방법 논문

Goat Intestinal Inverted Sacs를 사용한 히스티딘의 막 수송 시연: 학부생을 위한 체험 교육 도구

DOI:

10.3791/66882

⸱

2024년 10월 4일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry, Sri Venkateswara College, University of Delhi

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에서, 우리는 염소 장에서 히스티딘의 막 수송을 보여주는 저렴하고 재현 가능한 방법을 보고합니다. 이 과정은 나트륨 구배에 의해 활성화된 히스티딘과 나트륨 이온이 장세포막을 가로질러 함께 운반함으로써 발생합니다. 이 방법은 생체 막을 가로지르는 용질 이동을 더 잘 이해하기 위해 경험 학습 교육학을 활용합니다.

초록

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히스티딘은 필수 아미노산으로 면역 체계, 폐 환기 및 혈관 순환과 관련된 대사 산물의 전구체이기도 합니다. 식이 히스티딘의 흡수는 주로 장세포의 정점 막에 존재하는 광범위한 중성 아미노산 수송체(B0AT)에 의한 나트륨 결합 중성 아미노산 수송에 의존합니다. 여기에서는 염소 jejunal inverted sacs를 사용하여 내강에서 장 융모 장세포에 의한 히스티딘의 흡수를 보여줍니다. 다양한 농도의 나트륨과 히스티딘에 노출된 jejunal sacs를 분석하여 시간의 함수로 sac 내부의 히스티딘 농도를 측정했습니다. 그 결과 활성 히스티딘 흡수가 나타났습니다. 소금의 농도를 증가시키면 히스티딘의 흡수율이 높아져 염소 장 함낭에서 나트륨과 히스티딘 흡수의 공존을 시사합니다. 이 프로토콜은 적절한 변형을 통해 아미노산 또는 기타 대사 산물의 장 이동성을 시각화하는 데 적용될 수 있습니다. 우리는 이 실험을 학부생들이 막 전달의 개념을 이해하는 데 도움이 될 수 있는 경험적 교육 도구로 제안합니다.

서론

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생물학적 세포는 세포내 세포질과 세포외 내용물을 분리하는 막 지질 이중층으로 둘러싸여 있습니다. 멤브레인은 용질(1)의 움직임을 조절하는 반투과성 장벽 역할을 한다. 생체막을 통한 수송은 용질의 투과성 계수에 의해 영향을 받으며, 이는 용질의 농도 및 전하를 포함한 여러 요인에 따라 달라집니다. 일반적으로 용질은 세 가지 메커니즘(그림 1)을 사용하여 멤브레인을 통해 이동합니다: 수동 확산(passive diffusion), 촉진 확산(facilitated diffusion) 및 능동 수송(active transport)2. 단순 확산은 용해성, 비전하 및 비극성 용질이 반투과성 멤브레인을 통해 농도 구배를 전달하는 과정입니다(그림 1A). 막 단백질은 더 높은 농도의 지역에서 더 낮은 농도의 영역으로의 용질의 이동을 포함하기 때문에 이 과정을 돕지 않습니다. 확산 속도는 Fick의 법칙3을 기반으로 합니다. 반면에, 촉진 확산은 단백질 의존적 수송으로, 멤브레인은 에너지 소비 없이 선택적 용질만 농도 구배를 통과할 수 있습니다(그림 1B). 이러한 종류의 수송은 구체적이며 포화 역학을 나타내는 데 있어 단순 확산과 다릅니다.

