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방법 논문

Enhancing the Development and Growth of Infant Cerebral Palsy Rats Using Selective Spinal Manipulations

1.4K 조회수

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DOI:

10.3791/65659

⸱

2024년 2월 2일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

본 연구는 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 성장과 발달에 대한 선택적 척추 교정의 효과를 설명하며, 구체적인 절차와 표준화된 프로토콜을 강조한다. 프로토콜을 평가하기 위해 체중 측정, 로타로드 테스트, 발 결함 점수, 기타 행동 테스트 및 성장 호르몬 감지를 수행했습니다.

초록

뇌성마비(CP)는 유병률이 높고 장애율이 높으며 치료가 어려운 난치성 소아 질환입니다. 현재 뇌성마비에는 다양한 치료법이 사용되고 있습니다. 치료에는 약물 및 비약물 요법이 포함됩니다. 중국 전통 의학 외부 요법은 비약물 요법에서 매우 독특한 치료 방법입니다. 마사지는 전통 한의학의 외부 요법 중 하나로 뇌성마비 치료에 사용되며 효능이 좋고 부작용이 적으며 조작성이 강합니다. 한의학의학 외부 요법의 일환으로, 선택적 척추 교정은 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 성장과 발달을 효과적으로 촉진할 수 있습니다. 수술은 크게 4단계로 나뉘었는데, 먼저 척추와 척추 양쪽에 1분 동안 문지르는 방법을 적용했습니다. 누르고, 반죽하는 방법은 척추에 5분, 척추 양쪽 근육에 5분 동안 적용했습니다. 둘째, 척추의 민감한 국소 경혈을 2분 동안 누르고 주무르는 것을 수행했습니다. 셋째, 영향을 받은 팔다리를 1분 동안 비틀림법으로 치료하였다. 넷째, 이마에서 뇌 뒤쪽까지의 정중선에 1분 동안 문지르는 방법을 적용했습니다. 이 연구는 뇌성마비를 앓고 있는 어린 쥐를 치료하기 위해 선택적 척추 조작을 사용하는 것을 목표로 했습니다. 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 체중, 로타로드 검사, 발 결함 점수 및 성장 호르몬을 검출하여 뇌성마비가 있는 유아 쥐의 성장과 발달에 대한 선택적 척추 조작의 효과를 이해했습니다. 그 결과 체중 증가를 촉진하고, 균형 능력과 운동 기능을 개선하고, 유아 뇌성 마비 쥐의 성장 및 발달을 촉진하고, 성장 호르몬 분비를 촉진하고, 등의 민감한 부분의 온도를 높일 수 있음을 보여주었습니다.

서론

뇌성마비(Cerebral Palsy, CP)는 태아 또는 유아기에 뇌의 비진행성 손상으로 인해 발생하며, 비정상적인 운동 및 자세 발달1, 느린 체중 증가 2,3,4 및 운동 기능 장애를 특징으로 하는 장애군입니다. 중국의 뇌성마비 발병률은 2.48%이며, 유병률은 각각 2.46인치(1-6세)5이다. 외국 연구에서는 2.4%-3.6%6의 유병률이 보고되었습니다. 뇌성마비는 아동의 신체적 상해와 장애의 주요 원인이며, 그 중 균형 장애와 운동 장애는 일상 생활 활동에 큰 영향을 미칩니다1. 뇌성마비는 조산, 감염, 유전학, 신생아 허혈 및 저산소증, 신생아 황달 및 기타 복잡하고 다양한 병원성 요인에 의해 발생할 수 있다7. 뇌성마비 치료의 목표는 신체 기능과 삶의 질을 향상시키는 것이다 8. 현재 뇌성마비의 치료 방법은 뇌심부 자극9, 로봇 보조 보행 훈련10, 손목 및 발목 침11, 마사지와 결합된 경락 침술12 등이 있다.

