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방법 논문

완전한 재관류를 위한 Longa Middle Cerebral Artery Occlusion 방법의 최적화

3.1K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/66720

⸱

2024년 11월 22일

 ,  , 
1Department of Histology and Embryology, University of Zagreb School of Medicine, 2Croatian institute for brain research, University of Zagreb School of Medicine

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 연구자가 수정된 Longa 외부 경동맥 방법을 사용하여 마우스에서 중뇌동맥 폐색 절차를 수행할 수 있는 단계별 가이드를 제공합니다. 이 기사에 제시된 수정 사항은 중뇌동맥 폐색의 정확도를 높이고 완전한 재관류를 보장하는 것을 목표로 합니다.

초록

중뇌동맥 폐색 모델은 허혈성 뇌졸중을 연구하기 위한 주요 동물 모델입니다. 30년 넘게 연구에 사용되어 왔음에도 불구하고 표준화는 여전히 불충분하다. 주로 쥐와 생쥐를 대상으로 실시되는 이 시술은 생쥐의 더 작고 연약한 특성으로 인해 어려움을 겪습니다. Koizumi 총경동맥법과 달리 Longa 외부 경동맥은 허혈 후 완전한 재관류를 보장하는 유일한 내강 내 필라멘트 스트로크 모델입니다. 이 측면은 재관류 현상을 조사하는 연구에서 매우 중요합니다. 이 기사에서 설명한 외과적 수정은 허혈기 전체와 재관류 시작 후에도 총경동맥에서 지속적인 혈류를 보장합니다. 이러한 수정의 목표는 허혈 기간 동안 중뇌 동맥에 근접한 가지에서 관류를 중단하지 않고 유지하여 중뇌동맥을 선택적으로 폐색하는 것입니다. 또한, 재관류의 시작은 갑작스럽고 정밀하게 제어할 수 있으므로 인간 의학에서 혈관 내 혈전제거술을 보다 정확하게 모델링할 수 있습니다. 이 포괄적인 비디오 기사를 제공하는 우리의 목표는 새로운 외과 의사의 교육을 용이하게 하고 과학계 내에서 수술 절차의 표준화를 촉진하는 것입니다.

서론

뇌졸중은 사망 원인 2위, 사망 및 장애를 합친 3차 주요 사망 원인1. 뇌졸중은 그 원인에 따라 허혈성 또는 출혈성일 수 있으며, 허혈성 뇌졸중은 임상에서 훨씬 더 흔합니다. 허혈성 뇌졸중은 뇌 조직에 혈액을 공급하는 동맥이 막혀 허혈, 세포 사멸 및 염증을 유발합니다. 혈전용해술과 기계적 혈전제거술과 같은 재관류 요법이 등장한 이래로 뇌졸중 치료에 큰 진전이 이루어졌습니다. 그러나 모든 재관류 요법은 흔히 재관류 손상(reperfusion injury)이라고 하는 것을 일으켜 환자의 상태를 악화시킬 위험이 있다2. 재관류 손상의 정확한 메커니즘은 아직 불분명하며, 잠재적인 원인과 예방 조치를 식별하는 것은 전임상 연구에 달려 있습니다. 이를 위해 허혈성 뇌졸중 후 재관류 손상에 대한 적절한 동물 모델을 개발하는 것이 중요합니다.

중뇌동맥폐색(MCAO)은 허혈성 뇌졸중을 연구하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 동물 모델입니다. 그것은 주로 설치류에서 수행되며 지금까지 과학 문헌에 설명 된 많은 다른 변이체를 가지고 있습니다 3,4. 총경동맥(CCA) 및 외경동맥(ECA) 변형으로 알려진 두 가지 주요 유형인 Koizumi와 Longa는 필라멘트 삽입을 위한 동맥 절제술 부위에 따라 기술적으로 다릅니다 5,6. 최근 논문에서 혈관 관류의 생체 내 모니터링을 통해 Longa 방법만이 진정으로 뇌 허혈/재관류 모델로 간주될 수 있음을 보여주었습니다7. 이 시술은 필라멘트를 ECA에 삽입하고, ICA를 통해 진행하고, 뇌 조직 허혈을 유발하기 위해 중뇌동맥(MCA)의 분기점에 고정하는 것을 포함합니다. 미리 결정된 허혈 기간이 지난 후 필라멘트를 빼면 재관류가 허용되어 일시적인 뇌 허혈을 시뮬레이션합니다. 뇌졸중 발병 후 연구에 사용되는 주요 결과 변수는 대부분 경색 병변의 부피이며, 이는 생체 외 조직학 또는 생체 내 뇌 스캔을 사용하여 측정할 수 있습니다. MCAO 모델의 과제는 변이체 간(inter-variant), 작업자 간(inter-operator), 피험자 간(inter-subject) 차이로 인한 낮은 재현성이며, 후자는 전임상 뇌졸중 연구에서 상당한 제한을 제기한다4.

