Method Article

새로운 냉각 셀 프로세서 시스템이 Islet Cell Isolation Facility에 미치는 영향 평가

DOI:

10.3791/65321

⸱

August 11th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Qatar Metabolic Institute, Hamad Medical Corporation, 2Univ-Lille, Inserm, CHU Lille, Institute Pasteur Lille, U1190 - EGID F-59000 Lille, 3Department of Nephrology, Leiden University Medical Center (LUMC)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기의 프로토콜은 후처리 시 셀 생존력을 개선하기 위해 GMP(Good Manufacturing Practices) 클린룸과 호환되는 맞춤형 냉각 셀 프로세서 시스템을 설명합니다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

임상 이식을 위해 인간 섬을 정제하는 골드 스탠다드 세포 프로세서를 포함한 표준 세포 치료 장비는 거의 냉장 보관되지 않으므로 원심분리 단계에서 세포가 고온에 노출될 수 있습니다. 맞춤형 냉각 시스템은 인간의 섬 생존 능력과 기능에 직접적인 이점이 있습니다. 현재 연구는 최소한의 수정이 필요한 새로 개발되고 쉽게 구할 수 있는 냉각 셀 프로세서 시스템의 효과를 테스트하고 인간 세포 생존력 및 GMP 클린룸 환경에 미치는 영향을 평가하기 위해 고안되었습니다.-30°C로 설정된 기계식 냉장 열교환기인 냉각기 시스템을 사용하여 원심분리기 덮개에 뚫린 구멍을 통해 냉각된 의료 등급의 건조 공기를 셀 프로세서 보울로 전달했습니다. 카타르에서 췌장 기증자의 가용성이 제한됨에 따라 시스템 검증은 풀링된 인간 골수 버피 코트의 연속 밀도 구배 정제로 수행되었습니다. 멸균 상태, 난류 및 입자 수는 클래스 C 및 클래스 B 클린룸 환경에서 측정되었습니다. 냉각된 셀 프로세서 주변에서 난류가 발생하지 않았으며 클린룸 GMP 표준에 따라 과도한 0.5μm 및 5μm 공기 중 미립자가 생성되지 않았습니다. 채취 단계의 시작과 끝에서 온도는 비냉각 셀 프로세서에서 각각 21.50°C± 0.34°C 및 21.93°C± 0.20°C로 상승했으며, 냉각 셀 프로세서에서는 0.17°C± 10.9°C, 0.35°C± 11.16°C로 상승했습니다(p <0.05). 냉각된 cell processor는 단핵 cell fraction의 회수율(98%)과 후처리에서 생존율(100% ± 2%)을 모두 개선했습니다. 새로운 냉각 시스템은 셀 프로세서에서 발생하는 열을 효과적으로 줄이면서 GMP 클린룸 환경에 미립자 영향을 미치지 않습니다. 여기에 설명된 냉각 셀 프로세서는 저렴하고(세금, 통관 및 운송을 포함하지 않은 $16,000) 강력한 냉각을 제공하는 최소 침습 방법입니다. 현재 GMP 세포 치료 시설에서 이 기술을 임상 프로그램을 위해 인간 섬 세포 분리 및 이식에 적용하고 있습니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

중증 제1형 당뇨병에 대한 섬 이식은 내인성 인슐린 분비를 회복시킬 수 있으며 많은 국가에서 치료의 표준이 되었습니다1. Islet isolation은 췌장의 온열 효소 및 기계적 분해를 포함하는 다단계 절차이며, 그 후 소화된 조직의 회수를 위한 냉각 단계 및 세포 프로세서에서 연속 또는 불연속 밀도 구배를 통한 islet 정제를 포함합니다. 급속 냉각은 효소 분해 단계를 늦추고 오염된 acinar 세포에 의해 방출된 소화 효소로부터 섬을 보호합니다. 셀 프로세서는 원래 주변 온도에서 세포 혈액 성분을 분리하도록 설계되었습니다2. 1989 년 랑거 한스의 인간 췌장 섬을 정화하기 위해 용도가 변경되었습니다 3. 30년 동안 인간 섬은 임상 시험을 위해 정제되었으며, 최근에는 불연속 그래디언트가 있는 세포 프로세서에서 정제되었습니다4 또는 연속 밀도 그래디언트1 또는 이와 동등한 컴퓨터 작동 믹서로 만든 연속 밀도 그래디언트1 5,6,7. 다른 그룹에서는 대형 원통형 플라스틱 병<을 사용하여 대형 포유류와 인간으로부터 섬을 정화했다고 보고했습니다>sup class="xref"8,7,9, 이는 정화 및 섬의 품질을 실질적으로 향상시켰습니다.

