이 프로토콜은 테스토스테론 또는 에스트라디올과 시프로테론 아세테이트(트랜스젠더를 위한 인간 치료에 사용됨)의 피하 투여를 통해 성별을 확인하는 호르몬 요법을 모방한 두 가지 설치류 모델의 개발, 용량 설정, 관련 바이오마커 식별 및 효과 평가를 설명합니다.
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방법 논문
성별 확인 호르몬 요법을 모방한 쥐 모델 수립
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
트랜스젠더(TG)는 출생 시 지정된 성 정체성과 성별이 일치하지 않는 개인입니다. 그들은 종종 성별 확인 호르몬 요법(GAHT)을 받는데, 이는 개인의 성별 정체성에 더 부합하는 2차 성징을 획득할 수 있도록 하는 의학적 개입으로, 수많은 사회 심리적 변수를 개선하는 데 일관된 결과를 제공합니다. 그러나 GAHT는 다른 신체 시스템을 표적으로 하며 아직 완전히 확인 및 특성화되지 않았지만 일부 부작용이 기록되어 있습니다. 그러므로, GAHT를 받는 TG 환자는 감염되기 쉬운 하위 집단으로 간주될 수 있으며, 위험 평가의 틀에서 특별한 주의를 기울여야 합니다(예: 대상 동물 모델의 사용을 통해). 본 연구는 GAHT를 모방한 두 가지 랫트 모델, 즉 TG 여성을 위한 GATT를 모방한 탈남성화-여성화 모델(dMF)과 TG 남성을 위한 GAHT를 모방한 탈남성화-남성화 모델(dFM)을 구현하기 위한 절차를 설명한다. 이 모델은 인간 GAT(인간 GHT)에 사용되는 것과 동일한 호르몬, 즉 β-에스트라디올과 dMF용 시프로테론 아세테이트, dFM용 테스토스테론을 투여하여 2주 동안 동일한 노출 경로로 구현되었습니다. 쥐는 치료 기간 동안 건강 상태와 잠재적으로 공격적인 행동을 평가하기 위해 매일 검사를 받습니다. 희생 시 혈액과 표적 조직을 샘플링하여 생화학적, 분자적, 조직병리학적 분석을 위해 보관했습니다. 성별에 따른 매개변수, 즉 정자 수와 음핵 크기도 평가되었습니다. 또한, 남성과 여성의 쥐 간에서 독점적으로 및/또는 우선적으로 발현되는 CYP450 동형은 GAHT의 성공을 확인하고 모델을 설정하기 위해 새로운 바이오마커로 확인 및 특성화됩니다. 갑상선 침범은 또한 내분비계의 핵심 표적으로 연구되어 왔습니다.
서론
남성, 여성, 둘 다, 둘 다 아님 또는1 사이 어딘가에 있는 개인의 심리적 인식을 성 정체성이라고 합니다. 생물학적 성별(cisgender)과 일치하거나 다를 수 있습니다(트랜스젠더 - TG). TG 남성은 여성으로 태어났지만 자신을 남성으로 식별하는 개인입니다. TG 여성은 남성으로 태어나지만 자신을 여성으로 정체화한다2. 현재 전 세계적으로 2,500만 명의 TG 인구가 있는 것으로 추정되며3 이들 대부분은 성별 불쾌감(gender dysphoria)을 앓고 있으며,이는 자신의 성별과 태어날 때 지정된 성별 사이의 불일치를 특징으로 하는 심리적 상태4이며, 이는 사회적 차별과 직장 및 가정에서의 어려움을 초래할 수 있으며, 종종 우울증으로 이어질 수 있다. 불안과 스트레스5. 이러한 이유로 TG 사람들은 종종 성별 확인 호르몬 요법(GAHT) 및/또는 성별 확인 수술을 받습니다. TG 남성의 경우 GAHT는 테스토스테론(T)(표 1), TG 여성의 경우 에스트로겐(E2)과 항안드로겐제....
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프로토콜
연구는 Directive 2010/63/EU, 2014년 3월 4일 이탈리아 법령 n. 26 및 OECD GLP(Good Laboratory Practice) 원칙에 따라 수행되었습니다. 연구 프로토콜은 이탈리아 보건부의 승인을 받았습니다(승인 번호 806/2021-PR). 여기에서는 남녀 모두의 성적으로 성숙한 어린 Sprague-Dawley 쥐 16마리(13g 수컷 쥐 304마리와 7g 암컷 쥐 190±±, 8-9주령)를 구입하여 표준 실험실 조건(22± 0.5°C, 50%-60% 상대 습도, 시간당 12-14회의 공기 변화와 12시간의 암흑광 교대)에서 물과 먹이를 자유롭게 이용할 수 있습니다. 모든 케이지에서 각 동물의 환경 풍요로움을 위해 나무 갉아먹는 블록을 삽입하고 매주 교체하십시오.
참고 : GAHT는 설치류의 경우 8-9 주에 해당하는 청소년기 (Tanner stage 2-3)에 시작할 수 있기 때문에 8-9 주 된 동물이 선택되었으며 잠재적으로 TG people9의 전체 수명 동안 지속됩니다.
