BALB/c-nu 마우스의 간암종 확립 및 Sanleng Jiashen 공식의 치료 효과 조사

요약

여기에서는 정립소 간세포암이 있는 BALB/c-nu 마우스에 대한 Sanleng Jiashen 공식의 치료 및 혈관 억제 효과를 조사하기 위한 단계별 프로토콜을 제시합니다.

초록

간암의 치사율과 화학 약물에 대한 내성으로 인해 간암에 대한 전통적인 약초의 효과적인 처방을 모색하지 않을 수 없었습니다. 반복 가능하고, 조작하기 쉬우며, 간암의 병태생리학적 과정을 고도로 모방한 동물 모델은 효과적인 약물 후보를 성공적으로 스크리닝하기 위한 전제 조건입니다. 한편, 신뢰할 수 있는 약물 효능 평가 지표 및 수단은 항간암 약물 연구 및 개발의 보증이기도 합니다.

Sanleng Jiashen 공식, Sparganium stoloni erum, Buch를 함유 한 중국 전통 의학의 대표적인 처방전. -햄. (Sanleng), Panax 인삼 C. A. Mey. (인삼), Rheum officinale Baill. (대황) 및 Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong)는 간에 영양을 공급하고 열을 맑게 하며 독소를 제거하고 혈액 순환을 촉진하여 간암을 치료하기 위해 처방됩니다. 이 실험 프로토콜은 동결건조된 Sanleng Jiashen 공식의 제조 및 BALB/c-nu 마우스에서 제자리 간암의 확립 과정을 설명합니다. 조직병리학적 염색, 암 마커의 면역조직화학적 검출, 생쥐의 생체 내 이미징 및 병아리 배아 융모막 막 검사를 사용하여 간암 조직의 악성 증식에 대한 Sanleng Jiashen 공식의 억제 및 항혈관신생 효과를 조사했습니다. 이 데이터는 Sanleng Jiashen 공식이 종양 질량 부피 감소, 병리학적 손상 개선 및 암 마커 ki67 수치 저하로 나타나는 간암 조직의 악성 증식에 효과적으로 저항할 수 있음을 보여줍니다.

혈관 신생의 우수한 억제는 또한 Sanleng Jiashen 공식이 간암의 진행과 악화를 치료하고 예방할 수 있는 잠재력을 가질 수 있음을 시사합니다. 전체 실험 계획은 쥐 간암 치료에서 전통 의학 구성 요소의 포괄적인 프로세스를 보여주며, 이는 간암 모델의 수립 및 최적화, 간암 예방 및 치료를 위한 약물 연구 및 개발에 대한 참고 자료를 제공합니다.

서론

간암은 간에서 발생하는 치명적인 암으로, 전 세계적으로 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다¹. 미국과 일부 개발도상국의 간 질환 발병률은 높은 수준을 보이고 있으며, 2030년까지 전 세계적으로 100만 명 이상의 간암 환자가 발생할 수 있습니다². 흡연, 비만, 음주 등 건강에 해로운 생활 습관과 B형 간염, C형 간염 및 기타 바이러스의 파괴로 인해 간암의 발병률과 사망률은³년마다 크게 증가하고 있습니다. 간암은 조직학적 특징이 다르고 예후가 좋지 않은 이질적인 악성 종양으로, 간세포암, 간내 담관암, 섬유^{층암 등} 발병률이 매우 넓다4. 간암은 진행된 단계에서 진단되는 경우가 많으며, 많은 진행성 환자는 방사선 치료를 받을 수 없다⁵. 멀티키나아제 억제제인 소라페닙(sorafenib)은 진행성 간암 환자에게 널리 받아들여지는 약물이지만, 단기간 내에 상당한 내성이 생기는 경우가 많다⁶. 현재 면역관문억제제인 PD-1과 PD-L1과 소라페닙을 병용하여 간암의 발병을 조절....

프로토콜

특정 병원체가 없고 생후 5주, 체중이 18-22g인 BALB/c-nu 수컷 누드 마우스를 길림대학교 변혁의과대학 동물실험센터에서 먹였습니다. 먹이 조건은 22 °C-24 °C, 상대 습도 40 % -60 %였습니다. 실험동물 허가 번호는 SYXK(Ji) 2018-0006이며 실험 과정은 길림대학교 윤리위원회의 규칙 및 규정을 준수하며 동물 윤리 승인 번호는 20221228-01입니다.

1. 동결 건조 Sanleng Jiashen 공식¹⁵의 준비

1. 지능형 달인 냄비(재료 표 참조)에 Sanleng 16g, 인삼 16g, 대황 8g, Chuanxiong 2g을 넣고 실온에서 30분 동안 탈이온수 294mL에 담가둡니다. 가열하고 끓인 후 30°C에서 100분 동안 계속 요리하고 이중 의료용 거즈를 통해 액체를 걸러냅니다( 재료 표 참조). 잔여물에 252mL의 탈이온수를 넣고 100°C에서 30분간 조리한 후 이중 거즈로 액체를 걸러냅니다.
2. 깨끗한 스테인리스 스틸 접시에 1.1단계의 여과액을 모으고 -80°C에서 12시간 동안 동결합니다( 재료 표

