뜸 실험 플랫폼은 쥐를 제한 없이 고정할 수 있으며 쥐는 깨어 있는 상태에서 다중 경혈 뜸을 받을 수 있어 쥐의 복지를 보장하고 작업자의 안전을 보호하며 치료 효능을 보장하고 실험의 효율성을 향상시킬 수 있습니다.
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방법 논문
만성 신부전을 가진 쥐의 처리를 위한 Herbal-Cake-Separated Moxibustion 사용
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
임상 실습에서 뜸을 다루는 과정에서 피험자는 뜸재가 떨어지거나 피부가 뜨거워지고 치료 효과가 떨어지는 등의 문제를 피하기 위해 안정적인 기분과 편안한 자세를 취해야 합니다. 이러한 문제는 쥐 뜸 실험에서도 존재한다. 임상실습을 시뮬레이션하기 위해서는 동물실험에 실험기구, 즉 고정된 쥐와 뜸 치료 동기화가 가능한 뜸 장치를 도입하여 실험용 쥐가 무마취 상태에서 조용하고 편안하게 뜸 치료를 받을 수 있도록 해야 합니다.
우리 연구 그룹은 쥐 뜸 실험 플랫폼을 설계했습니다. 이 장치는지지베이스 플레이트, 여러 고정 구성 요소 및 분할 된 구성 요소가있는 나무 보드로 구성되었습니다. 이 장치는 묶지 않고 쥐의 뜸 작동 모드를 달성 할 수 있으며 마취 및 화상을 피하고 동시에 등에 여러 경혈을 노출시킬 수 있습니다. 이 작업은 쥐와 작업자의 신체적, 정신적 부상을 피할 수 있어 연구 효율성을 높이고 뜸 동물 실험의 개발 및 연구를 더욱 촉진합니다.
이 장치는 구조가 간단하고 작동 및 대중화가 용이하며 포괄적이고 혁신적으로 설계되고 재사용이 가능하며 주로 뜸을 기반으로 하는 쥐 실험에 적합합니다. 본 글에서는 주로 랫드뜸을 위한 실험플랫폼 장치의 구조, 이 장치를 이용한 실험용 랫드에서 허브-케이크-분리-뜸의 기본 절차를 소개하고, 만성신부전(CRF)의 랫트 모델 구축 및 대표적인 실험 결과에 대해 설명한다.
서론
뜸은 불을 가하면서 나타났다. 고대의 의사들은 불이 타는 몸의 일부가 불편함의 증상을 완화시킬 수 있다는 것을 우연히 발견했습니다. 장기간의 실습 끝에 "Artemisiae Argyi Folium"이 점차 주요 뜸 재료로 선택되었습니다1. 뜸은 중국 전통 의학의 중요한 구성 요소 중 하나이며, 중국 전통 의학의 달인 및 경혈 침술과 병치하면 이 세 가지 주요 중국 전통 의학 요법은 많은 질병에 널리 사용됩니다.
중국 의사들은 일찍이 황디네이징(黃國公京, 황제의 내경(內內) 시대부터 질병을 치료하기 위해 뜸을 자주 사용했습니다. Artemisiae Argyi Folium은 경락을 따뜻하게 하여 출혈을 멈추고 감기를 쫓아내며 통증을 완화하는 기능을 가진 한약의 일종입니다. 그것은 전통 중국 의학의 외부 치료에 일반적으로 사용되며 또한 중국 전통 의학 달인의 치료에도 사용할 수 있습니다. 뜸은 일종의 외용요법2으로, 뜸이나 다른 약물을 신체 표면의 경혈에 올려 약한 뜸의 열을 태우고 사용하며 약물의 효과를 이용하여 질병을 치료하는3.
일반적인 치료 방법 중 하나인 뜸은 임상 실습에서 널리 사용되어 왔습니다. 뜸 치료가 지속적으로 확장됨에 따라 점점 더 많은 연구가 뜸의 메커니즘을 조사하고 많은 동물 실험을 수행했습니다 4,5.
