방법 논문

혈관 질환의 연구 방법론

DOI:

10.3791/64588

⸱

2022년 8월 16일

 , 
1Department of Experimental Diagnostic and Specialty Medicine (DIMES), Alma Mater Studiorum - University of Bologna, 2Pathology Unit, IRCCS University Hospital of Bologna

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

논의된 기사:

아오마츠, A. 외. 허혈성 신장 손상 마우스 모델의 신장에서 microRNA에 대한 정량적 검출 방법. 시각화 실험 저널. (163), e61378 (2020).

Bauer, S., Pauli, J., Pelisek, J. 포르말린 고정 파라핀 포매 인간 죽상동맥경화성 병변에서 최적화된 고품질 DNA 추출. 시각화 실험 저널. (168), e61452 (2021).

수아레스-쿠엥카, JA 외. 혈관성형술을 받은 중증 사지 허혈 환자에서 국소 순환 단핵 전구 세포를 사용하여 절단을 예측합니다. 시각화 실험 저널. (163), e61503 (2020).

졸리, M. 외. 내시경 비강내 두개골 기저부 수술에서 확산 MRI 트랙조영술의 역할. 시각화 실험 저널. (173), e61724 (2021).

사설

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

본 컬렉션의 주요 목적은 인간 또는 마우스 모델에서 생 체 내 및 시험관 내에서 세포, 단백질 및 mRNA 수준에 대한 혈관 질환을 연구하기 위한 새로운 방법론에 대한 최신 지식을 독자에게 제공하는 것입니다. 여기에는 새로운 이미징 및 인공 지능 양식뿐만 아니라 석회화된 동맥과 같은 어려운 조직 회수1로 확장된 조직병리학적 분석이 포함됩니다. 이 컬렉션은 이러한 질문에 완전히 답하는 네 가지 방법을 제시하며, 현대적이고 기술적인 관점으로 오래된 문제에 접근하는 방법에 대한 매우 흥미로운 단서를 제공하여 이 분야의 급속한 기술적 발전을 보여줍니다.

허혈-재관류 손상(IRI)은 급성 신장 손상(AKI)2의 주요 위험 요소입니다. miRNA가 우수한 후보이지만 특정 진단 바이오마커는 확립되지 않았습니다3. 아오마츠 외.4 는 qRT-PCR에 의해 miRNA를 정제하고 정량화하는 흥미로운 AKI 마우스 모델을 개발했습니다. 그들은 허혈-재관류 손상에 의해 유도된 AKI로 17개의 상향 조절된 miRNA를 확인했습니다. 이 방법을 사용하면 동적 범위, 정확한 정량화 및 높은 특이성으로 AKI 신장의 miRNA 프로필을 연구할 수 있습니다. 또한 이 모델은 IRI 전후의 약물 투여를 용이하게 합니다. 프로토콜은 또한 독자에게 알아야 할 중요한 지점과 PCR 후 비특이적 반응을 설명합니다. 몇 가지 핵심 포인트는 균질화, 내인성 대조군 선택 및 정제된 miRNA의 품질입니다. 이 방법은 인간 신장의 IRI 연구를 위한 AKI의 동물 모델을 제공하기 때문에 매우 유용하며, 이는 miRNA를 넘어서는 추가 연구에 실현 가능할 가능성이 높습니다.

Bauer et al.5 은 소량의 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 죽상동맥경화반에서 DNA 추출을 위한 반자동 방법을 설정했습니다. 이것은 미만성 석회화된 죽종과 같은 매우 어려운 조직의 병리생물학을 연구하기 위한 표준화된 방법을 제공할 가능성이 높기 때문에 또 다른 흥미로운 주제입니다1. 이는 핵산 및 기타 세포 함량을 변경하는 탈회화 프로토콜의 사용을 포함하기 때문에 조직 회수를 어렵게 만듭니다1. 저자는 DNA 단편화에 큰 차이 없이 두 가지 수동 컬럼 기반 방법에 비해 더 높은 DNA 농도와 더 나은 DNA 품질(안정성 및 재현성)을 얻었습니다. 중요한 프로토콜 수정에는 탈파라핀화를 위한 배양 단계(시약의 독성 감소), 하룻밤 프로테아제 K 분해, 65°C에서 용해 완충액 첨가 후 추가 배양 시간 및 용출 부피 증가가 포함됩니다. 이 프로토콜은 미래의 고처리량 분석에 확실히 유망합니다.