결과

그림 2A에서 볼 수 있듯이 BALB/c-nu 마우스의 제자리(in-situ) 간암 모델을 구축하고 Sanleng Jiashen 공식의 항종양 효과를 평가했습니다. 그림 2B는 Sanleng Jiashen 공식이 간 종양의 성장을 크게 억제할 수 있음을 보여줍니다. 병리학적 결과는 대조군과 비교하여 모델 그룹의 종양 병소가 주변 조직과의 경계가 명확하고, 종양 병소가 더 크며, 결절 확장 및 압박 성장이 있음을 보여주었습니다. 한편, 종양 조직 내 종양 세포의 배열은 간 소엽 구조가 없이 무질서합니다. 이에 따라 종양 세포는 덜 이질적이며 종양체 주위에 큰 혈관이 있습니다. 모델 그룹과 비교했을 때, Sanleng Jiashen 공식의 농도가 다른 종양 면적이 감소했는데, 이는 약물 개입 후 생쥐의 상피내암의 종양 크기가 억제되었음을 나타냅니다(그림 2C.......

토론

많은 양의 증거에 따르면 Sanleng Jiashen 공식의 Sanleng, 인삼, 대황 및 Chuanxiong이 간암 치료에 약리학적 효과가 있음이 확인되었습니다. 연구에 따르면 Sanleng은 종양 세포의 증식 및 성장을 크게 억제하여 종양 세포의 침입 및 전이를 방지하고 세포 사멸을 유도하며 세포주기 및 종양 미세 환경을 조절할 수 있습니다²⁰. 산렝의 유효성분인 캠페롤(kaempferol)은 위암⁽²¹), 전립선암⁽²²), 간암(23)의 증식을 억제하고 자가포식을 촉진하며 산화 스트레스를 조절함으로써 위암(21), 전립선암(22), 간암⁽²³ )의 발생 및 발병을 억제할 수 있음이 입증되었다. Myricetin은 항 종양 활성을 가진 인삼의 핵심 화합물입니다. 미리세틴(myricetin)은 세.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.25% 트립신 용액	HyClone, 미국	SH30042.01B
1mL 일회용 주사기	Mingankang Medical Equipment Co., Ltd., 중국	RWSB
1% 페니실린 및 스트렙토마이신 용액	Hyclone, 미국	SV30010
1.5mL 원심분리관	Corning, America	MCT-150-C-S
12cm 바늘 집게	Hesdick, 중국	HKQS-211
6-0 외과용 봉합사	Shanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Shanghai, China	CR631
75% 알코올	Sichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Sichuan, China	1.00009E+11
96웰 플레이트	NEST, 중국	701001
Acetone	Tianjin Dingfu Chemical General Plant, Tianjin, China	GB686-89
BALB / c-nu 남성 누드 마우스	베이징 Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., 베이징, 중국	SYXK (Ji) 2018-0006
생물학적 조직 베이킹 머신	라이카, 독일	라이카 HI1220
세포 배양 접시	NEST, 중국	NEST.706001
구연산 용액	Wuhan Canos Technology Co., Ltd., 우한, 중국	sj1074
D-luciferin	Gold Biotechnology®, Inc., 중국	LUCK-100
DMEM	Hyclone, 미국	SH30243.01
난자 조명기	Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, China	WZSDT
Eosin 염색 용액	Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, China	110703061
Erythromycin eye ointment	Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 상하이	H37022025
태아 소 혈청	Clark, 미국	FB25015
완전 자동 지능형 병아리 인큐베이터	Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, China	29538
GFP 렌티 바이러스 솔루션	Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, China	F22AZ
염소 혈청	Shenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, China	WLA067
휴대용 마우스 두개골 드릴	STRONGWT, 중국	190
HCCLM3 세포주	WheLab, 상하이, 중국	C1010
가열 패드	Zhongke Life Technology Co., Ltd., 항저우, 중국	GEJRD-10W
Hematoxylin	Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., 후난, 중국	B-YH250-1
지능형 달인 냄비	Hangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., Hangzhou, China	3003BQ
도립 형광 현미경	Olympus, 일본	IX73
ki67 1 차 항체	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China	GB121141-100
Lodophor disinfectant	Cofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, China	202110073
Luciferase	Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, China	E26JZ
매트릭스 접착제	코닝, 미국	356234
의료 거즈	Yunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Yunnan, China	71712049971
메탄올	Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Guangdong, China	1.17001.023
안과 가위	Hesdick, 중국	HKQS-209
안과 핀셋	Hesdick, 중국	HKCL-20
파라핀 임베딩 기계	Leica, 독일
파라핀 슬라이싱 머신	Leica, 독일	Leica CM1950
파라포름알데히드	Biosharp, 중국	BL539A
PBS 버퍼	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China	G2156-1L
Puromycin	Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Beijing, China	P8230
냉장고	Thermo Scientific, America	TDE40086FV-ULTS
Scalpel	Hesdick, 중국	HKCL-93
2차 항체	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China	GB23301
Small animal live imaging system	Caliper Life Sciences, America	IVIS Lumina XR
Sorafenib	Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., 상하이, 중국	284461-73-0
투명 드레싱	3M, 미국	9534HP
트리톤 X-100	베이징 Solarbio 과학 및 Technology Co., Ltd., 베이징, 중국	T8200
진공 동결 건조기	닝보 Xinzhi 생명공학 Co., Ltd., 닝보, 중국	sz-10N
흰색 깃털 닭고기 달걀	산동 Haotai 실험 동물 사육 Co., Ltd., 중국 산동	SCXK(Lu) 20180004
Xylene	Sigma-Aldrich, 미국	534056

EG1150H