실제로, 임상 이식을 위해 인간 섬을 정제하기 위한 황금 표준을 고려할 때10,11, 제조된 세포 프로세서는 냉장 장치가 없었습니다. 냉장 시설의 부족으로 인한 직접적인 결과로, 섬들은 정화 단계에서 온도 상승에 노출되었습니다. 원심분리 중에는 로터의 기계적 마찰로 인해 제어되지 않은 온도 상승이 발생합니다12,13. 세포 프로세서는 포도당 유도 인슐린 분비 및 세포 생존율을 통계적으로 증가시키는 섬 격리 센터의 냉각 시스템으로 조정되었으며, 정제 절차 중에 췌장섬을 저온으로 유지하는 이점을 확인했습니다14,15.

1980년대 후반에 밀도 구배 정제 중 섬 손상을 줄이기 위해 10개의 냉장 프로토타입이 제작되었지만 더 이상의 주목을 받지 못했다는 점에 유의해야 합니다. 셀 프로세서 프로토타입은 냉각된 폴리에틸렌 글리콜을 사용한 스핀들 및 보울 냉각을 기반으로 했습니다. 특히, 장기 보존 용액 및 다당류 밀도 구배를 포함한 섬 정제 용액은 실온 이상에서 사용할 때 섬 생존력에 해로울 수 있습니다16,17,18. 섬 세포 정제를 위한 셀 프로세서와 원래의 비냉장 셀 프로세서의 다양한 냉각 전략을 비교하여 로터의 마찰로 인해 발생하는 제어되지 않은 온도 상승을 방지하기 위해 평가되었습니다. 인간 섬 정제 동안 세포 프로세서를 냉각시키기 위한 몇 가지 시도가 있었습니다. 셀 프로세서는 현재 University of Illinois Chicago의 섬 격리 센터에서 사용되는 그래디언트 원심분리 중에 0-8 °C19의 온도를 유지하기 위해 특별히 설계된 냉장실에 임시 또는 영구적으로 보관할 수 있습니다19, University of Miami14, University of Oxford facilities15, 샌프란시스코 대학교(맞춤형 냉각 장치가 셀 프로세서를 둘러싸고 있음). 또 다른 수정에는 스웨덴 제네바 및 체코 공화국에서 전자 제어 액체 질소 냉각을 사용하는 냉각 시스템으로 셀 프로세서 스핀들의 코어 냉각이 포함됩니다15,19. 2000 년 중반의 또 다른 대안은 에어컨 장치 12 또는 릴 대학 (University of Lille)의 샤프트를 액체 냉각하는 셀 프로세서의 코어 냉각이었습니다.

셀 프로세서의 냉각 수정은 쉽게 구할 수 없으며 GMP 클린룸 환경 내에서 보증 손실 및 기계 서비스 생성자의 거부를 포함한 위험(습도, 응결 축적)이 있습니다. 따라서 이탈리아 밀라노, 노르웨이 오슬로, 스코틀랜드 에든버러를 포함한 일부 섬 센터에서는 섬 정제 공정 중에 셀 프로세서에 냉각 시스템을 사용하지 않습니다15.

