여기에서는 화학 지문 다중 패턴 인식과 결합 된 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)를 확립하기위한 프로토콜을 제시하여 클레 마티 디스 아르만디 콜리스 및 그 불순물의 진정한 품종을 효과적으로 식별하기위한 새로운 전략을 제공합니다.
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방법 논문
클레마티디스의 진위 여부를 식별하기 위한 다중 패턴 인식을 위한 화학적 지문과 결합된 HPLC 아르 만디 콜리스
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
중국 약재 및 관련 간음 물질을 식별하는 방법은 Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, 보편적으로 사용되는 중국 전통 의학)를 예로 들어 구성되었습니다. 클러스터 분석(CA), 주성분 분석(PCA) 및 직교 부분 최소 제곱 판별 분석(OPLS-DA)을 포함하여 화학 측정법과 결합된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 지문을 기반으로 정품 Chuanmutong 품종 10개 배치와 관련 불순물 5개 배치를 분석하고 비교했습니다. 또한, β- 시토스테롤의 함량을 결정하였다. Chuanmutong의 대조 화학 지문이 확립되었고 12 개의 공통 피크가 확인되었습니다. 정품 Chuanmutong 품종 10 개 배치의 지문과 대조 지문 간의 유사성은 0.910-0.989 인 반면, 5 개 배치의 간음 자의 유사성은 0.133-0.720에 불과했습니다. 크로마토그램의 공통 피크를 기반으로 15개의 샘플 배치를 PCA에 의해 3가지 함량 수준으로 분류하고 CA에 의해 4가지 범주로 집계하여 정통 Chuanmutong과 Chuanmutong의 불순물을 명확하게 구분했습니다. 또한, OPLS-DA를 통해 진짜 촨무퉁과 촨무통의 불순물을 효과적으로 식별할 수 있는 7가지 차등 성분이 발견되었다. 정품 Chuanmutong 품종의 10 개 배치의 β- 시토스테롤 함량은 97.53-161.56 μg / g 인 반면, 5 개 배치의 β- 시토스테롤 함량은 크게 다양했으며, 그 중 클레 마티스 피터라 핸드의 β- 시토스테롤 함량. 그리고 클레 마티스 구 리아나 록스 브. Var. finetii Rehd. et 윌스. Chuanmutong의 정통 품종보다 현저히 낮았습니다. 본 연구에서 확립된 HPLC 지수 성분 함량 및 화학적 지문 다중 패턴 인식 방법은 정통 한약 재료 및 관련 불순물을 효과적으로 식별하기 위한 새로운 전략을 제공합니다.
서론
Chuanmutong, 클레 마티스 아르 만디 프란치의 마른 콜리스. 또는 클레 마티스 몬타나 Buch.-Ham.은 클리닉 1,2,3에서 일반적으로 사용되는 중국 전통 의학입니다. 비뇨기 문제, 부종, 혀와 입의 염증, 우유 분비 감소, 관절 경직, 습열로 인한 근육통치료에 사용됩니다 4. Chuanmutong은 항상 중국 남서부, 특히 최고의 품질을 찾을 수있는 쓰촨에 분포하는 야생 품종에서 항상 얻었습니다 5,6. 정통 품종과 밀접하게 관련된 간음제는 유사한 특성 7,8,9,10으로 인해 구별하기가 어렵습니다. 중국 약전 2020년판에서 Chuanmutong의 품질 표준은 내용물 결정 없이 특성, 현미경 식별 및 박층 ....
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프로토콜
1. 화학적 지문 검출 방법
- 크로마토그래피 조건
- 아세토니트릴(A)/물(B) 이동상을 준비합니다. HPLC 소프트웨어에서 다음과 같이 그라디언트 프로그램을 설정하십시오 : 0-20 분, 3 % A-10 % A; 20-25 분, 10 % A-13 % A; 25-65 분, 13 % A-25 % A; 65-75 분, 25 % A-40 % A; 75-76 분, 40 % A-3 % A; 76-85 분, 3 % A-3 % A.
- 이동상의 유속을 1.0mL/분으로 유지합니다.
- 30°C로 유지된 C18 컬럼(250 mm x 4.6 mm, 5 μm)에서 크로마토그래피 분리를 수행한다.
- 주입량을 10μL로 설정합니다.
- 205 nm의 파장에서 샘플을 검출합니다.
참고: 크로마토그래피 조건의 특정 설정은 고성능 액체 크로마토그래피 작동 소프트웨어의 작동 절차(재료 표)를 참조하십시오.
- 시료용액 준비
- 원료를 내경 850 μm ± 29 μm 인 나일론 메쉬를 통과시켜 균일 한 입자 크기로 분쇄합니다.
