안지오텐신 II의 마우스 모델에서 중앙 정맥 카테터에 의한 약물 치료 유도 복부 대동맥류 및 3D 초음파에 의한 모니터링

복부 대동맥류 (AAA)는 궁극적으로 파열과 환자 사망으로 이어질 수있는 대동맥벽의 염증 및 조직 파괴 과정으로 인한 혈관의 병리학 적 팽창입니다. 외과 적 AAA 수리에서 상당한 업적에도 불구하고, 동맥류 확장의 진행을 차단하고 잠재적으로 파열의 위험을 낮추는 보수적 인 약물 치료는 현재까지 누락되었습니다. 동물 모델은 질병의 유발 요인과 중재자를 밝히고 치료에 대한 새로운 접근법을 테스트하기 위해 개발되었습니다. AAA의 마우스 모델은 널리 적용되고 인간 조직으로부터의 상이한 관찰을 포괄한다. 그들의 pathomechanistic 차이로 인해, 종종 분자 / 경로의 특정 기능 또는 잠재적 인 치료 약물 ^1,2의 효능을 조사하기 위해 하나 이상의 모델이 적용됩니다. AAA 유도의 가장 일반적으로 사용되는 모델 중에는 아포리포단백질 E 결핍(ApoE KO) 마우스³에서의 안지오텐신-II(Ang-II) 투여가 있는데, 이는 급성 모욕으로부터 대동맥벽 ^4,5에 이르는 동맥류 형성에 의존하는 모델에 비해 더 만성-유사 병인을 갖는다. 따라서, Ang-II 모델은 질환 진행을 모니터링하는데 특히 적합한 것으로 보이며, 최근에는 대사 및 염증 반응과 관련하여 인간 AAA 질환과 매우 유사한 것으로 나타났다⁶. 특히, Ang-II 모델은 AAA 발달뿐만 아니라 흉부 동맥류 형성뿐만 아니라 교내 혈전 형성을 통한 대동맥 박리를 특징으로합니다.

질병의 개시를 막기보다는 이미 확립된 AAA의 진행을 표적으로 하는 것을 목표로 하는 치료법은 치료^(7,8)를 필요로 하는 기존 병태를 갖는 환자로서 더 높은 번역 가치를 가질 수 있다. 비교 가능한 실험 설계의 경우, AAA 유도 전후에 대동맥 크기를 모니터링하여 질병 발생의 역치를 정의하고 잠재적으로 마우스를 치료 그룹으로 계층화해야합니다.

약물 투여 방식은 각 물질의 흡수 및 안정성에 달려 있습니다. 복강내(i.p.) 주사는 적용의 용이성, 마취제를 필요로 하지 않으며, 주사 부피의 제약의 부족으로 인해 가장 자주 이용된다⁽⁹). 그러나 약동학은 투여 경로를 선택할 때 i.p.가 주로 간 문맥 순환을 통해 흡수되고 순환에 도달하기 전에 간 대사를 겪을 수 있기 때문에 첫 번째 통과 효과¹⁰에 따라 혈장 농도가 달라질 수 있으므로 고려해야합니다. 정맥 내 (i.v.) 주사는 물질의 가장 높은 생체 이용률을 산출하고, 반복적 인 i.v. 접근의 도전은 매일 투여를위한 카테터 및 혈관 접근 포트의 사용에 의해 회피 될 수있다 ^11,12,13. AAA 설정과 관련하여, 순환에서의 약물 분포는 정의된 농도에서 직접적인 동맥류 노출을 용이하게 한다.

여기에서는 삼투압 펌프의 피하 이식을 통해 Ang-II 마우스 모델에서 AAA를 유도하기 위한 워크플로우를 설명하고, 외부 경정맥에 삽입된 카테터에 연결된 혈관 액세스 포트를 통한 일일 i.v. 약물 치료뿐만 아니라 두 개의 등쪽 임플란트가 있음에도 불구하고 3D 초음파⁽¹⁴ )를 통한 동맥류 크기의 모니터링을 위해 설명합니다.