능동적 수송은 농도 구배에 대한 분자의 단백질 의존적 수송, 즉 ATP 또는 이온 구배를 사용하여 낮은 농도 영역에서 더 높은 농도 영역으로의 분자 수송입니다(그림 1C). 수송체가 ATP를 가수분해할 때, 수송체를 1차 능동 수송(primary active transport)이라고 부른다(그림 1C; 왼쪽 패널). 능동 수송의 또 다른 형태는 2차 능동 수송이다(그림 1C, 오른쪽 패널). 2차 능동 수송에서 용질은 전기화학적 구배를 기반으로 이동합니다. 이는 수송 단백질이 이온(일반적으로 Na+)의 이동을 농도 구배 아래로 다른 분자 또는 이온의 이동과 농도 구배에 대한 이동과 결합할 때 발생합니다. 이러한 종류의 용질 이동은 용질과 이온이 모두 같은 방향으로 이동하는 공동 수송(Symport) 또는 용질과 이온이 반대 방향으로 이동하는 교환(Antiport)일 수 있습니다.

식품 공급원의 식이 아미노산과 단당류는 소장에서 흡수됩니다. 소장은 기능적으로 십이지장(Duodenum), 제주눔(Jejunum), 회장(Ileum)의 세 부분으로 나눌 수 있습니다(그림 2). 용질의 흡수는 소장 전체에서 이루어지며, jejunum과 회장의 근위 끝에서 최대 흡수가 발생합니다. 장 장세포는 분극된 세포이며, 인접한 두 세포를 연결하는 긴밀한 연접은 기저외측과 정점 막 부위라는 두 개의 별개의 막 부위를 생성합니다(그림 2). 분해에 의해 생성된 발광 용질의 흡수는 정점 막 부위4에서 발생합니다.

정점 막의 장 장세포에서의 히스티딘 수송은 나트륨 의존적인 2차 활성 교감의 예입니다. 기저외측 말단에서 장세포로 들어가는 히스티딘은 농도 구배를 따라 간문맥 순환으로 이동합니다. 장내 나트륨의 세포 내 농도는 12mmoles/L1로 유지되며, 이는 기저막에 위치한 Na+ K+ATPase에 의해 세포 밖으로 나트륨을 활발하게 펌핑하기 때문에 세포 외측/발광 농도보다 낮습니다(그림 3). 장세포의 정점 막에서 B0AT와 나트륨 중성 아미노산 수송체 (SNAT) 5는 나트륨 의존성 공동 수송체(5,6)에서 히스티딘뿐만 아니라 아스파라긴 및 글루타민과 같은 아미노산을 운반하는 주요 수송체입니다. 장세포의 기저막에 존재하는 LAT(Large Amino Acid Transporter)1라고 불리는 또 다른 수송 단백질은 류신, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌과 같은 큰 중성 아미노산을 세포막을 가로질러운반한다 7.

체험 학습 교육학을 통해 분광 광도법 및 일상적인 생화학 분석과 같은 기술과 통합된 막 수송의 개념을 가르치는 것을 목표로 하기 때문에 개념을 이해하기 쉬운 용어로 보여줄 수 있을 뿐만 아니라 학부생의 참여 학습을 가능하게 하는 방법론을 개발하는 것이 필수적입니다. 현재 학생들이 생화학의 이러한 개념을 배우기 위해 직접 참여할 수 있는 리소스는 제한되어 있습니다. 여기에서는 학부 실험실에서 쉽게 재현할 수 있고 다른 대사 산물의 수송을 평가하는 데에도 적용할 수 있는 염소 장막을 통한 히스티딘 수송을 입증하기 위한 간단한 프로토콜을 보고합니다. 더 중요한 것은 이 방법이 학부 실험실에서 저렴한 재료를 사용하므로 가장 단순한 실험실 환경에서도 체험 학습이 가능하다는 것입니다.

프로토콜

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모든 단계가 포함된 전체 프로토콜은 그림 4의 개략도에 나와 있습니다. 이 방법은 쥐의 내장을 사용한 이전 연구에서 채택된 것이다8. 실험은 기관 지침에 따라 수행되었습니다. 이 연구에 사용된 샘플은 상업 공급업체에서 조달했습니다.

주의: 이 실험 중에는 장갑을 착용하십시오.