더욱이, 설치류에서 MCAO를 따르는 경색 영역은 설치류의 뇌 크기에 비해 방대합니다. 또한, 뇌의 해마 후방 영역은 MCA가 아닌 후뇌동맥(PCA)의 혈류에 주로 의존함에도 불구하고 종종 경색 용적에 모집된다8. 문헌에 기술된 Koizumi 및 Longa 방법에서와 같이, CCA는 마우스에서 Willis 서클의 불완전한 개통성으로 인해 허혈 기간 동안 결찰 상태로 유지되어 의도한 것보다 훨씬 더 넓은 영역에서 허혈 유도를 유도합니다 5,6,9. 허혈 기간 후에 CCA를 다시 열거나 수리하는 방법에서도, 통상적인 30-60분의 허혈은 비-MCA 영역에서 돌이킬 수 없는 조직 손상을 초래한다(10). 또한, 예상과 달리 이전 연구에서는 필라멘트의 실리콘 코팅 길이가 병변 크기11에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여주었습니다. 그러나 필라멘트의 실리콘 코팅 길이 선택은 교합 기간 동안 결찰된 CCA가 있는 모델에서만 다루어졌습니다.

이 방법의 목표는 마우스에서 Longa MCAO 방법을 수정하여 허혈 기간 동안 CCA에서 중단 없는 혈류를 가능하게 하여 MCAO의 선택성을 높이고 시술 후 경색 부위의 완전한 재관류를 보장하는 것이었습니다. 이러한 수정은 사망률을 낮추고 피험자 간 분산을 줄임으로써 마우스의 허혈 재관류 손상을 연구하는 종단 연구에 큰 도움이 될 것입니다.

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프로토콜

모든 동물 취급 및 절차는 자그레브 대학교 의과대학의 윤리 허가 위원회와 크로아티아 공화국 농업부의 과학적 목적으로 사용되는 동물 보호를 위한 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 실험 절차는 크로아티아 동물보호법(NN 102/17, 32/19), 동물보호법 개정안(NN 37/13) 및 과학적 목적으로 사용되는 동물 보호에 관한 지침(NN 55/13)에 따라 수행되었으며, 이는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 유럽 지침(지침 2010/63/EU)에 부합합니다.

