방법 논문

신경 손상이 있는 쥐의 통증 변화의 특성: 1회 Tuina 중재 후 24시간 이내

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DOI:

10.3791/65593

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2024년 1월 26일

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1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, 2Beijing Hospital

이 논문에서

요약

경미한 만성 수축 손상 쥐에 대해 "Three-Manipulation and Three-Acupoint" tuina 요법을 수행하기 위해 tuina 조작 시뮬레이터를 사용하여 프로토콜을 제시하고, 행동 분석을 통한 통증 변화와 효소 결합 면역 흡착 분석을 사용하여 염증 인자 발현의 변화를 테스트하여 24시간 이내에 tuina의 효과적인 진통 시점을 평가합니다.

초록

투이나는 한의학의 외적 치료 방법으로서 임상 및 기초 연구에서 말초신경병증성 통증(pNP)에 대한 진통 효과가 있음이 입증되었습니다. 그러나 투이나의 진통 효과에 대한 최적의 시점은 다양한 부상 감각에 따라 달라질 수 있으며, 이는 투이나 진통의 시작 메커니즘에 대한 탐색에 영향을 미칩니다.

이 연구는 경미한 만성 수축 손상(경미한 CCI) 모델 쥐를 사용하여 pNP를 시뮬레이션하고 지능형 투이나 조작 시뮬레이터를 사용하여 투이나 요법을 수행하기 위한 세 가지 방법(점 누르기, 뽑기, 반죽)과 세 가지 경혈(Yinmen BL37, Chengshan BL57 및 Yanglingquan GB34)을 시뮬레이션했습니다. 이 연구는 냉간 민감도 역치(CST), 기계적 인출 역치(MWT) 및 열 인출 잠복기(TWL)를 테스트하여 CCI가 경미한 쥐에서 24시간 내 통증의 변화와 투이나 진통제의 효능에 대한 최적의 시점을 평가했습니다. 또한, 이 연구는 Elisa 검출을 통해 IL-10 및 TNF-α 발현 변화를 평가했습니다. 그 결과, 투이나는 즉각적이고 지속적인 진통 효과가 있는 것으로 나타났습니다. CST, MWT, TWL 세 가지 부상 민감도 역치와 IL-10 및 TNF-α의 두 가지 사이토카인의 경우, 중재 후 24시간 이내에 투이나의 진통 효능은 시점에 따라 유의하게 다릅니다.

서론

말초신경병증성 통증(pNP)은 말초 체성 감각 신경계의 병변 또는 질병으로 인한 통증을 말하며, 일련의 증상과 징후로 나타나며, 통각과민증이 주요 증상 중 하나입니다 1,2. 통각과민증은 찌르기, 추위, 열 등 유해한 자극에 의해 통증이 고조되는 것을 말한다3. 대규모 역학 연구가 수행되었으며, pNP가 가장 흔하며 신경병증성 통증에서 유병률이 6.9%-10%인 것으로 나타났습니다4. pNP는 신경 손상, 대상포진 후 신경통, 고통스러운 당뇨병성 다발성 신경병증, 다발성 경화증, 뇌졸중, 암 등을 포함한 여러 질병에 의해 발생할 수 있습니다.5. 요즘 pNP를 치료하는 주요 방법은 약물 치료이지만 효과가 이상적이지 않습니다. 그리고 부작용이 심각하여 개인과 사회의 경제적 부담이 큰 주범6.