동물 실험은 지역 윤리위원회와 오스트리아 과학부 (BMWFW-66.009/0355-WF/V/3b/2016)의 승인을 받았으며 과학적 목적으로 사용되는 동물 보호에 관한 유럽 지침 2010/63/EU와 오스트리아 동물 실험법 2012을 준수했습니다. ≥15 % 체중 감소, 음식 및 / 또는 수분 섭취 피하기, 활동 감소 (운동 저하증) 또는 운동 장애 또는 통증 / 증상 관리에도 불구하고 장기간의 흔들림, 긁힘, 호흡 곤란 또는 구부러진 자세. 필요한 경우, 동물을 깊은 마취, 즉 케타민 (약 100 mg / kg)과 자일라진 (약 5 mg / kg)의 과다 복용 칵테일 또는 자궁 경부 탈구로 안락사시킵니다. 외과 적 절차의 경우 무균 기술과 멸균 / 깨끗한 장갑이 전체적으로 사용됩니다.

1. 펌프 이식

1. 마취
   1. ApoE 결핍 마우스(B6.129P2-Apoe^tm1Unc/J)를 정상 식단에 유지하고, 바람직하게는 인간 질병에서 남성 우세를 나타내기 위한 실험에 12-14주령의 수컷 동물을 포함시킨다³.
   2. 수술 1일 전(d-1, pre-OP), 제조자의 프로토콜에 따라 마우스 중량에 따라 원하는 농도의 안지오텐신 II로 삼투압 펌프를 준비하고 채우고, 펌프를 37°C에서 하룻밤 동안¹⁵개의 식염수로 인큐베이션한다.
      예: 25g 마우스의 경우, 1000ng/kg/min 전달 속도와 0.25μL/h 펌프 속도를 갖춘 삼투압 펌프( 재료 표 참조)를 사용하여 28일 동안 300μL의 식염수(Ang-II의 1500ng/h를 전달하기 위한 6000ng/μL 농도)에 Ang-II 1.8mg을 용해시킵니다. 무딘 충전 바늘로 용액을 펌프에 적재 한 다음 흐름 중재자를 삽입하여 펌프를 닫으십시오.
   3. 마우스를 무의식_{이 될 때까지} 2 L/min O2와 혼합된 3%-4% 이소플루란의 마취 챔버에 놓는다. 마우스를 경향이있는 위치의 가열 테이블 (37 °C)로 옮기고 코 콘을 통해 이소플루란 마취를 1.8 % -2 %로 유지하십시오.
   4. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 눈 윤활제를 바르십시오.
   5. 마우스에 10 μL/g의 식염수에 2.5% 부프레노르핀을 피하 주사하고 발가락 꼬집음으로 마취 깊이를 확인합니다.
   6. 마우스의 왼쪽 상단에 있는 작은 부분을 어깨 뼈 위로 다시 면도합니다. 면도 부위의 소독을 위해 10 % (w / v) 포비돈 요오드 용액을 바르십시오.
2. 펌프 삽입 (5-7 분, 현미경없이 수행)
   1. 마우스가 발가락 꼬집음으로 완전히 마취되었는지 확인하고 중추와 왼쪽 견갑골 선 사이의 메스로 등 위쪽의 피부에 1cm 횡단 절개를하십시오.
   2. 포셉으로 피부를 잡고 무딘 곡선 가위를 사용하여 왼쪽 뒷다리 쪽으로 밀어 피하 주머니를 만듭니다. 가위를 열고 열린 가위를 컷에서 꺼내 반복하여 주머니를 넓히십시오.
   3. 펌프를 꼬리쪽으로 유동 중재자와 함께 주머니에 부드럽게 삽입하십시오 (절개 부위에 의한 Ang-II 방출의 잠재적 간섭을 최소화하기 위해).
      참고 : 포켓은 펌프 삽입을 위해 충분히 넓을뿐만 아니라 피부가 펌프 주위에 단단하지 않아야하며 최적의 상처 치유를 위해 펌프와 절개 부위 사이에 적어도 5mm가 있어야합니다.
   4. 4-0 개의 흡수 가능한 중단 봉합사로 상처를 닫으십시오.
   5. 마우스에 10 μL / g의 마우스를 피하로 식염수에 10 % 포도당을 주사하십시오.
   6. 포비돈 요오드 상처 스프레이를 닫힌 상처에 바르고 마우스가 가열 램프 아래에서 의식을 회복 할 수있게 한 다음 수술 후 3 일 동안 200 mL의 식수에 7.5mg의 피리트라 미드 (연장 된 통증 관리를 위해)와 20 mL의 5 % 포도당으로 케이지로 돌려 보내십시오.
   7. 하루에 여러 번 마우스에서 통증이나 고통의 징후가 있는지 확인하십시오.
      참고 : 대동맥 파열은 20 % -40 % 비율로 발생하며 주로 수술 후 처음 3-10 일 이내에 발생하기 때문에 빈번한 동물 모니터링을 통해 장기간의 심한 통증이나 고통의 위험을 최소화해야합니다. 임박한 파열의 주요 징후는 그룹과의 분리, 구부러진 자세, 이동성 감소 (뒷다리 마비의 정도까지), 취급 중 감소 또는 무반응이 포함됩니다.

