수행됩니다. 온도 및 광합성 활성 방사선(PHAR) 강도는 배양 전반에 걸쳐 각각의 깊이에서 측정됩니다. 6시간의 계내 배양(일광 시간) 후, 미생물 매트를 병으로부터 수확하고 건조시킨다. O2 플럭스는 미생물 바이오매스로 정규화된다. 대조군으로서, 플럭스는 미생물 매트 바이오 매스가없는 호수 물을 포함하는 별도의 밝고 어두운 가스 밀폐 병 (블랭크 컨트롤)에서 O2 농도의 변화에 대해 보정됩니다. 다음은 플로팅 바지선을 만들고 전체 실험을 단계별로 수행하기위한 자세한 지침입니다. 이 논문은 또한 두 개의 깊이(1m 및 2m)에서 미생물 매트를 측정한 대표적인 결과를 제시하며 각 깊이에서 5번의 반복을 수행합니다. 실제 온도와 광도는 데이터 로거를 사용하여 전체 실험 중에 측정되었습니다.
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참고: 샘플링하기 전에 전체 프로젝트 요구 사항, 통계 설계 또는 예상되는 표본 변동성을 기준으로 복제 정도를 결정합니다. 정확한 통계 분석과 잠재적인 샘플 손실 또는 파손을 설명하기 위해 5쌍의 밝고 어두운 배양 병의 5쌍이 제안됩니다. 설명 된 부유 식 실험 바지선은 5 개의 반복과 1 쌍의 빈 컨트롤을 운반하도록 설계되었습니다. 실험 바지선의 기술 도면은 그림 1 을 참조하십시오.

그림 1: 실험 바지선과 측면 플로트의 기술 도면. (A) 평면도: 바지선의 프레임은 4개의 알루미늄 플랫 바(회색)로 결합된 4개의 알루미늄 앵글 L 프로파일 조각(파란색)으로 구성됩니다. XPS 플로트 (분홍색)는 평행 한 알루미늄 조각의 두 지점에서 프레임에 장착됩니다. 배양 병 용 체인은 550mm 간격으로 미리 뚫린 구멍 (빨간색 화살표)에 스냅 후크를 사용하여 양쪽의 프레임에 부착됩니다. 체인에는 배양 병 부착을 위해 1m 및 2m 거리에서 스냅 후크가 제공되었습니다(실험 깊이에 따라 스냅 후크 위치 선택). 콘크리트 앵커는 바지선의 선수에 고정되어 있으며, 25mm의 돌출부는 앵커의 체인과 연구 선박의 부착 지점 역할을 할 두 개의 미리 뚫린 구멍(노란색 화살촉)을 허용합니다. 프레임은 4개의 알루미늄 앵글 조각(녹색 화살촉) 사이의 평행 조인트를 통해 쉽게 조립 또는 분해됩니다. (B) 측면도는 매달린 배양 병과 콘크리트 앵커 (갈색 사각형)가있는 매달린 체인을 보여줍니다. (C) 측면 XPS 플로트 : 평행 알루미늄 앵글 L 조각 (파란색)은 수직 알루미늄 플랫 바 (회색)로 연결됩니다. 크로스바 섹션 아래에 XPS 플로트 (분홍색)가 필요한 구멍 크기 (4mm)로 장착됩니다. 매달린 체인은 8mm 구멍 (빨간색 화살촉)에 스냅 후크로 부착됩니다. 바지선의 선수에는 돌출된 알루미늄에 두 개의 8mm 구멍이 뚫려 있는데, 하나는 바지선에 앵커를 고정하기 위한 것이고(노란색 화살촉) 다른 하나는 연구선을 바지선에 계류하기 위한 것입니다(파란색). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
1. 실험용 바지선 건설
알림: 플로팅 바지선은 함께 장착된 두 개의 동일한 섹션으로 구성되어 있어 쉽게 조립/분해할 수 있습니다. 모든 중고 부품은 취미 시장이나 건축 자재를 판매하는 상점에서 구입할 수 있습니다.

그림 2: 조립된 실험용 바지선. 조립 된 실험 바지선의 사진. 빨간색 화살촉은 인큐베이션 병으로 체인을 부착하기위한 구멍을 보여줍니다. 녹색 화살촉은 플로트의 두 반쪽이 함께 연결된 위치를 가리킵니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3: 인큐베이션 병. 1m 깊이에 매달려있는 두 쌍의 어둡고 가벼운 배양 병 사진. 한 쌍의 병에는 돌 위에서 여전히 자라는 손상되지 않은 미생물 매트 샘플이 들어 있습니다 (빨간색 화살촉). 두 번째는 각각의 깊이에서 호수 물이 담긴 빈 병입니다. 노란색 화살촉은 배양 병의 내벽에 부착 된 산소 센서 지점을 가리 킵니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
2. 현장에서의 설치
3. 인큐베이션 병 준비
4. 샘플 수집 및 취급
알림: 다이버는 더 깊은 물에서 샘플을 수동으로 수집합니다. 얕은 물에서는 스노클링이나 물놀이로 할 수 있습니다.
5. 1차 생산성 측정
알림: 보트에 앉아있는 사람은 다이버에게서 상자를 가져 와서 다음 단계를 수행합니다.

