Ixodes 견갑골에 대한 진드기 인공 막 공급

요약

여기에 제시된 것은 다양한 진드기 수명 단계의 부분적 또는 전체 충혈을 허용하기 위해 인공 막 시스템을 통해 시험관 내에서 진드기를 혈액으로 공급하는 방법입니다.

초록

진드기 및 관련 질병은 공중 보건 및 수의학 부담으로 인해 중요한 연구 주제입니다. 그러나 연구 및 사육 중 진드기의 먹이 요구 사항은 실험 질문이나 실험실에서 진드기 및 관련 병원체를 연구하는 능력을 제한 할 수 있습니다. 인공 막 사료 공급 시스템은 이러한 문제를 줄이고 전통적인 동물 사료 공급 시스템으로는 불가능했을 수있는 새로운 연구 길을 열 수 있습니다. 이 연구는 모든 Ixodes 견갑골 수명 단계에서 공급 및 충혈 성공을 위해 정제 된 인공 막 공급 시스템을 설명합니다. 더욱이, 본 연구에서 기술된 인공 막 공급 시스템은 원하는 막 두께의 간단한 정제를 통해 다른 진드기 종과 함께 사용하도록 변형될 수 있다. 인공 막 공급 시스템의 이점은 시스템의 노동 집약도, 수유 성공에 영향을 미칠 수있는 추가 환경 요인, 진드기의 새로운 종 및 생활 단계에 대한 기술을 개선해야 할 필요성에 의해 상쇄됩니다.

서론

진드기 매개 질병은 전 세계 인간과 동물의 건강에 큰 영향을 미치며 2004년부터 2016년까지 미국에서 발생한 모든 매개체 관련 질병의 2/3 이상을 차지합니다¹. 또한 최근 몇 년 동안 사례 수가 증가하고 있으며 더 많은 사람과 가축이 진드기 및 관련 질병의 영향을 받고 있습니다 ^2,3. 사례 수의 증가 추세에는 여러 가지 원인이있을 수 있지만 기후 변화는 중요한 요소입니다 ^3,4. 진드기 매개 질병 사례의 지속적인 증가는 진드기와 진드기가 전염시키는 병원체 간의 관계를 조사하기 위한 새로운 도구를 개발해야 할 필요성을 강조합니다.

진드기는 먹이를 먹는 동안 생리학 및 유전자 발현의 변화를 겪고 이러한 변화가 병원체 전파에 중요한 역할을하는 것으로 알려져 있습니다 ^5,6. 특히 설치류 모델이 특정 병원체에 감염되기 쉽지 않은 상황에서 동물 모델을 사용하여 병원체 전파 및 획득에 대한 전....

프로토콜

1. 진드기 막 챔버 준비

1. 유리 평면 또는 암 스탠드의 세라믹 코팅 금속베이스와 같은 평평하고 비 다공성 인 표면을 70 % 에탄올로 닦아서 준비한 다음 플라스틱 랩의 단일 층으로 덮어 플라스틱 랩이 평평하고 기포 나 주름이 없는지 확인하십시오 ( 그림 1A 참조).
2. 준비된 표면에 100% 레이온 렌즈 청소지를 테이프로 붙입니다. 용지의 네 면 모두에 테이프로 평평하고 약간 팽팽한지 확인합니다. 렌즈 용지 4인치 x 6인치 두 장을 1.3단계에서 설명한 부피를 사용하여 멤브레인으로 만들 수 있습니다.
   알림: 이것은 최대 12개의 공급 챔버를 구성하기에 충분합니다( 그림 1B 참조). 멤브레인이 애벌레 진드기 용인 경우 렌즈 청소용 용지 대신 운류 종이를 사용하십시오.
3. 일회용 용기에 실리콘 키트의 각 부분 5mL를 측정하여 00-10 경도 실리콘 혼합물을 준비하고 두 액체를 가볍게 혼합한 후 1.5mL의 헥산을 추가합니다. 혼합물이 균질하고 완전히 혼합 될 때까지 계속 혼합하십시오.
   알림: 성인 진드기 용 멤브레인을 만드는 경우 00-50 경도 실리콘을 사용하십시오.
4. 작은 스퀴....

