MLH1 대장암 환자의 말초혈액 내 유전자 발현 및 대장암과의 연관성

요약

이 연구는 말초혈액과 대장암에서 MLH1 유전자 발현 사이의 연관성을 조사하고, 사례-대조군 접근법을 활용하여 환자의 발현 수준과 일치하는 건강한 대조군을 비교합니다.

초록

MutL homolog 1 (MLH1)은 이질이량체 복합체 MutLα의 구성 요소로, 뉴클레오티드 혼입으로 인한 염기-염기 불일치 및 삽입/삭제 루프를 검출하고 수정합니다. MLH1 단백질이 없으면 복구되지 않은 불일치의 빈도가 증가하여 장기 암이 발생합니다. 이번 연구는 대장암 환자의 혈액 샘플에서 MLH1 유전자 발현과 종양 침습(T) 및 림프절 침범(N)과의 관계를 정량화하고자 했다. 혈액 샘플은 36명의 CRC 환자로부터 채취했습니다. RNA를 추출하고, 키트를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 프라이머는 엑손-엑손 접합 접근법을 사용하여 구축되었으며, MLH1 및 β-액틴 유전자는 실시간 중합효소연쇄반응(Real-Time PCR)을 사용하여 3배 테스트되었습니다. 유전자 발현 분석 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, t-test를 사용하여 MLH1 의 발현과 T 및 N 변수와의 연결을 조사했습니다. 본 연구에서는 평균 연령이 57.35세에서 4.22세± 연령이 26-87세인 여성 15명(41.6%)과 남성 21명(58.4%)을 포함한 대장암 환자 36명이 포함되었다. 그 결과, 환자의 MLH1 유전자 발현 비율이 건강한 사람에 비해 감소했으며, 질병의 각 단계에서 유전자 발현의 감소가 유의한 것으로 나타났습니다. 본 연구의 결과는 MLH1 유전자 발현의 감소가 CRC의 발달에 효과적인 역할을 한다는 것을 보여주었다.

서론

대장암(CRC)은 가장 흔한 유형의 암 중 하나입니다. 이는 전 세계적으로 암 관련 사망의 네 번째 주요 원인입니다¹. CRC는 여성보다 남성에서 더 빈번하게 발생하며, 개발도상국보다 선진국에서 3-4배 더 흔합니다. CRC 발병률의 1 x 10⁵ 당 연령 표준화(전세계) 발병률은 남녀 모두 19.7명, 남성은 23.6명, 여성은 16.3명이다². 역학 연구는 CRC와 강력한 환경 및 생활 방식 연관성을 보여주었습니다. 비만, 붉은색/가공육, 담배, 알코올, 안드로겐 결핍 요법, 담낭 절제술은 모두 CRC 위험을 약간 증가시키는 것과 관련이 있다 ^2,3.

염색체 불안정성, 현미부수체 불안정성 및 CpG 섬 메틸레이터 표현형(CIMP)은 CRC⁴의 종양 형성에 중요한 역할을 합니다. 이전 연구에 따르면, CRC 환자에서 약 250개의 서로 다른 돌연변이가 확인되었으며, 이는 DNA 불일치 복구(MMR) 유전자와 관련된 ....

프로토콜

2021년 4월부터 2023년 5월까지 난퉁대학교 부속병원 2에서 사례 대조군 연구가 수행되었습니다. 연구 프레임워크를 수립하기 위해 병원의 행정 부서와 협력합니다. 윤리적 승인은 연구 제안서를 Nantong University Ethics Committee에 제출하여 획득했습니다. 기밀 유지와 정보에 입각한 동의를 보장하기 위해 윤리 지침을 따랐습니다.

1. 환자 모집 및 연구 설계

1. 연구 참가자를 포함시키기 위한 표본추출
   1. 대장암 환자 36명과 대조군의 말초 혈액에서 MLH1 유전자의 발현을 조사합니다. 참가자 선택을 위한 명확한 포함 및 제외 기준을 개발합니다.
   2. 특정 유형의 대장암(대장암 종양이 있는 것으로 간주되는 직장암, 맹장암, 상행암, 횡단암 및 하행 대장암)으로 진단된 개인을 모집하고 정보에 입각한 동의를 받았습니다.
   3. 유전자 발현 분석을 혼란스럽게 할 수 있는 다른 암 진단 또는 질환이 있는 개인을 제외합니다. 또한 최근 3개월 이내의 수혈 병력, 최근 6개월 이내의 항암화학 요법 또는 방사선 요법 병력, 알코올 또는 약물 사용 병력, 자가면역 질환....

결과

이 연구에서는 대장암 환자 36명을 대상으로 말초혈액 내 MLH1 유전자 발현 및 대장암과의 관계를 조사했습니다. 인구통계학적 변수를 분석한 결과, 여성은 15명(41.6%), 남성은 21명(58.4%)이었다. 환자의 평균 연령은 57.35세± 4.22세였으며 연령대는 26-87세였다. 환자의 체질량지수(BMI) 상태를 살펴보면 14명(38.8%)의 BMI가 정상(18.5 및 24.9kg/^m2)이었고, 22명(61.2%)의 BMI가 정상 범위(18.5 미만 또는 24.9kg/^m2 이상) 내에 있지 않은 것으로 나타났다. 대장암 증례의 조직병리학적 특징은 다음과 같다: 종양 등급은 WHO 등급 체계²⁶에 따라 분류되었으며, 12예(33.3%)는 잘 분화되었고, 18예(50%)는 중간 정도, 6예(16.7%)는 잘 분화되었다. 림프혈관 침습은 14건(38.9%), 신경주위 침습은 9건(25%)에서 관찰되었다. 모든 환자는 명확한 절제 .......

토론

본 연구는 MLH1 유전자의 발현을 조사하는 것을 목적으로 수행되었다. 이 연구에서는 건강한 사람에 비해 아픈 사람에서 MLH1 유전자 발현 수준이 감소하는 것으로 나타났습니다. 폴드 체인지(fold change) 연구에 따르면, 아픈 사람의 2기, 3기, IV기의 MLH1 유전자 발현이 건강한 사람에 비해 현저히 감소한 것으로 나타났습니다.

대장암은 유병률과^{생존율 3,27}로 인해 전 세계 암 관리에 있어 중요한 문제이다. 일부 대장암 환자의 기대 수명이 5세에 이르지 못한다는 점과 암 환자의 욕구가 진단 후 해에 따라 다르기 때문에 대장암에 대한 완전한 조사는 필수적인 필요성이다^28,29

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아가로스 젤 전기영동 장비	RNA 품질 확인에 사용되는	Bio-Rad	Mini-Sub Cell GT 시스템
에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)	시그마-알드리치	E9884	혈액 샘플의 항응고제로 사용
NanoDrop	ThermoFisher Scientific	ND-2000	분광 광도계 RNA 순도를 결정하는 데 사용
Real-time PCR 기계	적용	RT-PCR 반응에 사용되는	A34322
RNA 추출 키트	Intron Biotechnology Co	#Cat 17061	혈액 샘플에서 RNA 추출에 사용
SYBR Green PCR 키트	Thermo Fisher Scientific		4309155 RT-PCR 실험에 사용되는 시약

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