뜸 방법은 직접 뜸과 간접 뜸으로 분류할 수 있습니다. 몸의 피부에 뜸을 놓는 방법을 직접 뜸이라고 합니다. 간접 뜸은 뜸 원뿔의 표면과 경혈을 약물 또는 기타 물질로 분리합니다. 뜸은 과민성 대장 증후군(irritable bowel syndrome)6, 만성 피로 증후군(chronic fatigue syndrome)7, 무릎 골관절염(shoulder osteoarthritis)8 등 다양한 질환을 치료할 수 있다.
이 논문은 주로 허브-케이크-분리-뜸의 메커니즘에 대해 논의합니다. Herbal-cake-separated-moxibustion은 간접 뜸 방법에 속하며, 약용 케이크에 뜸 콘을 올려 뜸을 적용합니다. 현재 연구에 따르면 뜸쑥 원뿔 연소, 뜸 잎 타르의 화학 조성 및 경혈 자극에 의해 생성되는 적외선 및 온난화 효과는 경혈에 약물의 침투를증가시킴으로써 질병 예방 및 치료9를 달성할 수 있습니다. 따라서 한방-떡 분리-뜸은 주로 뜸, 약물 및 경혈을 통해 "종합적인 효과"를 낸다10.
이전 연구에 따르면 뜸은 CRF 11,12,13,14,15를 치료하는 효과적인 방법이지만 기본 메커니즘은 아직 정의되지 않았습니다. 우리는 CRF에 대한 임상 및 동물 연구에 종사해 왔습니다. 현재 우리는 소포체 스트레스의 허브 케이크 분리 뜸 매개 단백질 키나아제 RNA 유사 소포체 키나아제(PERK) 신호 경로를 기반으로 CRF 쥐를 대상으로 뜸 실험 연구를 수행하고 있습니다. 본 동물실험을 통해 만성콩팥 치료에 있어 뜸의 잠재적 기전을 선제적으로 규명하고자 합니다. 이 실험에서는 쥐의 허브 케이크 분리 뜸 처리가 핵심 작업입니다.
이전 실험16에서는 사육 케이지의 뚜껑을 사용하여 쥐를 묶고 고정했습니다. 작업자를 보호하기 위해 쥐를 묶기 전에 마취해야 합니다. 그러나 Sprague-Dawley (SD) 쥐는 두려워하고 놀라게하기 쉽습니다. 바인딩 작업은 쥐에게 쉽게 안절부절 못할 수 있습니다. 쥐의 잘못된 자세 고정, 경혈 위치 편차, 실험 시간 증가, 작업자 부상 등의 문제가 자주 발생했습니다.
또한 바인딩이 너무 빡빡하면 쥐에게 쉽게 호흡 곤란을 일으킬 수 있어 동물 복지에 도움이 되지 않습니다. 바인딩이 너무 느슨하면 쥐가 몸부림치고 몸을 움직이기 쉬워 뜸이 떨어져 피부에 화상을 입어 실험 결과에 영향을 미칩니다. 문헌에 따르면, 동물실험은 여전히 제본(16,17,18)을 포함하며, 대부분의 실험 장치는 고정만 가능하여 뜸(moxibustion)19과 같은 다른 기술의 구현을 방해한다. 따라서 실험 장치에서 고정과 뜸의 통합을 달성하는 동시에 동물 복지와 실험 사양 및 효율성을 보장하는 것이 연구자의 초점 영역 중 하나가 되었습니다.
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프로토콜
이 계획은 Yunnan University of Chinese Medicine의 동물 보호 지침을 따르며 Yunnan University of Chinese Medicine의 동물 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 실험동물복지윤리심사번호는 R-062021G098이다.
1. 뜸 실험 플랫폼 장치(그림 1)
참고: 우리는 쥐의 뒷다리와 앞다리 사이의 거리와 행동 및 생리학적 특성을 기반으로 쥐 뜸 실험 플랫폼 장치를 설계하고 제작했습니다.
- 뜸 장치의 크기
- 구타 방지 보드 재료와 나무 보드를 사용하여 장치를 제작하십시오. 전체 크기는 52cm L x 23.5cm W x 64cm H이고 장치의 바닥 면적은 1222cm2입니다.
알림: 뜸 작업은이 높이의 플랫폼에서 수행되며 쥐는 침착하게 유지 될 수 있습니다.