2. 경정맥 카테터 삽입

참고 :이 수술 절차에는 8x-10x 배율의 현미경이 필요합니다.

1. 혈관 접근 시스템 ( 재료 표 참조)을 사용하여 3Fr 측면을 원하는 길이 (실리콘 앵커 전에 ∼5-7 mm)로 절단하고 카테터를 혈관 액세스 시스템 (VAS)의 22 G 금속 커넥터 위로 밀어 넣어 카테터를 적어도 3 mm 겹침으로 준비하십시오. 포트에 보호하기 위해 버튼에 알루미늄 캡을 놓습니다.
2. 1-1.5cm 길이 6-0 실크 합자를 준비하십시오.
3. 마우스를 무의식_{이 될 때까지} 2 L/min O2와 혼합된 3%-4% 이소플루란의 마취 챔버에 놓는다.
4. 마우스를 수핀 위치의 가열 테이블(37°C)로 이동시키고, 코콘을 통해 이소플루란 마취를 1.8%-2%로 유지한다.
5. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 눈 윤활제를 바르십시오.
6. 마우스에 10 μL/g의 마우스를 피하로 식염수에 2.5% 부프레노르핀으로 주사한다.
7. 복부 측면과 위쪽 뒤쪽의 오른쪽에있는 목의 오른쪽에서 모피를 면도하십시오 (왼쪽에는 이식 된 삼투 펌프가 있습니다).
8. 면도 부위의 소독을 위해 포비돈 - 요오드 용액을 바르십시오.
9. 마우스가 발가락 꼬집음으로 완전히 마취되었는지 확인하십시오.
10. 경정맥 준비 (5-10 분, 현미경으로 수행)
    1. 오른쪽 쇄골 위로 목의 오른쪽에서 0.5cm 횡단 supraclavicular 피부 절개를하십시오.
    2. 무딘 미세 외과 핀셋을 사용하여 결합 조직과 지방을 분리하여 외부 경정맥을 노출시킵니다. 지방의 작은 혈관을 찢어 버리지 마십시오.
    3. 가슴 근육에 가까운 혈관의 적어도 5mm를 분리하십시오.
    4. 무딘 구부러진 마이크로 핀셋을 사용하여 정맥 아래의 조직을 해부하고 6-0 합자 중 2-3 개를 통과시킵니다.
       참고: 관심 영역에서 측면 가지가 확인되면 합자를 측면 가지에 인과적으로 삽입하거나 측면 분기를 6-0 합자로 분리하고 묶어서 영구적으로 결찰해야 합니다.
    5. 합자를 집어 넣고 식염수 한 방울을 사이트에 넣으십시오.
11. 버튼 이식 (5-7 분, 현미경없이 수행)
    1. 마우스를 뒤집어 경향이있는 위치에 놓습니다. 발가락 꼬집음으로 마취의 깊이를 확인하고 포비돈 요오드 용액을 적용하여 면도 부위를 소독하십시오.
    2. 중추와 오른쪽 견갑골 선 사이의 메스로 등 위쪽에 1cm 시상 절개를하십시오.
    3. 무딘 곡선 가위를 사용하여 둔한 해부로 절개 부위 주변의 VAS 크기보다 약간 큰 원형 포켓을 만드십시오.
    4. 무딘 곡선 가위를 사용하여 가위를 약간 연 다음 열린 가위를 당겨 목의 복부 절개 쪽으로 오른쪽 어깨 위로 두개골로 터널링하고 더 밀어 넣을 때 동작을 반복하십시오.
       참고: 이 단계에서는 마우스를 왼쪽으로 켤 수 있습니다.
    5. 터널이 복부 절개에 도달하면 복부에서 등쪽 절개까지 수술 클램프를 통과하십시오.
    6. 카테터의 3Fr 끝을 클램프에 부착하고 터널을 통해 카테터를 당겨 복부 목 절개에서 벗어나 VAS가 등쪽 절개에 배치되도록하십시오.
    7. VAS의 수술 펠트 디스크를 뒤쪽의 절개에 피하 삽입하십시오.
    8. 카테터의 클램핑을 풀고 칼슘과 마그네슘(PBS^-/-)이 없는 식염수 또는 인산염 완충 식염수로 플러시하고, 취급 도구의 포크 엔드를 사용하여 보호 알루미늄 캡을 제거한 다음 자기 끝을 사용하여 버튼을 잡고 액체가 1Fr 끝에서 누출될 때까지 해당 인젝터에 부착된 1mL 주사기로 주입합니다.
