이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

생쥐의 소아 뇌진탕 모델: 장기 장애를 동반한 폐쇄성 두부 손상(CHILD)

1.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/67667

⸱

2025년 2월 7일

 ,  ,  , 
1Centre d'Études Biologiques de Chizé-Centre National de la Recherche Scientifique (CEBC-CNRS), UMR 7372 CNRS/Université de La Rochelle, 2Univ. Bordeaux, CNRS, CRMSB, UMR 5536, 3Division of Biomedical Sciences, School of Medicine, University of California Riverside, 4Department of Basic Sciences, Loma Linda University School of Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

소아 뇌진탕은 생리적, 심리적 혼란을 동반한 장기적인 후유증을 초래할 수 있습니다. 이 소아 뇌진탕 마우스 모델은 장기적인 신경 염증, 백질 변화 및 행동 기능 장애를 동반한 신경 변형을 초래합니다. 이 모델은 수명 변화를 평가하기 위해 차등 충격 위치 또는 반복되는 뇌진탕에 맞게 조정할 수 있습니다.

초록

어린 시절의 뇌진탕 및 경미한 외상성 뇌 손상(mTBI)은 심각한 건강 위험을 나타내며, 많은 환자가 나중에 쇠약해지는 생리학적, 신경학적, 심리사회적 결과를 보입니다. 세포 및 분자 병태생리학적 메커니즘은 상대적으로 알려져 있지 않으며, 이러한 중요한 격차는 만성 후유증을 완화하기 위한 특정 치료 전략에 대한 연구를 효과적으로 배제합니다. 어떤 단일 동물 뇌진탕 모델도 인간 피험자에서 보고된 모든 특징을 요약하지 않으며, 현재 모델은 특정 연구 질문에 답하도록 설계되었습니다. 우리는 임상적 초기에 직면한 장기 증상을 요약하는 청소년 뇌진탕을 개발하기 시작했는데, 이를 CHILD(Closed Head Injury with Long-term Disorder)라고 합니다. 이 모델에서는 전자기 충격기를 통한 충격력이 가볍게 마취된 구속되지 않은 출산 후 17일차(P17) 마우스의 머리에 전달되어 머리가 자유롭게 회전할 수 있도록 합니다. 생쥐를 정위 장치를 가로질러 단단히 늘어난 은박지 위에 놓고 임팩터는 대상 피질 영역과 조심스럽게 정렬됩니다. 전자기 충격기는 부상 심각도를 결정하기 위해 충격 깊이, 체류 및 지속 시간을 쉽게 선택할 수 있습니다. 이 모델의 강점은 중요한 임상 기능인 머리 회전을 허용한다는 것입니다. 충돌 후 생쥐는 즉시 주변 환경을 탐색하기 위한 적절한 시간과 시간을 모니터링한 다음 댐으로 돌아갑니다. 뇌진탕의 중증도를 높이면 쥐의 하위 집합에서 두개내 출혈이 발생합니다. 생쥐는 원하는 대로 일생 동안 행동 및 신경 영상을 정기적으로 모니터링할 수 있습니다. 다양한 부상 심각도는 청소년 뇌진탕의 이질적인 특성을 모방합니다. 현재의 표준 CHILD 모델은 두개골 골절, 관찰 가능한 기존 신경 영상 변화(임상과 유사)를 나타내지 않지만 진행성 및 지속적인 신경 세포 사멸, 확산 MRI 변경, 신경 세포 활동 및 가소성 변형, 신경교증 증가 및 나이에 따른 점진성 행동 교란을 유발합니다. 요약하면, 이 CHILD 모델은 많은 임상 뇌진탕 환자에서 관찰되는 초기 및 장기 기능을 모방합니다.

서론

소아 외상성 뇌 손상(TBI)은 소아 응급 진료 방문의 주요 원인이며 나중에 건강을 쇠약하게 만드는 것과 관련이 있기 때문에 주요 건강 문제입니다. 모든 TBI사례의 75%를 차지하는 경증 TBI(mTBI)1조차도 생리적, 심리적, 신경학적,인지 기능 장애2를 포함한 장기적인 이상을 유발합니다. 소아 mTBI의 높은 발생률과 이와 관련된 심각한 건강 위험에도 불구하고, 만성 결핍에 선행하는 병리학적, 세포적, 분자적 메커니즘은 여전히 연구되지 않고 있습니다. 이러한 지식의 격차는 소아 mTBI에 대한 효과적인 치료법 및 진단 방법의 개발을 방해합니다.

