<ol><li> 로 비디오에 나타난 흐름 챔버를 구성. parafilm 밀봉이 꽉 있는지 확인하고 세탁 coverslips을 사용합니다. </li><li> 50-10 &#39;에 대한 챔버에 품어 굴지 바인딩 요원. </li><li> 차단 단백질과 유리 coverslip에 비 특정 바인딩 사이트를 차단합니다. </li><li> 버퍼 polymerizing에서 G - 굴지 흐르는하여 챔버 내부의 중합 굴지. </li><li> 초과 버퍼 흐르는으로 희미 unpolymerized의 굴지. </li></ol>

시간 경과 현미경과 분해 굴지 모니터링

자, 오늘 제가 해드리고자 하는 것은 정립 현미경에서 이미징하기 위한 융합 챔버인 플로우 챔버(flow chamber)를 구성하는 방법을 보여드리는 것입니다. 그런 다음 필름을 사용하여 두 개의 공간을 만듭니다. 그래서 제가 하는 일은 파라 필름을 작은 스트립으로 자르는 것입니다.다음으로 저는 기본적으로 벽의 채널을 형성하고 기울어진 공기로 건조시킬 것입니다. 나는 파라 위에 커버 슬립을 씌웠고, 여기에 완성품이 있습니다. 그런 다음 열 블록에서 가열하여 param을 녹이고 기본적으로 seal을 만듭니다.이것이 무엇인지는 여기 커버 유리이고, 커버 유리 위에는 바로 여기 보시는 것처럼 두 겹의 핌이 있습니다. 그리고 이것 위에, 다시, 22 x 2 2 mil 미터 커버 슬립이 있습니다. 바로 여기 이것, 내가 인장을 떨어뜨리기 위해 param을 눌렀습니다.자, 액체가 여기 한 방향으로 들어가고 여기 여과지로 이 방향으로 빨아들일 수 있습니다. 그리고 그 방법을 조금 후에 보여드리겠습니다. 그래서 제가 좋아하는 것은 가습실에 넣는 것을 좋아하는데, 이는 매우 간단합니다.두 종류의 높은 스트립을 가져 와서 아래에 종이 필터를 넣으십시오. 그리고 시끄러운 소리를 유지하기 위해 나는 덮개를 씌우고 흐름 챔버의 덮개 슬립을 씌웠습니다. 이제 챔버에 솔루션을 도입하는 방법은 챔버 입구에 피펫 팁을 놓고 분리하는 것입니다.이제 내가 하는 일은 뚜껑을 닫고 10분 동안 챔버를 배양하는 것입니다. 반대편에서 액체를 빨아들이기 위해 내가 평소에 하는 일은 그것을 사용하고 여과지를 가져와 이렇게 얇은 스트립으로 자르는 것입니다. 그리고 저는 이 얇은 스트립 중 하나를 가져와서 입구에 용액을 바르는 동시에 여과지를 출구에 놓아 교환물, 용액을 빨아들입니다.따라서 액체가 용액을 통해 흐르는 것을 볼 수 있습니다. 그런 다음 중간 마감을 위해 5분 동안 기다립니다. 이제 제가 할 수 있는 일은 액틴과 액틴을 실제로 중합해야 하고, 유동 챔버 내부에서 중합을 하는 것인데, 이는 이전과 동일한 절차입니다.그래서 이렇게 하고 나서 이제 작용이 중합되었기 때문에 많은 양의 버퍼를 사용하여 모든 un excess un polymerized action을 씻어냅니다. 여기 약 100마이크로리터가 있고 몇 개의 반응 챔버 부피에 해당하는 완충액입니다. 그냥, 아시다시피, 여과지가 포화 상태가 되면 방향을 바꿔야 합니다. 그래?그래서 저는 이것으로 이미징을 할 준비가 되었습니다. 그래서 액틴이 부착 된 관류 챔버. 이제 슬라이드를 가져와서 현미경 아래에 장착하고 오일 대물렌즈로 이미징하고 있기 때문에 덮개의 상단 표면에 침지 오일을 바르고 잔디 접촉을 하여 용액이나 단백질 또는 내부에서 작용하는 모든 것을 평가할 것입니다.그래서 제가 하는 일은 타임랩스 이미징을 하는 동안 실제로 솔루션 측면을 교환할 수 있다는 것입니다. 이와 같이.

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