현재 연구는 최소한으로 수정된 셀 프로세서 시스템과 함께 새로 개발된 즉시 사용 가능한 냉각기의 효과를 테스트하기 위해 설계되었습니다. 간단히 말해서, 여기에 설명된 공기 기반 냉각기는 -40°C에서 -100°C 사이의 건조 가스 1SCFM(Standard Cubic foot Per Minute)의 온도를 제어하는 기계적으로 냉각된 열교환기입니다. 이 냉각 시스템에는 건조한 의료용 공기 공급이 필요합니다. 공기는 라인과 열교환기를 통해 (7.9mm) 노즐을 통해 흐릅니다. 노즐 내에 위치한 히터는 열을 공급하여 기류의 온도를 제어합니다. 여분의 단단한 플라스틱 원심분리기 덮개를 구입하여 최소한의 수정이 이루어졌습니다. 덮개에 직경 13.3mm의 구멍을 뚫고 냉각된 공기를 원심분리기 덮개의 구멍을 통해 냉각기 노즐에서 셀 프로세서로 전달했습니다. 냉각된 의료 공기는 셀 프로세서의 원심분리 보울 내부에 주입되어 액체의 온도 또는 밀도 구배를 지속적으로 제어했습니다.

냉각 셀 프로세서의 기술적 성능과 냉각 요소가 GMP 클린룸 환경에 미치는 영향을 평가했습니다. 주요 초점은 생존력을 보존하기 위해 인간 섬 정화 과정에서 매우 낮은(<10 °C) 온도를 달성하는 것이었습니다. 섬 분리를 위한 대용물로 버피 코트 밀도 분리를 사용하여 세포 생존력에 대한 이 냉각 프로토콜의 효능을 확인했습니다.

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Protocol

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이 프로토콜은 기관 폐기 지침에 따라 사용하기에 적합하지 않은 폐기된 전혈을 사용했습니다. IRB 승인 및 사전 동의는 적용되지 않습니다.

1. 냉각 셀 프로세서 설정

참고: 모든 절차는 클린룸 환경에서 수행되어야 하며 직원은 클린룸 의류 절차를 존중해야 합니다.

