여기에서 우리는 자발적인 유전자 조작 마우스 모델에 의해 쥐 ATC 종양을 얻기 위한 표준 파이프라인을 제시합니다. 또한, 우리는 원발성 및 전이된 병변에 대한 종양 역학 및 병리학적 정보를 제시합니다. 이 모델은 연구자들이 종양 형성을 이해하고 약물 발견을 촉진하는 데 도움이 될 것입니다.
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이 논문에서
요약
초록
역형성 갑상선암(ATC)은 드물지만 치명적인 악성 종양으로 예후가 좋지 않습니다. ATC 환자에서 표준 치료법이 본질적으로 고갈되기 때문에 치료 방법뿐만 아니라 ATC의 발암 및 개발에 대한 보다 심층적인 연구가 시급합니다. 그러나 낮은 유병률은 철저한 임상 연구와 조직 샘플 수집을 방해하여 효과적인 치료법을 만드는 데 거의 진전이 없었습니다. 우리는 유전 공학을 사용하여 C57BL/6 배경에서 조건부 유도 가능한 ATC 쥐 모델(mATC)을 만들었습니다. ATC 쥐 모델은 TPO-cre/ERT2에 의해 유전자형이 결정되었습니다. 브라프CA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 및 타목시펜으로 복강내 주사로 유도. 쥐 모델을 사용하여 종양 역학(유도 4개월 후 종양 크기는 12.4mm2 내지 32.5mm2 범위), 생존율(평균 생존 기간은 130일) 및 전이(폐 전이는 마우스의 91.6%에서 발생함) 곡선 및 병리학적 특징(Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 및 Caspase-3 면역조직화학적 염색으로 특징지어짐). 결과는 자발적인 mATC가 인간 ATC 종양과 매우 유사한 종양 역학 및 면역학적 미세 환경을 가지고 있음을 나타냅니다. 결론적으로, 병태생리학적 특징과 통일된 유전자형의 높은 유사성으로 mATC 모델은 임상 ATC 조직 및 샘플 이질성의 부족을 어느 정도 해결했습니다. 따라서 ATC의 메커니즘 및 중개 연구를 촉진하고 ATC에 대한 소분자 약물 및 면역요법제의 치료 가능성을 조사하기 위한 접근 방식을 제공할 것입니다.
서론
갑상선암은 가장 흔한 내분비 악성 종양 중 하나이다1, 갑상선 상피에서 유래한다. 최근 몇 년 동안 갑상선암의 발병률은 전 세계적으로 급격히 증가하고있습니다 2. 갑상선암은 종양 세포 분화 정도에 따라 크게 종류가 뚜렷할 수 있다. 임상 행동 및 조직학에 기초하여 갑상선 암종은 유두상 갑상선 암종(PTC) 및 여포성 갑상선 암종(FTC), 저분화 암종(PDTC), 미분화 또는 역형성 갑상선 암종(ATC)을 포함한 잘 분화된 암종으로 나뉩니다3. 경미한 행동과 더 나은 예후를 보이는 흔한 유형인 PTC와는 대조적으로4, ATC는 모든 갑상선 종양의 2%에서 3%를 차지하는 희귀하고 매우 공격적인 악성 종양이다5. ATC는 드물지만 갑상선암 관련 사망의 약 50%를 차지하며 생존율(6-8개월)이 낮습니다6,7. ATC 사례의 50% 이상이 폐 전이로 진단된다8. ATC의 공격적인 특성 외에도 클리닉에서 제한된 효과적인 치료법이 개발되었습니....
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프로토콜
여기에 설명된 동물 절차는 중국 쓰촨성 청두에 있는 쓰촨 대학교 서중국 병원 동물 윤리 위원회의 승인을 받아 수행되었습니다.
1. TBP 마우스의 유도
- 생쥐 유전자형 확인
- 약 3 주에 암컷 쥐와 수컷 쥐를 분리하십시오. 동시에 귀 태그 클램프를 사용하여 귀 태그를 고정하십시오. 귀 태그는 귀의 아래쪽 절반과 중간 1/3에 배치하고 모세혈관이 가장 많이 집중된 부위를 피하십시오.
- 부드럽지만 안전하게 마우스를 제지하십시오. 마우스 꼬리 바닥을 단단히 잡습니다. 쥐가 잡을 수 있는 표면에 마우스를 놓습니다.
- 자유 손을 어깨 위에 부드럽게 그러나 단단히 놓은 다음 엄지 손가락과 집게 손가락 사이의 목덜미를 빠르게 잡습니다. 새끼 손가락으로 꼬리를 잡으십시오.
- 알코올로 꼬리를 닦으십시오. 멸균 가위를 사용하여 피부 샘플을 <5mm로 잘라내어 라벨이 있는 깨끗한 샘플 용기에 넣습니다. 생쥐의 모피를 제거 할 필요는 없습니다. 지혈을 얻기 위해 멸균 스폰지로 꼬리를 압축하십시오.
- 다음으로, 쥐 꼬리를 용해하고 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하여 유전자형을 확인합니다.
알림: 쥐 꼬리 하나를 자른 후 쥐 꼬리 사이....