1. 거꾸로 된 Jejunum sacs의 준비

  1. 염소 jejunum을 전처리하고 청소하십시오.
    1. 갓 희생 된 건강한 염소의 내장을 허가 된 공급 업체에서 조달하십시오.
    2. 내장을 1x 인산염 완충 식염수(PBS)에 충분히 넣어 청소를 위해 완전히 담그도록 합니다.
    3. 소장과 대장을 분리하고 외부 결합 조직을 가위로 제거하십시오.
    4. 10mL 주사기를 사용하여 1x PBS로 소장을 부드럽게 세척하고 소화되지 않은 음식 물질을 제거하여 속이 빈 소장 백을 얻습니다. 효과적인 청소를 위해 이 과정을 세 번 이상 반복하십시오.
      알림: 세척하는 동안 과도한 힘이나 바늘을 사용하지 마십시오. 힘을 가하면 장 벽에 구멍이 뚫려 장 세포가 손상될 수 있습니다.
    5. 자를 사용하여 소장의 전체 길이를 측정하여 십이지장(소장의 1/4)과 제주눔(Jejunum)과 회장(Ileum)으로 균등하게 나뉘는 나머지 부분의 세 부분을 얻습니다.
    6. Jejunum 파트를 이용하여 실험을 진행한다.
  2. 거꾸로 된 Jejunum을 준비합니다.
    1. 칼날을 사용하여 결합 조직을 모두 제거하여 jejunum 부분을 청소하십시오.
    2. jejunum을 12-15cm 길이로 자르고 1x PBS로 세척 한 다음 PBS가 들어있는 페트리 접시에 담습니다.
    3. 융모 부분이 외부로 노출되도록 유리 막대를 사용하여 제주눔 부분을 반전시킵니다.
      주의: 모서리가 날카로운 유리 막대를 사용하지 마십시오. 또한 유리 막대의 직경은 주머니의 직경보다 크지 않아야 합니다.
      참고: 이 시점에서 광학 현미경으로 융모를 시각화할 수 있습니다(그림 4).
    4. 반전된 jejunum 부분을 1x PBS로 부드럽게 씻어냅니다.
    5. 거꾸로 된 jejunum의 측면에서 누출이 있는지 확인하십시오.
    6. 거꾸로 된 제주눔 부분을 5cm 길이의 주머니로 자릅니다.
    7. 한쪽 끝을 노끈으로 묶고 주머니를 PBS로 채워 묶인 끝에서 시각적 누출이 있는지 다시 확인합니다.
    8. 다른 쪽 끝을 묶어 외부 표면에 융모가 있는 빈 거꾸로 된 주머니를 만듭니다.
    9. 거꾸로 된 주머니를 여과지에 두드려 외부 누출 여부를 다시 확인하십시오.
  3. 1x PBS에서 역주머니를 평형화합니다.
    1. 당일에 실험을 진행하거나 4°C에서 1x PBS에 주머니를 밤새 보관합니다.

2. 히스티딘 수송을 위한 실험 설정

  1. 표 1과 같이 서로 다른 농도의 염화나트륨에 따라 3개의 50mL 튜브로 구성된 2세트를 조립합니다.
  2. 준비된 장 주머니를 각 세트에 대해 30분, 60분 동안 지정된 튜브에 담그십시오.
  3. 지정된 시간이 지나면 별도의 1.5mL 미세 원심분리기 튜브에서 주머니 내부의 용액을 비우고 부피를 측정합니다.
  4. 2mL 주사기를 사용하여 주머니 내부의 액체를 흡인합니다. 또는 주머니의 한쪽 끝을 풀고 내용물을 새 1.5mL 튜브에 모읍니다.
  5. 히스티딘 추정을 위해 수집된 샘플의 0.1mL를 분석하고 표준 그래프를 사용하여 농도를 계산합니다.