1. 그룹 크기 조정 및 동물 관리
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결과
Tassinari et al.14 및 Tammaro et al.33에 의해 입증된 바와 같이, 다음 결과는 쥐에 대한 GATT의 성공과 모델의 적절성을 보여주었습니다.
사망률이나 공격성과 같은 비정상적인 행동은 기록되지 않았으며, 독성이나 고통의 임상적 징후(예: 활동 감소, 필로렉션, 단장되지 않은 외모)는 관찰되지 않았다14.
발정기와 발정기 동안 성체 수컷 쥐와 암컷 쥐의 혈장 T 농도는 각각 5.71 ± 0.84 ng/ml 및 1.24 ± 0.29 및 0.80 ± .36 ng/ml이다34. 생식선이 손상되지 않은 쥐의 평균 순환 T 수준은 3.5 ± 0.5 ng/mL35입니다. 두 모델 모두에서 대조군 쥐에서 측.......
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토론
GAHT를 모방한 설치류 모델의 구현은 TG 사람들의 잠재적인 특정 감수성과 취약성, 그리고 일반적으로 평생 지속되는 치료법의 장기적인 결과를 연구하는 데 중요합니다.
문헌에 유사한 연구가 거의 없다는 점을 감안할 때 이 실험의 중요한 점은 모델을 설정하기 위한 용량을 선택하는 것입니다. 이러한 용량은 부작용, 독성 및/또는 사망을 일으키지 않고 동물에 대한 장기 투여와 양립할 수 있을 만큼 충분히 낮아야 합니다. 또 다른 중요한 점은 인간이 선호하는 경로를 고려하여 채택하는 가장 좋은 투여 경로입니다. 실제로, dFM 모델에서는 T가 TG 남성의 임상 실습에 따라 투여되지만(15) dMF 모델에서는 투여 경로가 TG 여성15의 임상 실습과 겹치지 않았다. 보다 신뢰할 수 있는 방법을 확립하기 위해서는 추가 실험이 필요합니다. 사실, .......
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공개 사항
저자는 이 연구가 잠재적으로 이해 상충을 일으킬 수 있는 상업적 또는 재정적 관계 없이 수행되었다고 선언합니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 분석 저울 ABJ 320-4NM | Kern | Z741091 | |
| Bouin | Biooptica | 05-M01008 | |
| 원심분리기 5415 R | Eppendorf | 프 | |
| 시프로테론 아세테이트 시그 | 마-알드리치 | C3412 | |
| D-MEM 배지 | Gibco | ||
| ExcelTaq 2X 고속 Q-PCR 마스터 믹스(SYBR, ROX), 200 RXN | 스모비오 | TQ1210 | |
| 포르말린 용액, 중성 완충, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| GraphPad Prism 소프트웨어 버전 5.0 Windows | GraphPad 소프트웨어 | ||
| 헤마톡실린 | 바이오옵티카 | 05-06002/L | |
| 헤오신 | 바이오옵티카 | 05-10007/L | |
| 이미징 소프트웨어 | Nikon | NIS-BR | |
| JMP 10 통계 소프트웨어 | SAS Institute | ||
| Microm | Thermo Scientific | HM 325 | |
| 현미경 | Nikon Microphot FX | ||
| 마우스/쥐 테스토스테론 ELISA | Biovendor | RTC001R | 96T |
| NanoDrop 1000 분광 광도계 | Thermo Scientific | ND-1000 | |
| 파라피나 | Biooptica | 087910 | |
| 휴대용 저울 SCOUT STX2202 | 오하우스< | br/> 30253064 | |
| 프라이머 프라이머 | 라이프 테크놀로지 | PrimerBlast | |
| 쥐 에스트라디올 ELISA | 바이오벤더 | RTC009R | 96T |
| 쥐 TSH(갑상선 자극 호르몬) ELISA 키트 | ELK 생명공학 | ELK2283 | 96T |
| 쥐 TSH(갑상선 자극 호르몬) ELISA 키트 | ELK 생명공학 | ELK2283 | 96톤 |
| SensiFASTcDNA 합성 키트 | Bioline | BIO-65053 | 50 반응 |
| Sesam Oil | ACROS | AC241000010 | |
| Sprague Dawley rats 남성과 여성 | Envigo | 8/9 주령 | |
| 표준 다이어트 | Mucedola | 4RF18 | |
| T4(티록신) ELISA 키트 | ELK Biotechnology | ELK8716 | 96T |
| 테스토스테론 에난테이트 | Sigma-Aldrich | T3006 | |
| Thermal Cycler LineGene 9600 Plus Bioer | Aurogene | ||
| Tissue 프로세서 | Shandon Excelsior ES, Thermo Scientific) | ||
| 총 RNA 정제 키트 | Norgen | 17200 | 50 컬럼 |
| Victor 3 멀티라벨 리더 | 퍼킨 엘머 | ||
| &베타;-에스트라디올 17-발레레이트 | 시그마-알드리치 | E1631 |
참고문헌
- Rokach, A., Patel, K. Human sexuality: Function, dysfunction, paraphilias, and relationships. , Academic Press. (2021).
- American Psychological Association. Guidelines for psychological practice with transgender and gender nonconforming people. Am Psychol. 70 (9), 832-864 (2015).
- Ammari, T., Sluiter, E. C., Gast, K., Kuzon, W. M.
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