여기에서는 골다공증 모델 쥐의 중재에 Lingnan Fire-Needle 요법을 적용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.
방법 논문
* These authors contributed equally
여기에서는 골다공증 모델 쥐의 중재에 Lingnan Fire-Needle 요법을 적용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.
filiform 바늘 치료와 비교하면 불 바늘 치료는 바늘의 자극과 열에 의한 온열 작용이 모두 있기 때문에 일부 만성 질환이나 난치병에 예상치 못한 효과를 발휘합니다. 골다공증(OP)은 폐경 후 여성과 중년 및 고령 남성에서 발병률이 높으며 치료 주기가 깁니다. 중국 전통 의학(TCM)에 따르면 링난 불 바늘 요법은 골다공증 치료에 대한 잠재력을 보여주었습니다. 그러나 널리 사용되기까지는 아직 갈 길이 멉니다. 이 기사는 쥐에 대한 OP의 개입에 Lingnan 화염 바늘 요법의 적용에 중점을 둡니다. 바늘 도구 선택, 경혈 선택, 쥐의 몸 위치 및 고정 방법을 다룹니다. 또한 불 바늘로 바늘을 꿰매는 동안과 후에 취해야 할 단계와 예방 조치를 간략하게 설명합니다. 실험은 정상 그룹, 모델 그룹, 화염 바늘 그룹의 세 그룹으로 수행되었으며 각 그룹에는 10 마리의 쥐가 포함되었습니다. 불-바늘 그룹의 쥐는 6 세션 동안 불-바늘 중재로 치료되었습니다. 중재 기간이 끝난 후, 대퇴골 표본을 채취하고 마이크로 CT 스캔을 수행했습니다. 결과는 파이어 니들링이 OP 쥐의 뼈 형태와 미네랄 밀도를 향상시킬 수 있음을 시사합니다. 이 정보는 불-바늘 치료에 대한 기초 연구를 수행하기 위한 방법론적 기초가 될 수 있습니다.
한의학은 기후와 환경과 같은 요인이 사람의 체격에 영향을 미칠 수 있으며, 이는 다시 질병의 발생과 발병에 영향을 미칠 수 있다고 믿습니다. 주로 광둥성, 광시성, 하이난 섬을 포함하는 중국의 링난 지역은 열대 계절풍 기후 지역에 위치하고 있습니다. 결과적으로, 이 지역에서 오랫동안 살았던 사람들은 일종의 비장 결핍증에 걸리기 쉽다. 경우에 따라서는 신장과 간으로 전이되어 골다공증의 유병률을 유발하기도 한다1. 비장(脾臟)과 위(胃)는 기(氣)와 혈액(腺)의 생화학(腸語)의 원천이 되는 물과 곡물을 운반하고 흡수하는 기능을 하며, 간(肝)은 골수를 유지하는 데 도움을 줍니다. 따라서 뼈의 영양은 비장, 위, 간의 공급에 의존합니다. 한의학에서 신장은 골수를 생성하고 뼈를 강화하는 능력이 있으며 그 생명력은 뼈의 강도와 기능에 직접적인 영향을 미칩니다. 따라서 신장 결핍은 골다공증과 직접적인 관련이 있습니다. TCM에 따르면 간(Gan)-신장(Shen) 결핍과 본질 부족(Jing)이 근본적인 원인입니다. 어떤 경우에는 비장(Pi)과 위(Wei) 결핍 또는 둘의 불균형으로 인해 영양실조가 발생할 수 있습니다. 즉, 간(Gan), 신장(Shen), 비장(Pi), 위(Wei)의 결핍이 근본 원인이며, 외부의 기(Xie qi)는 경락을 막고 뼈와 근육을 손상시킵니다. 세계보건기구(WHO)에 따르면, OP는 낮은 골량과 조직 악화를 특징으로 하는 의학적 상태입니다2 이는 노인에게 심각한 우려 사항입니다. 골다공증의 예방과 치료에는 적절한 중재를 선택하는 것이 중요합니다.
