여기에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)에 의해 마우스 귀에 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하는 방법과 알레르기성 접촉성 피부염의 중증도를 평가하는 방법을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
피부는 인체의 첫 번째 방어선이며 환경 화학 물질에 가장 많이 노출되는 기관 중 하나입니다. 알레르기성 접촉 피부염(ACD)은 국소 발진, 발적 및 피부 병변으로 나타나는 흔한 피부 질환입니다. ACD의 발생과 발달은 유전적 요인과 환경적 요인의 영향을 받습니다. 최근 몇 년 동안 많은 학자들이 일련의 ACD 모델을 구축했지만 이러한 모델의 실험 프로토콜이 모두 다르기 때문에 독자가 잘 확립하기가 어렵습니다. 따라서 안정적이고 효율적인 동물모델은 아토피성 피부염의 발병기전을 더 연구하는데 큰 의미가 있다. 이 연구에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)을 사용하여 생쥐의 귀에 ACD 유사 증상을 유도하는 모델링 방법을 자세히 설명하고 모델링 중 피부염의 중증도를 평가하는 몇 가지 방법을 설명합니다. 이 실험 프로토콜은 일부 실험에 성공적으로 적용되었으며 ACD 연구 분야에서 특정 판촉 역할을 합니다.
서론
알레르기성 접촉성 피부염(ACD)은 접촉 부위의 습진과 유사한 증상, 중등도의 경우 부종 및 홍반, 심한 경우 구진, 미란, 삼출 또는 다량의 흉터를 특징으로 하는 흔한 피부 질환입니다1. 인구의 최대 20%에 영향을 미치며 모든 연령대의 사람들에게 영향을 미칠 수 있습니다2. ACD는 알레르겐에 반복적으로 노출된 사람에게서 자주 발생하며, 가정이나 직장에서 하나 이상의 알레르겐에 대한 개인의 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다3. IV형 지연성 과민증은 ACD4에서 주요 유형의 면역 반응으로 간주됩니다. 알레르겐에 반복적으로 노출된 피부 부위에서는 순환 기억 T 세포가 다량으로 축적되어 면역 및 염증 반응을 유도한다 3,5,6. 이 연구의 목적은 ACD 발병에서 면역학적 및 염증 반응에 대한 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 실험실 기술을 제안하는 것입니다.
ACD의 ....
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프로토콜
생쥐의 모든 관리 및 치료는 Yangzhou University의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 수립한 지침에 따라 이루어졌으며 프로젝트 라이선스 SYXK(SU)2022-0044에 따라 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구에는 6-8주령의 BALB/c 수컷 및 암컷 마우스가 사용되었습니다. 각 그룹은 6마리의 마우스로 구성되었습니다( 재료 표 참조). 케이지는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있는 온도 조절 챔버(22 ± 2 °C, 12시간 명암 주기)에 배치되었습니다. 실험 흐름도는 그림 1에 나와 있습니다.
1. 동물 준비
- 환경에 순응 한 지 1 주일 후에 모델링을 시작하십시오.
- 마우스를 조작하기 전에 자외선 램프와 75% 알코올 소독제를 사용하여 환경과 조리대를 청소하고 소독하십시오.
알림: 외부 요인의 영향을 피하기 위해 마우스 귀에 식별을 위해 마우스를 표시할 수 없습니다. 뒷면이나 꼬리 부분의 얼룩을 대안으로 사용할 수 있습니다. - 작은 면봉을 사용하여 생쥐의 복부에 비눗물을 바릅니다 (약 1-2cm2 크기). 모....
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결과
반복적인 DNFB 자극 하에서 DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 심지어 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다. 그러나 순수(대조군) 또는 용매 대조군(비히클 그룹)의 귀 투여는 유사한 증상을 나타내지 않았습니다(그림 4).
한편, DNFB 그룹에서는 치료되지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 후 왼쪽 귀의 두께가 유의하게 증가한 반면(그림 5A), 대조군과 비히클 그룹에서는 큰 차이가 없었습니다(그림 5B). DNFB 그룹 마우스의 왼쪽 귀는 모델링 11일째에 에반스 블루 염료를 주입한 후 분명히 짙은 파란색으로 변했는데, 이는 오른쪽 귀와 시각적으로 달랐습니다. 그러나, 대조군 및 비히클 군에서 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 귀는 거의 동일한 색이.......
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토론
마우스의 귀에서 ACD 유사 증상을 유도하기 위해 여기에 설명된 프로토콜은 ACD의 병태생리학을 연구하고 신약 개발을 위한 스크리닝 도구로 사용할 수 있습니다.
ACD 모델을 확립하는 데는 초기 감작과 후속 자극의 두 가지 주요 단계가 있습니다. 복부는 일반적으로 초기 감작 부위이지만 후속 자극 부위는 약간 다르게 선택되었습니다. 이전 연구에 따르면 대부분의 학자들은 생쥐의 등이나 목에 ACD 모델을 설정하기 위해 DNFB/DNCB 또는 옥사졸론과 같은 화학 감작제를 사용하기로 선택했으며 생쥐의 모델링 영역을 제모하기 위해 블레이드 또는 트리머를 사용하는 것이 불가피합니다17,18,19. 그러나 이 단계는 피부 장벽을 쉽게 파괴하고 후속 실험에 영향을 줄 수 있습니다. 또한, 떨어지는 약물은 목덜미의 넓은 면적과 .......
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공개 사항
저자는 이 작업에 대한 이해 상충이 없다고 보고합니다.
감사의 글
이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC)이 N.-N.에 지원했습니다. Y. (81904212); 장쑤 성 중국 전통 의학 과학 기술 프로젝트 (YB201995); 중국 박사후 연구원을 위한 특별 자금 지원 프로젝트(2020T130562).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠 (DNFB) | 머크 | 200-734-3 | 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠, ≥ 99% |
| Acetone | Sinopharm 화학 시약 Co. 주식 회사 | 10000418 | ≥ 99.5% |
| 알루미늄 호일 | Cleanwrap | CF-2 | |
| Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | 염료 함량 약. 80% |
| 마우스 고정제 | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
| 올리브 오일 | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
| 피펫 팁 | Biofount | FT-200 | 10 - 200 μ l |
| 피펫터 | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 - 200 μ l |
| 면도날 | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
| 버니어 캘리퍼스 | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |
참고문헌
- Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children. Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).
- Koppes, S. A., et al.
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재인쇄 및 허가