- 구타 방지 보드 재료와 나무 보드를 사용하여 장치를 제작하십시오. 전체 크기는 52cm L x 23.5cm W x 64cm H이고 장치의 바닥 면적은 1222cm2입니다.
- 뜸 장치의 본체
- 구타 방지 보드 재료로 전체 장치의 바닥을 만드십시오.: 베이스 플레이트는 흰색 표면의 52cm L x 23.5cm W입니다. 전체 장치를 안정화하기 위해 바닥이 장치 무게의 큰 부분을 차지하는지 확인하십시오.
- 60cm 높이의 단단한 나무로 장치의 높은 플랫폼을 만드십시오.
알림: 이것은 전체 장치의 메인 프레임으로 전체 장치를 안정화하고 쥐를 서 있는 위치에 배치하는 것을 지원합니다. - 10cm L x 6cm W x 10cm H 크기의 높은 플랫폼 위에 5개의 배치 슬롯을 놓습니다. 인터벌 보드(10cm L x 1.3cm W x 10cm H)를 사용하여 서 있는 위치에 있는 쥐의 앞다리와 뒷다리 사이의 거리에 해당하는 배치 슬롯을 분리합니다.
- 뜸 장치의 구성 요소
- 배치 슬롯 위에 두 개의 스테인리스 스틸 스트립을 고정합니다. 각 고정 스트립은 15개의 구멍이 있는 직각 동일 모서리 강철 막대 40cm L x 1.4cm W(양쪽 너비가 동일함)입니다. 고정 스트립의 세 개의 구멍은 각 슬롯에 해당하며 매화 손잡이 나사와 이동 호스를 고정하는 데 사용됩니다. 인접한 구멍 사이의 거리는 7cm입니다.
- 304 스테인리스 스틸로 만든 단열 네트워크의 양쪽 끝에 조정 가능한 매화 손잡이 나사를 놓고 고정 단열 네트워크와 고정 스트립에 연결합니다.
- 각 배치 슬롯의 상단을 아연 도금 플레이트 프레임으로 둘러싸인 들어 올릴 수 있는 단열 네트워크로 연결합니다. 이 프레임을 양쪽 끝의 매화 손잡이 나사에 연결합니다. 단열 네트워크 중앙에 304 스테인리스 스틸 원형 메쉬 재료를 배치하여 재가 떨어져 쥐를 데우는 것을 방지하고 쥐를 고정하여 뜸을 용이하게 합니다.
- 스테인리스강 이동식 호스(길이 34cm)의 하단을 스테인리스강 고정 스트립으로 고정하고 상단을 파이프 클램프 연결판으로 고정합니다.
알림: 이동식 호스는 서스펜션 뜸 작업 중 뜸 스틱의 위치를 조정하는 데 편리합니다. - 알루미늄 합금으로 만든 튜브 클램프를 사용하여 스테인리스 스틸 이동식 호스와 뜸 클립을 연결합니다.
- 스테인레스 스틸 뜸 클립을 파이프 cl에 연결하십시오.amp 연결 플레이트를 사용하고 뜸을 위해 8-10개의 뜸 스트립을 동시에 고정합니다.
알림: 이동식 호스, 튜브 clamp 연결 플레이트 및 뜸 클립은 쥐의 서스펜션 뜸 작업에 사용할 수 있습니다.
2. 만성 신부전의 쥐 모델 확립
- 24 특정 병원체가없는 (SPF) SD 수컷 쥐 (3-4 주령, 체중 180-200g)를 1 주일 동안 순응. 수유 온도를 18-24 °C로 유지하십시오. 40-70%의 상대 습도; 그리고 12시간 빛과 12시간 어두운 주기. 모든 케이지에 6마리의 동물을 수용하고 물과 공동 사료를 무료로 이용할 수 있습니다.
- CRF의 랫트 모델을 설정합니다. 난수 표에 따라 이 프로토콜에 따라 6마리의 쥐를 대조군으로 선택하고 나머지 18마리를 모델 그룹으로 선택합니다. 대조군(n=6)에는 증류수(10mL∙kg-1∙day-1)와 일반사료를, 모델군(n=18)에는 아데닌 현탁액(150mgkg-1∙day-1)과 고단백 사료를 21일 동안 투여한다.