투이나는 중국 전통 의학의 친환경적이고 경제적이며 안전하고 효과적인 외부 치료 방법입니다7. 많은 임상 연구에서 pNP에 대한 tuina의 진통 효과가 입증되었으며 기초 연구에서는 tuina 8,9의 즉각적이고 누적적인 진통 효과를 확인했습니다. tuina의 주요 누적 진통 메커니즘은 염증 인자의 수준을 낮추고 신경 교세포10,11의 활성화를 억제하는 것입니다. 선행 연구에서는 투이나의 누적 진통 효과를 확인하였으며, 주로 투이나 치료 20회 후 좌골 신경 손상이 있는 쥐의 등뿌리 신경절(DRG)과 척추 등쪽 뿔(SDH)에서 주로 단백질 결합, 압력 반응 및 신경 돌영과 관련된 차등 발현 유전자(DEG)를 발견했다12. 최근 연구에서 투이나는 즉각적인 진통 효과가 있으며, 투이나(tuina) 중재를 1회 시행하면 경미한 CCI 쥐의 통각과민을 완화할 수 있으며, 특히 열성 통각과민증을 보다 효과적으로 완화할 수 있음이 확인되었다13. 그러나 투이나의 진통 효과에 대한 최적의 시점은 부상 감각(추위, 열, 기계)에 따라 달라질 수 있으며, 이는 투이나 진통의 시작 메커니즘 탐색에 영향을 미칩니다.

염증 매개체는 통증 수용체를 감작시키고 활성화시켜 분비물 역치와 이소성 분비물을 감소시켜 말초 감작에 기여할 수 있다14,15. 말초 신경 손상 후 TNF-α는 염증 반응의 개시 인자로서 IL-10 및 IL-1β와 같은 염증 인자의 합성을 촉진하여 직접적인 조직 염증 손상을 일으키고 국소 신경 말단을 자극하며 통증을 유발할 수 있습니다 16,17,18. Tuina는 TNF-α, IL-10, IL-6 및 IL-1β 19,20,21과 같은 염증 인자의 발현을 감소시킴으로써 진통 효과를 얻을 수 있습니다. 이 연구는 임상적 pNP를 시뮬레이션하기 위해 경미한 CCI 모델 쥐를 선택하고 저온 민감도 역치(CST), 기계적 인출 임계값(MWT), 열 인출 잠복기(TWL)에 의한 1회 투이나 중재 후 추위, 열 및 기계적 자극 통증의 행동 테스트를 위해 다른 시점을 선택하고 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA)에 의해 혈청에서 IL-10 및 TNF-α을 선택했습니다. Tuina의 진통 효과가 중요한 시점을 선택하기 위해 후기 단계에서 Tuina 진통의 시작 메커니즘 연구를 위한 기초를 제공합니다.

프로토콜

베이징 중의과대학 동물 보호 및 사용 위원회(BUCM-4-2022082605-3043)는 이 연구에 사용된 모든 절차를 승인했습니다.

1. 동물과 연구 디자인

  1. 생후 8주 된 수컷 Sprague-Dawley(SD) 쥐 49마리를 획득하고 체중이 200 ± 10g입니다.
  2. 난수 테이블 방법을 사용하여 쥐를 가짜 연산 그룹(n = 7), 모델 그룹(n = 7), 투이나 그룹 직후(n = 7), 투이나 그룹(n = 7) 후 6시간, 투이나 그룹(n = 7) 후 12시간, 투이나 그룹(n = 7) 후 18시간, 투이나 그룹(n = 7) 후 24시간으로 나눕니다.

2. 경미한 CCI의 랫트 모델 확립 (그림 1)

참고: 마이너 CCI를 모델링하는 방법은 선행 연구 22,23,24에서 설명한 바와 같았다.