3. Pauly의 반응을 이용한 히스티딘의 추정

  1. 히스티딘에 대한 표준 곡선을 준비합니다.
    1. 히스티딘(5mM)과 물의 원액을 사용하여 표 2 에 표시된 대로 다양한 농도의 히스티딘 용액을 제조합니다.
    2. 각 튜브에 설판실산(0.5mL)과 질산나트륨(0.5mL)을 추가합니다.
    3. 실온에서 5분 동안 튜브를 배양한 다음 각 튜브에 탄산나트륨과 에탄올 각각 1mL를 추가합니다.
    4. 실온(~20°C)에서 20분 동안 튜브를 배양하고 파장 490nm에서 흡광도를 확인합니다.
    5. 흡광도 대 히스티딘 농도의 표준 곡선을 플로팅합니다.
      참고: 이 히스티딘 검사는 디아조 화합물을 형성하는 히스티딘의 특성을 기반으로 합니다(그림 5).

결과

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장 융모에 의한 히스티딘이 역낭의 내강으로 흡수됨으로써 히스티딘의 장 이동성을 입증하기 위한 실험적 워크플로우는 그림 4, 표 1 및 표 2에 설명되어 있습니다. 세 가지 독립적인 실험 설정이 수행되었으며 대표 데이터가 그림 6에 나와 있습니다.

주어진 실험 조건에서 Pauly의 반응을 사용한 히스티딘 추정은 300μM까지 Lambert Beer의 법칙을 따랐습니다(그림 6A). 히스티딘에 대한 이 검사는 시약의 아미노산과 디아조늄 이온 사이의 결합에 의존합니다. Pauly의 시약에는 농축된 염산에 용해된 설판실산이 있습니다. 이 산은 질산나트륨과 HCl의 존재 하에 디아조트화(diazotization)를 거칩니다. 디아조늄 염 p-페닐디아조설포네이트는 알칼리성 조건에서 히스티딘 분자와 반응하여 짙은 빨간색/주황색에서 노란색 복합체를 형성하며, 이는 490nm에서 분광광도계로 읽을 수 있습니다(그림 5)9. 이 검사는 히스티딘과 티로신에 의해 주어진다는 점에 유의할 수 있습니다. 이 연구에 사용된 테스트는 냉각 조건에서 아질산나트륨을 사용하는 대신 질산나트륨을 실온(~20°C)에서 직접 사용하도록 원래 반응을 약간 수정한 버전입니다9.

역낭 내부에서 회수된 샘플에서 관찰된 양성 폴리 반응은 장 융모를 가로지르는 히스티딘의 흡수를 보여줍니다. 그림 6B 는 장세포에서 히스티딘 흡수와 나트륨 농도 사이의 상관관계를 보여줍니다. 배양 시간이 30분에서 60분으로 증가함에 따라 히스티딘의 흡수가 증가하는 것은 2차 활성 수송을 나타냅니다.