Suarez-Cuenca et al.6 은 중증 사지 허혈(CLI) 환자의 사지 절단 위험을 예측하기 위해 혈관성형술 부위에 가까운 혈관에서 순환하는 단핵 전구 세포(MPC)를 정량화하기 위한 프로토콜을 제시했습니다. 이것은 오늘날 CLI에서 절단 위험이 여전히 매우 높기 때문에7 그리고 사용 가능한 예측 모델이 상당히 부족하기 때문에 또 다른 흥미로운 주제입니다8. 순환 바이오마커를 식별할 수 있는 가능성은 임상 실습에서 매우 유망하며 CLI 환자의 병력과 관리를 변화시킬 수 있는 실현 가능한 관점을 제공합니다.

Zoli et al.9의 연구를 통해 이미징 기술 tractography를 사용하여 뇌하수체-간뇌 및 두개골 기저부 종양의 확장을 조사했습니다. 두개골 기반 수술 전에 수술 전 신경영상 평가가 중요하며, 기술적 문제로 인해 지금까지 두개골 기저 수술에 트랙토그래피가 거의 채택되지 않았습니다 10. 이러한 종양 관리를 위한 MRI 프로토콜 구현 외에도 저자의 목표는 신경외과 의사와 신경영상 팀 간의 중개 협력을 설명하는 것이었습니다. 이 협력은 이러한 환자에 대한 효과적인 통합 다축 접근 방식을 위한 다학제적 프로토콜을 제공합니다. 구현된 프로토콜에는 고급 후처리 보정을 위한 새로운 접근 방식으로 빠른 시퀀스(확산 강조 이미지에 대한 위상 역 인코딩 스캔)가 포함되었습니다. 이는 이러한 어려운 종양의 수술 전 연구를 위한 새로운 접근 방식의 길을 열어줍니다.

혈관 죽종성 질환은 여전히 전 세계적으로 주요 건강 문제이며, 영상, 혈액, 조직에 이르기까지 다양한 수준에서 이러한 환자를 연구하기 위해서는 점점 더 새로운 방법이 필요합니다. 이 컬렉션은 혈관 질환 연구에서 몇 가지 문제를 극복하기 위한 팁을 공개하며, (1) 플라크 세포, 단백질 및 mRNA 함량을 연구하는 새로운 방법, (2) 어려운 조직 회수(예: 석회화된 영역)로 확장된 조직병리학적 분석 및 (3) 혈관신생의 정량화. 확실히, 조직 분석과 관련된 새로운 접근법의 개발 및 공개는 광범위한 병리와 관련이 있으며 잠재적으로 모든 수준에서 진단을 위한 임상 지침에 영향을 미칩니다.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 인정을 받지 않았습니다.

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fittipaldi, S., et al. The study of calcified atherosclerotic arteries: an alternative to evaluate the composition of a problematic tissue reveals new insight including metakaryotic cells. BMC Clinical Pathology. 16, 12(2016).
  2. Kelly, K. J. Acute renal failure: much more than a kidney disease. Seminas in Nephrology. 26 (2), 105-113 (2006).
  3. Fittipaldi, S., et al. miRNA signature of hepatocellular carcinoma vascularization: how the controls can influence the signature. Digestive Diseases and Sciences. 62 (9), 2397-2407 (2017).
  4. Aomatsu, A., et al. A quantitative detection method for microRNAs in the kidney of an ischemic kidney injury mouse model. Journal of Visualized Experiments. (163), e61378(2020).
  5. Bauer, S., Pauli, J., Pelisek, J. Optimized high quality DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded human atherosclerotic lesions. Journal of Visualized Experiments. (168), e61452(2021).
  6. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Predicting amputation using local circulating mononuclear progenitor cells in angioplasty-treated patients with critical limb ischemia. Journal of Visualized Experiments. (163), e61503(2020).
  7. Uccioli, L., et al. Critical limb ischemia: current challenges and future prospects. Vascular Health and Risk Management. 14, 63-74 (2018).
  8. Vasuri, F., et al. Biochemical and immunomorphological evaluation of hepatocyte growth factor and c-Met pathway in patients with critical limb ischemia. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 48 (4), 430-437 (2014).
  9. Zoli, M., et al. Role of diffusion MRI tractography in endoscopic endonasal skull base surgery. Journal of Visualized Experiments. (173), e61724(2021).
  10. Jacquesson, T., et al. Full tractography for detecting the position of cranial nerves in preoperative planning for skull base surgery: technical note. Journal of Neurosurgery. 132 (5), 1642-1652 (2019).

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

MicroRNAsIschemic Kidney InjuryDNA ExtractionAtherosclerotic LesionsMononuclear Progenitor CellsCritical Limb IschemiaDiffusion MRI TractographyEndoscopic Endonasal Skull Base Surgery

관련 논문