  1. 7일 동안 SD 쥐의 적응형 먹이를 허용합니다. 모델링하기 전에 쥐를 2-3시간 동안 단식시키십시오.
  2. 마취 기계로 마취를 위해 3-5% 이소플루란으로 채워진 상자에 쥐를 넣습니다. 마취 후 양쪽 눈에 안과 연고를 바르면 건조함을 예방할 수 있습니다.
  3. 쥐를 테이블 위에 엎드린 자세로 고정하고 오른쪽 엉덩이 관절 부위의 털을 면도하고 요오드로 소독합니다(그림 1B).
  4. 발가락 꼬집으로 마취의 수술 평면을 확인합니다. 좌골 신경의 보행 방향을 따라 약 0.5-1cm의 피부 절개를 하고 근육층을 뭉툭하게 분리하고 이상근의 아래쪽 가장자리를 완전히 노출시킵니다(그림 1C).
  5. 신경 외 혈관의 혈액 순환을 방해하지 않고 흡수성 크롬 장 봉합사(4-0 유형)를 신경 주위에 느슨하게 묶습니다. 가짜 그룹 쥐의 좌골 신경을 결찰 없이 3분 동안 노출시킵니다(그림 1A,D,E).
  6. 바늘이 없는 주사기를 사용하여 0.9% 염화나트륨 용액 1방울을 좌골 신경에 바르면 좌골 신경을 재설정하는 데 도움이 됩니다. 층별로 봉합하고 아목시실린 분말과 같은 항염증제를 적당량 투여하고 근육층을 1바늘 봉합하고 2바늘로 피부를 봉합합니다(그림 1F).
    참고: 2.3단계에서 2.6단계까지 마취를 유지하기 위해 쥐의 입과 코로 2%-3% 이소플루란이 흐르도록 합니다.
  7. 쥐를 따뜻하게 유지하고 깨어날 때까지 기다립니다. 쥐를 사육실로 돌려보냅니다.

3. 지능형 tuina 조작 시뮬레이터 개입(그림 2)

참고: 모델이 확립된 후 7일 째 되는 날부터 치료가 시작되었습니다.

  1. 컴퓨터 작동 인터페이스에서 기기 매개변수를 4N의 자극력, 60회/분의 자극 빈도, 36°C의 온도로 조정합니다. 쥐를 쥐 고정기에 넣고 뒷다리 경혈의 위치를 노출시킵니다(그림 2A, 자체 개발 기계, 특허 번호. ZL 2023 20511277.5)25.
  2. 기기를 활성화하여 포인트 프레싱, 뽑기 및 반죽 방법을 수행합니다(표 1). 투이나 그룹 쥐의 모델 쪽에 있는 Yinmen(BL37), Chengshan (BL57) 및 Yanglingquan (GB34) 점(표 2)의 순서로 컴퓨터 화면에 표시된 Point-Pressing, Pluging, Kneading을 클릭합니다(그림 2B, C)26).
    1. 투이나 그룹의 경우 1일 동안 하루에 한 번 4N의 힘, 60회/분의 빈도, 방법당 포인트당 총 9분의 중재를 수행합니다.
    2. 가짜 그룹과 모델 그룹을 tuina 그룹과 동일한 횟수로 9분 동안 억제합니다.

4. 행동 측정

참고: 개입 후 임계값 냉간 감도 임계값(CST), 기계적 인출 임계값(MWT) 및 열 인출 대기 시간(TWL)은 각각 5개의 tuina 하위 그룹, 모델 그룹 및 가짜 작업 그룹에서 테스트되었습니다. 모델 및 가짜 그룹에 대한 테스트 시간은 tuina 그룹의 테스트 시간과 동일합니다(즉, 24시간).