그림 4: 현장의 실험 설정 스키마. 호수 표면에 정박된 실험용 바지선의 그림. 미생물 매트 바이오 매스가 들어있는 배양 병 (0.5 L)은 두 가지 다른 깊이 (1m 및 2m)에 매달려 있습니다. 다이버들은 미생물 매트 샘플을 적절한 깊이의 배양 병에 직접 수집했습니다. 개별 병의 산소 농도는 선박에서 측정됩니다. 병이 물에서 꺼냅니다. 산소 농도 값은 산소 센서에 광 케이블을 연결하여 몇 초 안에 측정됩니다. 그런 다음 병을 조심스럽게 다시 물 속으로 내립니다. 두 깊이에서 두 쌍의 배양 병을 측정하는 전체 절차는 ~ 2 분이 걸립니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
6. 샘플 분석
7. 데이터 분석
)를 합리적인 단위로 변환하십시오.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
, ,
, 
및 를 각각 할당하면 생산성 GEP 계산을 위한 방정식 (8)은 다음과 같이 작성할 수 있습니다.
(8.1)
(8.2)
(8.3)
독립 영양 및 종속 영양 호흡의 합을 나타냅니다 (그림 5B; RE, 즉, 두 호흡이 어둡고 밝은 조건에서 유사하다고 가정).
와
가
둘 다 음수라고 가정합니다
. 가 양수이면
원시 데이터에 특이치가 있는지 주의 깊게 확인합니다. 종속영양 활동으로 인한 호흡 손실이 광합성 활동보다 높을 수 있기 때문에 이론적으로 음수일 수 있습니다. 
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그림 5: 낮 동안 미생물 매트의 순 및 총 생태계 생산성. (A) 가벼운 병-순 생태계 생산성 : 가벼운 병에서 미생물 매트의 순 산소 생산성의 시간 과정 데이터. 배양 병의 산소 농도 변화는 낮 동안 1 시간 후에 측정되었습니다. 회색 원: 미생물 매트 샘플이 있는 병. 흰색 원: 호수 물만 담긴 빈 병. (B) 어두운 병 호흡: 어두운 병의 독립 영양 및 종속 영양 호흡의 합. 배양 병의 산소 농도 변화는 일광 기간 동안 1 시간 후에 측정되었습니다. 회색 원: 미생물 매트 샘플이 있는 병. 흰색...
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이 백서에 설명 된 방법론은 광학 산소 센서를 사용하여 O2 농도를 측정하는 비 침습적 기술과 결합 된 밝고 어두운 병 산소 기술의 원리를 기반으로합니다. 이 시스템은O2 측정을 위한 광섬유를 병에서 병으로 빠르게 이동할 수 있으므로 다양한 배양 설정을 병렬로 측정할 수 있습니다. 다양한 깊이의 저서 공동체는 분류 학적 구성과 생산성이 다를 수 있습니다. 병렬로 동시에 측정하면 시간을 절약하고 결과를보다 정확하게 만들 수 있으므로 periphyton이 자라는 전체 깊이 프로파일을 계산할 수 있습니다. 쉐이크 플라스크에 통합된 비침습적 산소 센서는 실시간 산소 플럭스 모니터링을 가능하게 합니다.
설계된 실험 설정을 통해 군집이 자연적으로 발생하는 각 깊이에서 미생물 군집의 1차 생산성을 측정할 수 있으며, 이는 실험실에서 시뮬레이션하기 어렵습니다(적절한 압력, 일주 과정의 온도 및 현장 광도 변화 추적, 다양한 영양소 가용성)...
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저자는 공개 할 이해 상충이 없음을 확인합니다.
이 연구는 체코 과학 재단 (GACR 19-05791S), RVO 67985939 및 전략 AV 21, 토지 절약 및 복구 프로그램 내에서 CAS의 지원을 받았습니다. 현장에서 촬영을 해준 Ondřej Sihelský에게 많은 감사를 드립니다 - 그가 없었다면 촬영은 완전히 지옥이었을 것입니다. 이 프로젝트는 연구 된 지역에 대한 액세스를 제공 한 Palivový Kombinát Ústí s.p. 및 Sokolovská Uhelná와의 긴밀한 협력 없이는 불가능했을 것입니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 알루미늄 각도 L 프로파일 40 x 40 mm x 3 mm, 길이 2,000 mm | |||
| 알루미늄 플랫 바 40 x 3 x 350 mm | |||
| 버킷 15 L 콘크리트 충전재 | |||
| 나사 잠금이 있는 카라빈 후크 50 x 5 mm | |||
| 전기 테이프 검정 | |||
| 압출 폴리스티렌 (XPS) 재료 500 x 200 x 150 mm | |||
| Fibox 3 LCD 추적 | PreSens Precision Sensing GmbH | 독립형 광섬유 산소 측정기 | |
| Hondex PS-7 휴대용 깊이 사운더 | Hondex - Honda | - 바닥에서 깊이까지 측정; https://www.honda-el.net/industry/ps-7e | |
| KORKEN - 유리 밀폐 항아리 0.5 L | IKEA | 인큐베이션 병; https://www.ikea.com/cz/en/p/korken-jar-with-lid-clear-glass-70213545/ | |
| 금속 후크 | |||
| 산소 센서 스폿 SP-PSt3-NAU-D5 | PreSens Precision Sensing GmbH | 실제 조건에서 측정을 위한 비침습적 광학 산소 센서 | |
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| 와셔 4 x 10 mm |
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