1. 동물 및 수술 부위의 준비

  1. 동물을 녹아웃 상자에 넣고 산소/질소 혼합물(1:2 비율)에 5% 부피의 이소플루란을 사용하여 마취를 유도합니다.
  2. 동물의 의식 상태와 호흡 빈도를 육안으로 검사한 후 실험실 저울로 가져와 무게를 잰다.
  3. 적절한 마취 깊이를 보장하기 위해 하지의 디지털 간 피부를 꼬집어 반사를 확인합니다.
  4. 동물을 가열된 수술대에 놓고 코를 마취 마스크 안으로 가져옵니다. 초기 수술대 온도를 36°C로 설정하고 동물의 체온을 37°C로 유지하도록 조정합니다(이후 단계에서 도입된 직장 프로브를 통해 측정). 모든 추가 단계에서 이소플루란의 부피 분율을 조정하여 동물의 호흡수를 100회/분으로 유지합니다.
    알림: 동물과 직접 접촉하는 모든 표면과 재료는 절차 전에 철저히 소독해야 합니다.
  5. 동물의 눈에 눈 연고를 바르면 탈수와 이소플루란 가스로부터 동물을 보호할 수 있습니다.
  6. 동물을 뒤로 돌리고 그 아래에 수술용 테이프로 만든 작은 베개를 놓아 목을 뻗습니다.
  7. 수술용 테이프를 사용하여 동물의 팔다리를 제자리에 고정합니다. 실수로 어깨 관절 탈구를 일으키지 않도록 앞다리를 너무 많이 펴지 않도록 주의하십시오.
  8. 하얀 석유 젤리를 사용하여 직장 프로브에 윤활유를 바르고 직장에 삽입하여 지속적인 체온 측정을 합니다. 수술용 테이프를 사용하여 꼬리와 함께 프로브를 제자리에 고정합니다.
  9. 수술 전에 식염수와 부프레노르핀(0.5mg/kg)을 복강내 주사하여 시술 중 동물에게 수분을 충분히 공급하고 진통을 유지합니다.
  10. 무선 동물 이발기를 사용하여 동물의 목 부분을 면도하십시오. 수술용 테이프를 사용하여 면도한 털을 모두 모으십시오. 또한 면도기로 해당 부위를 면도하여 털이 완전히 없도록 하십시오.
  11. 측정된 동물의 체중 및/또는 나이에 따라 MCAO 필라멘트를 선택하십시오. 용기에서 꺼내 눈에 잘 띄는 곳에 페트리 접시에 넣으십시오. 필라멘트의 실리콘 부분에 식염수를 한 방울 떨어뜨려 깨끗하고 먼지가 없는 상태로 유지하십시오.
    알림: 필라멘트의 실리콘 코팅 두께는 12-16주 된 마우스의 경우 제조업체의 공식 권장 사항에 따라 선택해야 합니다. 또한 실리콘 코팅의 길이는 폐색할 관개 영역의 크기에 따라 사전에 신중하게 계획해야 합니다( 토론 참조).
  12. 수술대 위에 깨끗한 수술용 드레이프를 놓습니다.
  13. 동물의 면도한 피부에 베타딘 한 방울을 바릅니다. 면봉을 사용하여 소독제를 안쪽에서 바깥쪽으로 원을 그리며 피부에 문지릅니다. 그런 다음 에탄올에 적신 면봉으로 동일한 작업을 수행합니다. 각 반복에 대해 새 멸균 면봉으로 이 단계를 3번 반복합니다.
  14. 국소 상처 진통제를 위해 향후 절개 부위의 소독 부위에 리도카인 젤을 살짝 바릅니다.