  1. 추위 민감도 임계값(CST)
    1. 표면 온도가 4 ± 1 °C( START > SET 클릭)인 지능형 냉판 및 열판 통증 감지기에 쥐를 놓고 투명한 플라스틱 케이지로 덮습니다.
    2. 쥐가 투명한 플라스틱 케이지에 적응할 때까지 5분 동안 쥐의 탐색 활동을 관찰합니다.
    3. 다음 5분 이내에 뒷다리의 수술 쪽에서 발을 들어 올리는 횟수를 관찰하고 기록합니다.
      알림: 쥐의 활동이나 자세의 변화로 인한 발 들어 올리기 횟수는 포함되지 않습니다.
  2. 기계적 인출 임계값(MWT)
    1. 테스트하기 전에 15-30분 동안 테스트 상자에 격자(0.5cm × 0.5cm)로 쥐를 바닥 표면에 놓습니다.
    2. 통증 프로브(EVF 5형)를 쥐의 오른쪽 발바닥 후방 부위 중앙으로 이동시키고 손으로 압력을 선형으로 높이고 쥐가 발을 들어 핥을 때 기기 화면에 표시되는 임계값을 기록합니다. 측정 간격은 각각 5분씩 연속으로 10회 측정합니다.
  3. 열 인출 대기 시간(TWL)
    1. 바닥면이 유리로 된 테스트 상자에 쥐를 넣고 테스트를 시작하기 전에 15분 동안 적응시키십시오.
      참고: 열 수축 발 반사의 잠복기는 열 자극 통증 기구(PL200 유형)를 사용하여 감지되었습니다.
    2. 매개변수 설정: 최대 테스트 시간은 30초이고 강도는 50%입니다. START 및 방향 버튼을 클릭합니다.
    3. 적외선 프로브를 쥐의 오른쪽 발바닥 뒤쪽 영역 중앙으로 이동하고 감지를 시작합니다.
    4. 쥐가 발을 들어 올리고 핥을 때 발 후퇴 반사의 대기 시간을 기록하십시오. 각 측정 사이에 10분 간격으로 대기 시간을 5번 연속으로 측정합니다.

5. 엘리사

  1. 행동 검사 후 복강 내 주사 마취를 위해 35mL/100g의 4% 염소 수화물을 쥐를 마취합니다. 쥐의 복부 중앙을 따라 피부와 근육을 세로로 잘라 내부 장기를 노출시킵니다.
  2. 순수한 분리를 위해 안정기와 바늘 홀더를 사용하고, 복부 대동맥을 식별하고, 신선한 혈액을 채취하고, 검사를 위해 샘플을 보관합니다. 분리 튜브를 사용하여 혈청을 분리합니다. 즉시 검출을 위해 혈청 샘플을 채취하거나 별도로 포장하여 -80 ° C의 냉장고에 보관하십시오.
    알림: 분리하기 전에 혈액 s를 허용하십시오.amp30분 동안 응집시킵니다.
  3. 테스트 과정을 위해 쥐의 혈청을 준비하고 최소 30분 동안 실온(RT)에서 보관합니다.
  4. 테스트할 샘플에 대해 빈 웰과 표준 샘플 웰을 설정합니다. 총 50μL의 표준 시료를 효소 결합 플레이트에 추가합니다. 먼저 40μL의 희석액을 추가한 다음 10μL의 샘플을 테스트할 샘플 웰에 추가합니다.
    참고: 샘플을 추가할 때는 효소 라벨이 부착된 웰의 바닥에 추가해야 하며, 가능한 한 웰의 벽에 닿지 않도록 하고 부드럽게 흔들어 잘 섞어야 합니다. 블랭크 웰에는 샘플 또는 효소 라벨링 시약이 포함되어 있지 않으며 다른 단계는 동일합니다. 샘플의 최종 희석은 5회입니다.
  5. 밀봉 필름으로 플레이트를 밀봉한 후 37°C 인큐베이터에 30분 동안 넣습니다.
  6. 농축된 세척액을 증류수로 30배 희석하여 따로 보관합니다.
  7. 밀봉 필름을 제거하고 우물에서 액체를 붓고 흔들어 말리십시오. 각 웰에 세척액을 채우고 30초 동안 그대로 두었다가 붓습니다. 이 단계를 5번 반복하고 마지막으로 흔들어 말리십시오.
  8. 양 고추냉이 과산화효소 표지된 아비딘(웰당 100μL)을 추가합니다.
  9. 각 웰에 50 μL의 컬러 현상액 A를 첨가한 다음 50 μL의 컬러 현상액 B를 추가합니다. 부드럽게 흔들어 섞은 다음 어두운 곳에서 37분 동안 10°C 환경에 둡니다.
  10. 웰당 50μL의 정지 용액을 추가하여 반응을 종료합니다.
    알림: 이 시점에서 파란색이 노란색으로 바뀝니다.
  11. 빈 웰을 0으로 만들고 450nm의 파장에서 각 웰의 광학 밀도(OD 값)를 순서대로 측정합니다.

