여기에서는 침술 실험 중 쥐를 효과적으로 고정시키기 위해 쥐 재킷을 사용하여 개선된 현탁액 고정 방법을 제시합니다. 또한, 이 고정 장치의 구조와 적용, 전기 침술 요법에서의 활용에 대한 지침 및 평가가 설명됩니다.
방법 논문
* These authors contributed equally
여기에서는 침술 실험 중 쥐를 효과적으로 고정시키기 위해 쥐 재킷을 사용하여 개선된 현탁액 고정 방법을 제시합니다. 또한, 이 고정 장치의 구조와 적용, 전기 침술 요법에서의 활용에 대한 지침 및 평가가 설명됩니다.
기초 실험 침술 연구에서 쥐는 일반적으로 실험실 동물로 사용됩니다. 그러나 고정된 자세를 유지하기는 어렵습니다. 전기 침술 시술 중에는 쥐를 적절하게 고정시키는 것이 필수적입니다. 현재 쥐 고정은 마취 고정, 고플랫폼 고정, 바인딩 고정, 자체 제작 쥐 코트로 고정 등 다양한 방법이 사용되고 있습니다. 그러나 이러한 방법에는 한계가 있어 실험의 효율성과 조작성에 어느 정도 영향을 미칠 수 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 옷을 사용하여 쥐를 매달고 고정하는 방법을 소개합니다. 첫째, 쥐는 자신의 체형에 맞는 쥐 재킷을 입고, 어둠과 굴을 파는 것을 선호합니다. 바늘 수술은 쥐가 쥐 옷을 입은 후에 수행 할 수 있습니다. 매달려 있을 때 쥐는 팔다리가 움직일 수 없기 때문에 비교적 가만히 있습니다. 이 고정 방법은 경제적이고 사용자 친화적인 이점을 제공할 뿐만 아니라 쥐를 편안하고 편안한 자세로 안정적이고 안정적으로 고정할 수 있도록 합니다. 또한 시간 소비, 실험 공간 및 인력 자원을 효과적으로 최소화합니다. 또한 이 방법은 쥐의 침술에 사용되는 대부분의 경혈을 노출할 수 있습니다. 이 기사에서는 주로 특별히 설계된 쥐 재킷, 높은 고정 랙 및 연결 구조를 포함하는 장치의 구성에 중점을 둡니다. 또한, 쥐 전기 침술 절차에서 쥐 의류 기반 현탁액 고정 방법의 적용을 입증하기 위해 예시적인 예가 제시될 것입니다.
침술은 질병을 예방하고 치료하기 위해 특정 경혈이나 다른 위치에 침을 꿰는 것이 특징인 전통적인 치료법입니다. 전기침술은 선모침과 전기자극1을 병행하여 관련 파라미터를 조절하여 자극량을 정밀하게 조절할 수 있어침술치료의 표준화2를 촉진한다. 최근 몇 년 동안 전기침술의 기전에 대한 연구가 계속 확대되고 심화되고 있으며3,4 이로 인해 전기침술의 기전을 연구하는 연구가 매년 증가하고 있다5.
전기 침술에 대한 기초 연구에서 쥐는 가장 일반적으로 사용되는 동물입니다. 전기 침술 치료 중에는 원활한 시술을 위해 시술자는 가만히 있어야 합니다. 인간을 대상으로 한 임상시험과 달리 동물 실험에 사용되는 작은 동물은 15-30분 동안 긴 전기 침술 시술을 받는 동안 의식적으로 명령을 따를 수 없습니다. 이로 인해 연구자들은 안정적이고 신뢰할 수 있는 고정을 달성해야 하는 주요 과제를 안고 있습니다. 부적절한 고정은 동물에게 불안, 우울증, 공포와 같은 부정적인 감정을 유발할 수 있으며,이는 쥐의 부상 위험과 실험 인원의 물릴 가능성을 증가시킬 뿐만 아니라 연구 결과의 안정성과 설득력에도 영향을 미친다.