중국 전통 의학(TCM)은 CP13,14에 대한 효과적인 치료법으로 점점 더 많이 사용되고 있습니다. 마사지는 마사지의 일부로서 특정 역할을 합니다. 예를 들어, 선택적 척추 교정은 DNA 하이드록시메틸화(hydroxymethylation)의 상태를 조절하여 신경 발달을 조절하고 학습 및 기억 기능을 향상시킬 수 있다15. 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 치료에서, 선택적 척추 조작은 염증성 사이토카인 TNF-α와 IL-10 유전자 프로모터 영역의 메틸화 수준을 조절함으로써 피질과 해마의 염증성 항상성을 향상시킬 수 있으며16 뇌성마비를 가진 유아 쥐의 균형 능력에 긍정적인 치료 역할을 할 수 있다16. 선택적 척추 교정은 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 인지 기능을 향상시킬 수 있다17. 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 치료에는 선택적 척추 조작이 사용되었으며, 그들의 성장과 발달에도 치료 효과가 있는 것으로 관찰되었다18.

본 연구의 목적은 체중, Rotarod test19, Foot-fault score20,21 및 기타 행동 테스트 및 성장 호르몬 검출을 측정하여 선택적 척추 조작이 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 성장과 발달에 미치는 영향을 설명하고 관련 인력에게 연구 아이디어를 제공하는 것입니다.

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프로토콜

이 연구는 윈난 전통 중국 의학 대학의 실험 동물 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 동물에 대한 모든 실험 작업은 실험 동물 축소, 최적화 및 대체의 3R 원칙을 따랐습니다(번호 R-06202018). 이 실험에는 평균 체중이 250-300g인 특정 병원체가 없는(SPF) 등급의 건강한 Sprague Dawley(SD) 쥐(수컷 14마리, 암컷 7마리)가 사용되었습니다. 쥐는 Yunnan University of Traditional Chinese Medicine의 SPF 동물실에서 사육되었으며 인증 번호: SYXK(Yunnan)K2022-0004. 모든 쥐는 22-26 ° C의 실내 온도와 40 % -50 %의 상대 습도에서 자연광이 제어되는 환경에서 12 시간의 라이트 / 다크 사이클 아래에 수용되었습니다. 적응형 수유 1주일 후 수컷/암컷 비율은 1:2로 유지되었습니다. 1주일 후, 임신한 쥐는 하나의 우리에 수용되어 정상적으로 먹이를 먹고 자유롭게 먹고 마셨습니다. 자연 분만 후, 임신한 쥐에게서 태어난 건강한 새끼 쥐를 선발하였다. 어린 쥐는 뇌성마비를 앓고 있는 어린 쥐의 성장과 발달에 대한 선택적 척추 조작의 효과를 관찰하기 위해 Sham, Control 및 Treatment 그룹으로 나뉘었습니다. 실험을 위해 각 그룹에서 6마리의 수컷 새끼를 선택했습니다. 치료군은 생후 5일 째부터 선택적 척추 교정술을 시행하였으며, 6일간 치료 후 1일간 휴식을 취하였다.