결과

중부 표준시: 모델군과 비교했을 때, 투이나 투여 후 6시간 후에 발을 들어 올린 그룹의 횟수는 유의하게 감소하였으며, 그 차이는 통계적으로 유의하였다(P < 0.05). 가짜 그룹과 비교했을 때, 모델 그룹에서 발을 들어 올리는 횟수가 유의하게 증가하였으며, 그 차이는 통계적으로 유의하였다(P < 0.05)(표 3, 그림 3).

MWT: 모델군과 비교했을 때, 투이나의 각 하위군의 MWT는 투이나 후 18시간을 제외하고는 모델군보다 유의하게 높았으며, 투이나 후 24시간의 MWT는 모델군보다 유의하게 높았으며, 통계적으로 유의한 차이를 보였다(P < 0.05). 가짜 연산군과 비교했을 때, 모델군의 MWT는 유의하게 낮았으며, 통계적으로 유의한 차이(P < 0.01)를 보였다(표 3, 그림 4).

TWL:
모델군과 비교했을 때, 투이나 직후에는 투이나 직후, 투이나 직후에는 6시간, 투이나 후에는 18시간 후에 유의한 증가가 있었으며, 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 가짜 작업군과 비교했을 때, 모델군은 유의하게 감소하였으며, 통계적으로 유의한 차이(P < 0.01)를 보였다(표 3, 그림 5)

엘리사
일리노이-10: 모델군과 비교했을 때, 투이나 투여 후 6시간 및 24시간 후에 유의한 감소가 있었으며, 통계적으로 유의한 차이(P < 0.01)가 있었다(표 4, 그림 6).

TNF-α: 모델군과 비교했을 때, 투이나 직후(**P < 0.01), 투이나 직후 6시간(**P < 0.01), 투이나 직후 24시간(**P < 0.05)에서 유의한 감소가 있었으며, 통계적으로 유의한 차이가 있었다(표 4, 그림 6)

figure-results-1
그림 1: 경미한 CCI의 쥐 모델 확립. (A) 크롬 장 봉합사(4-0). (B) 피부 준비. (C) 절개. (D) 좌골 신경을 노출시킵니다. (E) 신경 주위의 흡수성 크롬 장 봉합사 (4-0 유형). (F) 근육층과 피부를 봉합합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 2: 지능형 tuina 조작 시뮬레이터 처리. (A) 지능형 Tuina 조작 시뮬레이터(특허 번호. ZL ZL 2023 20511277.5)를 참조하십시오. (B) Yinmen(BL37), Chengshan(BL57) 및 Yanglingquan(GB34)의 위치. (C) 자극 음문(BL37). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 3: 각 그룹에 속한 쥐의 추위 민감도 역치(CST) 결과. *P < 0.05, 모델 그룹과 비교, #P <0.05, 가짜 그룹과 비교. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

figure-results-4
그림 4: 각 그룹의 쥐에 대한 기계적 인출 임계값(MWT) 결과. *P <0.05, 모델 그룹과 비교, #P < 0.05, 가짜 그룹과 비교. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

figure-results-5
그림 5: 각 그룹에 속한 쥐의 열 인출 잠복기(TWL) 결과. *P < 0.05, **P < 0.01, 모델군과 비교; #P <0.05, ##P < 0.01, 가짜 그룹과 비교. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

figure-results-6
그림 6: 모델 그룹과 비교한 각 그룹의 쥐의 혈청 IL-10 및 TNF-α 수치의 변화(평균 ± SD, n = 7), "*P<0.05, **P<0.01). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

세 가지 방법방법분류함수
포인트 프레싱온난화 및 차단 해제자오선을 따뜻하게 하고 담보물을 차단하지 않는 방법
뽑기휴식신경통에 작용하여 팔다리의 저림이나 통증을 치료한다.
반죽휴식근육 경련 완화

표 1: 세 가지 자극 방법.