현대의 침술사들은 링난의 기후와 링난족의 신체적 특징을 결합하여 독특한 링난의 불침 요법을 개발하였다3. 파이어 니들 테라피는 특수 바늘을 빨갛게 태워 인체의 특정 부위나 경혈을 빠르게 찔러 다양한 질병을 치료하는 일종의 치료 방법입니다. 이 방법은 피부병, 근골격계 및 관절 질환, 신경 질환 및 기타 전신 질환에 널리 사용되며 우수한 효능을 보여줍니다4. 소방 바늘을 이용한 골다공증 치료는 오랫동안 클리닉에서 사용되어 왔으며 한의학의 단순한 침술이나 경구 투여보다 치료 효과가 우수합니다 5,6,7. Lingnan 불-바늘 요법은 침술, 삼날 바늘 및 흉터 뜸을 통합합니다. 그것은 신장을 따뜻하게하면서 경락의 기와 혈액 순환을 향상시킬 수 있습니다. 이 치료법은 한의학에서 OP의 발병에 기여하는 혈액 정체와 신장 (Shen) 결핍을 모두 해결할 수 있습니다. 또한 비용이 저렴하고 효과가 빠르며 치료 기간이 짧고 안전하다는 장점이 있습니다. 그러나 그 메커니즘에 대한 연구가 부족합니다. 본 논문은 골다공증 모델 쥐를 대상으로 한 Lingnan Fire-Needle의 구체적인 절차를 소개하고 관련 기초 연구를 수행하기 위한 방법론적 기초를 제공합니다.
모든 실험은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 실험동물 관리 및 사용 가이드(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)에 따라 수행되었으며, 후베이성 중의학 대학(Hubei University of TCM)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 무게가 220 ± 20 g인 성인 암컷 Sprague-Dawley (SD) 쥐가 시험에 사용되었다. 모든 쥐는 23± 1°C 및 40%-50% 습도에서 12시간 밝음/어두운 주기로 유지되었으며 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었습니다.
1. 수술 전 준비
2. 침 치료
3. 침 치료 후 관리
4. 데이터 수집 및 분석
표 1의 데이터는 정상군과 비교하여 모델군에서 섬유주골의 두께(Tb.Th), 섬유주골의 수(Tb.N) 및 섬유주골의 정적 매개변수 골부피율(BV/TV)이 모두 유의하게 감소하였고(p <0.05), 섬유주골의 분리(Tb.Sp)가 증가하였음을 나타낸다(p <0.05); 쥐의 대퇴골 골단(trabecular epiphysis)의 섬유주 뼈가 풍부한 영역에서 섬유주 뼈의 뼈 구조가 탈골다공증 후 현저히 파괴되었음을 나타내며, 이는 명백한 손상을 나타냅니다.
모델군과 비교했을 때, 화재-침술군에서 대퇴골의 섬유주 두께, 섬유주 수, 섬유주 정적 매개변수 골부피 분율은 유의하게 증가하였고(p <0.05), 섬유주 분리는 감소하였다(p <0.05). 이는 화염 바늘 요법이 뼈 제거에 의해 유발된 골다공증 모델 쥐에서 대퇴골의 해면 구조 손상을 개선할 수 있음을 시사했습니다.
그림 4 는 각 그룹에서 쥐 뼈 해면 매트릭스의 3차원 구조 이미지를 보여줍니다. 그림 4A 는 정상 그룹, 그림 4B 는 모델 그룹, 그림 4C 는 화염 바늘 그룹입니다. 그림에서 알 수 있듯이 정상군에 비해 모델군에서 대퇴골 해면기질의 중심부와 주변부까지 많은 수의 섬유주가 소실되었고, 하부에 많은 수의 충치가 나타났다. 뼈 구조의 전체적인 연속성이 손상되어 자유 뼈 섬유주(free bone trabeculae)의 일부가 나타났다. 모델군과 비교했을 때, 화염침군에서 대퇴골의 해면골의 중심부와 주변부의 섬유주(trabeculae)의 두께가 크게 증가하였으며, 전체적인 골구조의 연속성이 개선되었다. 이는 불의 바늘이 난소 절제술에 의한 골다공증의 쥐 모델에서 대퇴골의 해면골의 섬유주 구조를 보호할 수 있음을 시사합니다.