       참고: 카테터 플러싱은 대안적으로 단계 2.1에서 수행될 수 있다.
    9. 주머니에있는 버튼을 caudally 누르고 VAS의 플랜지 아래에있는 VAS의 펠트 디스크 위에 피부를 닫고 적어도 두 개의 4-0 개의 봉합사가 두개골로 중단됩니다.
       참고: 버튼 주위의 피부에 긴장이 가해지지 않도록 하십시오.
12. 정맥 카테터 삽입 (7-10 분, 현미경으로 수행)
    1. 마우스를 다시 수핀 위치로 뒤집고, 발가락 꼬집음으로 마취 깊이를 확인한 다음 절단 부위에 식염수 한 방울을 추가하십시오.
    2. 카테터와 경정맥 주위의 첫 번째 합자를 가능한 한 멀리 2-3 노트로 묶어 정맥을 리게이트하고 카테터를 외부에 고정시킵니다. 두 번째 합자를 가슴 근육에 가능한 한 가깝게 이동하십시오.
    3. 카테터를 필요한 길이로 짧게 하여 카테터의 ~3-5 mm가 정맥에 들어오도록 대각선 각도로 마이크로 가위로 절단하여 날카로운 끝을 만듭니다.
    4. 식염수로 채워진 1 mL 주사기에 부착된 27 G 바늘을 사용하여 정맥에 구멍을 뚫고, 고정된 두개골 합자를 당기고 바늘을 정맥에 평행하게 밀어냄으로써 정맥에 구멍을 뚫는다.
       참고: 역류에서 혈액이 정맥에서 누출되면 면봉을 사용하여 출혈이 멈출 때까지 압력을 가하십시오.
    5. 고정 된 두개골 합자를 당기고 구부러진 핀셋을 사용하여 카테터를 정맥으로 밀어 넣음으로써 동일한 방식으로 카테터를 정맥에 삽입하십시오. 카테터가 정맥과 정렬 될 때까지 카테터를 밀어 넣으십시오.
    6. 카테터가 정맥에 삽입되는 부위에 두 번째 합자를 2-3 노트로 묶고 혈액 누출이 없는지 확인하십시오. 세 번째 합자 및 일부 국소 지방 조직이 카테터를 추가로 고정하는데 사용될 수 있다.
    7. 마이크로 가위로 두 합자의 과도한 끝을 자르고 식염수 한 방울을 넣으십시오.
    8. 4-0 흡수 가능한 중단 봉합사로 피부를 닫으십시오.
    9. 마우스에 10 μL / g의 마우스를 피하로 식염수에 10 % 포도당을 주사하십시오.
    10. 취급 도구의 포크 끝을 사용하여 원하는 부피의 억제제 또는 PBS / 식염수를 마우스에 주입하여 보호 알루미늄 캡을 제거한 다음 자기 끝을 버튼으로 잡고 인젝터에 부착 된 1 mL 주사기로 주입하십시오.
        참고: 주입하기 전에 액체 한 방울이 나올 때까지 플런저를 눌러 주입 주사기에 공기 또는 기포가 없는지 확인하십시오. VAS의 인젝터와 주사기를 분리하면서 플런저에 양압을 유지하여 카테터 팁으로 혈액을 끌어 당겨 카테터 막힘을 일으키는 것을 방지하십시오.
    11. 닫힌 상처에 포비돈 요오드 상처 스프레이를 바르고 마우스가 가열 램프 아래에서 의식을 회복 할 수있게 한 다음 수술 후 3 일 동안 200 mL의 식수에 7.5mg의 피리트라미드 (연장 된 통증 관리를 위해)와 20 mL의 5 % 포도당으로 케이지로 돌려 보내십시오.
    12. 하루에 여러 번 마우스에서 통증이나 고통의 징후가 있는지 확인하십시오.
13. 매일 주사 (<5 분)
    1. 매일 주사를 위해, 마우스를 의식이 없고 호흡 속도가 느려_{질 때까지 2} L/min O2와 혼합된 3%-4% 이소플루란의 마취 챔버에 놓은 다음, 단계 2.12.10에서와 같이 주사한다. 카테터가 더 이상 정맥에 삽입되지 않았 음을 나타내는 주사 후 부종의 징후가 있는지 목에 확인하십시오. 또한 카테터가 가려지면 주사가 불가능합니다.
       참고 : 10 μL / g의 마우스 체중 1 일 주사는 마우스에 의해 잘 견뎌냅니다.