- 매일 체중, 정신 상태, 식단을 관찰하고 기록하십시오. 21일이 끝나면 안와 혈액 샘플링 전에 모든 동물이 12시간 동안 금식했는지 확인하십시오.
- 궤도 혈액 샘플을 수집합니다.
- 쥐를 이소플루란으로 잠시 마취시킨다. 우세하지 않은 손으로 쥐의 등을 잡고, 엄지와 검지 사이에 쥐의 머리와 얼굴을 대칭으로 잡고, 쥐의 안검의 한쪽을 완전히 노출시킨 다음 이 자세를 유지합니다.
- 주로 사용하는 손으로 엄지와 검지 사이에 3cm 길이의 녹는점 모세혈관을 잡고 모세혈관을 천천히 비틀어 혈액이 튜브 밖으로 천천히 흐를 때까지 45°에서 쥐의 내안각 정맥총으로 들어갑니다.
- 0.5mL 혈액 채취 항응고제 튜브에 150-200μL의 혈액 샘플을 채취하고 모세혈관을 부드럽게 빼내고 솜으로 안와를 누릅니다.
- 항응고제 튜브를 빠르고 철저하게 흔듭니다. 자동 생화학 분석기를 사용하여 혈장 혈청 크레아티닌(Scr) 및 혈액 요소 질소(BUN)를 측정합니다.
참고: Scr 및 BUN의 증가는 CRF 모델이 성공적으로 설정되었음을 나타냅니다. - 쥐를 4 개의 그룹으로 나눕니다 : A : 6 마리의 대조군 쥐, 치료 없음; 18마리의 모델 쥐를 그룹 B: (모델 그룹: 약물 또는 뜸 투여 없음), C: (로사르탄 칼륨 그룹: 2.33 mg∙kg-1∙day-1 투여, 위침 12 G), D: (허브-케이크 분리-뜸 그룹: 허브-케이크 분리-뜸을 양측 Shenshu [B23] 및 양측 Pishu [B20]에 적용)로 나눴다.
3. 치료 단계
참고: 그룹 A 와 B 는 어떠한 치료도 받지 않는 반면, 그룹 C와 D는 24일 동안 하루에 한 번 치료를 받고 12일 치료 후 이틀을 쉬게 됩니다.
- 시술 전의 준비 사항
- 말린 Radix astragali 300g, 말린 Radix Codonopsis 300g, 말린 Radix Rehmanniae Praeparata 200g, 볶은 Shorthorned Epimedium Herb 100g 및 Cornus officinalis 100g을 준비합니다. 이 분말을 섞으십시오.
- Artemisiae Argyi Folium 500g을 중국 전통 의학 분쇄기(34,000회전/분 속도)에 5분 동안 넣고 분쇄 분말을 접시에 옮긴 다음 600 메쉬 체로 걸러냅니다. 두 번의 스크리닝 라운드 후 굵은 뜸을 제거하고 미세한 뜸을 백에 옮겨 사용합니다(그림 2).
- 미세한 뜸을 금형에 채워 뜸쑥을 준비하여 지름 0.5cm, 높이 0.5cm의 작은 뜸 콘을 만듭니다. 또는 양손의 엄지와 검지 사이에 뜸을 말락사하여 뜸 원뿔을 형성합니다(그림 3A).
- 5mL 주사기를 0.5cm 두께의 원형 플라스틱 링 4개로 자르고 동일한 수평면(한 변의 길이가 26mm인 정사각형 평면의 모서리, 그림 3D)에 4개의 링을 붙여서 허브 케이크 몰드를 준비합니다.
- 분말과 물을 1:1 비율로 섞고 혼합물을 허브 케이크 틀에 채워 약 케이크를 만듭니다(그림 3E). 약싹은 틀에 넣어 건조한 곳에 보관하세요.
- 경혈 표시
- 다음과 같이 경혈을 찾습니다 : Shenshu (B23), 두 번째 요추의 양쪽, 양쪽에 하나의 경혈; Pishu (B20), 양쪽에 있는 11번째 흉추의 늑간, 양쪽에 하나의 경혈(그림 4).
참고: 경혈의 위치는 Manual of Acupuncture for Experimental Animals20을 참조하십시오. - 주로 사용하지 않는 손에 두꺼운 고무 장갑을 끼어 쥐의 머리를 부드럽게 덮고, 주로 사용하는 손으로 쥐의 등에 있는 경혈을 찾은 다음 색상 마커로 경혈을 표시합니다.
