Method Article

원발성 월경통이 있는 쥐에서 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법을 사용한 원시 및 처리된 Cyperi Rhizoma 샘플 분석

DOI:

10.3791/64691

⸱

December 23rd, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

In This Article

Summary

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여기에서는 원발성 월경통이 있는 쥐에서 초고성능 액체 크로마토그래피-고분해능 탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS)을 사용하여 원시 및 가공된 Cyperi rhizoma(CR) 샘플의 비교 분석을 제시합니다. 대사 산물 및 샘플 성분의 혈중 농도 변화는 CR로 처리 된 쥐와 식초로 처리 된 CR (CRV) 사이에서 조사되었습니다.

Abstract

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Cyperi rhizoma (CR)는 산부인과에서 널리 사용되며 중국의 여성 질병 치료를위한 일반 의약품입니다. 식초로 처리한 후 CR의 진통 효과가 향상되기 때문에 식초로 처리한 CR(CRV)은 일반적으로 임상적으로 사용됩니다. 그러나, 식초 가공에 의해 진통 효과가 향상되는 메커니즘은 불분명하다. 이 연구에서는 초고압 액체 크로마토그래피탠덤 질량분석법(UPLC-MS/MS) 기술을 사용하여 월경통이 있는 CR 처리 쥐와 CRV 처리 쥐 사이의 외인성 성분 및 대사 산물의 혈중 농도 변화를 조사했습니다. 그 결과 이 쥐의 혈액에서 15가지 성분과 2가지 대사 산물의 수준이 다른 것으로 나타났습니다. 그 중에서도 CRV 그룹의 (-)-myrtenol 및 [(1R, 2S, 3R, 4R) -3- 하이드 록시 -1,4,7,7- 테트라 메틸 사이클로 [2.2.1] 헵트 -2- 일] 아세트산의 수준은 CR 그룹보다 상당히 높았다. CRV는 전염증, 혈소판 응집 및 혈관 수축 활성이 있는 2 시리즈 프로스타노이드 및 4 시리즈 류코트리엔의 수준을 감소시키고 아라키돈산 및 리놀레산 대사와 불포화 지방산의 생합성을 조절하여 진통 효과를 제공했습니다. 이 연구는 식초 가공이 CR의 진통 효과를 향상시키고 CRV의 작용 메커니즘에 대한 우리의 이해에 기여한다는 것을 보여주었습니다.

Introduction

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원발성 월경통(PD)은 임상 산부인과에서 가장 흔한 상태입니다. 생식 기관의 골반 병리 없이 월경 전이나 월경 중 요통, 부기, 복통 또는 불편함이 특징입니다1. 유병률에 대한 보고서에 따르면 학생의 85.7%가 PD2를 앓고 있습니다. 저용량 경구 피임약이 표준 치료법이지만 심부 정맥 혈전증과 같은 부작용이 점점 더 주목을 받고 있다3. 경구 피임약 사용자 중 심부 정맥 혈전증의 유병률은 여성 1,000명당 >1명이며, 위험은 처음 6-12개월과 40세 이상 사용자 사이에서 가장 높다4.

중국 전통 의학(TCM)에서 오랫동안 사용된 Cyperi rhizoma(CR)는 Cyperaceae 계통의 Cyperus rotundus L.의 말린 뿌리줄기에서 파생됩니다. CR은 월경 장애를 조절하고 우울증과 통증을 완화합니다5. CR은 산부인과에서 널리 사용되며 여성의 질병을 치료하는 일반 의학으로 간주됩니다6. 식초로 처리된 ....

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Protocol

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모든 동물 관련 실험은 충칭 중의학연구소 실험윤리위원회의 승인을 받아 수행되었다. 8-10주령이고 체중이 200g± 20g인 24마리의 암컷 Sprague Dawley 쥐(SD)를 이 실험에 사용했습니다.

