본 프로토콜은 상부 경추 신경절을 식별하고 절제함으로써 아드레날린성 신경 분포를 절제하는 마우스 모델을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
교감 신경계가 암 진행에 중요한 역할을 한다는 증거가 늘어나고 있습니다. 아드레날린성 신경 분포는 침샘 분비, 일주기 리듬, 황반 변성, 면역 기능 및 심장 생리학을 조절합니다. 쥐 외과적 교감신경 절제술은 반복적인 약리학적 개입 및 관련 부작용의 필요성을 피하면서 완전하고 일방적인 아드레날린 절제를 허용함으로써 아드레날린 신경 분포의 효과를 연구하는 방법입니다. 그러나 생쥐의 외과적 교감신경 절제술은 상부 경추 신경절의 크기가 작기 때문에 기술적으로 어렵습니다. 본 연구는 상부 경추 신경절을 확실하게 식별하고 절제하여 교감신경계를 절제하는 수술 기법을 기술한다. 신경절의 성공적인 식별 및 제거는 형질전환 마우스를 사용하여 형광 교감신경절을 영상화하고, 절제 후 호너 증후군을 식별하고, 절제된 신경절에서 아드레날린 마커를 염색하고, 교감신경 절제술 후 표적 기관에서 감소된 아드레날린 면역형광을 관찰함으로써 검증됩니다. 이 모델은 암 진행뿐만 아니라 교감 신경계에 의해 조절되는 다른 생리적 과정에 대한 향후 연구를 가능하게 합니다.
서론
여러 연구에서 종양 미세 환경의 신경이 종양 진행을 지원하는 데 적극적인 역할을 한다고 보고했습니다. 아드레날린성 교감신경의 절제는 생체 내에서 전립선암과 위암의 종양 발달 및 파종을 저해하는 것으로 나타났으며1,2,3, 아드레날린성 수용체의 약리학적 차단은 두경부암의 종양 성장을 억제한다 4. 교감신경 침범은 또한 췌장암, 자궁경부암 및 기저 세포 암종 진행에서 설명되었습니다 5,6,7.
교감 신경계 내에서 상부 경추 신경절(SCG)은 머리를 자극하는 교감신경 줄기의 유일한 신경절입니다. SCG는 타액 분비 및 일주기 리듬과 같은 다양한 생리적 기능을 조절하고 자궁 경부 림프절을 직접 자극합니다 8,9,10.
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프로토콜
여기에 설명된 동물 절차는 메모리얼 슬론 케터링 암 센터(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 8주령의 수컷 및 암컷 NSG 마우스를 여기에 사용하였다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 기구는 멸균되고, 수술 작업 표면은 소독되고, 동물의 피부 표면은 소독되며, 외과 의사는 수술 내내 멸균 장갑을 착용합니다.
1. 마우스의 준비 및 수술 전 설정
- 수술 전날, 유도 챔버(폭 3.75 x 깊이 9 x 높이 3.75, 재료 표 참조)에서 2% 이소플루란으로 마우스를 마취합니다.
참고: 마취 수술면은 일반적으로 개별 동물에 따라 3-5분 내에 이루어집니다. 발가락 꼬집음으로 마취의 적절성을 평가하고 이소플루란 비율을 적절하게 높입니다.- 목의 복부 측면을 면도하거나 제조업체의 지침에 따라 화학 제모제를 사용하십시오 ( 재료 표 참조).
- 수술 당일, 유도 챔버에....
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결과
이 프로토콜은 마우스 모델에서 SCG의 외과적 제거를 설명합니다. 그림 2 는 CCA, 전경정맥 및 SCG를 포함한 해부학적 랜드마크를 보여줍니다. 해부(그림 2A)를 통해 우측 전방 경정맥이 기관의 측면 경계를 따라 흐르는 것을 볼 수 있습니다. 전경정맥보다 더 깊숙이 위치하기 때문에 왼쪽 CCA와 내경동맥(ICA)과 외경동맥(ECA)으로의 분기점은 정맥 측면에서만 희미하게 보입니다. NSG에서 이를 검사할 때. 형광 현미경 하에서 적색 형광 뉴런을 갖는 B6-P0TdTomato 형질전환 마우스(슈반 세포가 형광 적색, 미공개 연구인 P0-Cre TdTomato 마우스), 형광 미주 신경은 CCA에 측면으로 흐르는 것을 볼 수 있으며, 형광 SCG는 전방 경정맥 측면의 CCA의 분기점에서 볼 수 있습니다(그림 2B).
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토론
이 프로토콜은 SCG 입력의 외과적 편측 절제를 위한 마우스 모델을 설명합니다. 이 기술을 사용하면 다양한 환경에서 아드레날린 성 신경 분포의 효과를 연구 할 수 있습니다. 또한, 절제된 교감신경 신경절은 시험관내 실험(in vitro experiments)을 위한 3D 매트리겔 배양(3D matrigel culture)에서도 성장할 수 있다 30.
SCGx와 관련된 연구는 해부학적 구조가 더 커서 해부학적 시각화 및 해부가 더 쉽기 때문에 대부분 쥐에서 수행되었습니다. 마우스의 SCGx는 이전에 Ziegler et al.26에 의해 기술되었고 다른 연구21,22,27,28에서 간략하게 보고되었지만, 이 기술은 SCG의 절제 전에 CCA가 노출되고 해부되는.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
Q. W.는 NIH T32CA009685의 지원을 받았습니다. RJW는 NIH R01CA219534의 지원을 받았습니다. 메모리얼 슬론 케터링 암 센터 핵심 시설은 NIH P30CA008748의 지원을 받았습니다.
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재료
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| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & 드와이트 주식회사 | 40002957 화학 제모제 | |
| 노르아드레날린 연구 ELISA | 노동 진단 노 | E-5200 | |
| NSG 마우스 | 잭슨 연구소 | JAX:005557 | |
| 포비돈-요오드 면봉 | PDI | S41350 | |
| Webcol 알코올 준비 | Covidien | 5110 |
참고문헌
- Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341 (6142), 1236361(2013).
- Zhao, C. M., et al. Denervation suppresses gastric tumorigenesis. Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014....
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재인쇄 및 허가