2. 허혈유도 수술

  1. 메스를 사용하여 소독된 피부를 처음 절개합니다. 수술 상처가 더 쉽게 치유될 수 있도록 피부 절개 스트로크 횟수를 최소한으로 유지하십시오.
    알림: 모든 기기는 이전에 멸균 처리되어야 합니다. 독자는 멸균 또는 수술용 장갑 사용에 대한 기관 지침을 참조해야 합니다.
  2. 7형 및 5형 겸자를 사용하여 표재성 근막을 떼어내고 기저 조직에서 타액선을 분리합니다.
    알림: 항상 집게를 닫은 상태에서 전진하고 조직을 밀어내기 위해 멀어지면서 확장하십시오. 이렇게 하면 조직 외상을 최소화하면서 해부학적 공간을 횡단할 수 있습니다.
  3. 침샘이 후속 단계를 방해하지 않도록 하면서 와이어 견인기를 초기 위치에 놓습니다.
  4. Type 7 겸자를 사용하여 깊은 목 근막을 제거하고 경동맥 영역에서 흉쇄유돌근을 분리하여 견인기의 위치를 변경합니다.
  5. 경동맥 영역에 접근할 수 있도록 흉쇄유돌근 아래에 도달하도록 견인기의 위치를 변경합니다.
  6. 경동맥 부위에 명확하고 시각적으로 쉽게 접근할 수 있도록 오모설근을 절제합니다.
  7. 경동맥 근막에 함께 붙어있는 경동맥 정맥과 미주 신경에서 경동맥과 그 가지를 풀어줍니다.
    알림: 이 근막은 미주 신경을 손상시키거나 심각한 출혈을 일으키지 않도록 조심스럽게 제거해야 합니다.
    1. 경동맥 트라이어드의 측면에 있는 경동맥 근막을 꼬집고 부드럽게 옆으로 당겨 동맥, 신경, 정맥 및 주변의 모든 혈관 가지를 시각적으로 식별합니다.
    2. Type 5 겸자를 사용하여 근막을 측면으로 당기면서 CCA를 인접 신경 및 정맥에서 분기점과 CCA를 가로지르는 상갑선 정맥까지 분리합니다.
    3. 곡선형 Type 7 겸자를 사용하여 CCA의 하부를 기저 조직과 근막에서 완전히 분리하고 향후 단계에서 클램핑할 준비가 되었는지 확인합니다.
    4. CCA 분지 지점 위의 영역에서 두개골로 진행하면서 두 개의 겸자를 사용하여 경동맥 근막을 찢습니다.
    5. 마찬가지로 경동맥 근막의 느슨한 끝을 내측 및 측면으로 당겨 ECA와 내부 경동맥(ICA)을 근막과 주변 조직에서 각각 정확하게 분리합니다.
    6. 구부러진 Type 7 겸자를 사용하여 ECA 및 ICA를 기본 조직에서 자유롭게 설정합니다.
  8. 두 개의 각각의 가지로 조심스럽게 준비된 CCA를 사용하여 곡선형 7형 집게를 사용하여 ECA를 올리고 N0형 자동 폐쇄 집게로 고정합니다.
  9. 수술대에서 N0형 자동 폐쇄 겸자를 조심스럽게 내립니다.
    알림: ECA의 클램핑 포인트를 재배치하려면 그립을 약간 풀고 ECA 브랜치 포인트를 옆으로 밀어야 하는 경우가 있습니다. 이 시점에서 ECA 클램핑과 브랜치 포인트 사이에 1mm 이상의 ECA가 남아 있는지 확인하는 것이 중요합니다.
  10. ECA를 고정하고 N0 핀셋으로 단단히 고정한 상태에서 ECA 뒤에 두 개의 꼰 실크 실을 삽입합니다.
    알림: 두개골 나사산은 결찰 매듭을 만들며 클램핑 위치에서 두개골 방향으로 배치해야 합니다.
  11. 두개골 실은 영구적이므로 완전히 묶고 여분의 실은 가위로 잘라냅니다.
  12. 꼬리 실을 느슨한 고정 매듭으로 묶습니다.
    알림: MCAO 필라멘트가 통과할 수 있도록 ECA 분기 지점에 가깝게 놓고 느슨하게 유지해야 합니다.
  13. 혈관 마이크로클립을 사용하여 clamp 동맥 절제술 후 출혈을 방지하기 위해 CCA와 ICA를 닫습니다.
    알림: CCA는 맥동하는 고처리량 동맥이므로 CCA에 적용된 마이크로클립이 충분히 강한 그립을 갖도록 하는 것이 중요하며, 그렇게 하지 않으면 이후 단계에서 동물의 과다 출혈과 사망을 초래할 수 있습니다.
  14. 마이크로 스프링 가위를 사용하여 ECA 클램핑 부위 바로 아래에 작은 동맥 절개술을 만듭니다.
    알림: 동맥 절개술은 필라멘트의 실리콘 부분이 들어갈 수 있을 만큼 충분히 커야 하지만 N0형 집게에 의해 유지되는 장력을 손상시키지 않기 위해 ECA 둘레의 절반보다 크지 않아야 합니다.
  15. ECA와 일치하는 각도로 필라멘트를 CCA에 근접한 방향으로 동맥 절개 부위에 삽입하고 ECA의 분기 부위에 있는 느슨한 고정 매듭을 통과하여 필라멘트로 CCA의 루멘에 붙습니다.
  16. 필라멘트의 실리콘 부분 주위의 고정 매듭을 조입니다.
    알림: 필라멘트가 마지막 조작의 중간에 ECA에서 미끄러지는 경향이 있고 그 시점에서 다시 넣는 것은 매우 어렵기 때문에 이 시점에서 세심한 주의가 필요합니다.
  17. ICA 마이크로 클립을 조심스럽게 열고 제거합니다.
  18. 필라멘트를 ECA에 부분적으로 삽입하고 고정한 상태에서 완전한 동맥 절개술을 만들어 MCAO 필라멘트가 내부에 있는 ECA 그루터기를 느슨하게 합니다. 이 시점에서 N0 유형 자동 폐쇄 집게를 풀고 제거하십시오.
  19. 5형 핀셋 한 세트로 ECA 그루터기를 단단히 잡고 약간 올립니다. 다른 집게로 부분적으로 삽입된 필라멘트를 잡고 ECA 그루터기를 내리고 부드럽게 당겨 필라멘트의 안쪽 끝이 ICA 쪽으로 향하도록 합니다. 필라멘트의 실리콘 부분을 끼지 마십시오.
  20. 집게가 필라멘트를 잡고 ICA를 통해 필라멘트를 Wills 원 쪽으로 천천히 전진시킵니다.
    참고: ICA의 첫 번째 분기점은 작업자가 원하는 MCA 분기점을 놓칠 수 있는 유일한 분기점이기도 합니다. 따라서 필라멘트를 MCA 분기점으로 안내하기 위해 약간의 측면 전진 각도가 필요합니다. 약간의 측면 전진 각도로 필라멘트는 익상편 동맥(PPA)에서 멀어지고 전진 끝이 Willis 원에 들어갈 가능성이 더 높아집니다(그림 1).