성체 설치류 TBI 모델에는 체중 감소, 통제된 피질 충격 및 유체 타악기 손상이 포함되며 중등도에서 중증의 부상을 유발하도록 적정할 수 있습니다(결과 측정에 따라 다름)3,4. 이러한 성인 모델 중 다수는 소아 TBI에 맞게 조정되었습니다 5,6. 지난 10년 동안 mTBI 모델은 폐쇄성 두부 손상이 있는 설치류와 회전 모델7에서 개발되었습니다. 그러나 발달 중인 설치류에서 이러한 모델을 구현하는 것은 성체 TBI 문헌에 비해 희박합니다8. 소아의 임상적 이질성을 모델링하는 광범위한 중증도를 포괄하는 임상적 관련성을 다루기 위해 이 연구는 CHILD(Closed Head Injury with Long-term Disorder) TBI 모델을 개발했습니다. CHILD는 2-3세 소아에서 관찰되는 수초화의 정점에 해당하는 발달 연령인 P17 마우스를 사용하는 비수술, 비구속 뇌진탕 모델입니다9. 가벼운 이소플루란으로 마취된 마우스의 체성 감각 피질 위로 전자기 충격기를 사용하여 충격파가 전달됩니다. 구속되지 않은 머리에 충격을 가하면 뇌에 회전력이 가해집니다10, 많은 임상 뇌진탕 보고서에서 보고된 바와 같습니다. 임상적 mTBI와 일관되게 CHILD 모델은 기존 신경 영상에서 두개골 골절이나 눈에 띄는 이상을 유발하지 않습니다.

CHILD 모델에는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, CHILD에서 초기 및 장기 병리학적 특징이 모두 관찰되었으며, 이는 청소년 뇌진탕 환자에서 관찰된 병리학적 임상적 특징을 모방합니다. 늦은 시점에서 신경교증, 변화된 확산 텐서 MRI, 연령10,11세에 따른 점진적 행동 섭동, 변형된 뉴런 활동 및 가소성11,12에서 관찰되었습니다. 흥미롭게도, 한 번의 소아 손상 후 장기적으로 심장 이상과 함께 예상치 못한 말초 결과도 발견되었다13. 둘째, 이 모델은 재현 가능하며 연구자들과 실험실 간에 유사한 결과를 보여주었습니다13. 셋째, CHILD 모델은 유연하며 TBI의 이질적인 특성을 캡슐화하도록 확장할 수 있습니다. 예를 들어, 이전 연구에서는 충격의 속도와 깊이가 다르면 심각도가 달라지는 것으로 나타났습니다10,11. 마지막으로, 이 모델의 또 다른 강점은 CHILD를 반복적으로 투여할 수 있고 반복적인 손상에 대한 반응을 조사하고 취약한 뇌 영역을 식별하기 위해 다른 위치에 쉽게 적용할 수 있다는 것입니다.

전반적으로 CHILD 모델은 임상적 소아 mTBI 및 뇌진탕을 복제하고 소아 mTBI의 병태생리학적 특성에 대한 이해를 촉진하는 연구 도구 역할을 합니다. 실제 TBI 사례에 설명된 기능의 모든 측면을 캡슐화하는 모델은 없지만 이 모델은 답변되지 않은 많은 뛰어난 연구 질문을 해결할 수 있습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

실험은 University of Bordeaux(프랑스)와 University of California Riverside(미국 CA)의 2개 사이트에서 재현되었습니다.

보르도에서는 대학 동물 시설에서 사육된 수컷 및 암컷 P17 C57Bl6J 마우스에 대해 모든 실험이 수행되었습니다. 초기 육종가는 상업적인 출처에서 얻었으며 12/12-h 암흑 / 명암 주기, 21 °C ± 1 °C의 온도, 55 % ± 10 %의 습도, 그리고 음식과 물이 임시로 제공되는 표준 조건에서 자랐습니다. 실험 절차는 보르도 대학교 동물 관리 위원회 규정, 실험실 동물 사용에 관한 프랑스 법률(승인 #29324-2021012118549817 v3), 유럽 이사회 지침(86/609/EEC) 및 ARRIVE 지침을 따릅니다. 이 프로토콜은 외상성 뇌 손상의 가벼운 모델이기 때문에 통증이나 고통을 일으키지 않습니다. 따라서 정기적인 통증 관리 외에 특별한 통증 관리가 필요하지 않습니다. 새끼의 이유식(TBI, Shams)은 P25에서 효과적이었습니다.