- 다음과 같이 경혈을 찾습니다 : Shenshu (B23), 두 번째 요추의 양쪽, 양쪽에 하나의 경혈; Pishu (B20), 양쪽에 있는 11번째 흉추의 늑간, 양쪽에 하나의 경혈(그림 4).
- 쥐 배치
- 두꺼운 고무 장갑을 착용하십시오. 주로 사용하는 손의 엄지와 다른 네 손가락을 사용하여 쥐의 등과 목의 피부를 약간 꼬집습니다. 자주 사용하지 않는 손의 엄지와 검지를 사용하여 쥐의 꼬리를 부드럽게 꼬집습니다.
- 쥐를 들어 올리고 쥐의 머리를 특수 뜸 플랫폼의 배치 슬롯에 맞춘 다음 쥐를 천천히 앞으로 움직입니다. 쥐의 앞발이 배치 슬롯의 가장자리에 가깝고 쥐가 슬롯으로 기어들어가는지 확인합니다.
알림: 시작하기 전에 전체 뜸 플랫폼을 소독하십시오. 쥐를 잡기 전에 쥐의 등을 부드럽게 만지거나 말을 걸어 진정시킵니다. 단열망의 높이를 낮은 위치(사용하지 않을 때)에서 쥐가 들어가기 편리한 가장 높은 위치로 조정하십시오.
- 쥐 고정
- 양손의 엄지와 검지를 단열망 양쪽 끝에 있는 매화 나사의 나사에 놓습니다. 매화 나사를 풀어 단열망을 쥐의 등에 가깝지만 압박을 일으키지 않는 적절한 위치로 내린 다음 나사를 조입니다.
- 뜸쑥 콘과 약용 케이크를 놓습니다.
- 쥐의 경혈 표시에 따라 Pishu (B20)와 Shenshu (B23)의 경혈에 해당하는 단열망에 약 케이크가 들어있는 준비된 곰팡이를 놓습니다. 4개의 경혈이 있으며 각 경혈은 약 케이크에 해당합니다.
- 약용 케이크에 뜸쑥 콘을 부드럽고 꾸준히 놓습니다.
- 뜸
- 라이터로 뜸 콘에 불을 붙이고 뜸 콘이 타버리고 잔류 열이 자연적으로 소멸될 때까지 뜸을 시작합니다(젖은 약용 케이크가 건조됨).
- 탄 뜸 콘을 같은 경혈에 새 뜸 콘과 약용 케이크로 교체하고 뜸 콘이 타버리고 약용 케이크가 마를 때까지 뜸을 계속합니다. 각 경혈에서 총 5회 반복합니다.
알림: 들어 올릴 수 있는 단열 네트워크를 청소하고 소독한 후 새 뜸 콘과 약용 케이크로 교체하십시오. - 각 경혈에서 5개의 뜸 콘을 태운 후 물이 포함된 폐기물 탱크에서 뜸쑥 콘과 약용 케이크를 끕니다.
참고: 각 경혈은 5개의 뜸 원뿔을 받습니다. 각 Moxa 콘은 타버린 후 교체할 수 있습니다.
- 쥐를 우리로 돌려보내기
- 빈 사육 케이지를 쥐 앞에, 뜸 플랫폼의 배치 슬롯 하단에 가깝게 놓고 가만히 유지하십시오. 쥐가 배치 슬롯에서 먹이 케이지로 이동할 수 있도록 쥐의 엉덩이를 가볍게 두드려줍니다. 쥐가 들어간 후 새장을 내려 놓으십시오. 주로 사용하는 손을 사용하여 쥐의 등에 있는 털을 잡고 쥐를 단단히 잡은 다음 추가 관찰을 위해 바닥에 놓습니다.
- 쥐가 숨이 가쁜지, 기분이 안정적인지, 피부 표면이 화상을 입었는지 관찰하십시오. 이상이 없으면 다시 케이지에 넣으십시오. 화상을 입은 경우 즉시 피부 표면에 데친 연고를 바르고 단일 케이지에 넣으십시오.