그림 1 : 쥐 고정 방법 : 코트로 묶인 쥐를 스윙합니다. 쥐에게 쥐 코트를 입힌 후, 두 개의 S 갈고리로 쥐 코트를 걸어 쥐를 고정하고 공중에 매달아 놓습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2: Lingnan Fire-Needle. (A) 바늘 도구. 0.40mm x 13mm 크기의 미세한 불 바늘을 선택하십시오. (B) 불타는 바늘. 알코올에 적신 면봉에 바늘 끝과 바늘 본체를 놓고 가열합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3 : 4 개의 경혈에서 화염 바늘 침술 절차. (A) Pishu (BL 20) : 12번째 흉추의 아래쪽 두 갈비뼈 사이에 위치, 중간 등쪽 선에서 6mm (B) Shenshu (BL 23) : 두 번째 요추의 아래쪽 두 쪽에 위치, 중간 등쪽 선에서 6mm (C) Zusanli (ST 36) : 무릎의 뒤쪽과 측면에 위치하며 비골의 작은 머리에서 약 3mm 아래에 있습니다. (D) Sanyinjiao (SP 6) : 뒷다리의 안쪽 발목 끝에서 약 10mm 직선으로 위치합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4: 다양한 그룹의 쥐의 대퇴골 원위부의 해면골의 3차원 구조 비교. (A) 정규 그룹. (B) 모델 그룹. (C) 불-바늘 그룹. 스케일 바: 500 μm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 그룹 | Tb.N(mm) | Tb.Sp (밀리미터) | Tb.Th (mm) | BV/텔레비젼 |
| 정규 그룹 | 3.29±0.47 | 0.23±0.06 | 0.12±0.03 | 0.39±0.14 |
| 모델 그룹 | 0.96±0.78* | 0.66±0.44* | 0.09±0.01* | 0.17±0.11* |
| 불-바늘 그룹 | 2.73±0.76Δ | 0.33±0.20Δ | 0.12±0.02Δ | 0.33±0.16Δ |
표 1: 대퇴 골다공증의 미세 구조 지표에 대한 화재 니들링 효과. 데이터는 평균 ± SD, n= 10을 보여줍니다. 정규 그룹과 비교하기 위해 *p<0.05; 모델 그룹 Δp<0.05로 비교를 수행했습니다.
Lingnan Fire Needle 요법은 깊은 역사적 배경을 가지고 있습니다. 불 바늘과 바늘 방법에 대한 기록은 Huangdi Neijing으로 거슬러 올라갈 수 있습니다. 현대의 침술사 Situ Bell과 Zhang Jiawei는 Lingnan의 기후와 사람들의 신체적 특성을 결합하여 Lingnan Fire-Needle 요법을 만들었습니다3. Lin Guohua는 Lingnan Fire-Needle 요법을 온난화, 준설, 토닝, 청소 및 제거로 요약했으며 온난화를 본질로 삼았습니다24.