삼경혈경혈자오선신경근육
인먼 (BL37)방광 경락(Bladder Meridian of Foot-Taiyang)좌골 신경 줄기대퇴 이두근
청산(BL57)경골 신경비복근(Gastrocnemius muscle)
양링취안(GB34)발 담낭 경락-Shaoyang총비골 신경전경골 근육(anterior tibial muscles)

표 2: 이 연구에서 사용된 3개의 경혈.

가짜모델투이나
0시간6시간12시간18시간24시간
중부 표준시12.8 ± 2.3825 ± 5.15#19.6 ± 10.9913.2 ± 2.49*16.4 ± 8.4117 ± 5.5719 ± 8.34
증권 시세 표시기69.47 ± 10.3540.63 ± 9.65##44.19 ± 10.7246.58 ± 9.4742.83 ± 11.4140.1 ± 5.5948.33 ± 8.7*
TWL12.06 ± 3.458.16 ± 2.09##12.09 ± 3.86**10.07 ± 2.7*9.44 ± 2.5210.42 ± 2.49**9.72 ± 2.29

표 3: 각 그룹의 쥐에 대한 CST, MWT 및 TWL 결과(평균 ± SD, n = 7). *P<0.05, **P<0.01, 모델 그룹과 비교; #P<0.05, ##P<0.01, 가짜 그룹과 비교.

가짜모델투이나
0시간6시간12시간18시간24시간
일-1055.10 ± 1.37**70.27 ± 6.2267.28 ± 1.2861.41 ± 3.36**67.98 ± 1.8569.03 ± 6.2957.16 ± 1.30**
TNF-α311.52 ± 13.45**339.33 ± 24.50309.47 ± 8.37**309.99 ± 14.95**334.62 ± 21.85319.22 ± 10.38316.24 ± 8.72*

표 4: 각 그룹에서 쥐의 혈청 IL-10 및 TNF-α 수치의 변화(평균 ± SD, n = 7, pg/mL). *P < 0.05, **P < 0.01, 그룹 모델과 비교 (*P < 0.05, **P < 0.01.)

토론

이 연구는 임상 좌골 신경 손상으로 인한 pNP를 시뮬레이션하기 위해 미성년자 CCI 모델을 사용했습니다. 경미한 CCI 모델은 결찰을 통한 신경 줄기의 지속적이고 만성적인 압박 및 억제를 포함하며, 인찰의 점진적인 팽창을 동반하여 좌골 신경 내에 부종이 발생하고 3-5일 내에 안정적인 만성 통증을 형성합니다27,28. 예비 연구에서 연구 그룹은 모델링 후 7일째 되는 날에 minor CCI 모델 그룹이 기존 모델 그룹보다 더 안정적이어서 단기 실험 설계에 더 적합하다는 것을 발견했습니다. 따라서 우리는 투이나 개입을 위해 이 시점을 선택했습니다.