1. 뇌성마비 모델 구축

  1. 수술에 필요한 현미경, 안과용 가위, 겸자, 봉합사, 수술용 플레이트, 가위, 면봉, 장갑을 소독하여 수술실에 놓습니다.
  2. 생후 3일째에 새끼를 어미와 임시로 분리하여 하나의 틀에 넣고 멸균 수술실로 운반합니다.
  3. 체중을 측정합니다. 체중이 7-9g 인 유아 쥐를 연구에 포함시키고 체중을 따르지 않은 쥐는 제외합니다. 새끼 쥐를 무작위로 가짜, 대조군, 치료 그룹으로 나눕니다.
  4. 2% 농도의 이소플루란으로 마취를 유도하고 소동물 흡입 가스 마취기를 사용하여 1%에서 마취를 유지합니다.
    참고: 이 실험은 주로 뇌성마비가 있는 유아 쥐의 성장과 발달에 대한 선택적 척추 조작의 효과를 관찰하기 위한 것입니다. 마취는 모델링 과정에서 일반적인 요구 사항에 따라 수행되었으며 추가 진통제가 관찰 결과에 영향을 미칠 것입니다.
    1. 작은 동물용 가스 마취제를 전원 공급 장치에 연결하고 인덕션 박스에 연결된 밸브를 엽니다.
    2. 유아 쥐를 인덕션 박스에 넣고 농도 조절 손잡이를 돌려 이소플루란 농도를 2%로 조절하여 마취를 유도합니다.
    3. 어린 쥐가 의식을 잃으면 인덕션 박스에서 제거하십시오. 수술판에 놓고 마취기의 채널 1을 닫습니다.
    4. 갓난아기 쥐를 누운 자세로 눕힙니다. 마취 상태를 유지하기 위해 마취 흡입 마스크를 고정합니다.
    5. 마취 흡입 마스크에 연결된 채널을 엽니다. 농도 조정 손잡이를 돌리고 이소플루란의 농도를 1%로 조정하여 마취를 유지합니다.
      참고: 마취 후 새끼 쥐의 발가락과 꼬리를 강제로 들어 올려 마취 깊이를 평가합니다. 발가락과 꼬리를 들어 올리고 꼬집었을 때 반응이 없으면 마취 깊이에 도달했음을 확인할 수 있습니다.
  5. 갓난아기 쥐의 목 피부를 75% 알코올로 3회 소독하고 목 피부를 세로 1cm 절개를 하여 피하 조직을 노출시킵니다.
    참고: 목 피부를 세로로 절개해도 피부 결함이 발생하지 않습니다.
  6. 해부 현미경으로 왼쪽 목의 피부를 절개하고 안과 핀셋을 사용하여 흉골근과 왼쪽 흉골근을 뭉툭하게 분리합니다.
    1. 좌측 총경동맥과 미주신경을 찾아 좌측 총경동맥과 미주신경을 분리한다.
    2. 모델 그룹에서는 전기 응고 펜으로 왼쪽 총경동맥을 절단합니다. 목 절개 부위를 세척하고 봉합합니다.
    3. Sham 그룹에서는 왼쪽 총경동맥과 미주신경을 분리합니다.
  7. 수술 후, 아기 쥐를 자동 온도 조절 식 수조에 넣고 1 시간 동안 소생시킬 수 있도록 엎드린 자세로 놓습니다.
    참고: 자연 회복 후 팔다리와 몸 전체의 피부색이 붉게 변했습니다. 새끼 쥐는 팔다리를 자율적으로 움직이고 독립적으로 기어 다닐 수 있습니다.
  8. 대조군과 치료군의 소생한 쥐를 37°C의 밀폐된 인큐베이터에 엎드린 자세로 놓습니다. 저산소증을 유발하기 위해 5% 산소와 95% 질소 가스의 혼합물을 도입하고 2시간 후에 쥐를 제거합니다.
  9. 저산소증 과정을 완료한 새끼 쥐를 저산소증 상자에서 꺼내 정상적인 대기 산소 함량이 있는 상자에 엎드린 자세로 놓습니다. 37°C 온도 조절 수조에 1시간 동안 놓습니다. 완전히 회복된 후 새끼 쥐를 어미의 우리로 다시 옮깁니다.
    참고: 자연적으로 회복한 후 팔다리와 몸 전체의 피부색이 빨갛게 변했습니다. 새끼 쥐는 팔다리를 자율적으로 움직일 수 있었고 독립적으로 기어 다닐 수 있었다.
  10. Sham 그룹의 새끼 쥐를 정상적인 대기 산소 함량을 가진 하나의 상자에 넣고 상자를 37°C 온도 조절 수조에 1시간 동안 놓습니다. 완전히 회복된 후, 새끼 쥐를 다시 어미의 우리에 넣어 먹이를 줍니다.
    참고: 자연적으로 회복한 후 팔다리와 몸 전체의 피부색이 빨갛게 변했습니다. 새끼 쥐는 팔다리를 자율적으로 움직일 수 있었고 독립적으로 기어 다닐 수 있었다. 전체 수술 과정은 윈난 전통 중국 의학 대학의 SPF 동물 실 특수 수술실에서 완료되었습니다. 소생술 및 저산소증 동안 작업자는 부적절한 자세로 인한 사망을 방지하기 위해 항상 어린 쥐를 관찰합니다. 수유하는 암컷 쥐에게는 SPF(Specific Pathogen Free) 번식 사료를 먹였고, 새끼가 스스로 먹이를 먹을 수 있게 되었을 때 새끼는 젖을 떼고(출생 후 21일) SPF 유지 사료를 먹였습니다.