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그림 1: 익상편구개 동맥 분기점을 지나는 중뇌동맥 폐색 필라멘트 전진의 그림. 적절한 필라멘트 전진(왼쪽)은 MCAO 필라멘트가 ICA의 측벽에 대해 뒤로 물러나고 PPA 분기 지점에서 멀어지도록 구부러지는 방식으로 방향을 지정함으로써 달성됩니다. 그렇게 하지 않으면(오른쪽) 필라멘트가 PPA에 들어가 뇌졸중을 일으키지 않을 수 있습니다. 후자의 경우 필라멘트는 필요한 만큼 전진할 수 없으며 외과의는 필라멘트의 끝이 ICA 분기점에서 보일 때까지 필라멘트를 빼내고 필라멘트를 다시 전진시키기 시작해야 합니다. 녹색의 동맥은 후방 소통 동맥(PcomA)을 나타내며, 대부분 마우스에서 특허가 없습니다. BioRender.com 로 만들어졌습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

  1. 저항의 급격한 증가가 느껴질 때까지 Willis 원을 통해 MCAO 필라멘트를 천천히 전진시킵니다.
    알림: 이 시점에서 필라멘트의 남은 길이를 관찰하는 것이 중요합니다. 필라멘트는 성인 마우스의 ICA 분기 지점에서 최소 7mm 이상 쉽게 진행되어야 합니다.
  2. 허혈 중에 필라멘트가 변위되지 않도록 고정 매듭을 조입니다.
  3. CCA 클립을 제거하고 시간을 기록해 둡니다.
    참고: 이것은 허혈 발병의 시작을 나타냅니다.
  4. MCAO 필라멘트의 느슨한 끝을 경동맥 삼각형과 동측 흉쇄유돌근 사이의 홈에 밀어 넣어 수술 상처 밖으로 튀어나오지 않도록 합니다.
  5. 와이어 견인기를 제거하고 수술 상처의 가장자리를 서로 더 가깝게 가져옵니다. 조직이 해부학적 위치로 돌아갈 수 있도록 수술 부위를 몇 초 동안 가라앉히십시오.
  6. 허혈 기간 후 상처가 더 빨리 다시 열릴 수 있도록 테이프 상처 봉합을 사용하여 수술 상처를 봉합합니다.
    참고: 연구자가 허혈 기간 동안 동물을 깨우고 싶다면 상처가 적시에 다시 열리는 것을 방지하기 위해 상처를 봉합하는 것이 좋습니다.

3. 허혈 기간

  1. MRI 또는 다른 정량적 관류 측정 방법을 사용하여 수술의 성공을 확인합니다.
    참고: MRI 스캔을 수행하는 경우 관류 가중 영상(PWI)은 넓은 MCA 영역에서 심각한 허혈을 보여야 하며 확산 가중 영상(DWI)은 세포 부종으로 인해 겉보기 확산 계수(ADC)가 감소한 부위를 설명해야 합니다.
  2. 허혈 기간이 끝날 때까지 동물을 깨끗한 케이지에 넣으십시오.

