Method Article

Epimedii Folium 양고기 오일 가공 기술의 최적화 및 제브라피쉬 배아 발달에 미치는 영향 테스트

DOI:

10.3791/65096

⸱

March 17th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

In This Article

Summary

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이 프로토콜에서는 Box-Behnken 실험 설계-반응 표면 방법론을 적용하여 Epimedii folium(EF)의 양고기 오일 가공 기술을 최적화하고, 제브라피쉬 배아 발달에 대한 조잡하고 최적화된 물 추출 EF의 영향을 예비 조사했습니다.

Abstract

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중국 전통 의학(TCM)인 에피메디 폴리움(EF)은 2,000년 > 된 의학 및 식품 분야에서 역사를 가지고 있습니다. 임상적으로 양고기 기름으로 가공한 EF는 약으로 사용되는 경우가 많습니다. 최근에는 EF를 원료로 사용하는 제품의 안전 위험과 부작용에 대한 보고가 점차 증가하고 있습니다. 처리는 TCM의 안전성을 효과적으로 향상시킬 수 있습니다. TCM 이론에 따르면 양고기 기름 가공은 EF의 독성을 줄이고 신장에 대한 강장제 효과를 향상시킬 수 있습니다. 그러나 EF 양고기 기름 가공 기술에 대한 체계적인 연구와 평가가 부족하다. 이 연구에서는 Box-Behnken 실험 설계-반응 표면 방법론을 사용하여 여러 구성 요소의 내용을 평가하여 처리 기술의 주요 매개변수를 최적화했습니다. 그 결과 EF의 최적 양고기 기름 가공 기술은 다음과 같다: 양고기 기름을 120°C ± 10°C에서 가열하고, 조잡한 EF를 첨가하고, 고르게 광택이 날 때까지 189°C ± 10°C로 부드럽게 볶은 다음, 그것을 제거하고 식힌다. EF 100kg 당 15kg의 양고기 기름을 사용해야합니다. 원유 및 양고기 기름 가공 EF의 수성 추출물의 독성 및 최기형성을 제브라피쉬 배아 발달 모델에서 비교했습니다. 결과는 조잡한 허브 그룹이 제브라 피쉬 기형을 일으킬 가능성이 더 높았으며 최대 치사 EF 농도가 더 낮았다는 것을 보여주었습니다. 결론적으로, 최적화 된 양고기 기름 가공 기술은 안정적이고 신뢰할 수 있으며 반복성이 우수했습니다. 특정 용량에서, EF의 수성 추출물은 제브라 피쉬 배아의 발달에 독성이 있었고, 독성은 가공 된 약물보다 생약에 대해 더 강했다. 결과는 양고기 기름 가공이 원유 EF의 독성을 감소시키는 것으로 나타났습니다. 이러한 발견은 양고기 기름 가공 EF의 품질, 균일성 및 임상적 안전성을 개선하는 데 사용될 수 있습니다.

Introduction

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Epimedii folium (EF)은 Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.)의 말린 잎입니다. Maxim., Epimedium pubescens Maxim., 또는 Epimedium koreanum Nakai. EF는 골다공증, 갱년기 증후군, 유방 덩어리, 고혈압, 관상 동맥 심장 질환 및 기타 질병을 치료하는 데 사용할 수 있습니다1. 중국 전통 의학(TCM)인 EF는 2,000년 이상의 의학 및 식품 분야의 역사를 가지고 있습니다. 저렴한 가격과 신장을 강화하는 현저한 효과로 인해 의약품 및 건강 식품에 널리 사용됩니다. EF는 양고기 기름으로 볶아서 가공하는데, 이는 Liu Song 시대2의 Lei Xiao가 쓴 Lei Gong Processing Theory에서 처음 설명한 과정입니다. 조잡한 EF와 볶은 EF의 효능은 상당히 다릅니다. 조잡한 EF는 주로 류머티즘을 없애는 반면, 볶은 EF는 신장을 따뜻하게 하여 양3을 강화합니다. 현재 EF는 의약품 및 건강 식품의 원료로 널리 사용되고 있습니다. 중국 특허 ....

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Protocol

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모든 동물 관련 실험은 충칭 중의학연구소 실험윤리위원회의 승인을 받아 수행되었다(실험동물윤리심의인증서 번호: ZJS2022-03).

1. 생리 활성 성분의 결정

참고: 이 연구에 사용된 종은 Epimedium sagittatum이었고 샘플은 충칭 Fengdu County에서 수집되었습니다. 샘플은 E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) 격언. 충칭 중국 전통 의학 연구소 생물 의학 연구소의 연구원에 의해.