  1. 장비 구매
    1. 여분의 플렉시글라스 뚜껑을 구입하십시오. 냉각 장비 시스템, 기계적으로 냉각된 가스 스트림 온도 컨트롤러가 있는 냉각기, 에어 드라이어, 압력 및 유량 조절기, 보증(옵션)을 구입하십시오. 참조는 재료 표를 참조하십시오.
      참고: 총 비용은 배송비나 관세를 제외하고 $16,133입니다.
    2. 현지 의료용 가스 공급업체에 표준 등급(유럽 약전 참조 1238)을 준수하는 압축 의료용 가스인 의료용 건조 공기를 주문하십시오. 2m6.8 (47 L : 23cm x 153cm, 직경 x 길이)의 실린더 3 개를 구입하십시오.
  2. 장비 설정(그림 1 및 그림 2)
    1. GMP 클린룸에 장비를 투입하십시오(GMP 절차에 따라 클린룸에 들어가기 전에 소독하십시오.
    2. 의료용 압축 공기의 경우 가스 실린더를 클린룸에 직접 배치하는 대신 가스 라인을 설치하십시오.
  3. 냉각을 위한 셀 프로세서의 수정
    1. 먼저 플렉시 유리 덮개를 제거합니다. 보증에 문제가 있는 경우를 대비하여 정품 플렉시글라스 덮개를 보관하십시오. 셀 프로세서의 예비 덮개에 냉각 장치 노즐 팁의 외경과 일치하는 직경으로 구멍을 뚫어 원심분리기 덮개(13.3mm 권장)가 깨지는 것을 방지합니다.
    2. 원형 폼 조각으로 브래킷을 고정하십시오. 이는 뚜껑의 파손 및/또는 긁힘을 방지하고, 냉각기 노즐을 셀 프로세서 위의 제자리에 고정하고, 주입된 공기의 높은 압력으로 인한 뚜껑이 과도하게 구부러지는 것을 방지하고, 노즐의 무게를 지탱하고, 마지막으로 실험 절차 중에 필요한 모든 셀 프로세서 기능에 자유롭고 안전하게 접근할 수 있도록 작업자에게 최대한의 안전을 보장하기 위해 수행됩니다.
    3. 냉각 노즐을 플렉시 유리의 구멍에 부착하여 냉각 시스템을 셀 프로세서에 연결합니다. 브래킷과 폼 쿠션으로 고정하십시오.
    4. 노즐에서 최대 8피트(2.44m) 떨어진 곳에 냉동 하우징을 놓습니다. 온도 조절기를 별도의 캐비닛에 보관하고 냉동 하우징에서 6피트(1.83m) 이내에 두십시오.
    5. 쿨러의 공기 흐름을 냉각하기 위해 쿨러 설정값을 -40°C로 설정합니다. 출구 공기 온도는 디지털 표시기에 0.1 °C의 분해능으로 지속적으로 표시됩니다. 온도 컨트롤러를 사용하여 출구 온도를 디지털 방식으로 0.1 °C로 설정하십시오.
    6. 냉각기에 공급하기 전에 압력 및 유량 조절기 모듈(그림 2)에서 공기 공급의 압력과 유량을 제어합니다. 각각 55psi 및 4SCFM 유량으로 설정하여 -30°C ± 2°C에서 냉각된 공기 흐름에서 최적의 조건에 도달합니다.
    7. 압축 공기가 -30°C에 도달하는 데 필요하므로 의료용 가스 공급이 5bar의 출력 압력에서 조절되고 최소 90분 동안 지속될 수 있는지 확인하십시오.
      참고: 의료용 건조 공기는 압축 의료용 가스이며 완전히 가압된 건조 공기는 표준 등급을 준수합니다.
    8. 셀 프로세서 덮개에 연결된 냉각기 노즐에서 원심분리기 덮개에 뚫린 구멍을 통해 5bar를 전달합니다. 냉각된 의료용 공기를 셀 프로세서의 원심분리 보울 내부에 주입합니다(그림 2). 냉각된 공기가 원심분리기 로터의 알루미늄 테두리에 수직으로 향하는 방식으로 공기 주입 위치를 선택합니다.
    9. 셀 프로세서를 준비할 때 로터가 실온(18°C)에 있는지 확인하십시오. 냉각 시스템의 자동 온도 조절기를 -30°C로 설정하고 로터에 직접 냉각 공기를 분사합니다.
      참고: +4°C의 최적 온도 구배에 도달하기 위해 다양한 시험 조건을 테스트했으며, 이는 셀 프로세서 셀 분리기 시스템의 내열성과 원심분리 중 로터의 가열을 극복하는 데 필요합니다. 프로그래밍된 온도 조절기는 절차 중, 특히 원심분리 중에 +18°C의 클린룸 온도에서 셀 처리 기계 내부의 최적 목표 온도를 유지합니다.
      1. 첫 번째 사전 냉각 단계로 셀 프로세서를 설정하여 +3°C에서 30-45분 동안 프로세서(셀 프로세서 키트 제외)를 냉각하고, 셀 프로세서를 실행하는 두 번째 사전 냉각 단계는 키트를 사용하여 +4°C, 134 x g에서 5분 동안 사전 냉각해야 합니다.