4. 샘플링 단계
- 24일간의 치료 후, 샘플링 전에 쥐가 12시간의 금식을 할 수 있도록 준비시킵니다.
- 가스 마취 기계에 이소플루란을 붓고 2-3% 이소플루란으로 쥐를 마취합니다. 2-3분 후 반사 신경이 없는지 확인하고(수술용 핀셋으로 꼬리를 꼬집어 반사가 없는지 확인) 심장 박동이 계속 존재하는지 확인하고 1-1.5% 이소플루란으로 유지 마취로 전환합니다.
- 준복부 대동맥에 바늘을 삽입하여 복부 대동맥에서 5mL의 혈액을 채취합니다. 혈액을 2시간 동안 그대로 두고 2490× g 에서 4°C에서 10분 동안 원심분리한 다음 추가 분석을 위해 혈청 상층액을 1.5mL 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
- 장기간 쥐를 깊이 마취하고 유지 마취 하에 복부 대동맥에서 혈액을 채취합니다. 또한, 자궁 경부 탈구로 쥐를 안락사시킵니다.
- 수술용 가위와 핀셋으로 양측 신장 근막과 지방을 제거하고 0.9% 생리식염수로 헹구어 양쪽 신장에서 조직을 채취합니다. 왼쪽과 오른쪽 신장의 무게를 측정하고 체중과 형태를 기록합니다.
- 왼쪽 신장을 6부분으로 자르고 4% 파라포름알데히드가 함유된 50mL 원심분리 튜브에 넣어 담그고, 고정하고, 보존하여 신장 조직을 보존합니다. 오른쪽 콩팥을 세로 방향으로 칼을 사용하고 가로 방향으로 두 개의 칼을 사용하여 여섯 조각으로 자릅니다. 이 조각을 6개의 2mL 극저온튜브에 넣고 즉시 액체 질소에 넣습니다. 보관을 위해 -80 °C 냉동고로 옮깁니다.
5. 탐지 단계
- 단백질 추출, 겔 전기영동, 막 전달, 차단, 1차 항체 배양, 2차 항체, 화학발광, 현상, 고정 및 필름 스캐닝에 적합한 크기의 오른쪽 신장 조직을 사용합니다.
- 겔 이미지 데이터 분석 시스템(예: Image-Pro Plus 6.0)을 사용하여 밴드의 그레이 값을 분석하고 각 단백질의 함량을 계산합니다.
- 왼쪽 신장 조직을 탈수, 투명화, 파라핀 삽입, 절편(두께 4μm), 헤마톡실린-에오신 및 Masson의 삼색 염색을 실시하고 200배 확대의 광학 현미경으로 신장 조직의 병리학적 변화21 을 관찰합니다.
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결과
신장 형태학
그림 5에서 볼 수 있듯이 다른 그룹에 비해 그룹 D(허브-케이크-분리-뜸 그룹)의 신장의 크기, 색상 및 질감은 정상 그룹에 더 가까웠습니다. 모델과 로사르탄 칼륨 그룹의 신장 형태는 서로 다른 정도의 백색 섬유증을 보였다.
신장 무게
그림 6 은 그룹 A의 왼쪽 신장 무게가 그룹 B의 체중과 유의하게 다르다는 것을 보여주며, 이는 CRF 모델이 성공적이었음을 나타냅니다. D 군의 좌측 신장 체중은 A군의 체중에 더 가까웠고, B 군과 C 군의 좌측 신장 체중은 D군의 체중과 유의한 차이를 보였다.
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토론
임상적으로 침 치료와 뜸 치료는 환자가 침착하고 편안한 태도를 취하고, 과도한 분노와 배고픔을 피하고, '평화'를 강조해야 합니다. 그러나 현재의 침 및 뜸 실험은 여전히 동물을 묶는다는 전제에 기초하고 있으며, 이는 실험의 원래 의도에 반할 뿐만 아니라 임상 실습에도 부합하지 않습니다. 동물을 묶어 동물을 겁주고 화나게 만드는 것은 실험 동물의 아드레날린과 기타 호르몬을 급격히 증가시켜 실험 결과에 영향을 미칩니다22. 침술 및 뜸 동물의 실험 운영 중에는 실험의 정확성을 보장하고 동물의 복지를 보호하기 위해 이러한 문제를 시급히 해결해야 합니다. 뜸은 쥐에게 더 큰 자극 효과가 있으며, 이는 사나운 기질과 결합되어 실험 중에 쥐를 안전하고 효과적으로 고정할 수 없는 경우 작업자가 부상을 입거나 질병의 위험을 증가시키며 실험 데이터의 정확성에 영향을 미칠 수 있습니다. 치료 시간이 길고 치료 과정이 길기 때문에 허브 케이크 분리 뜸 요법은 장기적인 뜸을 견딜 수 있는 고정 장치가 필요...
