이 프로토콜은 마우스 orthotopic 간 이식에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건을 위한 기술 정보를 제공합니다.
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방법 논문
Mouse Orthotopic Liver Transplantation에서 Cuff Technique을 사용한 혈관 재건
이 논문에서
요약
초록
마우스 orthotopic 간 이식은 간 허혈 및 재관류 손상의 근본적인 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 방법론입니다. 그러나 기술적 과제는 이 귀중한 실험 모델을 활용하고 이러한 기술을 다음 세대에 전달하는 데 장벽이 됩니다. 이 절차에서 가장 어려운 측면은 문맥(PV), 하대정맥(IHIVC) 및 상하정맥을 포함한 혈관 재건입니다. 봉합사 대신 플라스틱 커프를 사용하면 PV 및 IHIVC 재구성을 보다 원활하게 할 수 있습니다. 혈관은 정맥 카테터로 만든 커프를 이식 혈관의 끝에 부착하고 커프를 수용 혈관에 삽입하여 재건합니다. 가장 중요한 두 가지 측면은 혈관의 내부 내강을 적절하게 시각화하고 과도한 힘을 가하지 않는 것입니다. 우리의 목표는 수혜자 수술에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건에 대한 기술적 개요를 제공하는 것입니다. 커프 기술에 대한 이러한 기술 팁은 미세 외과 의사가 혈관 재건을 촉진하고 연구를 발전시키는 데 도움이 될 것으로 기대됩니다.
서론
생쥐 기형간 이식(MOLT)은 1991년에 처음 보고된 효과적인 실험 방법입니다1. 유전자 변형 마우스와 다양한 연구 시약을 활용한 이 실험 모델은 온열 및 냉간 허혈 및 재관류 손상을 조사하는 데 중추적인 역할을 했습니다. 그러나 이 모델의 높은 기술적 복잡성은 간 이식을 위한 기초 의학의 개발을 저해하고 있다2. MOLT는 (1) 기증 마우스에서 간을 채취하고, (2) 백테이블 수술, (3) 수혜자에게 간을 이식하는 세 가지 주요 단계를 포함합니다. 이러한 수혜자 시술 중 혈관 문합술이 가장 큰 도전입니다. 상하정맥 문합술은 일반적으로 수작업스티칭 2으로 완료되지만, IHIVC(infrahepatic inferior vena cava) 및 문맥(PV)은 손으로 꿰매는 봉합사 대신 플라스틱 커프를 사용하여 보다 효율적으로 재건할 수 있습니다.
무간주기는 수혜자의 본래 간이 제거된 시점과 이식편 이식 사이의 간격을 의미합니다. 일관된 결과를 보장하려면 무간 시간을 20분 미만으로 제한하는 것이 필수적입니다. 결과적으로, 이 모델을 채택한 연구는 특정 기관에 국한되어 있었다<....
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프로토콜
실험 프로토콜은 교토 대학의 동물 실험 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구는 10주 이상 숙성되고 무게가 25g에서 30g 사이인 C57BL/6 마우스를 사용했으며, 상업용 출처에서 얻었습니다( 재료 표 참조). 모든 동물은 2.5% 이소플루란(기관에서 승인된 프로토콜에 따름)으로 마취하고, 특정 병원체가 없는 조건에서 유지하고, 모든 실험 절차는 교토 대학의 동물 실험에 관한 규정에 따라 수행되었습니다. 연구에 사용되는 적절한 도구는 재료 표 에 나열되어 있으며 그림 1 및 그림 2에 나와 있습니다.
1. 동물 선택
- 체중이 25-30g인 마우스를 사용하십시오.
참고: mouse liver allografts2 는 일반적으로 주요 조직적합성 복합체 장벽에서 받아들여지지만, 본 연구에서는 냉간허혈 재관류 손상의 상세한 메커니즘에 초점을 맞추기 위해 syngeneic MOLT 모델을 선택했다10. 무게가 25g 미만인 마우스는 얇은 담관에 내....
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결과
PV 재건술은 문맥을 풀어줄 때 비틀림이 없고 간이 균일하게 관류될 때 성공적입니다. 무반수소 시간은 25분을 초과하면 쥐 폐사 위험이 증가하므로 20분 미만이어야 합니다. IHIVC 재건술은 이식편에서 혈액 역류가 없는 경우 성공적인 것으로 간주됩니다.
장기 보존 용액을 사용하여 이식편을 저온에서 1시간 동안 보관하면 재관류 후 6시간에 혈청 알라닌 아미노전이효소 수치가 약 2,000U/L가 됩니다(그림 7A). 이식 후 7일 시점의 생존율은 100%입니다(그림 7B). 그러나 간 동맥 문합이 없는 모델에서 수혜자 마우스는 이식 후 약 30일 후에 간내 빌종 관련 문제에 굴복할 수 있습니다
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토론
혈관 재건술을 배우는 것은 성공적인 MOLT를 달성하는 데 가장 어려운 측면입니다. 커프의 품질은 마우스의 크기가 작다는 점을 감안할 때 재건의 어려움에 큰 영향을 미친다5. 이 문서에서는 커프 준비, 부착 및 재건에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다.
커프 준비 및 연결 2,5에 관한 이전 보고서와 큰 차이점은 없지만 몇 가지 사소한 사항을 고려해야 합니다. 첫째, 커프 핸들의 두께는 전체 둘레의 약 1/6로 제한되어야 합니다. 너무 얇으면 손잡이가 쉽게 구부러져 잡기 어려워질 수 있습니다. 너무 두꺼우면 받는 사람의 복부에서 다루기 어려울 수 있습니다. 초기에 개인 선호도를 파악하는 것이 중요합니다.
둘째, 뒤쪽 테이블에서 루멘의 가시성이 중요합니다. 10-0 나일론 실이 사용되어.......
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공개 사항
어떤 저자도 공개해야 할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 2022 JST 기초 연구(일본 이식 학회)의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 16 G 정맥 주사 카테터 | TERUMO | SR-FF2032 | IHIVC 커프 |
| 20 G 정맥 카테터 | TERUMO | SR-FF1651 | PV 커프 |
| 8-0 브레이드 실크 | 나츠메 제작소 | CR9-80B2 | 8-0 실크 |
| Belzer UW 냉장 솔루션 | 아스텔라스 | 장기 보존 액체 | |
| 불독 클램프 | B BRAUN | FB329R | 불독 클램프 |
| C57BL/6 마우스 | 오리엔탈 바이오 서비스 | ||
| 이소플루란 흡입 솔루션 | Viatris | 마취 | |
| 마이크로 둔화 팁 0.1 mm x 0.06 mm | F.S.T | 11253-20 | 직선 마이크로펜치 |
| 마이크로 Serrefine 클램프 애플리케이터 잠금장치 | F.S.T | 18056-14 | 용기 클립 애플리케이터 |
| 마이크로 Serrefines | F.S.T | 18055-4 | 선박 클립 |
| No.11 예비 블레이드 | FEATHER 안전 면도기 | 11 | 블레이드 |
| 안과 가위, 라운드 핸들 | B BRAUN | FD103R | 마이크로시저 |
| 플라스틱 직사각형 컨테이너 | 다이소 | 길이 10cm, 너비 15cm, 높이 6cm | |
| SuperGrip Tips | F.S.T | 00649-11 | 곡선형 마이크로펜치 |
| SZX7 | 올림푸스 | SZX7 | 현미경 |
| 바이스 | 니가타세이키 | 00505351 | 테이블에 완두콩 집게를 고정하는 기계 도구 |
참고문헌
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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