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결과
우리는 종양 성장, 마우스 생존 시간 및 병리학적 특성을 조사하기 위해 mATC를 유도했습니다. 유도 후, 마우스를 즉시 희생시키고, 샘플(갑상선, 폐 및 간)을 다음의 조건들 중 하나가 발견되면 수집하였다: 1) 종양 압박에 의한 호흡 곤란; 2) 식욕 감소 및 비정상적인 발성; 3) 비정상적으로 혼수 상태; 4) 20% 이상의 체중 감소. 샘플링 과정 동안, 우리는 모든 마우스(12/12)가 유도 후 성공적으로 종양을 형성한다는 것을 발견했다. 마우스 생존 시간, 종양 특징/크기 및 전이된 병변을 기록했습니다.
총체적으로, 우리는 다음을 관찰했다 : 1) 종양은 부드러웠고, 왼쪽과 오른쪽의 종양의 크기는 일치하지 않았다. 2) 대부분의 생쥐(11/12)는 폐 전이가 있었지만 간 전이는 없었습니다. 구체적으로, 종양 크기는 전체 공정17에 걸쳐 동물 고주파 초음파 및 광음향 이미징 시스템(Vevo®3100)에 의해 모니터링되었다. 초음.......
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토론
갑상선 종양 해부를 위한 프로토콜 내의 중요한 단계
해부하는 동안 갑상선의 해부학 적 위치를 정확하게 이해해야합니다. 갑상선은 갑상선 연골과 기관 근처의 턱밑샘의 등쪽에 위치한 나비 모양의 샘입니다. 시술 과정에서 목 양쪽의 혈액 동맥을 절단하는 것은 조심스럽게 피했습니다.
mATC 품종의 수정 및 문제 해결
ATC는 드물고 매우 공격적인 악성 종양입니다. mATC 및 ATC 환자의 임상적 특성은 특정 유사점을 가지고 있습니다. 특히, mATC의 주요 사망 원인은 질식이며, 이는 ATC 환자와 일치합니다. 따라서 실험 중에 다음 사항에 유의해야합니다 : 1) 마우스를 부드럽게 잡고 수술 중 호흡에주의를 기울이십시오. 2) 갑작스런 사망을 방지하고 제 시간에 샘플을 얻지 못하도록하기 위해 후기 단계에서 면밀히 모니터링합니다. 3) 갑상선 및 폐 조직은 관찰 및 사진 촬영을 위해 조직 표면의 혈액에 의해 쉽게 영.......
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공개 사항
저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
이 작업은 중국 국가 핵심 연구 개발 프로그램(2021YFA1301203)의 지원을 받았습니다. 중국 국립 자연 과학 재단 (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); 쓰촨 대학교 화원 병원 임상 연구 인큐베이션 프로젝트 (22HXFH019); 청두시 과학기술국 국제협력프로젝트(2020-GH02-00017-HZ); 쓰촨성 자연과학재단, 2022NSFSC1314; "1.3.5 우수 분야 프로젝트, 중국 서병원, 쓰촨 대학교"(ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); 및 쓰촨 과학 기술 프로그램(2023YFS0098).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 100배 구연산염 항원 회수 용액(PH 6.0) | MXB | Cat# MVS-0101 | |
| 50x EDTA 항원 회수 용액(pH 9.5) | ZSGB-GIO | Cat# ZLI-9071 | |
| Brafflox/wt 마우스 | Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Caspase-3 | Beyotime | Cat# AC033 | |
| CD8 | 세포 신호 전달 기술 | Cat# 98941; RRID:AB_2756376 | |
| CD206 | 세포 신호 전달 기술 | Cat# 24595; RRID:AB_2892682 | |
| 마취 유도용 챔버 | RWDlifescience | ||
| Enhanced DAB 발색 키트 | MXB | Cat# DAB-2031 | |
| Eosin 염색 용액 | ZSGB-GIO | Cat# ZLI-9613 | |
| F4/80 | Abcam | Cat# 100790; RRID:AB_10675322 | |
| Foxp3 | 세포 신호 전달 기술 | Cat# 12653; RRID:AB_2797979 | |
| 완전 밀폐형 조직 탈수기 | Leica Biosystems | ASP300S | |
| Hematoxylin 염색 용액 | ZSGB-GIO | Cat# ZLI-9610 | |
| HistoCore Arcadia 전자동 조직 임베딩 머신 | Leica Biosystems | ||
| Ki67 | Beyotime | Cat# AF1738 | |
| 회전 슬라이서 | RWDlifescience | Minux S700 | |
| SPlink 검출 키트(Biotin-Streptavidin HRP 검출 시스템) | ZSGB-GIO | Cat# SP-9001 | |
| TPO-cre/ERT2 마우스 | 생명 과학 연구소, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| 와 협력Trp53flox/wt 마우스 | 생명 과학 연구소, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| 초음파 세포 분쇄기 | Ningbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., Ltd | JY92-IIN | |
| 초음파 젤 | 케플러 | KL-250 | |
| 초음파 시스템 | VisualSonics | Vevo 3100 |
참고문헌
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
- Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potenti....
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재인쇄 및 허가