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그림 1: 다양한 유형의 멤브레인 수송. 다양한 종류의 멤브레인 수송 시스템을 보여주는 개략도. (A) 수동적 확산. (B) 촉진 확산. (C) 1차 능동 수송(왼쪽) 및 2차 능동 수송(오른쪽). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 2: 장 융모의 장세포 조직. 이 그림은 소장에 초점을 맞추고 세 가지 뚜렷한 부분, 즉 십이지장(Duodenum), 제주넘(Jejunum) 및 회장(Ileum)을 보여줍니다. 또한 소장에는 융모라고 하는 손가락 모양의 돌기가 있어 섭취한 음식물을 흡수할 수 있는 표면적을 증가시킵니다. 미세융모는 아미노산 흡수를 위한 특정 수송체를 포함하는 장세포(enterocyte)라고 불리는 세포를 가지고 있습니다. 단단한 접합은 세포 사이에서 용질의 이동을 방지합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 3: 아미노산 수송체가 있는 장세포. 만화는 정점과 기저측 끝을 보여주는 하나의 장세포를 나타냅니다. 정점 말단에는 B0AT 및 SNAT5 단백질과 같은 수송체가 있고 기저막에는 LAT1 수송체가 포함되어 있습니다. 이러한 단백질은 함께 장 내강에서 문맥 순환까지 히스티딘의 흡수를 담당합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 4: 염소 장 도립 주머니를 사용한 히스티딘의 막 수송을 보여주는 프로토콜의 개략 도.염소 창자는 설명된 대로 조달, 사전 처리 및 세척되었습니다. 간단히 제주눔을 절제하고 거꾸로 된 주머니를 준비했습니다. 이 주머니는 다양한 염 농도에서 히스티딘 흡수를 정량화하기 위한 실험을 설정하는 데 사용되었습니다. 융모는 광학 현미경을 사용하여 400x 배율로 관찰되었습니다. 자세한 절차는 텍스트에 나와 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 5: Pauly의 방법에 대한 반응. Pauly의 테스트는 농축된 염산에 설파닐산을 함유한 시약에서 디아조늄 이온을 형성하는 것을 포함합니다. 알칼리성 조건에서 히스티딘은 디아조늄 염과 반응하여 분광 광도계를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정할 수 있는 적색 화합물을 형성합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 6: Pauly의 방법에 의한 히스티딘 추정. (A) 히스티딘에 대한 표준 곡선. 0-300 μM에 이르는 다양한 농도의 히스티딘을 Pauly의 반응에 가하고, 형성된 복합체를 파장 490 nm에서 측정하였다. (B) 장낭에서의 히스티딘 수송을 150mM(단단한 검정색) 및 200mM NaCl(단단한 회색) 염 용액의 존재 하에 30분 및 60분 동안 추적했습니다. 역주머니 내부의 히스티딘 농도는 표준 곡선을 사용하여 추정되었습니다(그림 6A). 값은 대조군(0mM NaCl)에 대해 보고됩니다. 세 가지 기술 복제가 수행되었으며 대표 데이터가 제시되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

표 1: 히스티딘의 장 이동성에 대한 실험 설정. 이 표는 두 시점에 걸쳐 서로 다른 농도의 염화나트륨에서 장낭의 배양을 보여줍니다. 이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

표 2: 히스티딘에 대한 표준 곡선의 제조. 이 표는 0-300 μM 범위의 알려진 히스티딘 농도를 가진 Pauly의 반응에 대한 다양한 단계와 구성 요소를 보여줍니다. 이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

토론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

멤브레인 수송은 기초 또는 응용의 모든 주요 생물 과학 분야의 학부생에게 가르치는 가장 기본적인 개념 중 하나입니다. 전통적으로 멤브레인을 가로지르는 움직임은 방사성 동위원소로 표지된 대사 산물을 사용하여 시각화되었습니다. 그러나 이러한 방법은 매우 위험하며 교육 또는 학습에 적합하지 않습니다. 체험 학습은 이러한 복잡한 개념을 이해하는 데 가장 적합한 교육 기법이지만, 인프라 부족, 값비싼 형광 기반 염료/대사 산물, 그리고 가장 중요한 동물 해부 실험 금지로 인해 더욱 복잡해지는 과제입니다. 따라서 학부 실험실 환경에서 안전할 뿐만 아니라 저렴하고 실현 가능한 도구와 대체 방법을 개발할 필요가 있습니다. 여기에서 학부생을 위해 막 전달을 가르치는 새로운 방법이 개발되었습니다. 보고된 프로토콜은 Agar et al. 19548에서 적응된 것으로, 염소 장 세포를 가로지르는 히스티딘의 단방향 활성 막 수송을 보여줍니다. 이 연구는 장막 전체의 히스티딘 흡수를 시각화하기 위해 색도 측정 기반 분석의 사용을 입증하기 위해 수행되었습니다. 학생들이 간단하고 재현 가능하며 이해할 수 있으며 모든 실험실 환경에서 수행할 수 있습니다.