화재 바늘을 사용하는 첫 번째 단계는 적절한 유형의 바늘을 선택하는 것입니다. 화재 바늘은 세 가지 주요 범주로 분류 할 수 있습니다 : 단일 머리, 다중 머리 및 납작 머리. 단일 머리 화재 바늘은 임상 실습에서 널리 사용되며 일반적으로 다중 시스템 질병에 사용됩니다. 다중 헤드 화재 바늘은 주로 피부 질환 치료에 사용되는 3 개의 미세 또는 3 개의 중간 굵은 화재 바늘을 삼각형 모양으로 결합합니다. 납작 머리 화재 바늘은 일반적으로 피부에 다양한 종류의 두더지, 사마귀 및 기타 과도한 유기체를 제거하는 데 사용됩니다25,26. 이 연구는 응용 분야가 더 넓고 기능이 더 많아 쥐의 크기에 적합한 가는 바늘을 쉽게 얻을 수 있기 때문에 단일 머리 바늘을 선택했습니다.
둘째, 불 바늘 요법의 올바른 사용은 바늘 소작에 대한 중요한 기준이 필요합니다. 연구원27 은 바늘을 특정 온도로 소작하는 것이 효과를 위해 필요하다는 것을 발견했습니다. 자극은 온도가 충분히 높지 않은 경우 관련 병리학적 변화를 완화하지 못할 수 있습니다. 따라서 원하는 치료 효과를 얻으려면 불침 치료에 사용되는 바늘을 붉거나 밝은 흰색으로 태운 다음 선택한 경혈 또는 부분에 빠르게 삽입해야 합니다. 또한, 불의 바늘로 바늘을 태우는 기준은 불 바늘 기구, 바늘 부위, 치료하는 질병에 따라 다르기 때문에 표 2에서 참조 할 수있는 소방 바늘로 바늘을 태우는 기준을 종합적으로 정리했습니다. 본 연구에서는 다지점 자극을 위해 다중 헤드 화재 바늘 대신 단일 머리 화재 바늘을 사용했습니다. 여러 개의 바늘이 너무 가까이 있으면 각 바늘이 균일하게 소작될 수 없기 때문입니다.
| 바늘 도구 | 바늘 연소 정도 | 표시 |
| 단일 머리 화재 바늘 | 붉은색. | 뼈 및 관절 질환 및 통증 질환 |
| 멀티 헤드 파이어 니들 | 바늘 끝이 약간 뜨겁습니다. | 여드름과 같은 피부 질환 |
| 납작 머리 화재 바늘 | 밝은 흰색. 바늘의 손잡이가 약간 뜨겁습니다. | 선모사마귀와 같은 신생물 |
표 2: 바늘을 태우는 기준.
화염 바늘 삽입 각도에 관해서는 일반적으로 수직입니다. 바늘을 얼마나 깊이 삽입해야 하는지에 대해서는 아직 정해진 기준이 없습니다. 그러나 일반적으로 근육이 많고 피부가 두꺼운 부위에는 깊은 삽입이 더 좋고, 피부와 근육이 얇은 부위에는 얕은 삽입이 더 적합하다고 제안됩니다. 또한 이 분야의 많은 전문가들은 불 니들링의 깊이가 선모 바늘 니들링과 같아야 한다고 생각합니다28. 한 연구에 따르면 경혈을 바늘로 찔 때는 불의 바늘의 깊이가 선모 바늘보다 얕아야 하고, 통증점을 바늘로 찔 때는 선조 바늘보다 약간 깊어야 한다고 합니다22. 따라서 소방용 바늘의 실제 적용에 관해서는 먼저 filiform 바늘의 표준을 참조한 다음 임상 경험을 바탕으로 침의 깊이를 결정하는 것이 좋습니다.