3.3D 초음파

1. 초음파 이미징 시스템, 가열 테이블 및 겔 워머를 준비하고, 트랜스듀서를 시스템에 부착하고, 횡방향 위치(즉, 마우스 척추에 수직)로 스테이지 위에 설정합니다.
2. 초음파 소프트웨어를 사용하여 30dB, 9.0mm의 이미지 깊이 및 8.08mm의 이미지 너비를 얻도록 설정을 조정합니다.
3. 마우스를 무의식_{이 될 때까지} 2 L/min O2와 혼합된 3%-4% 이소플루란의 마취 챔버에 놓는다. 마우스를 수핀 위치의 가열 테이블(37°C)로 이동시키고, 코콘을 통해 이소플루란 마취를 1.8%-2%로 유지한다.
4. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 눈 윤활제를 바르십시오.
5. 마우스 복부에 모피를 면도하십시오. 필요한 경우 제모 크림을 1 분 동안 바른 다음 젖은 거즈로 닦아내고 닦으십시오.
6. 무대의 네 개의 심전도 (ECG) 전극 각각에 전극 젤 한 방울을 추가하고 마우스 사지를 테이프로 붙입니다.
7. 마우스의 복부에 따뜻한 초음파 젤을 뿌리고 송신기를 내려 동물과 접촉하게하십시오.
8. 대동맥을 원형 빠른 맥동 혈관으로 식별하십시오.
   참고 : 열등한 정맥 카바 (IVC)는 대동맥 옆에 위치하며, 프로브를 단단히 누르면 대동맥이 안정적으로 유지되는 동안 IVC가 압축됩니다. 분석된 용기가 IVC가 아닌 대동맥이라는 확인은 맥파 도플러(PW-mode)를 사용하여, 65°의 각도로 얻을 수 있다. 대동맥은 높은 맥파 속도를 가질 것입니다.
9. 왼쪽 신장 동맥을 찾아 관심 영역 (즉, suprarenal 대동맥)에 간섭이 없는지 확인하기 위해 12mm까지 수동으로 두개골로 영역을 조사하십시오. 왼쪽 신장 동맥으로 돌아간 다음 왼쪽 신장 동맥에서 두개골로 프로브를 6mm로 설정합니다.
   참고: 3D 초음파는 지정된 길이(즉, 12mm)를 원점으로부터 중간 정도(6mm)부터 시작하여 지정된 길이(12mm)까지 두개골로 기록합니다. 간섭에 대한 문제 해결 단계에는 트랜스듀서를 약간 누르고, 트랜스듀서를 들어올린 다음 다시 내리고, 초음파 젤을 더 많이 적용하고, 스테이지의 각도를 기울이는 작업이 포함됩니다.
10. 3D 초음파 수집
    1. 호흡 게이팅을 25% 지연 및 50%의 윈도우로 설정하고, ECG 트리거(T1)를 50 ms로 설정한다(대동맥의 피크 수축기 확장을 기록하기 위해).
       참고: 호흡 게이팅은 호흡률과 운동 아티팩트가 제거되도록 하기 위한 노력에 따라 각 동물에 대해 최적화될 수 있습니다.
    2. 3D 옵션에서 스텝 크기가 0.076mm인 스캔 거리를 11.96mm로 설정하면 157프레임이 생성됩니다.
    3. 이 프로그램은 약 1-2 분 안에 157 프레임을 자동으로 획득합니다. 스크롤하여 이미지 품질을 확인하고 하위 수준인 경우 반복한 다음 이미지를 저장합니다.
11. 2D 직경 수집
    1. 호흡 게이팅 및 ECG 트리거를 끄고 suprarenal 대동맥의 12 mm 스트레칭에서 가장 큰 직경을 가진 영역을 수동으로 찾습니다.
    2. B 모드 이미지(¹⁶)를 획득한다.
    3. 또한 트랜스듀서를 이동하지 않고 동일한 사이트에서 시스템의 표준 설정을 사용하여 ECG 게이트 킬로헤르츠 시각화(EKV) 이미지를 획득합니다.
12. 스캔 종료
    1. 복부에서 초음파 젤을 닦아내고 마우스를 케이지로 되돌립니다. 마우스가 완전히 복구될 때까지 마우스를 모니터링합니다.