거꾸로 된 장낭 모델은 Wilson과Wiseman 10에 의해 처음 개발되었으며, 나중에 조직의 생존력을 높이기 위해 개선되었습니다. 약물 흡수의 메커니즘과 동역학은 gut inverted sacs11을 사용하여 설명되었습니다. 이 모델의 장점은 흡수를 위한 넓은 면적을 포함합니다. 그러나 조직 생존율은 제한 매개변수 중 하나입니다. 장 조직은 ~ 2 h11 동안 생리적 조건에서 생존 가능하고 신진 대사 적으로 활성 상태를 유지한다고보고되었습니다. 고려해야 할 이 접근법의 또 다른 잠재적인 주의 사항은 역주머니 제제에서 근육 점막과 장액을 제거할 수 없다는 것입니다. 특정 화합물이 근골층에 결합하면 이러한 화합물의 수송을 제한하거나 과소평가할 수 있습니다. 역장낭 모델은 민감하고 특이적이지만 다양한 요인이 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 이러한 요인에는 동물의 나이, 성별, 종, 식단 및 질병 상태뿐만 아니라 분석에 사용되는 장 부분(회장, 제주넘, 십이지장 및 결장)이 포함됩니다. pH, 통기 및 온도와 같은 환경 요인도 결과에 영향을 미칠 것입니다12.

장과 동물의 상태(살아있는/죽은 상태)의 채취 지연이 쥐 장의 십이지장 분절에서의 활성 수송에 영향을 미치는 것으로 나타났습니다. 마취된 동물로부터 채취하면 시간 지연을 최소화하여 운송업체의 성능 저하를 방지할 수 있다13. 그러나 대학에서 동물 해부를 금지했기 때문에 갓 희생 된 동물의 내장이 실험 설정에 사용되었습니다. 이 프로토콜은 장세포 전반에 걸쳐 대사 산물의 정성적 흡수를 확립하는 데 성공적으로 사용할 수 있지만, 막 수송 역학과 관련된 연구에서의 사용은 제한적입니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 단계는 생존 가능한 장세포로 누출 방지 도립 장 주머니를 성공적으로 준비하는 것입니다. 융모와 장세포의 섬세한 특성과 생존력은 도전을 제기하며, 이는 연습으로 극복할 수 있습니다. 더욱이, 시작 물질이 근친교배, 합성 동물 집단에서 유래하지 않았다는 점을 감안할 때, 실험 간 결과의 변동성은 중요한 단점입니다. 이것은 동일한 동물에서 여러 복제를 사용하여 극복 할 수 있습니다. 이러한 점을 염두에 두고, 본 연구에서 제시하는 방법은 학부 실습에서 교육적 도구로 엄격하게 사용되어야 한다.

설명된 프로토콜은 히스티딘의 수송을 입증하는 데 성공적으로 사용되었습니다. 나트륨과 히스티딘이 역주머니(inverted sacs)로 단방향으로 흡수되는 것은 2차 능동 수송(secondary active transport)의 symport 유형을 나타냅니다. 중성 아미노산의 장 흡수는 Na+ K+ ATPase에 의해 설정된 농도 구배에 의존하는 벡터 역학을 따릅니다. 유사한 설정은 세포 내 음막 전위와 150mM의 세포 외 나트륨 농도를 유지합니다. 이 두 가지 모두 정점 말단에서 B0AT에 의해 중성 아미노산의 활성 수송을 유도하고 LAT1에 의해 기저외측 말에서 장세포로부터의 후속 이동을 주도합니다. 흥미롭게도, 더 높은 염 농도(200mM)에서는 시간에 따른 흡수율에 큰 차이가 없었습니다. 현재로서는 그러한 관찰의 이유에 대해 언급 할 수 없습니다. 그러나 동일한 실험 설정을 확장하여 다양한 시점을 가진 여러 나트륨 농도와 150mM 염화콜린을 사용한 대조군을 포함하여 나트륨 의존성 수송 및 포화로 인한 가능한 기여도를 표시할 수 있습니다.