2. 바로잡기 반사 실험

  1. 생후 4일 째(모델링 후 2일 째)에 우측 반사 실험을 수행하여 모델이 성공적이었는지 확인합니다(그림 1 및 표 1).
    1. 새끼 쥐의 꼬리를 들어 올리고 수평 보드에 등을 대고 엄지와 검지를 사용하여 배와 목을 고정합니다. 쥐가 정상 위치로 돌아갈 수 있는지 확인하십시오. 오른쪽 반사의 상실로 인해 쥐가 비정상적인 위치에서 정상 위치로 돌아갈 수 없는 것은 성공적인 모델로 기록되어 있습니다16,22.
    2. 각 새끼 그룹이 누운 자세에서 엎드린 자세로 뒤집는 데 걸리는 시간을 기록하십시오. 누운 자세에서 엄지와 검지손가락을 동시에 놓는 시간을 기록하기 시작하고, 어린 쥐가 엎드린 자세로 돌아갈 수 있도록 하고, 앞발과 뒷발을 바닥에 놓으면 기록을 중지합니다. 어린 쥐가 20초 이상 정상 위치로 돌아올 수 없는 경우 오른쪽 시간을 20초로 기록하십시오.

3. 수술 전 준비

  1. 모델링 후 뇌성마비를 앓고 있는 새끼 쥐를 어미와 분리하여 주변 환경에 적응할 수 있도록 2분 동안 22-26°C의 일정한 실내 온도로 수술실로 데려갑니다.
  2. 손바닥을 온화하고 부드럽게 유지하고 온도를 36-37 °C 사이로 유지하기 위해 일회용 장갑을 착용하십시오.
  3. 쥐를 왼손의 손바닥에 부드럽게 놓습니다. 왼쪽 엄지 손가락을 구부려 2 분 동안 쥐의 눈을 가리고 어두운 시야를 형성하여 쥐가 작업자의 손바닥 환경에 적응할 수 있도록합니다. 오른쪽 검지와 중지를 사용하여 조작합니다.
    알림: 어린 쥐의 눈을 가리면 어두운 환경이 조성될 수 있습니다. 이렇게 하면 실험 결과에 영향을 미치는 안전하지 않고 불확실한 환경 때문에 새끼 쥐가 동요하는 것을 방지할 수 있습니다.