  1. 전자 분석 저울을 사용하여 각 기준 물질, 즉 icariin, epimedin A(EA), epimedin B(EB), epimedin C(EC) 및 baohuoside I(BI)의 적정량을 정확하게 칭량하여 대조 제품 용액을 준비하고 메탄올에 용해시킵니다. 이를 사용하여 381.61 μg/mL 이카리인, 124.14 μg/mL EA, 110.24 μg/mL EB, 1091.75 μg/mL EC 및 184.98 μg/mL BI를 포함하는 혼합 기준 원액을 제조합니다.
  2. EF를 3번 체로 분쇄하여 시험산물을 준비한다. 약 0.2g(전자 분석 저울 사용)의 분쇄된 EF를 마개가 있는 ....

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Results

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방법론적 조사 결과
이카리인, EA, EB, EC, BI 및 크로마토그래피 피크 영역의 농도 사이의 선형 관계가 관찰되었다( 표 3 참조). 이카리인, EA, EB, EC 및 BI의 크로마토그래피 피크 영역의 RSD%값(n=6)은 각각 0.28%, 1.22%, 0.65%, 1.67%, 1.06%였으며, 이는 HPLC 측정의 정밀도가 양호함을 나타낸다. 이카리인, EA, EB, EC, BI의 함량의 RSD%값(n=6)은 각각 1.59%, 1.46%, 1.86%, 2.29%, 0.98%로 되어 반복성이 양호한 것을 알 수 있었다. 시료 중의 이카리인, EA, EB, EC, BI의 피크 면적의 RSD%값(n=6)은 각각 1.49%, 1.96%, 1.42%, 0.96%, 0.81%였으며, 이는 시료 용액이 24시간 이내에 안정함을 나타내는 것이다. 이카리인, EA, EB, EC, BI의 평균 회수율은 각각 99.98%, 100.14%, 100.09%, 100.75%, 1.......

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Discussion

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독립 변수 및 그 수준의 결정
EF 가공 기술은 중국 약전 2020년판과 전국 26개 성, 시, 자치구에서 발표한 현지 한약 가공 사양에만 설명되어 있습니다1. 설명에는 양고기 기름을 가져다가 녹일 때까지 가열하고, EF 조각을 넣고, 균일하고 광택이 날 때까지 천천히 불로 볶고, 꺼내서 식히는 단계가 포함됩니다. 또한 Epimedium 100kg당 20kg(정제된 양고기 기름 20%)이 사용됩니다. 그러나 EF 처리 프로세스의 매개 변수는 지정되지 않습니다. 이 실험의 독립 변수 중 생산 공정에서 양고기 기름 복용량, 양고기 기름 온도 및 튀김 온도의 세 가지 핵심 요소를 정량화할 수 있습니다. 값 범위는 위의 설명에 따라 설정해야 합니다. 예비 시험 결과, 양고기 기름의 양이 15 % 일 때, EF 잎은 양고기 기름으로 고르게 코팅 될 수 있음을 알 수 있습니다. 복용량이 35 %를 초과하면 양고기 기름이 너무 많습니다. 마지막으로 양고기 기름 양.......

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Disclosures

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저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작업은 충칭 한의학 아카데미의 기초 과학 연구 사업 프로젝트 (프로젝트 번호 : jbky20200013), 충칭 과학 연구 기관의 성과 인센티브 지침 프로젝트 (프로젝트 번호 : cstc2021jxjl 130025) 및 충칭시 보건위원회 중국 재료 메디카 가공의 핵심 분야 건설 프로젝트.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileFisher197164
Baohuoside figure-materials-1 (Bfigure-materials-2 ) 공급자:Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20042402
크로마토그래피 컬럼Waters Corporation대칭 C18
Design Expert softwareStat- Ease Inc., Minneapolis, MNTrial Version8.0.6.1
DetectorWaters Corporation2998
분해기Hefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.S-FS553
전자 분석 저울Mettler-Toledo International Inc.
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
에탄올충칭 Chuandong 화학 (그룹) Co., Ltd.
Graphpad 소프트웨어GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.
메탄올Chongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.
미세 다공성 멤브레인Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0.22&뮤; m
양고기 기름Kuoshan Zhiniu 신선 식품 매장20211106
Office Excel 사무용 소프트웨어MicrosoftOffice Excel 2021
약전 체Shaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
순수 기계충칭 앤더슨 환경 보호 장비 Co., Ltd.Sro 10A
품질 여과지Shanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18cm
실체 현미경Carl Zeiss, Oberkochen, 독일Stemi 2000
초음파 세척기Branson Ultrasonics (Shanghai) Co., Ltd.BUG25-12
제브라피쉬중국 제브라피쉬 자원 센터(CZRC)AB 균주
MS205DU (영어)201808012109140120171101에서

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , China Medical Science and Technology Press. Beijing, China. (2020).
  2. Wang, X. T. Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , Nanchang Science and Technology Press. Jiangxi, China. (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S.

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