방법 논문

알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델

DOI:

10.3791/65120

⸱

2023년 3월 24일

 ,  ,  , 
1Department of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital of Yangzhou University, Yangzhou University, 2Department of Traditional Chinese and Western Medicine, Medical College, Yangzhou University, 3The Key Laboratory of Syndrome Differentiation and Treatment of Gastric Cancer of the State Administration of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou University, 4Jiangsu Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Treatment of Senile Diseases, Yangzhou University

이 논문에서

요약

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여기에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)에 의해 마우스 귀에 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하는 방법과 알레르기성 접촉성 피부염의 중증도를 평가하는 방법을 설명합니다.

초록

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피부는 인체의 첫 번째 방어선이며 환경 화학 물질에 가장 많이 노출되는 기관 중 하나입니다. 알레르기성 접촉 피부염(ACD)은 국소 발진, 발적 및 피부 병변으로 나타나는 흔한 피부 질환입니다. ACD의 발생과 발달은 유전적 요인과 환경적 요인의 영향을 받습니다. 최근 몇 년 동안 많은 학자들이 일련의 ACD 모델을 구축했지만 이러한 모델의 실험 프로토콜이 모두 다르기 때문에 독자가 잘 확립하기가 어렵습니다. 따라서 안정적이고 효율적인 동물모델은 아토피성 피부염의 발병기전을 더 연구하는데 큰 의미가 있다. 이 연구에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)을 사용하여 생쥐의 귀에 ACD 유사 증상을 유도하는 모델링 방법을 자세히 설명하고 모델링 중 피부염의 중증도를 평가하는 몇 가지 방법을 설명합니다. 이 실험 프로토콜은 일부 실험에 성공적으로 적용되었으며 ACD 연구 분야에서 특정 판촉 역할을 합니다.

서론

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알레르기성 접촉성 피부염(ACD)은 접촉 부위의 습진과 유사한 증상, 중등도의 경우 부종 및 홍반, 심한 경우 구진, 미란, 삼출 또는 다량의 흉터를 특징으로 하는 흔한 피부 질환입니다1. 인구의 최대 20%에 영향을 미치며 모든 연령대의 사람들에게 영향을 미칠 수 있습니다2. ACD는 알레르겐에 반복적으로 노출된 사람에게서 자주 발생하며, 가정이나 직장에서 하나 이상의 알레르겐에 대한 개인의 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다3. IV형 지연성 과민증은 ACD4에서 주요 유형의 면역 반응으로 간주됩니다. 알레르겐에 반복적으로 노출된 피부 부위에서는 순환 기억 T 세포가 다량으로 축적되어 면역 및 염증 반응을 유도한다 3,5,6. 이 연구의 목적은 ACD 발병에서 면역학적 및 염증 반응에 대한 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 실험실 기술을 제안하는 것입니다.

ACD의 ....

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프로토콜

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생쥐의 모든 관리 및 치료는 Yangzhou University의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 수립한 지침에 따라 이루어졌으며 프로젝트 라이선스 SYXK(SU)2022-0044에 따라 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구에는 6-8주령의 BALB/c 수컷 및 암컷 마우스가 사용되었습니다. 각 그룹은 6마리의 마우스로 구성되었습니다( 재료 표 참조). 케이지는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있는 온도 조절 챔버(22 ± 2 °C, 12시간 명암 주기)에 배치되었습니다. 실험 흐름도는 그림 1에 나와 있습니다.

1. 동물 준비

  1. 환경에 순응 한 지 1 주일 후에 모델링을 시작하십시오.
  2. 마우스를 조작하기 전에 자외선 램프와 75% 알코올 소독제를 사용하여 환경과 조리대를 청소하고 소독하십시오.
    알림: 외부 요인의 영향을 피하기 위해 마우스 귀에 식별을 위해 마우스를 표시할 수 없습니다. 뒷면이나 꼬리 부분의 얼룩을 대안으로 사용할 수 있습니다.
  3. 작은 면봉을 사용하여 생쥐의 복부에 비눗물을 바릅니다 (약 1-2cm2 크기). 모....

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결과

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반복적인 DNFB 자극 하에서 DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 심지어 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다. 그러나 순수(대조군) 또는 용매 대조군(비히클 그룹)의 귀 투여는 유사한 증상을 나타내지 않았습니다(그림 4).

한편, DNFB 그룹에서는 치료되지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 후 왼쪽 귀의 두께가 유의하게 증가한 반면(그림 5A), 대조군과 비히클 그룹에서는 큰 차이가 없었습니다(그림 5B). DNFB 그룹 마우스의 왼쪽 귀는 모델링 11일째에 에반스 블루 염료를 주입한 후 분명히 짙은 파란색으로 변했는데, 이는 오른쪽 귀와 시각적으로 달랐습니다. 그러나, 대조군 및 비히클 군에서 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 귀는 거의 동일한 색이.......

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토론

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마우스의 귀에서 ACD 유사 증상을 유도하기 위해 여기에 설명된 프로토콜은 ACD의 병태생리학을 연구하고 신약 개발을 위한 스크리닝 도구로 사용할 수 있습니다.

ACD 모델을 확립하는 데는 초기 감작과 후속 자극의 두 가지 주요 단계가 있습니다. 복부는 일반적으로 초기 감작 부위이지만 후속 자극 부위는 약간 다르게 선택되었습니다. 이전 연구에 따르면 대부분의 학자들은 생쥐의 등이나 목에 ACD 모델을 설정하기 위해 DNFB/DNCB 또는 옥사졸론과 같은 화학 감작제를 사용하기로 선택했으며 생쥐의 모델링 영역을 제모하기 위해 블레이드 또는 트리머를 사용하는 것이 불가피합니다17,18,19. 그러나 이 단계는 피부 장벽을 쉽게 파괴하고 후속 실험에 영향을 줄 수 있습니다. 또한, 떨어지는 약물은 목덜미의 넓은 면적과 .......

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공개 사항

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저자는 이 작업에 대한 이해 상충이 없다고 보고합니다.

감사의 글

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이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC)이 N.-N.에 지원했습니다. Y. (81904212); 장쑤 성 중국 전통 의학 과학 기술 프로젝트 (YB201995); 중국 박사후 연구원을 위한 특별 자금 지원 프로젝트(2020T130562).

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1-플루오로-2,4-디니트로벤젠 (DNFB)머크200-734-31-플루오로-2,4-디니트로벤젠, ≥ 99%
AcetoneSinopharm 화학 시약 Co. 주식 회사10000418≥ 99.5%
알루미늄 호일 CleanwrapCF-2
Evans blue dyeSolarbio314-13-6염료 함량 약. 80%
마우스 고정제ZHUYANBANGGEGD-SM1830
올리브 오일Solarbio8001-25-0500 ml
피펫 팁BiofountFT-20010 - 200 μ l
피펫터Eppendorf AG312300025020 - 200 μ l
면도날Shanghai Gillette Co. LTD74-S
버니어 캘리퍼스Delixi ElectricDECHOTVCS1200

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children. Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).
  2. Koppes, S. A., et al.

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재인쇄 및 허가

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