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공개 사항
저자는 이해 상충이 없다고 선언합니다. 쥐뜸 실험용 플랫폼 장치의 특허 번호는 ZL202320880924.X입니다.
감사의 글
이 논문에 대한 엄격한 지도와 지원을 아끼지 않은 Huang 교수님과 Miss Cui 교수님께 감사드립니다. 이 연구는 1. 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC), 82160938, "TGF-β1에 의해 매개되는 ERK 및 Smad 신호 경로의 상호 작용 효과에서 케이크 분리 뜸을 동반한 신장 간질 섬유증에 대한 메커니즘 연구 탐색"; 2. 윈난성 위생건강위원회 "2020 고위급 중의학 예비 인재"인큐베이션 프로젝트 (Yunwei TCM Development [2021], No.1); 3. 윈난성 과학 기술부 - 한의학 응용 기초 연구 공동 특별 기금 (No.2019FF002-022, No.202101AZ70001-286, No.202301AZ070001-030); 4. 윈난성 혁신팀: 침술과 투이나로 뇌병증 예방 및 치료(2023).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 0.5mL 헤파린 리튬 생화학 튜브 | Shijiazhuang Kangweishi Medical Equipment Co., LTD | 220518 | 혈액 채취 |
| 0.9% 생리식염수 | Kunming Nanjiang Pharmaceutical Co., LTD | / | 린스 |
| 1.5mL Eppendorf 튜브 | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 12100024 | 서브패키지 |
| 2mL 동결 보존 튜브 | Baroque Biotechnology Co., LTD | 88-0151 | 포장된 신장 |
| 4 ° C 냉장고 | Haier Group Co. LTD | BCD-236WDGL | Store |
| 5 mL 주사기 | Sichuan New century Medical polymer products Co., LTD | 20211115 | Gavage |
| 50 mL 원심분리기 튜브 | 베이징 랑게케 생명공학 주식회사 | CT-002-50A | 패키지 신장 |
| 12G 개비지 바늘 | 베이징 Zhongke Hengtian Technology Co., Ltd. | 12#55mm | 게이지 |
| 96 웰 플레이트 | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 11510 | 단백질 농도 측정 |
| -80 ° C freezer | Thermo Fisher Scientific | 991 | Store |
| Adenine | Beijing Boaotuo Technology Co., LTD | A0607 | 성형 약물 |
| BCA 개발자 | Biyuntian Biological Engineering Co., LTD | P0010 | 단백질 농도 측정 |
| BCL-2 단백질 항체 시약 | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab196495 | Western Blot |
| Caspase-3 단백질 항체 시약 | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab184787 | Western Blot |
| Chemiluminescence 이미징 시스템 | Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD | 100240073 | 단백질 밴딩 이미징 |
| 한약 분말 | 윈난 중국 의과 대학의 두 번째 제휴 병원 | / | 치료 |
| 직접 부하 색상 Prestained 마커 | Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar) | M221 | 웨스턴 블롯 |
| 일회용 혈액 채취 바늘 | Liuyang Sanli 의료 과학 기술 개발 Co., LTD | YZB/ 국가 0411-2010 | 혈액 샘플링 |
| 일회용 인간 정맥혈 샘플 채취 용기 | Liuyang Sanli 의료 과학 기술 개발 Co., LTD | 20210901 | 혈액 샘플링 |
| DK-30 자동 제빙기 | Henan Brothers instrument equipment Co., LTD | SHDX0023 | 제빙 |
| ECL 발광 기판 키트 | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL520B | 노출 필름의 잠재 이미지를 가시 이미지로 변환 |
| 전자 저울 | Shanghai Ran Hao Electronics Co., LTD | JCS-31002C | 쥐의 체중과 신장 무게를 측정 |
| 했습니다.얼어붙은 마이크로톰 | Thermo Fisher Scientific | HM525 NX | Microtome |
| 전자동 생화학 분석기 | Tianjin Micro nano core Technology Co., LTD | PV2112001Z02410305 | 신장 기능 검사 |
| 가스 마취 시스템 | Zhongshi Technology Co., Ltd | ZS-MV-1 | 마취 |
| 글리신 | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | Cat#G8200 | 러닝 버퍼, 웨스턴 트랜스퍼 버퍼 |
