광견병은 급성의 진행성 바이러스성 뇌염입니다. 총알 모양의 병인은 리사바이러스 속에 속하며, 그 중 최소 17개는 전 세계(남극 대륙 제외)에서 광견병을 유발합니다. 광견병 바이러스는 이러한 다양한 RNA 바이러스의 가장 중요한 구성원입니다. 모든 포유류는 취약하며 박쥐와 중육식동물은 중요한 저장소입니다. 전염은 주로 물린 후에 발생합니다. 전형적인 신경친화제인 비리온은 축삭을 통해 축삭을 통해 축삭을 통해 복제를 위해 중추신경계(CNS)로 복제한 후 타액선으로 구심적으로 진행되고 타액으로 배설됩니다. 전 세계적으로 개는 광견병으로 인한 사망 건수가 가장 많으며 매년 수만 명이 사망합니다. 인수공통전염병의 차원을 고려할 때 실험실 방법은 인간, 가축 및 야생 동물의 응용 연구 및 질병 보고, 예방 및 통제에 필수적입니다. 9개의 상호 관련된 기사 모음의 목적은 광견병 발생, 검출, 병리생물학, 역학, 관리 및 생물학적 제제의 개선에 대한 성찰을 제공하는 방법을 소개하는 것입니다.
광견병은 어떻게 평가됩니까? 광견병은 적절한 데이터 수집, 분석 및 역학적 해석을 통해 신고 대상 질병이어야 합니다. 오늘날 대부분의 사례는 사람을 노출시키는 동물을 기반으로 한 수동적 감시를 통해 보고됩니다. 임상 용의자(즉, 광견병 진단을 위해 무는 개)를 안전하게 포획, 구속, 진정 및 안락사하는 것을 상상하는 것은 합리적으로 간단해 보일 수 있지만 일부 야생 동물에게는 이것이 쉽지 않습니다. 예를 들어, 대만은 광견병이 '없는' 것으로 간주되는 지역으로, 원래 가축에 대한 광범위한 감시를 기반으로 했습니다. 그러나 다른 동물 보호구역의 중요성을 인식한 섬의 조사관들은 야생 동물에 관심을 돌렸습니다. Hsu et al. 설명하듯이, 빈사 상태와 죽은 박쥐의 표적 수집은 대만에서 독특한 리사바이러스 종을 검출할 수 있는 기회를 제공합니다1. 이러한 노력은 이 바이러스 속의 분류학적 폭을 확장하고 아시아의 다른 평가를 위한 합리적인 계획을 제공했습니다.
리사바이러스 진단에는 어떤 조직이 필요합니까? 관련 감시 방법의 도출 및 정확한 종 식별 외에도 광견병의 민감하고 구체적인 진단에는 안전하고 적절한 조직 선택이 가장 중요합니다. 19세기부터 중추신경계(CNS)는 일차 조직으로 인식되었습니다. 동물은 안락사되었고, 사체는 실험실로 보내졌고, 두개골은 열렸고, 뇌는 제거되었으며, 일부는 바이러스 내포물이 있는지 현미경으로 검사했습니다. 그러나 전체 동물의 운송은 실용적이지 않으며, 특히 가축과 같은 몸이 큰 포유류의 경우 더욱 그렇습니다. 더욱이 뇌의 모든 영역이 진단에 똑같이 유용한 것은 아닙니다. Jarvis et al. 노출 위험을 최소화하고 처리 시간을 줄이는 소형 및 대형 포유류 모두에 대한 안전하고 실용적인 부검 방법을 설명합니다2. 이러한 생물안전성 권장 사항의 적용과 뇌간 및 소뇌에 대한 집중은 동물 광견병에 대한 현대 실험실 기반 감시 관행을 개선할 것입니다.
바이러스 항원 검출에는 어떤 옵션이 사용됩니까? 일상적인 리사바이러스 진단을 위해 CNS 조직의 바이러스 봉입 관찰을 위한 직접 형광 항체(DFA) 검사가 20세기 중 반부터 사용되었습니다. 매우 민감하고 특이적이지만 DFA 테스트에는 형광 현미경이 필요하며 아세톤을 조직 고정제로 사용합니다. Patricket al. 뇌간 수집, 조직 인상의 포르말린 고정, 비오틴에 접합된 단클론 또는 다클론 항체의 사용, 광학 현미경에 의한 바이러스 내포물 검출에 의존하는 직접적이고 신속한 면역조직화학적 검사(DRIT)의 사용을 1시간 이내에 보고합니다3. DRIT는 DFA 테스트와 유사한 민감도와 특이성을 가지며 현장 조건에서 분산되고 향상된 실험실 기반 감시에 적합합니다. 자원이 제한된 설정의 경우 선형 흐름 분석(LFA)은 Mauti et al.에서 보고한 바와 같이 최소한의 기술 전문 지식이 필요한 신속한 진단을 위한 또 다른 방법입니다. 현장에서 양성 테스트 스트립은 확인을 위해 중앙 실험실로 보낼 수 있습니다4.
