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방법 논문

마그네틱-아르키메데스 전략을 사용한 세포 패터닝

2.1K 조회수

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DOI:

10.3791/66063

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2024년 2월 2일

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이 논문에서

요약

이 프로토콜은 자기 아르키메데스 효과(Magnetic Archimedes effect)를 기반으로 하는 잉크가 없고, 라벨이 없고, 기판에 독립적이며, 처리량이 많은 세포 패터닝 방법을 설명합니다.

초록

세포 포지셔닝을 정밀하게 제어할 수 있는 세포 패터닝은 세포 거동 연구에서 고유한 이점을 제공합니다. 이 프로토콜에서는 마그네틱-아르키메데스(Mag-Arch) 효과를 기반으로 하는 세포 패터닝 전략이 도입됩니다. 이 접근 방식을 사용하면 잉크 재료나 라벨링 입자를 사용하지 않고도 세포 분포를 정밀하게 제어할 수 있습니다. 세포 배양 배지의 자화율을 향상시키기 위해 상자성 시약을 도입함으로써 세포는 자석에 의해 반발되고 미세유체 기질 아래에 위치한 자석 세트를 보완하는 패턴으로 배열됩니다.

이 기사에서는 Mag-Arch 기반 전략을 사용한 세포 패터닝에 대한 자세한 절차를 제공합니다. 단일 세포 유형을 패터닝하는 방법과 공동 배양 실험을 위한 여러 세포 유형이 제공됩니다. 또한 세포 패터닝을 위한 채널을 포함하는 미세유체 장치를 제조하기 위한 포괄적인 지침이 제공됩니다. 병렬 방법을 사용하여 이 기능을 달성하는 것은 어렵지만 간단하고 비용 효율적인 방식으로 수행할 수 있습니다. Mag-Arch 기반 세포 패터닝을 사용하면 연구자들에게 체외 연구를 위한 강력한 도구를 제공할 수 있습니다.

서론

세포 패터닝은 체외 연구를 위한 직관적이고 강력한 기술로 진화하고 있습니다1. 배양 플레이트에서 세포 위치를 조작함으로써 세포 이동2, 생체 모방 다세포 공동 배양3, 오가노이드 조립4, 생체 재료 연구5 등을 포함한 다양한 실험을 위한 솔루션을 제공합니다. 대부분의 경우, 잉크가 없고 표지가 없는 분석법은 후속 조사를 위한 작동이 간편하고 세포 생존율이 높기 때문에 세포 패터닝에 선호됩니다.

Mag-Arch 효과는 상자성 액체의 반자성 물체가 자기장이 약한 영역으로 이동하는 경향이 있는 물리적 현상입니다 6. 살아있는 세포는 자연적으로 반자성인 반면, 세포 배양 배지는 조영제로 핵 자기 공명 영상에서 정맥 주사로 일반적으로 사용되는 가도펜테테이트 디메글루민(Gd-DTPA)과 같은 수용성 상자성 요소를 첨가하여 상자성을 만들 수 있다7. 결과적으로, 세포는 주변의 상자성 매질에 의해 반발되어 자기장이 약한 영역으로 이동할 것으로 예....

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프로토콜

1. 자석 세트 조립

  1. 스트립 패턴용 자석 세트를 조립합니다.
    1. 그림 1A와 같이 평평한 직사각형 자석을 선택하십시오. 이 데모에 사용된 직사각형 자석의 치수는 1.5mm × 10mm × 35mm(두께 × 높이 × 길이)입니다(재료 표 참조). 자석의 두께는 셀 줄무늬 사이의 간격을 결정합니다.
    2. 2mm 두께의 실리콘 판( 재료 표 참조)을 2mm × 8mm × 30mm 직사각형으로 자릅니다. 이 실리콘 판의 후자의 두 치수가 위에서 언급한 직사각형 자석의 치수보다 약간 작은지 확인하여 조립을 최적화하십시오. 실리콘 판의 두께는 셀 스트라이프의 너비를 결정합니다.
    3. 그림 1A와 같이 직사각형 자석과 실리콘 판을 층별로 조립합니다. 각 자석 세트는 4개의 자석과 3개의 실리콘 판으로 구성됩니다. 인접한 각 자석의 극이 반대인지 확인하여 고유한 인력으로 인해 자석 세트가 자동으로 정렬될 수 있도록 합니다.
    4. 사용하기 전에 자석을 소독하십시오.
      알림: 자석 세트를 순수한 물로 씻은 다음 75% 에탄올에 10분 동안 담....