링난(Lingnan)의 전문가 192명의 집단적 의견에 따르면, 고위험군에서 OP의 주요 원인은 2차 혈액 정체로 이어지는 신장(Shen) 결핍입니다. 따라서 OP의 치료는 신장(Shen) 결핍과 혈액 정체를 동시에 해결하는 것을 포함한다29. 현재 침술은 OP에 널리 사용되는 치료법입니다. 침 치료의 종류에는 filiform needle therapy, moxibustion, warm acupuncture, electro-acupuncture (EA), thread-embedding therapy, acupoint injection, acupuncture와 medicine의 조합, 침술과 뜸의 조합이 있습니다. 이 중 임상에서 가장 많이 사용되는 치료법은 실끼워넣기요법, 뜸, 침술과 의학의 병용요법30. 임상적으로 화염침 요법은 운동계, 신경계, 내분비계, 소화계, 산부인과 등 여러 장기계를 대상으로 하는 137종의 다양한 질환에 널리 사용되고 있으며, 그 중 가장 많이 적용되는 것은 운동 질환이다31. Lingnan Fire-Needle 요법은 침술, 삼날 바늘 및 흉터 뜸의 이점을 결합한 치료법입니다. 그것은 경락에 있는 기와 혈액 순환을 개량하고 신장 (Shen)를 따뜻하게 할 수 있습니다. 이 치료법은 한의학에서 OP의 발병에 기여하는 혈액 정체와 신장 (Shen) 결핍을 모두 해결할 수 있습니다. 또한 비용이 저렴하고 효과가 빠르며 시술 기간이 짧고 안전하다는 장점이 있습니다. 임상시험에 따르면 침 치료와 침 치료를 병행하는 것이 단순한 침 치료나 약물 치료보다 OP 치료에 더 효과적이다 5,6. 관절통은 OP의 전형적인 증상 중 하나이며, 관절통의 치료에 있어서는 불-침 요법의 효능이 filiform needle 요법보다 유의하게 우수하다는 것이 확인되었다32.
뼈 강도는 뼈 밀도, 단위 부피당 뼈의 양에 따라 달라집니다. 골량의 구성 요소인 골섬유주(bone trabeculae)의 수와 분포는 골량에 큰 영향을 미치며, 결과적으로 골밀도에 영향을 미칩니다. 뼈 부피 분율(Bone Volume Fraction)은 조직 부피 단위당 뼈 부피의 백분율을 나타내며 골량23에 대한 필수 기준입니다. 골격계의 일부인 해면골의 주요 기능은 움직임을 지원하고 촉진하는 것입니다. 그러나 크기를 늘리면 골밀도가 감소하여 뼈의 강도가 감소할 수 있습니다. 해면골의 골격 구조는 해면질이며 섬유주(trabeculae)로 구성되어 있습니다. 따라서 해면골의 구조는 섬유주(trabeculae)에 의해 결정됩니다. 해면골의 강도를 유지하기 위해서는 충분한 섬유주가 골격으로 존재하는지 확인하는 것이 중요합니다. 둘째, 뼈(33)의 구조적 안정성을 보장하기 위해 섬유주 사이에 상대적으로 적절한 수의 연결을 유지하는 것이 필요하다. 섬유주가 일정량의 하중을 지탱할 수 있으려면 두께가 유지되어야 합니다. 해면골의 구조는 존재하는 섬유주(trabeculae)의 수, 연결성 및 두께(34)에 기초하여 평가된다. 해면골의 구조적 매개변수를 비교한 후(표 1), 우리의 연구 결과는 쥐의 모델 그룹과 정상 그룹 간에 유의미한 차이를 발견했다. 대퇴골의 섬유주 수, 섬유주 두께 및 대퇴골의 뼈 부피 분율은 감소한 반면, 섬유주 분리는 모델 그룹에서 증가했습니다. 이러한 발견은 해면골 구조가 모델 그룹을 변화시켜 골다공증 또는 다른 뼈 질환으로 이어질 수 있음을 시사합니다. 해면골의 3차원 구조 이미지를 바탕으로 중간 부분에는 섬유주가 부족하고, 주변부 상부의 섬유주도 절반 이상이 결실된 것이 관찰되었습니다. 이는 난소 절제술 후 쥐의 대퇴골의 뼈 구조 무결성이 손상되었음을 나타냅니다. 모델 그룹과 비교했을 때, 화염 바늘 그룹의 대퇴골은 섬유주, 섬유주 두께, 골부피 분율이 증가하고 섬유주 분리가 감소한 것으로 나타났습니다. 또한, 해면골의 3차원 구조도를 고려했을 때, 불침군의 중심 구멍이 줄어들고 말초 뼈 섬유주가 완전하다는 것이 관찰되었습니다(그림 4). 이 연구는 화염 바늘 요법이 난소 절제술을 받은 쥐에서 대퇴골의 해골 구조에 대한 손상을 효과적으로 예방하고 제어한다는 것을 보여줍니다.