4. 쥐를 대조군과 치료군으로 나누기

  1. 모델링 후 2일차(P5)에 우측 반사 테스트로 모델을 확인하고 새끼 쥐를 대조군과 치료군으로 무작위로 나눕니다. 치료 그룹의 유아 쥐에 대해 선택적 척추 조작을 수행합니다.
  2. 새끼 쥐를 엎드린 자세로 눕힙니다. 척추가 항상 직선 높이에 유지되도록 합니다(그림 2A).
  3. 문지르는 방법으로 척추와 척추 양쪽을 1분 동안 마사지하고, 척추와 척추 양쪽 근육을 5분 동안 누르고 주무르는 방법을 사용합니다.
    1. 문지르는 방법으로 척추와 양쪽 피부를 마사지하여 어린 쥐의 긴장을 완전히 풀어줍니다. 문지르는 빈도가 100-120회/분인지 확인하십시오. 어린 쥐가 조용하고 동요하지 않은 후 1분 동안 문지르는 빈도가 1분인지 확인하십시오.
      1. 오른쪽 검지, 중지, 약지를 접촉면으로 사용하여 경추, 흉추, 요추의 표면 피부를 피하 조직을 방해하지 않고 머리에서 꼬리까지 원을 그리며 문지릅니다.
      2. 오른검지, 중지, 약지를 접촉면으로 하여 동물의 해부학적 기준 23에 따라 동물의 해부학적 기준23에 따라 승모근, 표재성 둔근, 경추 능형근, 가슴근 능형근, 광배근 및 외사근의 피부 표면에 순서대로 원을 그리며 수행합니다.
    2. 먼저 척추를 5분 동안 누르고 주무르면서 치료한 다음 5분 동안 척추 양쪽 근육을 누르고 주무르십시오.
      1. 주무르는 방법을 120분동안 분당 5회 빈도로 척추에 적용합니다. 오른쪽 검지 또는 중지를 접촉면으로 사용합니다. 머리에서 꼬리까지 경추, 흉추, 요추 표면 피부를 원형으로 주무르고 아래쪽으로 누르는 것과 함께 (1.77 ± 0.54 N)을 수행합니다. 힘이 경추, 흉추, 요추 및 척추상 인대에 도달하는지 확인하십시오.
      2. 척추 양쪽 근육에 5분 동안 120회/분의 빈도로 누르기와 주무르기 방법을 적용합니다. 오른쪽 검지 또는 중지를 접촉면으로 사용합니다. 동물 해부학 기준23에 따르면 승모근, 표재성 둔근, 능형목, 능형근 가슴근, 광배근 및 외부 비스듬한 복부 근육의 피부 표면을 머리에서 꼬리까지 둥글게 반죽하는 동작으로 1.77 ± 0.54 N의 힘으로 눌러 힘이 승모근, 표재성 둔근, 능형목, 능형가슴, 능형가슴, latissimus dorsi 및 외부 비스듬한 복부 근육 (그림 2B) 23.
  4. 민감한 척추 경혈(예: Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu, Feishu24)을 100-120회/분의 빈도로 2분 동안 누르고 주무르십시오. 오른쪽 검지 또는 중지를 접촉면으로 사용하여 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 국소 경혈(예: Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu, Feishu)의 표면 피부를 원형으로 주무르고 아래쪽으로 누르기(1.77 ± 0.54 N)를 수행합니다.
    참고: 경혈은 중국 침술 학회(Chinese Acupuncture Society)의 실험 침술 연구 분과(Experimental Acupuncture Research Branch)에서 공식화한 "동물 침술 포인트 맵(Animal Acupuncture Point Map)"에 따라 선택되었다)(그림 3)25.
  5. 비틀림법으로 영향을 받은 팔다리를 1분 동안 25회/분의 빈도로 국소적으로 자극합니다.
    1. 오른손 엄지와 검지로 뇌성마비를 앓고 있는 아기 쥐의 영향을 받은 팔다리를 꼬집어 두 손가락에 대칭적인 힘을 가합니다. 힘이 부드럽고 동작이 가볍고 부드러운지 확인하십시오. 우측 신근 수근 요골, 신근 디지토럼 일반, 신근 수근 척골, 지골, 지절간 관절, 비복근, 반건근, 중족골 및 유아 쥐의 중족골 관절을 앞뒤로 문지릅니다.
  6. 이마 정중선과 뇌 뒤쪽에 1분 동안 100-120회/분의 빈도로 문지르는 방법을 적용합니다. 오른쪽 검지를 접촉면으로 사용하고 유아 쥐의 이마에서 후방 뇌 중앙까지의 가상의 선(즉, Baihui, Fengfu 및 Dazhui의 한 줄)에 문지르는 방법을 사용합니다(그림 3).
    참고: 마사지는 주로 피부에 적용됩니다. 그것은 뇌성 마비를 앓고있는 아기 쥐의 머리 피부 표면에서 원을 그리는 운동입니다. 뇌성마비가 있는 어린 쥐의 피하 근육 움직임을 구동할 필요가 없습니다.
  7. 절차가 끝나면 새끼 쥐를 30분 동안 혼자 두었다가 어미 쥐 우리로 되돌립니다.
    참고 : 나이가 들면서 어린 쥐의 털이 두꺼워 지므로 실험 효과에 영향을 미치지 않도록 마사지 작업 중에 모든 그룹의 어린 쥐의 뒷털을 제거해야합니다.