2. 공기 중 미립자 수

  1. ISO 14644-1 표준에 따라 냉각 장치가 GMP 클린룸 환경에 부합하는지 평가하여 작동 단계에서 열 장치의 영향을 평가합니다.
  2. 입자 계수 모니터링을 사용하여 정지 및 작동 중인 중요 관리 지점에서 필요한 수준의 청결도가 달성되었다는 증거를 제공합니다.
    1. 시료 위치의 최소 개수는 측정된 면적에 따라 다릅니다. 다음 방정식을 사용하여 계산합니다
      figure-protocol-1
      여기서 A는 클린룸 또는 청정 공기 제어 공간의 면적(m2)이고 NL은 정수로 반올림된 샘플 위치의 수입니다.
    2. 공기 중 샘플링 볼륨은 각 위치에서 최소 볼륨입니다. 공기량이 지정된 가장 큰 입자 크기의 입자 20개를 계산할 수 있을 만큼 충분히 큰지 확인하십시오. 다음 방정식을 통해 공기 중 샘플링 볼륨을 계산합니다
      V= 20/C x 1000
      여기서 V는 L로 표시되는 위치당 최소 단일 샘플 부피이고 C는 클래스 제한(입자 수/m3)입니다.
    3. 각 위치에 대해 지역에 따라 하나 이상의 샘플을 사용합니다. 각 위치에서 샘플링된 최소 부피가 2L이고 최소 샘플링 시간이 최소 1분인지 확인합니다.
  3. 샘플링하기 전에 퍼지 필터로 입자 계수기 장치를 퍼지하십시오. 필터를 제거하고 샘플링을 위해 등속 프로브와 함께 놓습니다.
  4. 식별된 샘플링 위치에 입자 계수기 기기를 놓습니다. 입자 계수기 장치의 메인 화면에서 시료 수집을 시작합니다.
  5. 샘플링이 끝나면 입자 계수 장치를 다음 위치로 가져갑니다. 샘플링을 위한 모든 위치가 완료되면 데이터를 검토하고 보고서를 인쇄합니다.
  6. 해당 지역의 모든 샘플링 지점에 대한 평균 입자 농도가 표 1에 명시된 등급 한계 미만으로 떨어지면 허용 입자 농도를 갖기 위해 통과된 공간을 고려하십시오.