본 연구를 위해 선정된 난소절제술 모델 쥐의 한계는 다음과 같다. 에스트로겐 감소는 원발성 OP35의 위험 요인 중 하나입니다. 이러한 이유로 난소 절제술은 OP 랫트 모델 8,9,10을 확립하기 위한 신뢰할 수 있는 방법입니다. 또한 SD 쥐는 쉽게 접근할 수 있을 뿐만 아니라 편안한 먹이 조건으로 유순합니다. 결과적으로, 우리는 처음에 이 모델을 조사하고 경혈을 자극하기 위해 가는 불 바늘을 사용하는 것을 권장했습니다. 우리의 장기 계획은 노화 쥐와 같은 다른 모델에서 OP를 완화하는 데 있어 화염 바늘 요법의 효과를 추가로 검증하여 연구 범위를 확장하는 것입니다. 마지막으로, 표 3은 골다공증 모델 쥐에 대한 침 단독요법의 효능과 그 작용기전을 요약한 것이다. 우리는 다가오는 미래에 가능한 메커니즘에 대해 보다 심층적인 조사를 수행할 계획입니다 36,37,38,39,40,41,42.
| 결과 지표 | 작용 기전 | 참조 | ||||
| 뼈 흡수 | 침술은 뼈 흡수를 억제하여 뼈 손실과 구조적 변화를 예방합니다. | 36 | ||||
| 뼈 강도 | 침술은 섬유주 뼈의 부피와 두께를 증가시키고, 경골의 섬유주 분리를 낮추고, 인과 Dpd의 배설을 제한하는 동시에 혈청 오스테오칼신의 농도를 촉진했습니다. | 37 | ||||
| 뼈 대사 | 침술은 OVX 쥐의 혈청 ALP, BGP 및 TRAP 수치를 크게 하향 조절할 수 있습니다. | 38 | ||||
| 신호 전달 경로 | 침술은 골밀도를 개선하고, 생체 내 염증 반응을 약화시키며, Wnt 신호 전달 경로를 조절하여 쥐의 골형성에 영향을 미치는 인자 수준을 증가시킵니다. | 39,40 | ||||
| 내분비 조절 효과 | 침술은 에스트라디올, 부신피질자극호르몬 방출 호르몬(CRH), 부신피질자극호르몬(ACTH), 코르티코스테론(CORT)의 혈청 수치를 조절했다. | 41 | ||||
| 체중 | 침술은 렙틴 수치의 변화를 조절하여 체중 증가를 없애줍니다. | 36,41 | ||||
| 뇌 유래 신경 영양 인자 | 침술은 BDNF 및 TrkB 발현 수준을 높이고 골다공증 후 골절 치유 과정을 가속화할 수 있습니다. | 42 | ||||
표 3: 골다공증 모델 쥐의 효능에 대한 단순 침술의 효과.
저자는 공개할 것이 없다고 선언합니다.
이 연구는 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, NSFC) Nos. 82374564(YJD에) 및 Nos. 82074566(YJD에)와 중국 우한에 있는 세계침술뜸학회연맹(World Federation of Acupuncture-Moxibustion Societies)의 한의학침술-뜸을 위한 Sun Guojie Inheritance Base(세계침술뜸학회연맹[2019] No. 26)의 자금으로 지원되었으며, YJD와 중국 전통의학관리국의 국가 유명 TCM 상속 스튜디오 건설 프로젝트, 중국(중국 전통 의학국[2022], No. 5)에서 YJD.
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