본 프로토콜은 NIR-II 광학 이미징 장치를 사용한 마우스의 상세한 실시간 NIR-II 형광 이미징 동작을 설명합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
* These authors contributed equally
본 프로토콜은 NIR-II 광학 이미징 장치를 사용한 마우스의 상세한 실시간 NIR-II 형광 이미징 동작을 설명합니다.
새로운 이미징 기술인 근적외선 II(NIR-II, 1000-1700nm) 형광 이미징은 높은 감도, 심층 조직 침투, 공간 및 시간 해상도를 통한 우수한 이미징으로 인해 생물 의학 분야에서 상당한 잠재력을 가지고 있습니다. 그러나 의학 및 약학과 같이 시급히 필요한 일부 분야에서 NIR-II 형광 이미징의 구현을 용이하게 하는 방법은 관련 연구자들을 당황하게 했습니다. 이 프로토콜은 DAD(기증자-수용체-기증자) 골격이 있는 NIR-II 형광 분자 프로브 HLY1의 구성 및 바이오이미징 응용 분야에 대해 자세히 설명합니다. HLY1은 우수한 광학적 특성과 생체적합성을 보였다. 또한, NIR-II 광학 이미징 장치를 사용하여 마우스의 NIR-II 혈관 및 종양 이미징을 수행했습니다. 실시간 고해상도 NIR-II 형광 이미지를 획득하여 종양 및 혈관 질환의 검출을 안내했습니다. 프로브 준비에서 데이터 수집에 이르기까지 이미징 품질이 크게 향상되고 생체 내 이미징에서 데이터 기록을 위한 NIR-II 분자 프로브의 신뢰성이 보장됩니다.
형광 이미징은 기초 연구에서 일반적으로 사용되는 분자 이미징 도구이며, 클리닉에서 외과적 종양 절제술을 안내하는 데에도 자주 사용됩니다1. 형광 이미징의 필수 원리는 샘플(조직, 장기 등)을 조사한 후 레이저에서 방출되는 형광을 수신하기 위해 카메라를 사용하는 것입니다. 2. 프로세스는 몇 밀리 초 이내에 완료됩니다3. 형광 이미징 파장은 자외선 (200-400 nm), 가시 영역 (400-700 nm), 근적외선 I (NIR-I, 700-900 nm) 및 근적외선 II (NIR-II, 1000-1700 nm) 4,5,6. 생물학적 조직의 헤모글로빈, 멜라닌, 데 옥시 헤모글로빈 및 빌리루빈과 같은 내인성 분자는 가시 광선 영역의 빛에 강한 흡수 및 산란 효과를 가지므로 빛의 침투 및 감도가 크게 감소하고 가시 광선 파장의 형광 이미징에 악영향을 미칩니다 7,8,9.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
NIR-II 이미징 연구를 위한 동물 실험은 국제 실험 동물 관리 협회(AALAC)를 수상한 우한 대학의 동물 실험 센터에서 수행되었습니다. 모든 동물 연구는 중국 동물 복지 위원회의 실험 동물 관리 및 사용 지침에 따라 수행되었으며 우한 대학교 동물 실험 센터의 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받았습니다.
6주령의 암컷 BALB/c 누드 마우스(~20g)를 본 연구에 사용했습니다.
1. NIR-II 이미징 준비
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
물에 필요한 HLY1 도트의 형광 강도와 밝기는 NIR-II 이미징 기기에 의해 결정되었습니다. 90% fwTHF/H2O혼합물에서 HLY1의 형광 강도는 THF 용액의 5배였으며, 이는 HLY1의 두드러진 AIE 특징을 나타냅니다(그림 1B). 또한, HLY1 도트는 1,500nm LP 필터에서 강한 형광 신호를 방출하여 HLY1 도트가 NIR-IIb 이미징에 사용될 수 있음을 보여줍니다(그림 1D). HLY1 도트의 최대 흡수 및 최대 방출 파장은 각각 740nm 및 1,040nm였습니다(그림 2A). 또한, HLY1 도트의 유체역학적 크기는 동적 광 산란(DLS)에 의해 145nm로 측정되었습니다(그림 2B). HLY1 도트(0.2mL, 0.8mg/mL)를 혈.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
NIR-I 형광 이미징은 종양 및 혈관 이미징에 어느 정도 사용될 수 있지만 NIR-I 형광단(<900nm)의 제한된 최대 방출 파장으로 인해 조직 침투 및 종양 신호 배경 비율이33,34가 불량합니다. 열악하고 낮은 이미징 해상도는 이미징 피드백 치료의 결과와 실제 치료 효과 사이에 편차를 유발할 수 있습니다. 또한, 대부분의 NIR-I 형광단은 광학 안정성이 낮고 대사가 매우 빠르기 때문에 이미징 공정이 불안정합니다. NIR-I 형광단의 낮은 조직 침투 및 불안정성으로 인해 종양 및 혈관 영상에서의 적용은 크게 제한된다35. NIR-I 광과 비교하여 NIR-II 형광 이미징은 광자 산란 및 흡수가 크게 감소하고, 조직 자동 형광이 낮고, 신체 조직 침투력이 강하고, 시공간 해상도가 더 우수하다는 장점이 있습니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
저자는 공개 할 것이 없습니다.
이 작업은 NSFC(82273796, 82111530209), 중앙 정부의 지역 과학 및 기술 개발 지도를 위한 특별 기금(XZ202202YD0021C, XZ202102YD0033C, XZ202001YD0028C), 후베이성 과학 기술 혁신 핵심 프로젝트(2020BAB058), 중앙 대학을 위한 기초 연구 기금, 과학 기술 개발을 위한 티베트 자치구 COVID-19 예방 및 통제 프로그램의 보조금으로 부분적으로 지원되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 무수 피리딘 | Perimed | 110-86-1 | |
| 무수 황산나트륨 | 중국 국가 의약품 유한 | SY006376 | |
| 검은 판지 | 쑤저우 Yingrui 광학 기술 유한 회사 | AO00158 | |
| 컬럼 크로마토 그래 | 에너지 화학 | E080498 | |
| 디 페닐 포스 핀 팔라듐 디클로라이드 | 시그마 - 알드리치 | B2161-1g | |
| DSPE - PEG2000 | Ponsure | PS-E1 | |
| Dulbecco의 개조된 독수리 미디엄 | Gibco | 8121587 | |
| EGTA | Biofroxx | EZ6789D115 | |
| 소 태아 혈청 | Gibco | 2166090RP | |
| 이소 플루란 | GLPBIO | GC45487-1 | |
| K < > 2 < / sub>CO 3 < / sub> | Macklin | P816305-5g | |
| N. N '- 디메틸 포름 아미드 | 중국 국가 의약품 유한 | 1968 | |
| NIR-II 이미징 기기 | Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd | 16011109 | |
| N-sulfenanilide | Enerry chemical | 1250030-5g | |
| PdCl2(dppf)2CH2Cl2 | TCI | B2064-1g | |
| 페니실린-스트렙토마이신 | Gibco | 15140-122 | |
| 테트라하이드로푸란 | 중국 국가 의약품 유한 M005197 | ||
| 테트라트리페닐포스핀 팔라듐 | Immochem | 1021232-5g | |
| 테트라트리페닐포스핀 팔라듐 | Sigma-Aldrich | 1021232-5g | |
| 트리부틸틴 클로라이드 | Immochem | ||
| 트리메틸 클로로 실란 | 중국 국가 의약품 유한 공사 | 40060560 |
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.