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결과

직사각형(1.5mm × 10mm × 35mm) 및 원통형(Φ1.5m × 10mm) 자석을 선택하여 시연으로 셀 패턴을 만들었습니다. 사용자는 자석의 크기와 모양을 수정하거나 다르게 조립하여 다양한 셀 패턴을 만들 수 있는 유연성이 있습니다. 그림 1A,B에서 자석은 명확성을 위해 파란색(남쪽)과 빨간색(북쪽)으로 표시된 자극으로 조립되었습니다. 이 구성에서 자석은 그림 2와 같이 서로 측면으로 끌어당기고 정렬됩니다. 도 1c,d는 세포 배양 장치의 구조 및 세포 패터닝 절차를 나타낸다.

그림 2는 모노형 셀 패턴을 보여줍니다. GFP 표지된 HUVEC는 형광 현미경으로 관찰하는 데 사용되었습니다. 세포는 해당.......

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토론

Mag-Arch 기반 세포 패터닝은 대부분의 생물의학 실험실에 사용자 친화적인 솔루션을 제공합니다. 이 방법은 잉크가 없고, 라벨이 없고, 기판에 독립적이며, 고처리량 패터닝 8,13의 능력과 평행하게 발전합니다. 모노 타입 셀 패터닝의 경우 원스텝 방식으로 셀을 패터닝합니다. 절차는 배양 배지를 새로 고치는 것으로 간단히 끝납니다.

이전 연구에서는 자성 입자를 사용하여 세포를 표지하고 자석으로 끌어당겨 정확한 패턴을 형성했습니다14,15. 그러나 세포에 자성 입자가 존재하면 세포 행동에 대한 잠재적 영향에 대한 우려가 제기되었습니다. Mag-Arch 기반 세포 패터닝은 세포가 아닌 세포외 액체를 상자성으로 전환하여 반대 전략을 취합니다. 이 전략을 사용하면 배양 배지를 .......

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공개 사항

저자는 경쟁하는 재정적 이익이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 중국 국가 중점 R&D 프로그램(2021YFA1101100), 중국 국립 자연과학 재단(32000971), 중앙 대학 기초 연구 기금(No. 2021FZZX001-42), Zhejiang University Shanghai Institute for Advanced Study (Grant No. SN-ZJU-SIAS-004)를 참조하십시오.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
A2780 난소암 세포ProcellCL-0013
세포 배양 배지 (DMEM, 고 포도당)Gibco11995040
커버 슬라이드Citotest Scientific80340-3610미세 유체 제조용. 치수: 24mm &시간; 50mm
DiD메드켐익스프레스(MCE) HY-D1028적색 형광 (예 : 640 nm)
DiIMedChemExpress (MCE) HY-D0083 주황색 형광으로 세포 라벨링용(예: 550nm)
소 태아 혈청 (FBS)바이오 채널BC-SE-FBS07
가도펜테테이트 디메글루미네 (Gd-DTPA)베이징 베이루 제약 
젤라틴시그마 알드리치V900863
유리 셀 슬라이드Citotest Scientific80346-2510직경 : 25 mm; 두께 : 0.19-0.22 mm
유리 플레이트PURESHI 철물점미세 유체 공학을 제조합니다. 치수: 40mm &시간; 75mm
인간 배꼽 정맥 내피 세포(HUVEC)ServicebioSTCC12103G-1
네오디뮴-철-붕소 자석(N52)Lalaci
무독성 유리판 코팅(젤 슬릭 솔루션)Lonza1049286미세 유체 제조 시 탈형 편의를 위해
인산염 완충 식염수(PBS)ServicebioG4200
플라즈마 클리너SANHOPTTPT-2S
폴리디메틸실록산(PDMS) 키트DOWSILSYLGARD 184 실리콘 엘라스토머 키트미세유체학 제조용
폴리테트라플루오로에틸렌(PFTE) 금형PURESHI 철물점미세유체학 제조용 온라인 맞춤형
실리콘 플레이트PURESHI 철물점
평활근 셀 (SMC)ProcellCL-0517
초음파 세척기SapeenCSA-02
H10860002

참고문헌

  1. Christian, J., et al. Control of cell adhesion using hydrogel patterning techniques for applications in traction force microscopy. J Vis Exp. 179, e63121(2022).
  2. Abbas, Y., Turco, M. Y., Burton, G. J., Moffett, A. Investigation of human trophoblast....

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