원칙적으로, 염소/돼지/쥐/생쥐의 역제주늠낭은 추정을 위한 생화학적 분석이 있는 경우 다양한 식이 대사 산물의 장 흡수를 입증하는 데 사용할 수 있습니다. 또한 장 흡수 또는 막 수송 억제제를 잠재적으로 방해할 수 있는 다른 구성 요소의 효과도 분석할 수 있습니다. 도립낭은 체외 약물 흡수, 약물의 장 대사 및 약물 흡수에서 수송체의 역할을 연구하기 위한 제약 연구의 도구로 효율적으로 사용되었습니다. 마지막으로, 이 기술은 막 수송에 대한 생체 외 시연의 한 예이며 cell-free 추출물(in vitro)이 아닌 조직 샘플에 의존합니다. 그러나 이러한 이점은 감염되지 않은 염소/돼지/쥐 장의 가용성에 의해 상쇄되며, 이는 제한 요인이 될 수 있습니다.

학습 과정을 향상시키기 위해 교사가 사용할 수 있는 많은 교육 도구 중에서 경험 학습 또는 '행동에 의한 학습'은 학생들에게 강의 주제에 대한 전체적인 이해를 얻을 수 있는 기회를 제공하는 가장 진보적이고 효과적인 교육 방법인 교육 철학이자 방법론입니다. 체험 학습은 학생뿐만 아니라 강사의 실습 참여를 보장하며, 강사는 이 적극적인 학습 과정에서 지원과 멘토링을 제공합니다14. 이는 전통적인 이론적 교실 수업에 대한 훌륭한 대안으로 작용하며, 특히 학생들이 종종 상상하기 어려운 멤브레인 수송과 같은 특정 무겁고 통합적인 개념에서 그렇습니다. 이러한 연습은 또한 동료와 멘토 모두의 상호 작용 및 협력 학습을 장려할 것입니다. 본 이니셔티브는 유익할 뿐만 아니라 기억에 남을 뿐만 아니라 학생에게 변화를 줄 수 있는 학습 경험을 만들고 가능하게 하는 방향으로 한 걸음 더 나아가 전반적인 학습 경험에 큰 영향을 미칩니다.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 경쟁하는 재정적 이익이나 기타 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 델리 대학교 스리 벤카테스와라 대학(Sri Venkateswara College)의 생화학과(Department of Biochemistry)의 지원을 받았습니다. 저자들은 실험실 직원들의 지원에 감사를 표합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브TARSONS500020
10mL 테스트 튜브BOROSIL9800U04
50mL 멸균 팔콘 튜브TARSONS546041
500mL 비커BOROSIL10044977
500mL 코니컬 플라스크BOROSIL691467
D-글루코스SRL42738
디지털 분광 광도계SYSTRONICS2710
에탄올EMSURE1009831000
FinpipettesTHERMOFISHER4642090
유리 교반기 막대BOROSIL9850107
L-Histidine SRL17849
NaClSRL41721
니트릴 장갑KIMTECH112-4847
페트리 디쉬 TARSONS460090
인산염 완충 식염수 (ph 7.4)SRL95131
피펫 팁ABDOSP10102
탄산나트륨SRL89382
질산나트륨 SRL44618
소듐 포스페이트 이염기성 (무수)SRL53046
소듐 포스페이트 모노베이직 (무수)SRL22249
설파닐산 SRL15354

참고문헌

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  1. Nelson, D. L., Cox, M. M. Lehninger Principles of Biochemistry. 7th Edition. , W.H. Freeman and Company. (2017).
  2. Stillwell, W. Membrane Transport. An Introduction to Biological Membranes. , Elsevier Science. (2013).
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