이전 연구에서 연구자들은 침술이나 전기침술 수술 전에 마취 고정(anethesia fixation)7, 높은 플랫폼 고정(high platform fixation)8, 결합 고정(binding fixation)6,9 또는 쥐털 고정(rat coat fixation)10을 자주 사용했다. 그러나, 마취가 신체11 및 뇌기능12에 미치는 영향을 감안할 때, 그리고 임상적 사례에서 의식이 있는 환자에게 침술을 시행한다는 점을 고려할 때, 마취는 연구 결과에 어느 정도 영향을 미칠 수 있다. 따라서 마취 고정에 비해 깨어 있는 상태에서 쥐를 편안하게 고정하는 것이 더 나은 선택입니다.
그러나, 마취되지 않은 상태에서, 다양한 고정 방법들은 또한 각각의 한계를 가지고 있는데, 여기에는 쥐의 털이 쥐의 털을 덮는 것에 의한 제한된 경혈 노출(10), 수술을 수행하기 위해 적어도 두 명의 개체가 필요하거나(13), 조절이 불가능한 고정기 크기(14), 또는 강제된 자세(6)에 있는 쥐의 스트레스 상태를 포함한다. 이러한 기술적 문제를 해결하기 위해 우리는 쥐 몸의 대부분의 부분에서 침술 조작에 적합한 쥐 재킷과 고정 랙을 설계했습니다. 이것은 연구자들이 쥐에 대한 침술 절차를 효율적으로 수행하는 데 도움이 될 수 있습니다.
이 프로토콜의 근거는 다음과 같습니다: 첫째, 쥐의 재킷에 있는 닫힌 모자는 쥐의 자연적인 어둠과 굴을 파는 성향을 이용하여 활동 범위를 제한합니다. 둘째, 쥐의 팔다리 관절 근처에 있는 묶인 밧줄은 물리적 압박 억제 기능을 제공하여 쥐의 움직임에 일정한 제한을 가합니다. 그러나 쥐는 재킷을 입은 상태에서도 여전히 수평으로 점프하고 움직일 수 있습니다. 마지막으로, 쥐는 매달렸을 때 고정된 힘 지점 없이는 땅에 닿을 수 없기 때문에 쥐 재킷에 서스펜션 고정 장치를 추가하여 움직임을 더욱 제한하고 바늘 고정을 보장했습니다. 고정 장치의 구성은 그림 1에 나와 있습니다.

그림 1: 랫 재킷과 서스펜션 고정의 개략도. (A) 평평하게 본 쥐 재킷의 일반적인 모습. (B) 쥐 재킷의 3차원 보기. (C) 머리와 허리의 경혈 근처를 절개한 특수 맞춤 쥐 재킷. (D) 여러 마리의 쥐가 동시에 높은 선반에 매달려 있는 그림. 1 : 직물 전체보기; 2 : 앞다리 출구; 3 : 뒷다리 출구; 4 : 밧줄을 묶습니다 ; 5 : 봉합 후 형성된 공동; 6: 머리 경혈을 노출시키기 위한 절개; 7 : 등과 허리 경혈을 노출시키는 절개. 8: 봉합 위치. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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본 연구에서 쥐를 대상으로 실시한 모든 절차는 중화인민공화국에서 공식적으로 채택한 실험동물 복지 및 윤리 검토 지침(2018)과 National Academies Press15의 Guide for the Care and Use of Laboratory Animals를 준수했다. 이 프로토콜은 세 가지 주요 단계로 구성됩니다. 첫째, 쥐 재킷은 무게가 다른 쥐의 개별 체형에 따라 맞춤 제작되고 장착됩니다. 다음으로, 침술 조작은 표준 절차에 따라 수행됩니다. 마지막으로, 쥐는 재킷에 매달려 있고 바늘은 같은 그룹 내의 쥐 사이에서 동시 개입의 필요성을 수용하기 위해 제자리에 남아 있습니다.