이전 연구는 지능형 tuina 조작 시뮬레이터 (동물)가 "Three-Method and Three-Acupoint"29,30,31을 사용하여 tuina 치료의 20 세션 후에 좌골 신경 손상이있는 쥐의 통증을 효과적으로 완화 할 수 있음을 확인했습니다. 또한, 연구팀은 투이나가 한 번 투여하면 경미한 CCI 쥐의 통증 과민증 증상, 특히 열통각과민증을 효과적으로 완화할 수 있음을 발견했다13. 이 연구는 세 가지 치료 방법으로 포인트 누르기, 뽑기 및 반죽 방법을 채택합니다. 포인트 프레싱법은 자오선을 데우고 부수물을 차단을 해제하는 기능을 가진 온난화 및 차단 해제 기술입니다. 뽑는 방법은 신경 줄기에 작용하여 팔다리의 저림이나 통증을 치료할 수 있는 이완 기술입니다. 반죽법은 근육 경련을 완화하고 피로를 풀어주며 부상 부위의 통증을 완화할 수 있는 이완 기술입니다(표 1). 이 연구는 Yinmen(BL37), Chengshan(BL57) 및 Yanglingquan(GB34)을 치료를 위한 세 가지 경혈로 선택합니다(표 2). 경락을 따라 경혈을 선택하고 침술과 뜸에서 국소적으로 경혈을 선택하는 원칙에 따르면 세 개의 경혈은 족태양의 방광 경락과 족사양의 담낭 경락에 속합니다. 해부학적 신경 국소화에 따르면 Yinmen(BL37)은 좌골 신경과 그 가지에 위치하고, Chengshan(BL57)은 경골 신경에 위치하며, Yanglingquan(GB34)은 총경골 신경에 위치합니다. 해부학적 근육 위치에 따르면 3개의 경혈은 이두박근 대퇴근, 비복근 및 전경골 근육 주변에 위치합니다(표 2). 따라서 세 가지 방법과 세 가지 경혈의 개입을 통해 경혈-신경-근육의 관련 영역을 자극할 수 있습니다. 이 연구에서는 안정적인 만성 통증을 형성하고 tuina를 한 번 중재한 후 통증의 행동 변화가 감지되어 tuina가 즉각적인 진통 효과가 있고 손상 수용체에 따라 다른 치료 유의성 시점을 가지고 있음을 추가로 확인하여 tuina 진통 시작 메커니즘 연구의 다음 단계에 대한 치료적 지원을 제공합니다.

이 연구는 CST, MWT 및 TWL을 지표로 사용하여 다양한 부상 감각에 대한 tuina의 효능을 조사했습니다. pNP에서 유발된 통증의 임상적 양상은 주로 통각과민증(hyperalgesia)과 이질통(allodynia), 즉 냉열자극에 의한 통증과 기계적 촉각에 의한 통증을 포함한다4. 현재 이 두 가지 통증 감각에 대한 고전적인 정량적 행동 연구 지표는 CST, MWT 및 TWL입니다. CST 테스트에서 이 실험에 사용된 ZH-6C 지능형 냉간 및 열판 통증 테스터인 냉각판 테스트는 상대적으로 객관적이고 주변 환경 요인의 영향을 덜 받으며 온도가 일정하며 정밀도가 높습니다32,33. 기초 연구에서 Von Frey 필라멘트는 일반적으로 신경병증성 통증을 평가하는 고전적인 지표 중 하나인 MWT를 추정하는 데 사용됩니다. 주로 설치류에서 기계적 촉각 유발 통증을 평가하기 위해 기계적 자극에 의해 유발된 침술 통증을 목표로 합니다34,35. Hargreaves 테스트는 열 통증 자극기를 사용하여 열 통증 민감성에 대한 설치류의 반응을 감지하고 평가하며, 신경 손상 후 통증 민감도 또는 열 통증 반응의 회복을 평가하는 데 사용되어 동물의 뒷발이 열로 인해 수축 반응을 보이는지 관찰합니다. 기기는 동물의 뒷발(36)의 움직임을 감지하고, 제어기는 TWL로 알려진 적외선 정지 타이머(34)를 자동으로 끕니다. 실험에 의하면 TWL에 대한 경미한 CCI 모델 랫트의 민감도는 최적이다38. 따라서, 이번에 소CCI 모델 쥐의 행동에 대한 정량적 연구 방법은 냉각판 실험, 전자 기계 찌르기 장치 및 열 찌르기 장치를 사용하여 검출하는 것입니다.