- 분쇄 된 원료 2g (정확하게 칭량)을 마개가있는 50mL 원추형 플라스크에 ....
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결과
촨무통의 크로마토그래피 지문 및 유사성 분석(SA)
정밀도, 반복성 및 안정성의 상대적 머무름 시간의 RSD 값은 각각 0.46%, 1.65% 및 0.53% 미만이었습니다. 상대 피크 영역의 RSD 값은 각각 4.23%, 3.56% 및 3.96% 미만이었다. 그림 1A, B에서 볼 수 있듯이 10개의 정통 Chuanmutong 샘플의 HPLC 지문에는 12개의 뚜렷한 공통 피크(피크 1에서 피크 12까지)가 있었습니다. 10 호의 피크 면적이 상대적으로 컸기 때문에 해상도가 좋았습니다. 각 샘플에 존재하는 성분이었기 때문에 지문의 안정성과 재현성을 조사하기 위한 기준 피크로 사용되었습니다. 이어서, 피크 번호 10을 기준 피크(S)로 취하고, 나머지 11번 피크의 상대 체류 시간을 계산하였다.
유사성 분석에서 상관 계수가 1에 가까울수록 표본 간의 유사성이 높아.......
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토론
연구를 위한 샘플 수집은 중국 약재의 진위 여부를 식별하는 다중 패턴 인식을 구축하는 첫 번째 핵심 단계입니다. 시장 조사를 통해 우리는 쓰촨 야안, 량산, 러산이 촨무통의 야생 자원의 주요 생산 지역임을 발견했습니다. 같은 속의 관련 품종도 동일한 지리적 분포 6,20을 가지고 있습니다. CC, DC, DE, XS 및 SMT는 종종 Chuangmutong16,21; 따라서이 연구에서는 위에서 언급 한 원산지에서 정통 Chuanmutong 10 배치와 혼합 샘플 5 배치를 수집하고 품종의 정확성을 확인했습니다.
두 번째 핵심 단계는 화학 성분에 대해 가능한 한 많은 정보를 표시할 수 있는 HPLC 지문의 검출 조건을 선별하는 것입니다. 이 연구에서는 보충 그.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작업은 쓰촨 한약청 프로젝트(no. 2020JC0088, no. 2021MS203)의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아세트산 | Zhiyuan 화학 시약 Co., Ltd., 톈진, 중국 | 2017381038 | |
| 아세토니트릴 | 시그마-알드리치 Trading Co., Ltd., 중국 상하이 | WXBD5243V | |
| β-Sitosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., 중국 충칭 | 20210201 | |
| C18 열 | Yuexu Material Technology Co., Ltd., 중국 상하이 | Welch Ultimate LP | |
| Chuanmutong | Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 19020103 | CMT-1 |
| Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 200701 | CMT-2 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국 | 200701 | CMT-3 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 200901 | CMT-4 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국 | 210701 | CMT-5 |
| Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 210401 | CMT-6 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 200901 | CMT-7 |
| Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., 중국 쓰촨성 | 201201 | CMT-8 |
| Chuanmutong | Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., 쓰촨성, 중국 | 201001 | CMT-9 |
| Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국 | 210501 | CMT-10 |
| Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China | - | CC |
| Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. | Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, 쓰촨성, 중국 | - | DC |
| 클레 마티스 peterae 손 .- Mazz. | 황무 마을, 황무 향, 한위안 현, 쓰촨성, 중국 | - | DE |
| Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | - | XS |
| Clematis finetiana Levl. et Vaniot. | Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, 쓰촨성, 중국 | - | SMT |
| 전자 저울 | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., 상하이, 중국 | FA1204 | |
| Ergosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd, 충칭, 중국 | 20210201 | |
| Ethanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2021112602 | |
| Ethyl acetate | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017042043 | |
| Formic acid | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2016062901 | |
| 고성능 액체 크로마토그래피 | Agilent, 미국. | 1260 | |
| IBM SPSS 통계 버전 26.0 | International Business Machines Corporation, USA-Methanol | ||
| Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD6409V | ||
| Methanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 202010302 | |
| n-부틸 알코올 | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020071047 | |
| 석유 에테르 | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020090125 | |
| Phosphoric | acid Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., 톈진, 중국 | 20200110 | |
| SESCF-TCM 버전 2012 | 국가 약전 위원회, 중국 | http://114.247.108.158:8888/login | |
| Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., 충칭, 중국 | 20210201 | |
| Trichloromethane | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., 상하이, 중국 | 20200214 | |
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| 초음파 세척기 | Kunshan Hechuang 초음파 기기 Co., Ltd., 장쑤성, 중국 | KH3200E |
참고문헌
- Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
- Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....
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재인쇄 및 허가