5. 국소 경혈의 온도 감지

  1. 적외선 열화상 카메라를 사용하여 수술 전후에 국소 경혈 영역의 온도를 감지합니다.
    1. 선택적 척추 마사지 전에 휴대폰의 Type-C 인터페이스를 데이터 케이블로 적외선 이미징 장치의 USB 인터페이스와 연결하고 전원 버튼을 켭니다.
    2. 분석을 클릭하여 소프트웨어의 휴대폰 단말기로 들어가고 사진을 선택하여 사진 모드로 들어간 다음 오른쪽 하단 모서리에 있는 Picture in Picture 모드를 클릭합니다.
    3. 아기 쥐의 등에 있는 Dazhui, Xinshu 및 Shenshu 경혈(그림 3)의 경혈 부위에 카메라의 초점을 맞춰 체온 측정을 합니다. 사진을 클릭하여 이미지 캡처를 완료하고 JPG 형식으로 저장합니다 .
    4. 데이터 케이블로 컴퓨터를 연결하고 저장된 이미지를 Fotric 소프트웨어가 설치된 컴퓨터에 업로드하여 분석합니다.
      1. PC에서 Fotric 소프트웨어를 열고 로컬 파일을 연 다음 이미지의 위치를 찾습니다.
      2. 써모그램 작업 공간을 선택하고, 분석할 이미지를 선택하고, 분석 인터페이스로 들어갑니다.
      3. Analysis( 분석 ) 화면에서 오른쪽의 Thermal image(열화상 상자) 상자에서 사진을 선택하고 Lock( 잠금)을 엽니다.
      4. 확대/축소 기능을 선택하고 열화상 이미지와 왼쪽 상자 배경 이미지의 크기를 일치하도록 조정하고 오른쪽의 잠금을 끕니다.
      5. 상단의 툴바에서 Set measurement rectangle 을 찾아 그림에서 감지할 경혈을 표시합니다.
      6. 오른쪽의 보고서를 클릭하여 온도 값을 기록합니다.

6. 뇌성마비가 있는 유아 쥐의 운동 균형 기능 감지

  1. Behavioral Rotarod test19 를 사용하여 출생 후 61일째 에 Sham, Control 및 Treatment 그룹에 속한 쥐의 운동 기능을 감지합니다.
    1. 매개변수 설정: 전원 스위치를 시작하고 실험 수행 을 선택하여 다음 단계로 들어가고 Positive, Rats, Timing 5 min 을 선택하여 다음 단계로 들어가고 Acc 시간:10s, 속도:10rpm을 선택합니다.
    2. 그런 다음 쥐를 달리기 트랙에 놓고 단단히 서 있는 후 실행을 클릭하여 테스트를 시작합니다. 각 실행의 실행 상태를 ON으로 조정합니다. 각 쥐를 5분 동안 한 번씩 훈련시킨 다음 테스트를 세 번 수행하기 시작합니다.
    3. 훈련이 끝나면 새끼 쥐를 회전식 달리기 트랙에 올려 놓습니다. 안정되면 Run(실행)을 클릭하고 실행 상태를 ON으로 조정합니다. 5분이 끝나면 Date(날짜 )를 선택하여 로타로드 달리기 트랙에서 처음으로 떨어지는 각 쥐의 시간과 속도, 즉 실행 시간 데이터를 기록합니다.
  2. 발 결함 검사20,21을 사용하여 출생 후 61일째에 Sham, Control 및 Treatment 그룹의 오른쪽 앞다리의 균형 운동 기능을 평가합니다.
    1. 갓 태어난 쥐를 수평 사다리의 시작 부분에 놓고 사다리를 건너 반대쪽 끝(길이 100cm, 각 사다리 사이의 거리는 2cm)으로 건너가는 동영상을 녹화합니다. 한 번의 훈련 세션 후 5분 간격으로 각 쥐에 대해 공식 테스트를 세 번 수행합니다.
    2. 채점 기준(표 2)에 표시된 대로 동물이 저속 재생을 사용하여 점수를 매기기 위해 사다리를 건널 때 오른쪽 앞다리를 관찰합니다.

