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방법 논문

혈관 및 종양 이미징을 위한 밝은 NIR-II 형광 프로브

2.8K 조회수

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DOI:

10.3791/64875

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2023년 3월 17일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

본 프로토콜은 NIR-II 광학 이미징 장치를 사용한 마우스의 상세한 실시간 NIR-II 형광 이미징 동작을 설명합니다.

초록

새로운 이미징 기술인 근적외선 II(NIR-II, 1000-1700nm) 형광 이미징은 높은 감도, 심층 조직 침투, 공간 및 시간 해상도를 통한 우수한 이미징으로 인해 생물 의학 분야에서 상당한 잠재력을 가지고 있습니다. 그러나 의학 및 약학과 같이 시급히 필요한 일부 분야에서 NIR-II 형광 이미징의 구현을 용이하게 하는 방법은 관련 연구자들을 당황하게 했습니다. 이 프로토콜은 DAD(기증자-수용체-기증자) 골격이 있는 NIR-II 형광 분자 프로브 HLY1의 구성 및 바이오이미징 응용 분야에 대해 자세히 설명합니다. HLY1은 우수한 광학적 특성과 생체적합성을 보였다. 또한, NIR-II 광학 이미징 장치를 사용하여 마우스의 NIR-II 혈관 및 종양 이미징을 수행했습니다. 실시간 고해상도 NIR-II 형광 이미지를 획득하여 종양 및 혈관 질환의 검출을 안내했습니다. 프로브 준비에서 데이터 수집에 이르기까지 이미징 품질이 크게 향상되고 생체 내 이미징에서 데이터 기록을 위한 NIR-II 분자 프로브의 신뢰성이 보장됩니다.

서론

형광 이미징은 기초 연구에서 일반적으로 사용되는 분자 이미징 도구이며, 클리닉에서 외과적 종양 절제술을 안내하는 데에도 자주 사용됩니다1. 형광 이미징의 필수 원리는 샘플(조직, 장기 등)을 조사한 후 레이저에서 방출되는 형광을 수신하기 위해 카메라를 사용하는 것입니다. 2. 프로세스는 몇 밀리 초 이내에 완료됩니다3. 형광 이미징 파장은 자외선 (200-400 nm), 가시 영역 (400-700 nm), 근적외선 I (NIR-I, 700-900 nm) 및 근적외선 II (NIR-II, 1000-1700 nm) 4,5,6. 생물학적 조직의 헤모글로빈, 멜라닌, 데 옥시 헤모글로빈 및 빌리루빈과 같은 내인성 분자는 가시 광선 영역의 빛에 강한 흡수 및 산란 효과를 가지므로 빛의 침투 및 감도가 크게 감소하고 가시 광선 파장의 형광 이미징에 악영향을 미칩니다 7,8,9.

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프로토콜

NIR-II 이미징 연구를 위한 동물 실험은 국제 실험 동물 관리 협회(AALAC)를 수상한 우한 대학의 동물 실험 센터에서 수행되었습니다. 모든 동물 연구는 중국 동물 복지 위원회의 실험 동물 관리 및 사용 지침에 따라 수행되었으며 우한 대학교 동물 실험 센터의 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받았습니다.

6주령의 암컷 BALB/c 누드 마우스(~20g)를 본 연구에 사용했습니다.

1. NIR-II 이미징 준비

  1. 시중에서 판매되는 검은색 판지( 재료 표 참조)를 캐리어 중앙에 놓습니다. 그런 다음 샘플을 검은색 판지 위에 올려 샘플이 캐리어의 중앙(이미징 장치에 있는 스테이지)에 오도록 합니다.
    참고: 흰색 판지와 비교하여 검은색 판지는 NIR-II 이미징 중에 배경 간섭이 적습니다.
  2. NIR-II 프로브의 파장에 따라 적합한 필터를 선택하십시오. 시스템이 필터를 광학 이미징 경로로 이동할 때 화면 인터페이스에서 필터 모델에 해당하는 상자 영역(예: 900LP)을 제어하려면 길게(>2초) 누릅니다.
  3. 캐리어 콘솔이 위로 올라갈 수 있도록 캐리어 콘솔 제어 영역의 ....