1. 사전 니들링 준비

그림 2: 쥐의 체형과 일치하는 쥐 재킷 크기의 해당 다이어그램. 다이어그램에서 매개 변수 a는 상지와 쥐의 몸통 사이의 관절 뒤쪽에서 횡 거리를 나타냅니다. 이 값은 쥐 재킷의 상지에 대한 관통 구멍 사이의 간격 측정으로 사용됩니다. 마찬가지로, 매개변수 b는 쥐의 양측 하지가 몸통과 연결되는 등의 가로 거리를 나타냅니다. 이 측정은 쥐 재킷의 하지에 대한 관통 구멍의 간격을 결정합니다. 매개변수 c는 쥐 복부의 가장 두꺼운 부분의 둘레를 의미하며, 이는 쥐의 재킷 직물에 대한 너비 측정으로 사용할 수 있습니다. 매개변수 d는 쥐의 겨드랑이에서 장골 앞쪽까지의 거리를 나타내며 재킷의 위쪽 구멍과 아래쪽 구멍 사이의 세로 거리를 결정합니다. 매개변수 e는 쥐의 코끝에서 꼬리 바닥까지의 세로 거리에 해당하며, 쥐의 재킷 천의 길이 측정 역할을 합니다. 매개변수 f는 상지와 쥐의 몸통을 연결하는 관절의 둘레를 나타내며 상지가 통과하는 구멍의 둘레 역할을 합니다. 매개변수 g는 하지와 쥐의 몸통을 연결하는 관절의 둘레를 나타내며 하지가 통과하는 구멍의 둘레를 결정합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 본체 중량 (g) | 체형 매개변수(cm) | ||||||
| a | b | c | d | e | f | g | |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
표 1. 체중이 다른 쥐의 체형 매개변수의 측정 결과.

그림 3: 쥐 재킷의 물리적 모양과 사용법을 보여주는 다이어그램 . (A) 랫 재킷의 평면 외부 모습. 쥐의 재킷 모양은 직각의 사다리꼴과 비슷하며, 왼쪽과 오른쪽에 쥐의 상지와 하지가 통과할 수 있는 별도의 구멍이 있습니다. (B) 쥐 재킷의 펼쳐진 외부 모습. 헤드기어를 닫으면 반밀폐된 구멍이 생성되어 쥐가 들어가도록 유인하는 중요한 구성 요소 역할을 합니다. (C) 재킷을 입은 쥐의 옆모습. 쥐의 팔다리가 옷의 구멍을 통과하면 끈을 몸통의 복부 표면 위로 교차시켜 적절한 장력으로 뒤쪽에 단단히 고정합니다. 이렇게 하면 쥐가 상대적으로 움직이지 않게 됩니다. (D) 쥐 재킷을 입은 쥐의 복부 모습. 재킷의 복부 표면은 쥐의 복부 피부를 노출시켜 복부 지점에서 침술을 위해 편리하게 접근할 수 있도록 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
동영상 1: 쥐 재킷 입기. 이 비디오는 재킷에 쥐를 입히는 일반적인 과정을 보여줍니다. 이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4: 상승된 고정 랙의 물리적 모양과 사용법을 보여주는 다이어그램. (A) 높은 고정 랙. 이 랙은 주로 각 트레이에 용접된 두 개의 수직 철제 기둥(길이 60cm)과 지면과 평행하게 배치된 긴 수평 철제 막대기(길이 145cm)로 구성됩니다. 나사는 수직 기둥과 같은 높이에 수평 스틱을 고정하는 데 사용됩니다. (B) 고정 랙의 쥐 서스펜션. 쥐 재킷을 입은 쥐는 쥐 당 두 개의 S 자형 후크를 사용하여 고정 랙에 단단히 고정됩니다. (C) 여러 쥐에 대한 동시 전기 침술 치료. 꼬리 움직임으로 인한 잠재적인 간섭을 방지하기 위해 쥐 사이에 쥐의 꼬리 길이와 동일한 적절한 간격을 유지해야 했습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
2. 전기침술 시술
동영상 2. 요추 부위의 침 경혈. 이 비디오는 재킷을 입은 쥐의 옷차림, 허리의 경혈에 침 바늘을 삽입하는 것, 그리고 전기 침술 장치의 후속 연결을 포함하는 포괄적이고 일관된 절차를 보여줍니다. 이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
동영상 3. 복부와 하지의 침 경혈. 이 비디오는 재킷을 입은 쥐의 옷차림, 복부와 하지에 위치한 경혈에 침 바늘을 삽입하는 것, 그리고 전기 침술 장치의 후속 연결을 포함하는 포괄적이고 일관된 절차를 보여줍니다. 이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