7. 웨스턴 블로팅

  1. 앞서 설명한 바와 같이 조직 샘플의 웨스턴 블로팅 분석을 수행합니다26.
    참고: 용해물의 양은 조직 블록의 크기에 따라 결정되었습니다. 사용된 항체는 다음과 같습니다: 1차 항성장 호르몬 항체(0.5 μg [0.5 ng/lane]); 항성장 호르몬 수용체 항체 (1/1000); 1차 항체에 대한 내부 참조 항베타 Actin 항체(1/2000); 염소 anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) 2차 항체.

8. 손의 강도 감지

  1. 마사지에 사용되는 손의 조작력을 감지하는 데 사용되는 장치를 착용하십시오. 아기 쥐를 마사지하는 데 사용하는 손가락을 장치의 센서 칩으로 끼우고 전원 버튼을 켭니다.
  2. 수동 테스터 소프트웨어가 저장된 하드 디스크 인터페이스를 컴퓨터에 연결하고 URL 입력 상자에 수동 테스터의 전용 IP 주소를 입력합니다.
  3. 컴퓨터에 SpringVR 클라이언트를 설치하고 클릭하여 수집 인터페이스로 들어간 다음 오른쪽 하단 모서리에 있는 손가락 패턴을 선택하여 조작력을 테스트합니다.
  4. 압력 옵션을 선택하고 시작을 클릭하여 작동 중 작업자의 수동 힘을 기록하기 시작합니다. 이 소프트웨어는 조작의 강도를 자동으로 기록하고 파일 이름 PressureSensor의 데이터가 발견 될 로컬 디스크에 데이터 테이블을 생성합니다.

9. 데이터 통계

참고: 통계 분석에는 SPSS26.0 소프트웨어가, 막대 차트 생성에는 Graphpad Prism9.0.0이, 단백질 밴드의 그레이 값 분석에는 Image J가 사용되었습니다.

  1. 모든 데이터를 분석하고 평균 ± 표준 편차(평균 ± SD)로 표시합니다.
    참고: 테스트 표준은 α = 0.05였으며 P ≤ 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다. Fisher의 검정이 사용된 이유는 데이터가 분산 및 정규성 분석을 통해 분석되고 정규 분포 특성과 분산 동질성을 준수했기 때문입니다.

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결과

선택적 척추 교정은 뇌성마비가 있는 유아 쥐의 체중 증가를 촉진할 수 있습니다.
치료 기간 동안 체중은 산후 3일, 14일, 28일, 42일, 61일에 측정되었습니다(그림 4, 표 3). 생후 3일째 되는 날, 샴 그룹의 체중은 5.53 ± 0.035 g이었고, 대조군의 체중은 3.15 ± 0.43 g이었다. 치료군의 체중은 4.42 ± 0.13g으로 모델링 전 Sham군과 대조군과 크게 다르지 않았다.

출산 후 14일째, 샴 그룹의 체중은 35.97 ± 1.019 g, 대조군의 체중은 28.00 ± 0.7403 g, 치료군의 체중은 33.78 ± 3.705 g이었다. 트리트먼트 그룹과 샴 그룹 간에 체중에는 유의한 차이가 없었다. 대조군과 비교한 치료군의 가중치는 통계적으로 유의했다(P < 0.01).

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토론

허혈과 저산소증은 뇌성마비의 중요한 병원성 인자이기 때문에 국제적으로 인정된 뇌성마비 모델 확립 방법은 저산소증과 결합하여 뇌성마비 모델을 준비합니다 16,28,29,30. 뇌성마비가 발병하면 체중 및 운동 기능을 포함한 전반적인 발달 지연을 유발하며, 이는 성장 호르몬 분비 수준과 관련이 있을 수 있습니다31. 뇌성마비를 앓고 있는 어린 쥐를 치료하기 위해 선택적 척추 조작이 사용되었습니다. 치료 중 체중을 모니터링하고 Rotarod 테스트, Foot-fault score 및 성장 호르몬과 같은 행동 테스트를 수행했습니다. 치료 전과 후에 국소 경혈의 온도를 관찰했습니다. 허혈-저산소증 모델이 확립...