3. 그래디언트 준비 및 세포 분리 처리

  1. 실험에 앞서, 경량 및 중밀도 구배와 셀 프로세서 키트를 냉장고에서 +4°C에서 밤새 사전 냉각합니다.
  2. 유휴 상태에서 45분 동안 셀 프로세서를 사전 냉각합니다(즉, 사용하기 전에 셀 프로세서를 켜십시오). 온도를 +2 °C에서 +5 °C 사이로 유지하십시오. +4 °C에서 사전 냉각된 셀 프로세서 키트를 삽입합니다.
  3. 표준 에탄올 냉각 이중 재킷 그라디언트 메이커(옵션; 그림 3) 2개의 유리 챔버를 연결하고 자석 교반기에 놓습니다. 2개의 챔버 사이에 튜브를 고정합니다. 에탄올 순환 냉각 냉각기로 그라디언트 메이커를 0 °C에서 냉각합니다.
  4. 먼저, 챔버를 130mL의 중밀도 구배(HD; 1.087g/mL)입니다. 150mL/분의 펌프 속도로 로드합니다.
  5. 무거운 그래디언트가 백에 들어가면 전면 비커에 130mL의 고밀도(HD)를 추가하고 후면(클램프 닫힘)에 140mL의 저밀도(LD, 1.063g/mL) 그래디언트를 추가합니다.
  6. 2개의 챔버 사이에서 지혈/클램프를 디클램프하고 50mL/min 펌프 속도로 연속 그래디언트를 생성합니다.
  7. 혈액 은행의 가용성에 따라 전혈 폐기물(10개의 버피 코트 백에 40mL에서 60mL를 추가함)에서 수집한 여러 개의 풀링된 익명의 버피 코트에서 정제하기 위해 인간 단핵 버피 코트 세포를 미리 준비합니다.
    1. MNC 분리
      1. 저밀도 인간 단핵 세포 분리를 위해 밀도 구배 원심분리를 사용합니다. 이렇게 하려면 아래에 설명된 단계를 따르십시오.
      2. 세포 준비를 위해 혈액의 양(항응고된 전혈 또는 부유된 버피 코트)을 계산합니다. 반전을 혼합하여 2x-4x 완충 용액으로 혈액을 희석합니다. 혈액이 희석될수록 단핵 세포의 순도가 좋아집니다.
      3. 인산염 완충액과 항응고제를 혼합하여 완충액을 준비합니다. 혈액량을 35mL로 나누어 필요한 튜브 수를 계산하고 각 튜브에 15mL의 1.073 밀도 구배 용액을 붓습니다.
      4. 바늘에 연결된 60mL 주사기를 사용하여 밀도 구배 표면을 부드럽게 실행하여 밀도 구배 위에 희석된 혈액 현탁액 35mL를 점차적으로 층을 이룹니다.소량의 경우 피펫을 사용합니다. 인터페이스를 중단하면 단핵 층이 불량해질 수 있으므로 중단하지 마십시오.
      5. 400 x g에서 20분 동안 20°C에서 중단 없이 원심분리기(가속 0, 감속 0). 원심분리 후, 멸균 이송 피펫을 사용하여 단핵 세포의 계면층을 부드럽게 채취합니다. 세포를 다른 새로운 50mL 코니컬 튜브로 옮깁니다.
      6. 완충액(항응고제가 첨가된 PBS)으로 세포를 2번 세척합니다. 첫 번째 세척의 경우 세포가 들어있는 튜브를 50mL까지 완충액으로 채웁니다. 300 x g에서 20°C에서 10분 동안 펠릿 셀로 원심분리기(가속 9, 감속 0). 모든 상등액을 조심스럽게 부드럽게 제거합니다.
      7. 혈소판 제거를 위해 두 번째 세척을 수행합니다. 완충액을 사용하여 펠릿을 50mL 부피로 재현탁합니다. 200°C에서 10분 동안 200-300 x g의 원심분리기(가속 9, 감속 0).
      8. 세포를 최종 부피 5mL로 재구성하면 이러한 세포는 저밀도 MNC <1.073과 유사한 비중을 가져야 합니다. 농도계(densiometer)로 구배의 비밀도를 측정합니다.
      9. 전사 백에 95mL의 고밀도 그래디언트 배지(1.083g/mL)를 넣고 펠릿을 최종 부피 100mL로 재현탁합니다. 세포 분리기를 사용한 정제에 이 제품을 사용하십시오. 100mL의 최종 부피에는 세포와 1.083 고밀도 구배 매체가 포함됩니다.
        참고: 버피 코트는 0.5% BSA 또는 자가 혈장을 함유한 PBS로 냉장고에서 밤새 보관할 수 있습니다. 버피 코트는 세탁도 가능합니다.
  8. 연동 펌프를 사용하여 25mL/분의 속도로 100mL의 농축 보존 매체에 현탁된 버피 코트에서 분리된 최대 30mL의 MNC로 사전 형성된 그래디언트를 탑로드합니다. 그래디언트를 +4°C로 유지합니다.
  9. 사전 보정된 온도 프로브로 셀 프로세서 내부의 온도를 지속적으로 측정합니다. 멸균 온도 프로브에 연결된 디지털 열전대를 사용하여 공정 중 구배와 셀의 온도를 모니터링합니다.

4. 그래디언트 로딩의 다양한 단계 최적화

  1. +4°C에서 사전 냉각된 셀 프로세서 키트를 삽입합니다. + 4.5°C에서 무거운 기울기(130mL)를 로드합니다. 그래디언트 로딩이 끝나면 로터에서 발생하는 열을 최소화하기 위해 원심분리기를 상대적으로 낮은 속도(537 x g)로 설정합니다.
  2. 셀 프로세서를 꺼서 유압 시스템이 사전 실행 수준으로 돌아가 공기를 방출할 수 있도록 합니다.
  3. 537 x g에서 셀 프로세서를 다시 시작하고 중(130mL) 및 저밀도(140mL) 밀도 구배를 추가하여 +4.3°C에서 연속 밀도 구배와 50mL/분의 유속을 생성합니다.
  4. +6°C에서 100mL의 냉장 보관 매체를 버피 코트(30mL)에 넣고 25mL/분의 유속을 추가합니다. 세척액 50mL(25mL x 2)를 추가합니다.
  5. +5°C에서 5분 후 100mL/분의 유속으로 12개의 병에서 회전 구배를 수집합니다.
  6. 세척 매체(M199 + 인간 알부민 20% + 페니실린 스트렙토마이신 10%)로 튜브를 채웁니다. 튜브 1에 100mL의 세척 매체와 150mL의 세포를 채우고 튜브 2-12에 225mL의 세척 매체와 25mL의 세포를 채웁니다.