리버사이드에서는 E13 임신한 C57Bl6J 암컷 마우스를 상업적으로 획득했으며, 모든 실험은 P17세의 수컷 및 암컷 새끼 모두의 결과 새끼에 대해 수행되었습니다. 동물은 자동화된 12/12시간 암/광 주기와 21°C의 온도로 사육되었습니다. 댐과 새끼들은 음식과 물을 즉흥적으로 이용할 수 있었다. 모든 실험 절차는 University of California, Riverside Institutional Animal Care and Use Committee의 승인을 받았으며 동물 복지법 및 공중 보건 서비스 정책을 준수했습니다. 해당 시설의 모든 강아지(TBI, Sham)는 P21에서 젖을 뗐습니다.

이 연구에 사용된 동물, 시약 및 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 예비 단계

  1. 저체온증을 예방하려면 마취 유도를 위해 챔버를 예열하고 보온 패드로 회복 케이지를 미리 예열하십시오.
  2. 임팩터가 90° 각도로 장착된 입체 장치를 설정합니다.
  3. 모든 부품이 제대로 조여지고 고정되었는지, 피스톤이 임팩터에 단단히 조여졌는지 확인하십시오.
  4. 입체 장치에 맞는 알루미늄 시트를 자릅니다 (이 경우 18cm x 30cm). 여기에 사용된 알루미늄은 표준 알루미늄 품질입니다. 입체 프레임을 호일로 감싸서 동물이 누울 패드를 만듭니다. 동물의 무게를 지탱하기 위해 일반 실험실 테이프로 호일의 위치와 장력을 고정하십시오.
  5. 임팩터 컨트롤러를 켜고 부상의 심각도 기능에서 더 심각한 충격을 위해 2등급(G1)의 경우 충격 속도를 1m.s-1, 2등급(G2)의 경우 3m.s-1로 설정합니다(이 매개변수를 수정하면 뇌진탕의 심각도에 영향을 미침).
  6. 동물의 무게를 늘리십시오. P17에서 동물의 무게는 C57Bl6 마우스의 경우 5.9g 이상이어야 합니다. 해당 체중에 해당하는 동물은 제외됩니다.
    참고: 일부 연구에서는 CD1 마우스가 사용되었고 P17의 경우 임계값이 6.5g(개인 데이터) 이상으로 고정되었습니다.

2. 소아 경미한 외상성 뇌 손상 시술

  1. 이소플루란에 5분 동안 노출시켜 마우스를 마취합니다. 가스 조성을 2.5% 혼합물(이 경우 캐리어는 21% 산소와 합성 공기 혼합물임)로 설정하고 유속은 1.5L/min입니다.
    참고: 이 단계에서는 영향을 받지 않은 동물이 5분 이내에 깨어나므로 모든 조치를 신속하게 수행해야 합니다.
  2. 임팩터 아래에 마우스 머리를 놓습니다. 강아지는 모든 길이로 펼쳐야 합니다. 팁은 직경이 3mm이며 금속이 두개골에 미치는 영향을 최소화하기 위해 고무로 덮여 있습니다.
  3. 손잡이를 확장 위치로 전환하여 임팩터를 내립니다.
  4. 임팩터를 대략적으로 내리고 임팩터가 귀 사이에 오도록 마우스를 배치합니다. 그런 다음 마우스를 밀어 피스톤 팁이 하나의 피스톤 팁에 해당하는 만큼 앞으로 이동하고 피스톤 팁 하나가 동물의 왼쪽으로 이동하도록 합니다( 그림 1 참조).
    알림: 가짜 동물은 피스톤에서 약간 떨어진 곳에 위치합니다(동물의 어떤 부분도 충격을 받아서는 안 됨).
  5. 충격기가 동물의 머리에 닿도록 충격기를 내립니다(그림 1, E2).
  6. 임팩터를 후퇴로 설정합니다(그림 1, E3).
  7. 부상의 정도를 확인하려면 피스톤을 1mm 아래로 1등급 (G1)으로 이동합니다. 더 심한 충격 등급 2(G2)의 경우 피스톤을 3mm 아래로 이동합니다(그림 1E4).
  8. 심각도에 관계없이 체류 시간을 0.1초로 설정합니다(이 매개 변수를 수정해도 뇌진탕의 심각도에는 영향을 주지 않음).
  9. 오른쪽 손잡이의 Impact를 누릅니다(그림 1, E5).
  10. 시스템이 과열되지 않도록 왼쪽 손잡이를 빠르게 꺼짐 위치로 설정합니다. 자세한 내용은 순서도를 참조하십시오(그림 2).