항원 검출 외에 다른 방법이 리사바이러스 진단에 적합합니까? DFA, drit 및 LFA 테스트는 사후 CNS 조직에서 바이러스 항원을 검출하는 데 유용합니다. 그러나 뇌 조직은 분해될 수 있습니다. 더욱이, 인간이 의심되는 경우에는 생전 검사가 더 바람직하며 CSF와 같은 대체 임상 샘플을 포함할 수 있습니다. 따라서 분자 분석은 소량의 바이러스 핵산을 검출하는 데 매우 유용합니다. Marston et al. 및 Wang et al. 각각 빠르고 민감하며 특이적인 실시간 및 중합효소 연쇄 반응 기술을 각각 설명합니다 5,6. 샘플 오염을 최소화하기 위한 세부 사항에 대한 세심한 주의와 적절한 프라이머 설계를 통해 다양한 리사바이러스 스펙트럼에 걸쳐 1차 진단이 가능합니다.
일단 진단되면 기존의 현미경 검사가 리사바이러스 병리생물학에 대한 현대적인 통찰력에 적합합니까? 2차원 현미경 방법만 사용하면 상황과 복잡성에서 중요한 생체 내 요소가 누락될 수 있습니다. 그러나 긴 자유 작동 거리 대물렌즈를 사용하여 바이러스에 감염된 조직은 Zaeck et al.에 의해 자세히 설명된 바와 같이 고해상도의 기존의 공초점 레이저 스캐닝 현미경으로 이미지화하여 병원체 분포를 시각화하고 바이러스 병인, 확산, 친화성 및 신경 침범에 대한 미세한 세부 사항을 더 잘 이해할 수 있습니다7.
광견병 백신 효능을 측정할 수 있는 대안이 있습니까? 광견병 백신 효능을 측정하는 현재 방법에는 많은 수의 실험실 설치류가 필요합니다. 그러나 비용, 신뢰 구간 및 복지 문제로 인해 대안이 필요합니다. 광견병 바이러스 당단백질은 백신 접종 후 바이러스 중화 항체를 유도합니다. Jallet과 Tordo가 전달한 바와 같이, 매우 특이적인 단클론 항체를 사용하여 광견병 바이러스 백신의 상대적 함량을 측정하기 위해 동물 대신 시험관 내 ELISA 테스트를 사용할 수 있습니다8.
야생동물의 경구용 백신 미끼 소비에 대한 추론을 바이오마커를 사용하여 수행할 수 있습니까? 인간과 가축의 비경구 백신 접종 외에도 야생 중육식동물의 경구 백신 접종은 1970년대부터 운영되어 왔습니다. 사례 검출을 통해 여우, 너구리, 스컹크 등의 개체군 사이에서 백신 면역원성 또는 그에 따른 효능을 측정하는 것 외에도 바이오마커를 사용하여 백신이 함유된 미끼의 접촉 및 소비를 추론할 수 있습니다. 역사적으로 미끼에서 통합된 테트라사이클린의 검출은 동물의 뼈나 치아에서 이루어졌습니다. 이러한 경조직 수집에 대한 대안은 이오페녹산과 같은 다른 바이오마커의 혈청학적 측정입니다. Berentsen et al. 카리브해 지역에 도입된 아시아의 중요한 자연 저수지인 몽구스의 혈청에서 이러한 유도체에 대한 분석에 대해 보고합니다9. 포획된 몽구스가 이 바이오마커를 함유한 미끼를 섭취한 후 이오페녹산을 아세토니트릴로 추출하고 액체 크로마토그래피-질량 분석법으로 동물 혈청을 분석했습니다. 미끼 섭취 후 몇 주 동안 적절한 표시가 감지되었으며 이러한 유도체는 방목 동물에서 백신이 함유된 미끼 흡수의 현장 평가에 적합할 수 있습니다.
부분적으로 진행 중인 COVID-19 대유행으로 인해 강화된 리사바이러스 감시, 병원체 발견, 확증 진단 및 변이 특성화에서 개선된 바이러스학적 방법이 예상됩니다. 동료 검토 문헌에서 다양한 기술에 대해 읽는 것은 일반적으로 관심 있는 개인의 첫 번째 단계입니다. 그러나 일련의 단계를 직접 관찰하고 숙련된 작업자로부터 컨텍스트를 듣으면 뉘앙스와 오해가 제거됩니다. OIE 및 WHO가 권장하는 광견병과 관련된 현재 및 미래의 실험실 및 현장 프로토콜은 특히 개발도상국 내에서 새로운 연구자를 지원하기 위해 추가 시각적 방법 수집의 이점을 누릴 수 있습니다.