무릎 골관절염 쥐의 염증과 연골 손실을 줄이기 위한 Tuina 조작

요약

우리는 석고로 고정된 무릎 골관절염 쥐에 대해 수행되는 Tuina 조작에 대한 프로토콜을 제시합니다. 예비 결과에 기초하여, 상기 방법의 효능은 염증 및 연골 손실의 감소에 의존한다는 것을 시사하였다.

초록

임상 시험에 따르면 Tuina 조작은 무릎 골관절염 (KOA) 치료에 효과적이며 그 메커니즘을 발견하기 위해서는 추가 연구가 필요합니다. 따라서, 무릎 골관절염의 동물 모델의 조작은 매우 중요하다. 이 프로토콜은 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작을 위한 표준 프로세스와 KOA에 대한 Tuina의 메커니즘에 대한 예비 탐색을 제공합니다. 프레스 및 반죽 조작 방법 (신체 표면의 특정 부위를 누르고 반죽하는 것을 의미하는 Tuina 조작의 일종)은 쥐의 무릎 관절 주위의 5 개의 경혈에 적용됩니다. 조작의 힘과 빈도는 손가락 압력 기록에 의해 표준화되었으며 조작 중 쥐의 위치는 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다. 조작의 효과는 통증 행동 테스트와 활액막과 연골의 현미경 소견으로 측정할 수 있습니다. KOA 쥐는 통증 행동에서 상당한 개선을 보였다. 활막 조직 염증 침윤은 Tuina 그룹에서 감소했으며 종양 괴사 인자 (TNF) -α의 발현은 현저히 낮았다. 대조군에 비해, 연골세포 아폽토시스는 Tuina 그룹에서 더 적었다. 이 연구는 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작에 대한 표준화된 프로토콜과 Tuina의 치료 효과가 활막 염증 감소 및 지연된 연골 세포 사멸과 관련이 있을 수 있다는 예비 증거를 제공합니다.

서론

무릎 골관절염(KOA)은 주로 관절통에서 나타나는 퇴행성 질환입니다. 섬유화, 갈라짐, 궤양, 관절 연골 손실이 이 질환의 주요 원인이다¹. KOA는 유병률이 높으며 환자의 일상 생활에 지대한 영향을 미쳐 심한 경우 장애를 유발할 수 있습니다. 45-84 세의 사람들 중 KOA의 유병률은 나이가 들면서 증가하고 85 세 이상 인구의 유병률은 15 %이며 여성이 우세합니다 ^2,3. 또한 KOA는 개인과 사회 모두에 심각한 경제적 부담을 줄 수 있습니다. 설문 조사에 따르면 1인당 KOA의 직접 의료 비용은 연간 $5,120 ± $8,858에 달했습니다⁴. 사회의 고령화와 함께 KOA는 전 세계적인 건강 문제이자 주요 사회 문제이자 과학 연구의 주제가 되었습니다.

증거 기반 연구에 따르면 KOA⁵ 치료에 Tuina 조작의 효과가 있음이 밝혀졌습니다. Tuina 조작은 KOA 환자의 통증을 완화하고 기능 장애를 개선 할 수 있으며, 그 메커니즘은 항 염증 효과와 관련이 있습니다

프로토콜

이 연구는 상하이 한의과대학 부속 한중한의학통합병원 웨양병원 실험동물윤리위원회에서 실시한 동물윤리검토를 통과했다(YYLAC-2022-166).

1. 실험동물 준비 및 그룹화

1. 동물 준비
   1. 실온(18-21°C), 습도 40%-50%, 12시간: 12시간 일주기 리듬 교대에서 200-220g의 총 10마리의 건강한 SPF SD 암컷 래트를 후면합니다. 동물 윤리 지침 및 지침의 관련 조항을 엄격히 준수하여 통증 관련 동물 실험을 수행합니다.
2. 동물 그룹화
   1. 쥐를 무작위로 Tuina 그룹과 대조군으로 나눕니다. 모델링 후 21 일 동안 Tuina 그룹의 쥐를 프레스 및 반죽 조작으로 치료하십시오. 대조군의 쥐를 같은 Tuina 방에 넣고 Tuina 그룹이 치료를받는 동안 동시에 검은 천 가방에 넣으십시오.

2. 동물 모델링

1. 동물 마취
   1. 가스 마취를 위해 이소 플루 란을 사용하십시오. 쥐를 유도 농도가 3%인 유도 상자에 넣습니다. 쥐를 눕힌 후 상자를 흔들고 쥐가 엎드린 자세로 돌아가려는 시도 없이 전복될....

결과

통증 행동 테스트
MWT 결과는 모델링 후 오른쪽 뒷다리의 MWT가 이전보다 현저히 낮은 것으로 나타났습니다(p<0.05). 대조군과 비교하여, 래트의 MWT는 Tuina (p<0.05; 그림 5 및 표 2).

그림 5. 기계적 인출 역치 테스트(, Newton)

토론

이 연구는 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작에 대한 프로토콜을 제공합니다. 통증 행동 테스트와 조직형태학적 소견을 통해 KOA 쥐에 적용된 이러한 일련의 Tuina 조작이 활막 염증과 연골 세포 사멸을 감소시킬 수 있음을 시사했으며, 이는 KOA 동물 모델에 대한 Tuina 조작의 참고 자료가 될 수 있습니다.

프로토콜 중에는 몇 가지 중요한 절차가 있습니다. 첫째, KOA 모델을 유도하기 위한 적절한 방법을 선택하는 것이 중요합니다. KOA 모델을 유도하기 위한 방법은 관절강주사(²⁵), 관절내 수술(intra-articular surgery)26,27, 관절제동법(joint brakeking method^)28,29 등 다양하다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
절대 에탄올	Supelco	PHR1070	표본
ALMEMO admeasuring 장치	ahlborn	2450-1	기계적 철수 임계 값 테스트
안티 디곡신 항체	Sigma-Aldrich	SAB4200669	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
Anti-IL-1 beta	abcam	ab283818	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
DAB 기판 키트	Solarbio	DA1010	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
치아 보철 기본 재료	상하이 새로운 세기	20000356	모델 제작
eosin	bioswamp	PAB180016	HE 얼룩 IHC 또는 TUNEL의 경우
손가락 압력 기록	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
formic acid solution	Sigma-Aldrich	695076	석회화
H2O2	Sigma-Aldrich	386790-M	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
hematoxylin	bioswamp	PAB180015	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
Isoflurane	Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company	S10010533	가스 마취
중성 수지	바이오스왐	PAB180017	HE 얼룩 IHC 또는 TUNEL
파라포름알데히드 고정 용액	시그마-알드리치	100496	조직학 PBS
	시그마-알드리치	P3813	HE 염색 IHC 또는 TUNEL
발바닥 테스트 장치	IITC 생명 과학	/	발 철수 테스트
스터 파리 붕대	WANDE	20150023	모델 제작용
Proteinase K	Sigma-Aldrich	124568	For HE stain IHC 또는 TUNEL
TNF Alpha Monoclonal Antibody	Proteintech	60291-1-IG	For HE stain IHC 또는 TUNEL
TUNEL	Servicebio	GDP1042	HE 얼룩 IHC 또는 TUNEL
왁스	시그마 알드리치	327204	표본
자일렌	상하이 Sinopharm 그룹	100092	표본 제작

프; 플라