figure-protocol-1
그림 1: 임팩터 팁의 위치.(A) 임팩터 팁은 먼저 귀 사이의 정중선에 위치합니다. (B) 그런 다음 팁을 3mm 앞으로 이동합니다(팁 직경과 동일). (C) 마지막으로 피스톤 팁을 마우스 왼쪽에서 3mm 이동합니다. (디,이) 마그네틱 배럴과 관련하여 임팩터 팁의 가능한 위치. (D) 임팩터는 피스톤 몸체와 관련하여 3개의 위치(중립, 수축 또는 확장/충격)를 가지며 그 사이에는 5mm 범위가 있습니다. (E) 절차의 여러 단계에서 두개골 표면과 관련된 임팩터 팁의 위치. (1) 중립 위치에 있는 충격기의 위치; (2) 피스톤이 동물의 두개골에 부드럽게 닿도록 움직입니다 (2.5 단계). (3) 그런 다음 임팩터를 후퇴시키도록 설정합니다(단계 3.6). (4) 임팩터의 몸체 전체를 x mm 아래로 이동합니다(2.7 단계). G1 등급의 경우 G1의 경우 2mm 깊이(x)에서 2m.s-1의 충격 속도(y) 또는 G2의 경우 3mm(x) 깊이에서 3m.s-1의 충격 속도(y). (5) 레버 임팩트를 누르면 임팩터 팁이 중립 위치로 다시 이동할 때 체류 시간 동안 y 속도로 두개골 표면 아래 xmm 이동합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

figure-protocol-2
그림 2: CHILD 순서도. 뇌진탕 유도의 여러 단계를 나타내기 위해 색상으로 구분된 PND17 마우스에서 CHILD를 유도하는 단계를 자세히 설명하는 순서도. 설정 사진에는 (A) 임팩트 컨트롤러, 팽팽한 주석 호일 위에 임팩터와 팁이 위치한 정위 장치, 가열 패드 위에 위치한 회수 상자를 포함한 전체 CHILD 유도 장치(마취 장치는 보이지 않음)가 포함됩니다. (B) 스케일이 있는 고무 임팩트 팁(3mm). (C) 정위 프레임을 가로질러 뻗어 있는 주석 호일이 있는 정위 장치와 호일 위에 위치한 임팩트 팁이 있는 임팩터 솔레노이드. (D) 히트 패드 위에 놓인 회수실. (E) 순서도에서와 같이 강조 표시된 두 개의 제어 스위치가 있는 임팩트 컨트롤러(빨간색 상자 = 확장/후퇴/끄기, 보라색 상자 = 임팩트 토글). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

3. 외상 후 후속 조치

참고: 다음 단계는 오프라인 분석을 위해 비디오로 녹화할 수 있으므로 실험자는 여러 동물에 대해 연속으로 CHILD를 수행할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 동물 복지에 대한 정기적이고 반복적인 평가가 수행되어야 합니다.