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Results

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냉각 셀 프로세서가 GMP 클린룸에 미치는 영향을 먼저 정량화했습니다. 표준화된 방법은 입자 계수기를 사용하여 셀 프로세서 및 가압 공기 냉각기 시스템에 근접한 중요한 지점에서 GMP 등급 클래스 C 및 클래스 B 클린룸 환경에서 공기 중 입자 오염을 측정했습니다. 결과는 장비 주변에서 난기류가 발생하지 않았음을 보여주었습니다. 기록된 데이터에 따르면 클린룸 GMP 등급 C, 등급 B 및 BSL III 표준(그림 4)에 따라 0.5μm 및 5μm의 공기 중 미립자가 초과되지 않았습니다.

모든 실험은 연속적인 다당류 밀도 구배로 수행되었습니다. 먼저, 그래디언트 용액의 온도 측정은 냉각 및 비냉각 셀 프로세서에서 6번의 실행으로 서로 다른 시점의 셀 없이 테스트되었습니다. 후속 연구에서 인간 세포는 냉각된 세포 프로세서를 사용하여 밀도 구배에서 정제되었습니다.

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Discussion

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전 세계의 섬 격리 시설에서는 수십 년 동안 용도가 변경된 세포 프로세서에서 인간 섬 정제를 채택해 왔습니다. 일부 섬 생산 시설은 냉장되지 않은 셀 프로세서에서 섬을 계속 처리하지만, 대부분의 센터는 셀 프로세서10,11,15의 냉장 버전을 사용한다. 센터는 습기와 결로에 노출되는 주요 단점이 있는 냉장실에 셀 프로세서를 배치하거나 샤프트를 포함하여 셀 프로세서 자체를 기술적으로 크게 수정하여 기계 보증 및 예방 유지 관리에 즉각적인 영향을 미칩니다. 제시된 새로운 GMP 세포 치료 호환 세포 프로세서 냉각 시스템은 정의된 저온(+ <10°C)에서 세포 처리를 수행하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 실온에서 원래의 세포 프로세서 세포 분리기로 원심분리하는 동안 달성할 수 없습니다.

공랭식 기술은 브뤼셀

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 당뇨병에 대한 유럽 게놈 연구소(ANR-10- LABEX-0046 to FP)와 카타르 대사 연구소(카타르의 하마드 의료 기업)에 감사를 표합니다. 저자들은 논문 처리 비용 지원에 대해 Hamad Medical Corporation의 의료 연구 센터에도 감사를 표합니다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<강한>장비
공기 입자 카운터Lasair III 
에어젯 XR40 SP ScientificFTS 시스템 XR40
생물안전 캐비닛Thermo ScientificEQ-1301
순환 냉각 냉각기JulaboCF30
COBE 2991 Terumo BCT
원뿔형 냉각 트레이BiorepCCT-01
더블 재킷 그라디언트 메이커 집에서
KJT-열전대 온도계Hanna InstrumentsHI93551N액체 온도 측정용
자석 교반기 Thermo Scientific88880014
연동 펌프 MasterFlexMK-77921-79
온도계 Extech InstrumentsRMS 430COBE 온도
무용 비드 목욕Cole-Parmer10122-00
재료 및 시약
BD 줄기세포 열거 키트BD Biosciences 
COBE 2911 튜빙 키트Terumo BCT90819
원뿔형 튜브 250ml코닝430776
그라디언트 밀도 1.1Biochrom L6155
졸업된 일회용 병Thermo fisher382019-1000
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References

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