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결과

물에 필요한 HLY1 도트의 형광 강도와 밝기는 NIR-II 이미징 기기에 의해 결정되었습니다. 90% fwTHF/H2O혼합물에서 HLY1의 형광 강도는 THF 용액의 5배였으며, 이는 HLY1의 두드러진 AIE 특징을 나타냅니다(그림 1B). 또한, HLY1 도트는 1,500nm LP 필터에서 강한 형광 신호를 방출하여 HLY1 도트가 NIR-IIb 이미징에 사용될 수 있음을 보여줍니다(그림 1D). HLY1 도트의 최대 흡수 및 최대 방출 파장은 각각 740nm 및 1,040nm였습니다(그림 2A). 또한, HLY1 도트의 유체역학적 크기는 동적 광 산란(DLS)에 의해 145nm로 측정되었습니다(그림 2B). HLY1 도트(0.2mL, 0.8mg/mL)를 혈.......

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토론

NIR-I 형광 이미징은 종양 및 혈관 이미징에 어느 정도 사용될 수 있지만 NIR-I 형광단(<900nm)의 제한된 최대 방출 파장으로 인해 조직 침투 및 종양 신호 배경 비율이33,34가 불량합니다. 열악하고 낮은 이미징 해상도는 이미징 피드백 치료의 결과와 실제 치료 효과 사이에 편차를 유발할 수 있습니다. 또한, 대부분의 NIR-I 형광단은 광학 안정성이 낮고 대사가 매우 빠르기 때문에 이미징 공정이 불안정합니다. NIR-I 형광단의 낮은 조직 침투 및 불안정성으로 인해 종양 및 혈관 영상에서의 적용은 크게 제한된다35. NIR-I 광과 비교하여 NIR-II 형광 이미징은 광자 산란 및 흡수가 크게 감소하고, 조직 자동 형광이 낮고, 신체 조직 침투력이 강하고, 시공간 해상도가 더 우수하다는 장점이 있습니다.

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 NSFC(82273796, 82111530209), 중앙 정부의 지역 과학 및 기술 개발 지도를 위한 특별 기금(XZ202202YD0021C, XZ202102YD0033C, XZ202001YD0028C), 후베이성 과학 기술 혁신 핵심 프로젝트(2020BAB058), 중앙 대학을 위한 기초 연구 기금, 과학 기술 개발을 위한 티베트 자치구 COVID-19 예방 및 통제 프로그램의 보조금으로 부분적으로 지원되었습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
무수 피리딘Perimed 110-86-1
무수 황산나트륨중국 국가 의약품 유한SY006376
검은 판지쑤저우 Yingrui 광학 기술 유한 회사AO00158
컬럼 크로마토 그래에너지 화학E080498
디 페닐 포스 핀 팔라듐 디클로라이드시그마 - 알드리치B2161-1g
DSPE - PEG2000PonsurePS-E1
Dulbecco의 개조된 독수리 미디엄 Gibco8121587
EGTABiofroxxEZ6789D115
소 태아 혈청Gibco2166090RP
이소 플루란GLPBIOGC45487-1
K < > 2 < / sub>CO 3 < / sub>MacklinP816305-5g
N. N '- 디메틸 포름 아미드중국 국가 의약품 유한1968
NIR-II 이미징 기기Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd16011109
N-sulfenanilideEnerry chemical 1250030-5g
PdCl2(dppf)2CH2Cl2TCI B2064-1g
페니실린-스트렙토마이신Gibco15140-122
테트라하이드로푸란중국 국가 의약품 유한 M005197
테트라트리페닐포스핀 팔라듐Immochem1021232-5g
테트라트리페닐포스핀 팔라듐Sigma-Aldrich1021232-5g
트리부틸틴 클로라이드Immochem
트리메틸 클로로 실란중국 국가 의약품 유한 공사40060560
피 공사년 2월 12일 QH004335

참고문헌

  1. Liu, Y., et al. Versatile types of inorganic/organic NIR-IIa/IIb fluorophores: from strategic design toward molecular imaging and theranostics. Chemical Reviews. 122 (1), 209-268 (2022).
  2. Zhou, H., et al.

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재인쇄 및 허가

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