  1. 무호흡이 있는 경우(충격 직후) 무호흡 지속 기간과 충돌 중 머리 회전이 있었는지 확인하십시오.
  2. 복구 케이지의 오른쪽 측면에 마우스를 놓습니다.
  3. 마우스의 오른쪽 위치(4개의 다리로 기르기) 시간과 탐색 동작을 다시 시작하는 시간을 확인합니다. 일반적으로 가짜 마우스는 3-4분 이내에 깨어나고 3-4분 후에 탐색 행동을 재개합니다(그림 3). CHILD 마우스는 충돌 후 7-12분 이내에 깨어나고(그림 3A) 충돌 후 12-18분 이내에 탐색을 재개합니다(그림 3B).
    참고: 영향을 받은 동물이 30분 이내에 탐색 행동을 재개하지 않으면 해당 동물은 제외됩니다.
  4. 완전히 회복되면 동물을 집 우리로 되돌려 보냅니다. 이 시점에서 가짜 마우스와 CHILD 마우스(G1 또는 G2 심각도)의 행동은 정확히 유사해야 하며 깔짚 내에서 동물 그룹을 구별할 수 없어야 합니다.
    참고: 동물은 부상 후 최대18개월14 까지 방법 시작 부분에 표시된 조건에서 유지될 수 있습니다. 행동 결과 평가는 MRI 측정, 미니스코프 영상, 조직학 및 면역조직화학과 연계된 일련의 검사를 사용하여 수행할 수 있습니다12. GFAP 및 NeuN에 대한 면역조직화학은 초기 시점에서 모델 및 조직 변화의 존재를 검증하는 데 사용할 수 있습니다.

4. 면역조직화학(Immunohistochemistry)

참고: 부상 후 하루 후, G2 및 가짜 그룹(G2의 경우 n = 4 마우스, Sham의 경우 n = 4)의 동물을 마취하고 4°C에서 pH 7.4의 인산염 완충 식염수(PBS) 0.1M에서 제조된 4% 파라포름알데히드(PFA)로 경심 관류했습니다. 두개골에서뇌 10 개를 추출하여 동일한 PFA 용액에 하룻밤 동안 담근 다음, 절단하기 전에 아지드화나트륨(0.1%)이 함유된 PBS로 옮겼습니다. 그런 다음 비브라톰을 사용하여 50μm 두께로 관상 절편을 준비했습니다. 장기 보관을 위해 절편을 사용할 때까지 -20°C에서 동결 보호 배지(PBS의 경우 30% 에틸렌 글리콜 및 20% 글리세롤)에 배치했습니다. 뇌진탕이 뇌신경교증 및 신경 소실에 미치는 영향을 특성화하기 위해 GFAP 및 NeuN을 표적으로 하는 면역조직화학을 아래와 같이 수행했습니다.

  1. PBS에서 10분 동안 뇌 부분을 4회 세척합니다.
  2. 블로킹 용액(PBS의 1% BSA, 0,3% Triton X-100)에 절편을 실온(RT)에서 10분 동안 옮깁니다.
  3. 차단 용액에 희석된 1차 항체인 chicken anti-GFAP(1:3000) 및 rabbit anti-NeuN(1:500)을 4°C에서 밤새 절편을 배양합니다.
  4. 교반 상태에서 PBS에서 10분 동안 슬라이스를 4회 씻습니다.
  5. 그런 다음 RT에서 1시간 동안 1:1000으로 희석된 2차 형광 항체, Alexa-Fluor-488-nm 염소 항토끼 및 Alexa-Fluor-568-nm 염소 항닭을 포함하는 차단 용액의 단면을 옮깁니다.
  6. 그런 다음 교반 상태에서 PBS에서 10분 동안 섹션을 4회 세척합니다.
  7. 장착 매체를 사용하여 슬라이드에 섹션을 장착하고 커버 슬립을 추가합니다. 이미지 획득까지 슬라이드를 4°C로 유지하십시오.
  8. epifluorescence microscope 및 micromanager 소프트웨어를 사용하여 면역 형광을 습득하십시오. 10x 렌즈가 있는 스티칭 플러그인을 사용하여 동측 및 반대쪽 반구의 타일 이미지를 얻을 수 있습니다.
    참고: 1차 항체 또는 2차 항체가 생략된 음성 대조군 염색에서는 검출 가능한 라벨링이 나타나지 않았습니다. 보다 상세한 이미지 분석을 위해, 피지 소프트웨어(15 )를 사용하여 다양한 관심 영역(16)에서 면역염색 파라미터를 정량화할 수 있다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