4. 필라멘트 철수 수술

  1. 할당된 허혈 시간이 끝나기 약 5분 전에 동물을 위치에 놓고 다시 수술대에 고정합니다.
  2. 테이프 상처 봉합을 제거하고 와이어 리트랙터로 수술 상처를 다시 엽니다.
  3. MCAO 필라멘트의 느슨한 끝 부분을 주변 조직과 고정 매듭 나사의 끝에서 분리합니다.
  4. N0형 겸자를 사용하여 ECA 그루터기의 가장자리를 복부로 꼬집고 당겨 장력을 가합니다. 첫 번째 수술 절차와 유사하게 끼는 집게를 조심스럽게 내립니다.
    알림: 작업자는 고정 매듭을 끼면 매듭을 풀 수 없게 되므로 고정 매듭을 끼지 않아야 합니다.
  5. Clamp 미세혈관 클립으로 CCA를 다시 클릭합니다.
  6. 유형 5 집게를 사용하여 필라멘트 인출을 가능하게 하는 고정 매듭을 풉니다.
    알림: 매듭을 풀기 시작하는 가장 좋은 방법은 개별 부분으로 분리될 때까지 계속 꼬집은 다음 실 끝을 매듭 쪽으로 밀어내는 것입니다.
  7. 실리콘 부분이 ECA 그루터기에서 튀어나오기 시작할 때까지 MCAO 필라멘트를 천천히 빼냅니다. 필라멘트가 완전히 빠질 수 있도록 고정 매듭을 약간 조입니다.
  8. 필라멘트의 실리콘 끝에 가까워지면 고정 매듭을 조여 MCAO 필라멘트를 밀어내고 ECA 그루터기를 한 번에 닫습니다. 필라멘트가 빠진 후 매듭을 완전히 조입니다.
  9. CCA 클립과 함께 끼는 집게를 열고 제거합니다.
    알림: 이것은 허혈 기간의 끝과 재관류 과정의 시작을 표시합니다.
  10. 와이어 견인기를 제거하고 수술 상처의 가장자리를 다시 모읍니다.
  11. 수술 상처 주변부에서 시작하여 봉합하여 기저 조직이 보이지 않도록 상처를 완전히 봉합합니다.
    참고: 필요한 봉합사 수는 수술 상처의 크기에 따라 다릅니다.
  12. 소독용 알코올 물티슈를 사용하여 수술 부위를 청소하고 소독합니다.

5. 수술 후 관리

  1. 동물을 깨끗한 우리에 넣고 마취에서 자발적으로 깨어나도록 합니다.
  2. 더 쉽게 접근할 수 있도록 펠릿 식품을 케이지 바닥에 놓습니다. 식수를 사용하여 식품 펠릿을 부드럽게하십시오. 작은 페트리 접시에 식수를 채우고 케이지 바닥으로 가져옵니다.
  3. 다음 48시간 동안 복강내로 24시간마다 0.25mL 식염수와 부프레노르핀(0.5mg/kg)을 주사합니다.

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결과

수술 중 또는 수술 후 MRI 스캔, 특히 관류 가중 영상(PWI) 및/또는 확산 가중 영상(DWI) 스캔(그림 2)은 성공적인 시술의 결정적인 증거를 제공할 수 있습니다. 수술 중 PWI는 동측 MCA 영역에서 심각한 허혈을 보여 필라멘트 배치가 완전한 폐색을 초래했음을 확인합니다. 성공적인 시술의 수술 후 PWI는 병변 중심부에서 과관류를 표시하고 MCA 영역 경계에서 어느 정도의 재관류를 표시합니다. 수술 중 DWI 병변은 수술 중 PWI에서 관찰된 허혈 영역에 해당합니다. 수술 후 DWI 병변은 허혈성 병변의 중심부로 수축을 나타내며 병변의 겉보기 확산 계수가 현저히 감소하여 수술 중 DWI 병변 및 주변의 재관류된 뇌 조직보다 더 어둡게 만듭니다. 표준 T2 해부학적 스캔은 수술 중 및 수술 후 모두에서 필라멘트로 인한 출혈이 발생하지 않는 한 일반적으로 주목할 만한 것을 보여주지 않습니다

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토론

MCAO는 작업자에게 매우 까다로운 절차이며 동물에게는 쇠약해지는 절차입니다. 이러한 이유로, 연구자들은 뇌졸중의 중증도를 최소화하고, 절차적 실패를 줄이며, 시술 후 동물의 복지를 개선하는 표준 수술 절차를 갖추는 것이 가장 중요합니다. 이 MCAO 프로토콜은 마우스에서 이 절차를 수행할 때 고려해야 할 몇 가지 주요 측면을 강조합니다.