4. 초음파 분석

1. 볼륨 분석
   1. 분석 소프트웨어에서 3D 모드 이미지를 열고 이미지 처리 메뉴에서 3D로로드를 누르면 157 개의 2D 프레임이 3D 이미지 (예 : 큐브)로 컴파일됩니다.
   2. 볼륨 측정 메뉴에서 병렬 및 회전 방법을 선택하면 소프트웨어가 3D 이미지를 단일 창에 표시합니다.
   3. 볼륨(Volume)에서 시작(Start)을 누르고 첫 번째 점을 클릭하여 추가하고 커서를 대동맥 주위로 이동한 다음 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하여 윤곽선을 완료하여 대동맥의 내벽 주위에 첫 번째 윤곽선을 그립니다.
   4. 9-10프레임(0.75-1mm)을 건너뛴 다음 같은 방식으로 다른 윤곽선을 그립니다. 마지막 프레임에 도달할 때까지 이 단계를 반복합니다. 이로 인해 16-17 개의 윤곽선이 발생합니다.
      참고: 첫 번째 프레임과 마지막 프레임에는 12mm 이상의 정확한 볼륨을 계산하기 위해 윤곽선이 그려져 있어야 합니다.
   5. 메뉴에서 첫 번째 윤곽선을 선택하고 구체화를 선택합니다. 이것은 선박 벽에 선을 가깝게 맞추기 위해 가장자리 감지 알고리즘을 시작합니다. 윤곽선의 점을 새 위치로 드래그하여 윤곽선이 대동맥의 내벽 가장자리를 정확하게 정렬하도록 합니다.
      참고: Ang-II 모델에서는 교내 혈전이 존재할 수 있습니다. 이것이 이 모델의 일반적인 특징이기 때문에, 부피 측정은 혈전을 포함해야 한다.
   6. 모든 윤곽선을 구체화하고 마침 을 눌러 분석을 저장합니다. 계산된 볼륨이 왼쪽 하단 모서리에 표시됩니다.
2. 직경 분석
   참고: 직경 측정은 내벽, 외벽에서 외벽 또는 내벽에서 외벽으로 수행될 수 있지만 모든 측정에 대해 일관성이 있어야 합니다. 그러나 Ang-II 모델에서는 교내 혈전이 존재할 수 있으며 이는 분석에 포함되어야합니다.
   1. 3D 모드 이미지에서: 157개의 프레임을 평가하여 육안 검사로 최대 직경을 식별합니다. 그런 다음 측정 메뉴에서 선형을 선택하고 대동맥을 가로 질러 여러 선을 그려 가장 큰 지름 을 결정합니다.
   2. B 모드 또는 EKV (ECG 게이트 킬로 헤르츠 시각화) 이미지에서 : 시네 루프에서 육안 검사를 통해 대동맥의 최대 팽창 (수축기)을 식별하십시오. 그런 다음 측정 메뉴에서 선형을 선택하고 대동맥을 가로 질러 여러 선을 그려 가장 큰 지름 을 결정합니다.
      참고: ECG는 심장 주기를 결정하는 데 사용할 수 있지만 시각적 식별은 정확한 결과를 산출합니다.