CHILD 모델은 소아 마우스에서 비교적 빠르고 재현 가능한 mTBI 모델로, 중증도와 위치의 변화를 허용합니다. 예상대로 CHILD 마우스는 폐쇄성 두부 손상으로부터 상당히 긴 회복 시간을 보였습니다(그림 3). 코호트(n = 36 female sham, n = 140 male sham, n = 30 female G1, n = 55 male G1, n = 32 female G2, n = 141 male G2)를 집계했을 때, righting time(그림 3A, 3-way ANOVA p < 0.001)과 탐색적 행동을 재개하는 시간(Figure 3B, 3-way ANOVA p < 0.001)의 지연이 관찰되었다. 회복 기간은 또한 영향의 심각도에 따라 달라졌다(그림 3, G...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

프로토콜의 중요한 단계
여기에 설명된 CHILD 프로토콜은 (1) 충격 매개변수(속도, 깊이, 지속 시간)를 표준화하고, (2) 실험실 내부 및 실험실 간의 재현성을 보장하며, (3) 상업적으로 쉽게 이용할 수 있는 전자기 충격기(그림 2A)의 사용을 요구합니다. 또 다른 중요한 구성 요소는 설치류의 머리를 치는 충격기 팁입니다. 실리콘에서 금속 팁에 이르기까지 다양한 가능성을 사용할 수 있지만 이 프로토콜은 2mL 주사기의 플런저에서 얻은 고무 팁을 사용합니다(그림 2B). 고무 팁의 근거는 충격의 힘과 회전을 두개골에 전달하지만 두개골 골절을 유발하지 않는 것입니다. G2 마우스에서는 작은 부분 집합이 관련 경막하 출혈을 동반하거나 동반하지 않은 두개골 골절을 보였습니다. 전자기 충격기를 사용하면 G1 및 G2 지정에서와 같...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 공개할 내용이 없습니다.

감사의 글

이 방법 논문은 Eranet Neuron Neuvasc(Badaut), Agence Nationale de la Recherche Nanospace(Badaut), CNRS IRP IINOVAtion(Badaut) 및 NIH NINDS Grant No. 1R01NS119605(Obenaus, Badaut) 및 1RF1NS138032(Obenaus, Territo)의 지원을 받았습니다. 그림 1 은 BioRender.com 사용하여 만든 것입니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
BSASigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		A7030
C57Bl6J 마우스 찰스 리버 연구소 프랑스 CRLF 9 All. 물랑 버거, 69130 É cully, FranceBordeaux
Electromagnetic impactorLeica Biosystems, Richmond, IL USAImpact One 입체 임팩터
Epifluorescence microscopeOlympus, BX41, Center Valley, PA
Ethylen glycolSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
프랑스		102466
GFAP 1차 항체Millipore, Billerica, MAAB5541닭 anti-GFAP
GFAP 2차 항체Molecular Probes, InvitrogenA11034염소 anti-rabbit AlexaFluor  488
GlycerolSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		G5516
헤비 듀티 알루미늄 호일KirklandRK611Cosco
Micromanager 소프트웨어에서 획득됨 (NIH, 미국
NeuN 1차 항체AbCam, Discovery Drive, Cambridge
Biomedical Campus,
Cambridge, CB2 0AX, 영국		AB128886토끼 항NeuN
NeuN 2차 항체분자 프로브, InvitrogenA11041염소 항닭 AlexaFluor 568
PBSSigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		P5493
PFASigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		1.04003
아지드화나트륨Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		26628-22-8
입체 프레임 - 기본KOPF 기기 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-Unis900-C
입체 액자 - 전극 조작기KOPF 기기 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-unis960
입체 프레임 - u-프레임KOPF 악기 7324 Elmo St, Tujunga, CA 91042, É tats-unis900-U
Triton x-100Sigma Aldrich Chimie S.a.r.l
80 Rue de Luzais
L'lsle-d'Abeau Chesnes - BP701
38297 Saint-Quentin-Fallavier Cedex
France		X100
VectashieldVector laboratoriesH-1000-10Mounting medium
VibratomeLeica Biosystems, Richmond, IL, USAVTS1000
잭슨 연구소 잭슨 연구소 600 Main Street Bar Harbor, ME USA 04609UCR
이