초기 투이나 중재 후 다양한 통각 감각에 대한 치료 효과의 중요한 시점은 다릅니다. 현재 tuina 진통제의 임상적 효능 및 기전에 대한 예비 연구가 진행되고 있습니다. 우리의 이전 연구는 주로 일정 수의 투이나를 투여한 후의 진통 메커니즘에 초점을 맞췄다. 지난 2년 동안 투이나 진통이 어떻게 시작되는지를 탐구하기 위해 투이나의 초기 단계에서의 진통 메커니즘에 대한 연구가 수행되었습니다. 이 연구에서는 "세 가지 방법과 세 가지 경혈"을 사용하여 경미한 CCI 모델 쥐에 한 번 개입했습니다. 그런 다음 CST, MWT 및 TWL 검출을 위해 5개의 시점을 선택하여 경미한 CCI 모델 쥐의 온도 및 기계적 촉각 감각의 변화를 관찰했습니다. 이 연구는 ELISA를 사용하여 행동 테스트 후 쥐의 혈청 IL-10 및 TNF-α 수치의 변화를 감지했습니다. 그 결과, 투이나(tuina)를 한 번 중재한 후 모델군과 비교했을 때 둘 다 즉각적으로 개선되었다. 이는 투이나가 즉각적인 진통 효과가 있다는 이전 연구 결과를 다시 한 번 확인시켜주었다. 그러나 통증 감각의 유형에 따라 진통 효과가 유의한 시점은 동일하지 않습니다. CST의 관점에서, tuina 6 시간 후에 통계적 유의성이 있었다. MWT의 경우, 투이나 이후 24시간 후에 통계적 유의성이 있었다. TWL의 경우, 투이나 6시간 후에 유의한 통계적 유의성이 있었고, 투이나 직후와 18시간 후에 유의한 통계적 유의성이 있었다. 혈청 IL-10 수치의 경우, 투이나 투여 후 6시간, 투이나 투여 후 24시간 후에 유의한 감소가 있었으며, 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 혈청 TNF-α 수치의 경우, 투이나 직후 직후, 투이나 후 6시간, 투이나 후 24시간 후에 유의한 감소가 있었으며, 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 이는 투이나의 진통 효과는 지속될 수 있으나, 냉자극에 의한 통증 및 기계적 촉각에 의한 통증에 대한 효능의 시점에는 상당한 지연이 있으며, 열자극에 의한 통증에 대해서는 즉각적으로 효과적이고 더 유의하고 지속적인 효능을 가지고 있음을 나타낸다. 본 연구에서는 TUINA의 진통 시작 기전을 더욱 규명하기 위해 TRP(Transient Receptor Potential) 단백질과 관련된 단백질 및 유전자, 냉, 열, 기계적 민감성과 관련된 유전자, TGF-β, IL-6와 같은 기타 염증 인자에 대한 유전자 변화를 연구하고 있습니다.

요약하면, 본 연구의 결과를 바탕으로 투이나에 의해 영향을 받는 단백질 또는 경로가 기능할 수 있는 시점이 다를 수 있으며, 이로 인해 유의미한 진통 효과를 얻을 수 있는 시점이 다를 수 있음을 추론할 수 있습니다. 투이나 진통제의 시작 기전을 탐구하고 투이나의 임상적 효능 연구를 위한 기초를 제공하기 위해서는 추가적인 심층적인 연구가 필요하다.

공개 사항

저자는 재정적 또는 기타 이해 상충을 선언하지 않습니다.

감사의 글

저자들은 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, 82074573호, 82274675호)과 베이징 자연과학재단(Beijing Natural Science Foundation, 제7232278호)으로부터 이 논문의 연구, 집필 및 출판을 위한 자금을 지원받았다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
마취 기계Ruiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR500동물 호흡기 마취 관련 장비
크롬 장 봉합사Shandong Boda Medical Products Co., Ltd., ChinaBD210903건강한 어린 염소의 장에서 처리 된 콜라겐 단백질로 주로 만든 흡수성 외과 봉합
Electronic Von Frey instrumentBioseb, USABIO-EVF5기계적 인출 임계값을 감지하는 도구
지능형 냉판 및 열판 통증 감지기Anhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd, 중국.ZH-6C냉기 감도 임계값
IsofluraneRuiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR510-22-10마취
다기능 전 파장 마이크로플레이트 리더Molecular Devices (Shanghai) Co., Ltd.SpectraMax M2광학 밀도 (OD)를 감지하기위한 기기열
진통 장치Chengdu Techman Software Co., Ltd.,ChinaPL-200열 인출 대기 시간을 감지하기위한 기기
사

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