동영상 4. 쥐 재킷 제거. 이 비디오는 쥐에게서 재킷을 벗는 관습적인 관행을 보여줍니다. 이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
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본 실험에서는 총 12마리의 랫트를 전기침 치료 대상으로 선정하였으며, 고정 방법에 따른 래트의 반응을 관찰하였다( 표 2 참조). 12마리의 쥐 중 단 1마리의 쥐만이 15분의 전기침 침 유지 기간 동안 격렬한 투쟁을 보였다. 격렬한 움직임의 결과로 바늘이 중간에 떨어져 전체 쥐 수의 8.33 %를 차지했습니다. 이 결과는 일반적으로 사용되는 고정 방법이 현저한 수준의 안정성과 신뢰성을 나타낸다는 것을 시사합니다. 한 마리의 쥐가 보여준 투쟁에도 불구하고, 그룹의 쥐 대다수는 치료 내내 적절한 바늘 고정을 유지했습니다. 더욱이, 전기 침술 치료를 위해 쥐를 고정시키기 위해 이 방법을 사용한 2개월의 실험 기간 동안 쥐 사망 사례가 기록되지 않았으며, 이는 쥐에 대한 이 고정 방법의 안전성을 시사합니다.
또한, 표 3에서는 이 고정 방법을 문헌 9,10,13,14
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전기 침술은 인지 장애(cognitive impairment)16,17, 심근 손상(myocardial injury)18, 염증성 통증(inflammatory pain)19과 같은 다양한 질병에 좋은 치료 효과가 있는 것으로 나타났다. 그 작용 메커니즘을 이해하기 위해 주로 쥐를 이용한 동물 실험이 수행되었습니다. 시술 중 동물을 고정하는 것은 정확한 결과를 위해 매우 중요합니다. 많은 연구에서 동물 마취 후 전기 침술을 시행했지만, 이 방법은 뇌 기능을 저해하고 실험 정확도를 떨어뜨릴 수 있습니다. 또한, 마취제를 장기간 투여하면 바늘 시술이 길어지고 동물의 폐사 가능성이 높아집니다. 그러나, 보고된 비마취 고정 방법도 한계가 있으며, 이는 표 3에서 주의 깊게 논의되었다.
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모든 저자는 잠재적인 이해 상충이 없다고 선언했습니다.
저자는 이 논문에서 그림 2를 만드는 데 사용된 자료(공인 라이선스 ID: URUUO5699e)를 제공해 준 Home for Researchers의 Figdraw 과학 연구 도면 플랫폼에 감사를 표합니다. 이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81873380, 82074566), 후베이 성 자연 과학 재단 (2022CFCO43) 및 중국 전통 의학 관리국의 국가 유명 중국 의학 유산 스튜디오 건설 프로젝트 ([2022] No.5, [2022] No.75)의 보조금을 지원받았습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 75% 알코올 | Shandong Lircon medical technology co., ltd | 2002-0059 | 소독 |
| 침술 바늘 | Beijing Luo ya shan chuan medical equipment co., Ltd. | 니들링 | |
| 성인 Sprague-Dawley(SD) 쥐 | Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | 수혜자 |
| 고가 고정 랙에 고정되었습니다 | 과학 및 교육 연구를 위한 Taizhou shiai 기기 및 장비 Co., ltd | / | Fix rats |
| Hans 전자 침술 기구 | Beijing Huayun Ante Science and Technology Co. Ltd. | HANS-200A | 전기 침 |
| 의학 면봉 | 장쑤 성 Misawa 의학 공급 Co., 주식 회사. | 20172142357 | 소독 |
| 애완 동물 전기 가위 | 봉화 Xikou Lubao 나이프 & 가위 전기 제품 공장 | / | 쥐의 털 면도 |
| 핀셋 | Qingdao Schultz Biotechnology Co., ltd | 핀치 면봉 |
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