참고문헌

  1. Dewan, M. C., et al. Estimating the global incidence of traumatic brain injury. J Neurosurg. 130 (4), 1080-1097 (2018).
  2. Rivara, F. P., et al. Persistence of disability 24 to 36 months after pediatric traumatic brain injury: a cohort study. J Neurotrauma. 29 (15), 2499-2504 (2012).
  3. Fesharaki-Zadeh, A., Datta, D. An overview of preclinical models of traumatic brain injury (TBI): Relevance to pathophysiological mechanisms. Front Cell Neurosci. 18, (2024).
  4. Panchenko, P. E., Hippauf, L., Konsman, J. P., Badaut, J. Do astrocytes act as immune cells after pediatric TBI. Neurobiol Dis. 185, 106231(2023).
  5. Kochanek, P. M., Wallisch, J. S., Bayır, H., Clark, R. S. B. Pre-clinical models in pediatric traumatic brain injury-challenges and lessons learned. Childs Nerv Syst. 33 (10), 1693-1701 (2017).
  6. Smith, A. M., Grayson, B. E. A strike to the head: Parallels between the pediatric and adult human and the rodent in traumatic brain injury. J Neurosci Res. 102 (7), e25364(2024).
  7. McNamara, E. H., Grillakis, A. A., Tucker, L. B., McCabe, J. T. The closed-head impact model of engineered rotational acceleration (CHIMERA) as an application for traumatic brain injury pre-clinical research: A status report. Exp Neurol. 333, 113409(2020).
  8. Bodnar, C. N., Roberts, K. N., Higgins, E. K., Bachstetter, A. D. A systematic review of closed-head injury models of mild traumatic brain injury in mice and rats. J Neurotrauma. 36 (11), 1683-1706 (2019).
  9. Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog Neurobiol. 106-107, 1-16 (2013).
  10. Rodriguez-Grande, B., et al. Gliovascular changes precede white matter damage and long-term disorders in juvenile mild closed head injury. Glia. 66 (8), 1663-1677 (2018).
  11. Ichkova, A., et al. Early cerebrovascular and long-term neurological modifications ensue following juvenile mild traumatic brain injury in male mice. Neurobiol Dis. 141, 104952(2020).
  12. Badaut, J., et al. Endocannabinoid-mediated rescue of somatosensory cortex activity, plasticity and related behaviors following an early in life concussion. bioRxiv. , (2024).
  13. Leyba, K., et al. Neurovascular hypoxia after mild traumatic brain injury in juvenile mice correlates with heart-brain dysfunctions in adulthood. Acta Physiol. 238 (2), e13933(2023).
  14. Obenaus, A., et al. Progressive lifespan modifications in the corpus callosum following a single juvenile concussion in male mice monitored by diffusion MRI. bioRxiv. , (2023).
  15. Schindelin, J., et al. Fiji: An open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  16. Clément, T., et al. Juvenile mild traumatic brain injury elicits distinct spatiotemporal astrocyte responses. Glia. 68 (3), 528-542 (2020).
  17. Drieu, A., et al. Persistent neuroinflammation and behavioural deficits after single mild traumatic brain injury. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (12), 2216-2229 (2022).
  18. Obenaus, A., et al. A single mild juvenile TBI in male mice leads to regional brain tissue abnormalities at 12 months of age that correlate with cognitive impairment at the middle age. Acta Neuropathol Commun. 11 (1), 32(2023).
  19. Ryan, E., et al. Traumatic brain injury in children: Glial fibrillary acidic protein and clinical outcomes. Pediatr Emerg Care. 38 (3), e1139-e1142 (2022).
  20. Czeiter, E., et al. Blood biomarkers on admission in acute traumatic brain injury: Relations to severity, CT findings and care path in the CENTER-TBI study. EBioMedicine. 56, 102785(2020).
  21. Edwards, K. A., et al. Serum GFAP, NfL, and tau concentrations are associated with worse neurobehavioral functioning following mild, moderate, and severe TBI: A cross-sectional multiple-cohort study. Front Neurol. 14, 1223960(2023).
  22. Smith, A. M., et al. High-fat diet consumption negatively influences closed-head traumatic brain injury in a pediatric rodent model. Exp Neurol. 379, 114888(2024).
  23. Hunniford, V. T., et al. A systematic assessment of preclinical multilaboratory studies and a comparison to single laboratory studies. eLife. 12, e76300(2023).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

CHILDMRI
생쥐의 소아 뇌진탕 모델: 장기 장애를 동반한 폐쇄성 두부 손상(CHILD)
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.