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공개 사항

저자는 이 저작물과 관련하여 경쟁하는 재정적 또는 기타 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (82374614)의 일반 프로그램, 윈난성 과학 기술부의 주요 생물 의학 프로젝트 (202102AA100016), 윈난성 과학 기술부 응용 기초 연구의 공동 주요 프로젝트 (201901AI070004), 윈난성 대학 및 대학교의 뇌병증 예방 및 치료를 위한 주요 침술, 뜸 및 마사지 연구실(2019YGZ04), 윈난성 과학기술부 -- 윈난성 기초 연구 프로그램 청소년 프로젝트(202101AU070002), 윈난성 교육부 과학 연구 기금 대학원 프로그램(2023Y0433); 윈난성 교육부 과학연구재단, (2023Y0462).

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
96웰 플레이트Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510단백질 농도 측정
항-베타 액틴 항체AbacmAb8227희석: 1/2000
항성장 호르몬 항체AbacmAb1268820.5 & micro; g (0.5 ng / lane)
항성장 호르몬 수용체 항체AbacmAb202964희석 : 1/1000
기본 작동 현미경Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD SM-101BCA
개발자Biyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010농도 측정
화학발광 이미징 시스템Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073단백질 밴딩 이미징
다이렉트 로드 컬러 사전 염색 마커Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221웨스턴 블롯
DK-30자동 스노우 아이스 메이커Henan Brothers 기기 장비 Co., LTDSHDX0023제빙
ECL 발광 기판 키트Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520B노출된 필름의 잠상을 가시적인 이미지로 변환
전기 가열 온도 조절 수조TAISITE INSTRUMENTDK-98-II어린 쥐는 전자
저울Kunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002린 쥐의 체중을 측정
했습니다.독일 작은 흰색 전기 응고 펜 지혈제HaohangL55× W125× H37좌측 총경동맥을 응고시키는 데 사용되었습니다
갑 장쑤성 YANGzi LiDE 의료 기기 유한 회사 Q/320684 YZYL001-2017마사지 수술용
글리신베이징 솔레이바오 테크놀로지 유한 회사Cat#G8200전기영동 용액, 이송 유체 Goat
Anti-RabbitIgG H& 구성 엘(HRP) AbacmAb6721희석액: 1/10000
지능형 실험실 초순수 기계Chongqing huachuag 수처리 엔지니어링 유한 회사N/A여과(15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198마취는 어린 쥐의 유도에 의해 유지되었습니다
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134적외선 이미지 분석 소프트웨어
저온 고속 조직 분쇄기Wuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191조직 분쇄
메탄올 광동 Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519이송 유체 구성
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193전기 영동
Multiskan 스펙트럼 마이크로플레이트 분광 광도계TECANSpark조직 단백질의 흡광도와 농도가 검출되었습니다
압력 감지 스마트 장갑Jinan Super Sense Intelligent Technology Co., LTDMiiglove작업자의 조작 강도를 측정하는 데 사용됩니다
PVDF 멤브레인MerckMillipore Corporation IPVH00010 웨스턴 블롯
냉동 원심분리기Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220R원심분리기
연구 3-in-1 열화상 카메라FOTIRC226S (384 x 288)온도 측정
RIPA 용해물Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010용해 조직
SHA-CA 디지털 디스플레이 수조 온도 조절 발진기Changzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CA어린 쥐는 저산소증에 사용되었습니다
6마리의 쥐 피로 로타로드 장치Shanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP 모터 기능이 감지되었습니다
탈지분유저우 Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500감금 액체
SPF 사육 사료SPF(베이징)생명공학 유한 회사.A1EC30005A1S4285266수유중인 암컷 쥐에게
SPF 유지 사료SPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267젖을 뗀 후 새끼에게 먹이를 주었습니다
수술용 플레이트Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002모델 수술대는 어린 쥐
TS-200 궤도 셰이커Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8S겔 고정
트윈 80MedChemExpressHY-Y1819TBST  구성;
ZS-MV 휴대용 마취기ZHONGSHI SCIENCE & 기술ZS-MV-I실험 동물에서 마취를 유도하고 유지했습니다.
단백질 어 장 광를 먹였습니다. 에서 설립되었습니다.

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