대표적인 결과는 기준선, 8일째 및 27일째에 초음파에 의해 모니터링된 바와 같은 상완동맥류의 발달 및 진행을 보여준다(도 1A). 도 1A에서 27일째 대동맥의 삼색 염색(도 1B)은 벽 해부 및 교내 혈전을 갖는 형성된 동맥류의 형태를 추가로 예시한다. 대동맥 부피 (mm3)는 12 mm14의 연신에 걸쳐 결정되었고, 최대 대동맥 직경은 EKV 이미지로부터 추가로 측정되었다. 기준선에서 8일째까지의 125% 부피 성장의 역치는 초기 동맥류 발달을 정의하기 위해 설정되었다. 2 년 (2020-2021, n = 157)에 걸쳐 수집 된 데이터에 따르면,이 컷오프에 따라 AAA를 형성하지 못한 동물의 9 %만이 AAA를 형성하지 못했습니다. 그러나, 마우스의 35%는 9일째에 카테터 이식 전에 대동맥 파열(흉부 또는 복부)을 경험하였고, 따라서 AAA 질환이 확립된 나머지 동물의 총 56%가 치료 그룹으로 계층화될 수 있게 되었다(도 1C). 참고로, 우리의 역사적인 PBS 대조군 (n = 21) 중에서 동맥류는 다양한 정도로 발전했습니다 (범위 : 128 % -314 %, 평균 199 % ± 55 % SD 대동맥 부피 증가). 중요하게도, 초기 확장과 추가 질병 진행 사이의 역관계가 관찰되었는데, 즉, 빠른 진행성 동맥류의 55%(8일째에 >200% 부피 성장)는 27일째까지 더 이상 진행되지 않았고, 반면에 다른 동맥류의 80%(8일째에 >125% 및 <200% 부피 성장)는 실험이 끝날 때까지 계속 확장되었다(도 1D).

최근 보고된 바와 같이, 14,17에 보고된 바와 같이, 기술된 방법들은 성공적으로 확립되고, 검증되고, 구현되었으며, 예를 들어, 확립된 AAA의 진행을 차단하는 히스톤 시트룰린화 억제제 (GSK484, 호중구 세포외 트랩 형성의 억제를 위한)의 치료 효과를 문서화한다. ApoE 결핍 마우스는 28 일 동안 피하 이식 된 삼투 펌프에 의해 1000 ng / kg / min으로 Ang-II를 받았다. 동물을 8일째에 측정된 대동맥 부피를 기준으로 GSK484 (0.2 μg/g/day) 또는 PBS 처리로 1:1로 계층화하였고, 9일째에 경정맥 카테터 삽입 절차를 거쳤다. 약물 주사는 연구17이 끝날 때까지 마우스 중량의 10 μL/g의 부피로 매일 수행되었다. 도 2는 예시적인 (n=2/군) 초음파 결과(절대 및 상대적 부피 또는 직경 확장의 시간 과정)를 보여주며, GSK484 치료가 AAA 진행을 억제한 반면, 동맥류는 대조군 마우스에서 계속 확대되었음을 밝혀냈다.

도 1: 3D 초음파에 의해 검출된 바와 같은 Ang-II 마우스 모델에서의 AAA 형성 및 진행. (A) 상완 대동맥을 Ang-II 펌프 이식 후 기준선(BL), 8일째(d8), 및 27일째(d27)에서 3D 초음파에 의해 모니터링하였다. 부피는 3D 재구성된 이미지를 기반으로 12 mm 스트레치의 상완 대동맥(157 프레임)에 걸쳐 측정되었다. 최대 대동맥 직경은 EKV 이미지로부터 결정되었다. (b) 마우스 희생 및 장기 수집 후 27일째 대동맥의 횡단 절편의 삼색 염색. 대동맥 박리의 존재는 L1 / L2 (루멘 1 및 루멘 2)로 표시되며 교내 혈전은 A와 B에서 *로 표시됩니다. (c) 8일째에 AAA의 발생률(BL로부터 >125% 대동맥 부피 증가) 및 2년에 걸쳐 수집된 데이터 세트로부터 처음 9일 이내(흉부 또는 복부) 내의 대동맥 파열(n=157). (d) PBS 대조군-처리된 마우스(n=21)에서 동맥류의 초기 빠른 형성 (BL에서 8일째까지 >200% 대동맥 부피 성장) 대 적당히 성장(BL에서 8일째까지의 >125% 및 <200% 대동맥 부피 성장)의 8일째부터 27일째까지의 진행 빈도. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

도 2: 혈관 접근 버튼을 통해 GSK484 또는 PBS의 정맥내 주사에 의한 Ang-II 모델에서 AAA 진행을 차단하는 히스톤 시트룰린화의 억제로부터의 예시적인 결과 . (A) 대동맥 부피(mm3)는 상프레날 대동맥의 12 mm 스트레치에 걸쳐 측정된 바와 같다. (b) 기준선으로부터 계산된 대동맥 부피 성장 (BL = 100%). (C) EKV 이미지로부터 결정된 최대 대동맥 직경. (d) BL. GSK484 데이터로부터 계산된 대동맥 직경 성장을 이전에 발표된 연구17로부터 추출하였다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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