| HE 염색 시약 | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1120 | 얼룩 |
| 고단백 사료 | Jiangsu Synergetics Biological Engineering Co., LTD | XT19008 | Feeding |
| Intelligent laboratory 초순수 기계 | 충칭 huachuag 수처리 공학 co., LTD | 15L | 여과 |
| 내부 참조 β-actin | Jiangsu Qinke Biological Research Co., LTD | AF7018 | 웨스턴 블롯 |
| Isoflurane | Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd | 20220701 | 마취 |
| 액체 질소 | 쿤밍 보타이 드라이 아이스 판매 Co., LTD | / | 신장 조직 동결 |
| Losartan 칼륨 정제 | Merck Sharp & Dohme (China) Investment Co., LTD | J20180054 | 저 |
| 온 고속 티슈 그라인더 | Wuhan Servicebio technology CO., LTD | SKZ3F20200191 | 티슈 연삭 |
| Maason 염색 키트 | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1340 | 염색 |
| 메탄올 | Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd | 20220519 | Western Transfer Buffer |
| Mini-PROTEAN Tetra | Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd | 552BR 233193 | 전기영동 |
| Moxa | The Second Affiliated Hospital of Yunnan University of Chinese Medicine | / | Cure |
| Multiskan Spectrum Microplate Spectrophotometer | TECAN | Spark | 조직 단백질의 흡광도 및 농도가 감지되었습니다 |
| 위 | Zhangjiagang city Jinfeng 사슴 칼 절단 공장 | 201118 | 피부 절단 |
| Paraformaldehyde | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL539A | 고정 조직 |
| PERK 단백질 항체 시약 | Shanghai Pumai Biotechnology Co., LTD (CST China Agent) | 3192 | 웨스턴 블롯 |
| 포지티브 형광 현미경 | Carl Zeiss Suzhou Co., Ltd. | 5446000456 | 캡처 사진 |
| 조립식 접착제 | Derun Cheng (Beijing) Biological Co., Ltd (ACE China Agent) | B230418 | Western Blot |
| ProteinFind Goat Anti-Rabbit LgG (H + L), HRP Conjugate | Shanghai Dinran electronic Technology Co., Ltd (TRAN) | HS101 | Western Blot |
| pulverizer | Hefei Rongzhida small household appliances Co., LTD | RS-FS1401 | Crushed Chinese 의학 |
| PVDF 멤브레인 | MerckMillipore Corporation | IPVH00010 | 웨스턴 블롯 |
| 냉장 원심 분리기 | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD | MIKRO 220R | 원심 분리기 |
| RIPA 용해물 | Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio) | R0010 | 용해 조직 |
| 샘플링 모세관 | Jiangsu Kangjianhua Medical Supplies Co., LTD | 20160157 | 내부 canthus |
| Scald 연고 (Zilian 연고) | 의 혈액윈난성 전통 중국 의학 병원 | / | 뜸으로 인한 화상 치료에 사용 |
| 탈지 분유 | Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX) | 1172GR500 | Western 차단 버퍼 |
| 수술 블레이드 | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | JOBO10 | 절개 신장 조직 |
| 수술 칼 핸들 | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | J11010 | 마운팅 블레이드 |
| TS-200 오비탈 셰이커 | Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd. | TS-8S | 젤 고정 |
| 트윈 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| 핀셋 | Shanghai Medical Equipment Co., LTD | JD1050 | 뜸쑥을 집어 들다 |
| 동물용 의약품*마이크로 코어 신장 기능 검사 디스크 | 천진 마이크로 나노 코어 기술 Co., LTD | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | 신장 기능 검사 |
참고문헌
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