1. 추출의 제조

  1. 계산
    1. CR 또는 CRV 추출물을 6마리의 Sprague-Dawley 쥐(10g/[kg∙day])의 처리군에 3일 동안 투여할 계획입니다. 1g/mL의 CR 또는 CRV 추출물 농도를 사용하십시오(추출물 1mL는 허브 1g에서 얻음).
      참고: CR의 복용량은 6-10g입니다. 본 연구에서는 최대 용량 10g을 투약량으로 사용하였다. 성인의 평균 체중이 60kg이므로 성인 복용량은 0.1667g/kg입니다. 체중 변환 알고리즘(24)에 따르면, 인간과 래트 사이의 용량 변환 계수가 6.3이므로, 래트에 대한 용량은 1.05g/kg이다. 쥐의 경우 약물 용량을 10배 증가시켜 10.5g/kg으로 늘렸습니다. 투여량은 계산 및 실제 실험의 편의를 위해 10g/kg으로 설정하였다. 예를 들어, 계산에 의해, 총 36g의 CR 또는 CRV가 필요한 경우, 한약재는 적어도 두 번 준비되어야한다. 따라서, 200 g의 CR이 필요....

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Results

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월경통 모델 실험 분석
대조군에서는 30분 이내에 몸부림치는 반응이 없었는데, 이는 이 쥐들에게 통증을 유발하기 위해 옥시토신과 에스트라디올 벤조에이트를 복강 주사하지 않았기 때문입니다. 모델, CR 및 CRV 그룹의 쥐는 옥시토신 주사 후 상당한 몸부림 반응을 보였다. 이러한 결과는 월경통을 유발하는 에스트라디올 벤조에이트와 옥시토신 조합의 효능을 입증합니다. 모델과 대조군 간의 PGF 2α, PGE 2 및 PGF2α/PGE2 수준의 차이는 유의했으며(P < 0.001, P < 0.05), 모델의 효능을 입증했습니다(그림 1).

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Discussion

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TCM의 다양하고 다양한 특성으로 인해 이러한 허브는 때때로 임상 실습에서 효과가 없으며 이는 TCM의 부적절한 가공 및 달임 때문일 수 있습니다. TCM의 메커니즘은 현대 과학 기술29,30의 사용으로 더욱 분명 해지고 있습니다. 이 연구는 CR과 CRV 모두 PD 모델 쥐에서 치료 효과가 있고 CRV의 치료 효과가 더 중요하다는 것을 보여줍니다. CRV의 작용 메커니즘은 식초 가공이 혈액에 흡수되는 CR 성분에 영향을 미칠 수 있고 리놀레산 대사 및 불포화 지방산의 생합성과 관련될 수 있다는 사실과 관련될 수 있습니다. 그림 10은 통증 완화에서 CRV 작용의 잠재적 경로를 보여줍니다.

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Disclosures

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저자는 경쟁하는 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

Acknowledgements

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이 작업은 충칭시 보건 및 가족 계획위원회 한의학 과학 기술 프로젝트 (프로젝트 번호 : ZY201802297), 충칭 자연 과학 재단 일반 프로젝트 (프로젝트 번호 : cstc2019jcyj-msxmX065), 충칭 현대 산악 지역 특성 고효율 농업 기술 시스템 혁신 팀 빌딩 계획 2022 [10] 및 충칭시 보건위원회 중국 재료의 핵심 분야 건설 프로젝트의 지원을 받았습니다. 메디카 프로세싱.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
아세토니트릴 Fisher Scientific, 미국 펜실베니아 주 피츠버그197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20Beckman  쿨터, Inc.
에스트라디올 벤조에이Shanghai Macklin Biochemical Co., LtdC10042616
포름산Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA177799
LC 30A systemShimadzu, Kyoto, Japan228-45162-46
올리브 오일Shanghai Yuanye Biotechnology Co., LtdH25A11P111909
옥시토신 합성Zhejiang 펩타이드 생물학 Co., Ltd 
쥐 PGF2α ELISA 키트Shanghai lmai Bioengineering Co., Ltd202101
Rat PGFE2 ELISA kitShanghai lmai Bioengineering Co., LtdEDL202006217
SPF Sprague-Dawley ratsHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd인증 번호 SCXK (Hunan) 2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria1510002987
Triple TOF 4600 systemSCIEX, Framingham, MA, USABK20641402
waterFisher Scientific, Pittsburg, PA, USA152720
MRZ15K047트 2019092001

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yu, W. Y., et al. Acupuncture for primary dysmenorrhea: A potential mechanism from an anti-inflammatory perspective. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 1907009(2021).
  2. Rafique, N., Al-Sheikh, M. H.

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Cyperi RhizomaVinegar ProcessingPrimary DysmenorrheaLiquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryMetabonomics AnalysisDifferential MetabolitesKEGG PathwayPrincipal Component AnalysisOrthogonal Partial Least Squares

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