결과

성공적인 수유는 부분 또는 전체 충혈이 필요한지 여부에 달려 있습니다. 성공적으로 공급 I. 견갑골은 성인을위한 건메탈 그레이의 그늘을 바꾸고 막에서 스스로 분리됩니다. 그러나 적어도 완두콩 크기 인 경우 먹이를 마칠 때 막에서 분리 될 수 있습니다. 미성숙 단계의 경우 I. 견갑골, 완전히 충혈 된 진드기의 크기는 다양하며 성인과 달리 색 변화를 나타내지 않기 때문에 진드기가 완전히 충혈되었는지 확인하는 가장 좋은 방법은 분리입니다. 님팔 I. 견갑골이 사료 공급 중에 어떻게 보일 수 있는지에 대한 예는 그림 3을 참조하십시오. 성인 I. 견갑골 진드기는 막에서 분리되기 시작할 때까지 부착 후 1 주일 이상 걸립니다. 님프는 종종 부착 후 약 5 일 후에 분리되고 유충은 첫 부착 후 ~ 3-4 일 후에 분리되기 시작합니다. 하루에 두 번 혈액 변화를 유지하기를 원하고 곰팡이가 항진균제가 통제 할 수있는 것 이상.......

토론

진드기의 인공 막 공급은 다양한 실험 절차에 유용한 도구를 제공하지만 모든 응용 분야에서 동물 사료를 대체 할 가능성은 없습니다. 동물 먹이없이 모든 생애 단계에서 진드기의 큰 식민지를 유지하는 것은 일반적으로지지 할 수 없습니다. 대신, 인공 사료 공급 시스템은 모델 숙주에 의해 지원되지 않는 병원체로 진드기를 감염시키거나, 단순화 된 사료 공급 환경에서 진드기에 대한 화합물 또는 미생물의 통제 된 투여 량의 영향을 평가하거나, 실험실에서 쉽게 이용할 수없는 숙주 동물에 의존하는 진드기의 작은 식민지를 사육하는 것과 같은 다른 목적에 유용합니다^8, 10,11,23,24,25........

재료

²

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
00-10 경도 실리콘	Smooth-On	Ecoflex 00-10	Smooth-On Store의 시험 크기
00-50 경도 실리콘	Smooth-On	Ecoflex 00-50	Smooth-On Store의 시험 크기
30 경도 실리콘	Smooth-On	Mold Star 30	Smooth-On Store의 시험 크기
6-well 세포 배양 플레이트	Corning Incorporated	3516
아데노신 삼인산염 (ATP)	Millipore Sigma	A1852-1VL	mM ATP의 수용액을 만드는 데 사용되며, 이 용액은 0.2 micometer 필터를 통해 sterlized 처리됩니다
소 혈액	HemoStat	DBB500	기계적으로 탈백; 보통 한 번의 실험에는 500 mL가 충분합니다
Clingwrap	Fisherbrand	22-305654
여과지	Fisherbrand	09-790-2C	오토클레이브를 사용하고 사용하기 전에 식히십시오. 매체 대신 좋은 품질을 사용할 수 있습니다
플루온(수성 폴리테트라플루오로에틸렌)	Bioquip	2871
Hexane	Millipore Sigma	139386-100ML
렌즈 종이	Fisherbrand	11-995	100% 레이온과 같은 다른 출처에서 사용 가능
니스타틴	골드 바이오테크	N-750-10
파라필름	피셔브랜드	S37440
페니실린/스트렙토마이신/진균존	Gibco	15240-096	또는 다음과 같은 농도의 등가물 제네릭(10,000 units/mL of penicillin, 10,000 µ 스트렙토마이신의 g/mL 및 25 &마이크로; 암포테리신의 g/mL B)
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