MCAO 필라멘트의 선택은 유도된 뇌졸중 병변의 크기와 위치에 영향을 미치므로 이 절차에서 중요한 단계입니다11. Doccol이 개척한 것과 같은 실리콘 코팅 필라멘트는 필라멘트로 인한 출혈의 발생률을 낮추는 데 큰 도약을 이루었습니다12. 그러나 실리콘 코팅 필라멘트는 크기와 길이가 매우 다양하기 때문에 새로운 연구자가 실험 동물의 MCAO에 적합한 필라멘트를 선택하는 데 어려움이 있습니다. 필라...

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공개 사항

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다. 저자는 이 저작물에 언급된 상업적 이름 및 상표와 관련이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 크로아티아 과학 재단 프로젝트 BRADISCHEMIA (UIP-2017-05-8082)의 자금 지원을 받았습니다. GA KK01.1.1.01.0007 보조금 계약 번호에 따라 유럽 지역 개발 기금을 통해 유럽 연합이 자금을 지원하고, 유럽 지역 개발 기금을 통해 유럽 연합이 자금을 지원합니다. KK.01.1.1.07.0071, 프로젝트 "SineMozak. 박사 과정 학생인 로크 이스터(Rok Ister)와 마르타 퐁락(Marta Pongrac)의 연구는 유럽연합(European Union)이 유럽사회기금(European Social Fund)으로부터 자금을 지원받는 크로아티아 과학재단(Croatian Science Foundation)의 "젊은 연구자 경력 개발 프로젝트 - 박사과정 학생 교육"의 전폭적인 지원을 받았습니다. 수술 과정은 일반 카메라 마운트를 사용하여 수술용 현미경에 장착된 Android 스마트폰을 사용하여 촬영되었습니다. 비디오 자료를 편집하고 Wondershare Filmora 비디오 편집기를 사용하여 음성 해설을 녹음했습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Betadine 피부 용액 10g/100ml알칼로이드 SkopjeN/A
꼰 실크 봉합Fine Science Tools18020-60
Dafilon 봉합사 5/0 DS16B. BraunC0936154
Dolokain 20 mg/g gelJadran-Galenski LaboratorijN/A
Dumont #5 집게Fine Science Tools11251-202개
Dumont #7 집게Fine Science Tools11271-30
Dumont N0 자동 폐쇄 집게Fine Science Tools11480-11
Durapore 수술 테이프 1,25cm x 9,1m3M7100057169
Durapore 수술 테이프 2,5cm x 9,1m3M7100057168
외부 온도 조절기Petnap1012536
Halsey 바늘 홀더Fine Science Tools12500-12
핫 비드 살균기Fine Science Tools18000-50
Iris 가위Fine Science Tools14060-10
Isoflurane USPPiramal critical careN/A
레이저 도플러 모니터Moor MOORVMS-LDF2
Metal Pet Heat PadPetnap
Micro Vannas 스프링 가위Fine Science Tools15000-00
Mini-colibri retractorFine Science Tools17000-01
Recugel eye ointmentBausch& 롬N/A
S& T B-1 용기 마이크로 클램프 파인 사이언스 도구00396-012 개
S & T 마이크로 클램프 적용집게 Fine Science Tools00071-14
Schwartz micro serrefinesFine Science Tools18052-01
Stemi DV4 Spot stereo microscopeZeiss000000-1018-453
Steri-Strip Reinforced adhesive Skin Closures 3 mm x 75 mm3M7100236545
Straight tissue ViewportScience Tools11023-10
SZX 스탠드 암올림푸스SZ2-STS
, Tec III 300 시리즈 보정 기화기, 기화기 판매 및 서비스 inc.N/A
범용 스탠드 유형 2OlympusSZ2-STU2
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참고문헌

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