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방법 논문

Resazurin Microtiter 및 Checkerboard Assay를 사용한 Mycobacterium tuberculosis 의 약물 감수성 및 약물 상호작용 검출

923 조회수

⸱

DOI:

10.3791/67672

⸱

2025년 10월 24일

 ,  , 
1Department of Immunology, National Institute for Research in Tuberculosis, 2University of Madras, 3Faculty of Medical Research, Academy of Scientific and Innovative Research (AcSIR)

이 논문에서

요약

여기에서는 결 핵균의 약물 감수성 및 상호 작용 프로파일을 평가하기 위한 레사주린 마이크로타이터 분석(REMA) 및 바둑판 변형을 시각화하고 표준화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 시험 관 내에서 치료 요법에 사용할 약물 조합을 최적화하고 다제내성 결핵을 퇴치하기 위한 통찰력을 제공합니다.

초록

다제내성 결핵(MDR-TB)의 출현으로 인해 효과적인 치료를 안내하기 위해 신속하고 정확한 약물 감수성 검사(DST) 방법이 필요합니다. 본 연구에서는 최소 억제 농도(MIC)를 결정하고 결핵균 에 대한 항결핵제의 약물-약물 상호작용을 평가하기 위해 레사주린 마이크로타이터 분석법(REMA)과 체커보드 분석을 결합한 방법론을 소개합니다. 96웰 형식으로 조정된 REMA는 대사 활성 결핵균 에 의한 레사주린 염료의 감소를 약물 감수성의 시각적 지표로 활용합니다. 다양한 농도의 항결핵제를 M . tuberculosis 분리주에 대해 테스트하고 MIC를 결정하기 위해 색상 변화를 관찰합니다. 그 후, 약물 조합 간의 잠재적인 시너지 효과, 부가적 또는 길항 효과를 평가하기 위해 바둑판 분석이 사용됩니다. 이 간단하고 저렴한 방법은 7일 이내에 결과를 얻을 수 있어 기존 DST 방법에 비해 상당한 이점을 제공합니다. 이 방법은 결핵균 분리주의 DST에 대한 귀중한 통찰력을 제공하고 다제내성 결핵에 대한 치료 결과 개선을 위한 유망한 약물 조합의 식별을 용이하게 합니다.

서론

결핵균(Mycobacterium tuberculosis)에 의해 발생하는 결핵(TB)은 약물 내성 균주의 출현으로 악화되는 강력한 글로벌 건강 문제로 남아 있습니다. 세계보건기구(WHO)에 따르면 2023년에는 약 1,060만 건의 새로운 결핵 사례와 130만 명의 사망자가 발생하여 보다 효과적인 진단 및 치료 전략이 시급히 필요하다는 점을 강조했습니다1. 다제내성 결핵(MDR-TB) 및 광범위 약물 내성 결핵(XDR-TB)은 현재 치료 요법의 복잡성, 독성 및 연장된 기간으로 인해 질병 통제에 큰 어려움을 제기합니다 2,3.

결핵균의 독특한 생화학적 경로를 표적으로 하는 베다퀼린 및 델라마니드와 같은 새로운 항결핵제의 최근 도입은 결핵 관리의 획기적인 발전을 나타냅니다 4,5. 이 약물은 WHO가 승인한 더 길고 짧은 다제내성 결핵 요법의 일부로 주로 플루오로퀴놀론 및 리팜피신 내성 결핵 사례에 사용하도록 승인되었습니다 6,7. 그러나 최적의 약물 조합 및 투여 요법의 결정, 특히 이러한 제제가 확립된 치료법과 함께 사용되는 경우 여전히 중요한 조사 영역으로 남아 있습니다 8,9. 약물 감수성 테스트(DST)에 대한 현재 방법은 신뢰할 수 있지만 종종 시간 집약적이고 자원 집약적이며 임상 또는 연구 환경에서 복잡한 약물 조합을 평가하는 데 비실용적입니다10. 이는 결핵균에서 약물 효능과 상호작용 프로파일을 모두 평가할 수 있는 간단하고 확장 가능한 표현형 분석의 필요성을 강조합니다.

이러한 표현형 접근법 중에서 레사주린 마이크로타이터 분석(REMA)은 약물 감수성을 평가하기 위해 널리 받아들여지는 전통적인 방법으로 부상했습니다. 이 분석은 대사 활성 박테리아에 의해 파란색 레사주린 염료를 분홍색 레소루핀으로 환원시키는 것을 기반으로 하며, 세포 생존력의 시각적 지표 역할을 합니다. Palomino et al. 200211, 박테리아 성장을 평가하기 위해 레사주린을 사용하는 원리는 Pital et al.12의 연구로 거슬러 올라갑니다. 지난 20년 동안 REMA 방법은 광범위하게 검증되어 마이코박테리아 연구 및 진단 테스트를 위한 표준 운영 절차에 통합되었습니다 13,14,15.

REMA를 보완하는 Caleffi-Ferracioli 등이 도입한 바와 같은 바둑판 분석은 동일한 레사주린 기반 판독값을 사용하여 미세 희석 형식으로 2-약물 상호작용 연구를 가능하게 함으로써 REMA의 유용성을 확장합니다16. 원칙적으로는 유망하지만 이 방법은 일상적인 진단 분석보다는 초기 전임상 평가 중에 잠재적인 시너지 또는 길항 약물 조합을 스크리닝하는 데 주로 유용한 연구 도구로 남아 있습니다.

이 원고는 REMA 또는 그 바둑판 변형을 새로운 방법으로 제시하지 않습니다. 오히려 이 연구의 목표는 이전 연구에서 설명되고 성공적으로 적용된 MIC 결정 및 약물 상호작용 테스트를 위한 유용하고 검증된 방법론을 시각적으로 표현하는 것입니다. 우리는 접종물 준비, 약물 적정, 플레이트 레이아웃, MIC 해석 및 바둑판 상호 작용 분석에 대한 자세한 지침과 함께 단계별 프로토콜을 제공합니다. 이 원고는 결핵 약물 개발 및 실험 약리학에서 REMA 및 바둑판 분석의 보다 광범위하고 일관된 사용을 지원하는 것을 목표로 합니다.

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프로토콜

참고: 예제 실험에 사용된 화학 물질 및 재료는 재료 표 파일에서 사용할 수 있습니다.

1. 7H9-S 배지 준비

  1. 7H9-S 배지 100mL의 경우, 7H9 분말 0.47g과 카시톤 0.1g의 무게를 계량한 후 증류수 90mL에 녹입니다. 완전히 녹을 때까지 저어줍니다.
  2. 121°C에서 오토클레이브를 사용하여 250mL 플라스크에서 국물을 15분 동안 멸균합니다.
  3. 고압멸균하고 냉각한 후 올레산 알부민 포도당 카탈라아제(OADC) 보충제 10mL와 글리세롤 0.5mL를 첨가합니다.
  4. 멸균성을 확인하기 위해 37°C에서 밤새 배양합니다.
    참고: 준비된 7H9-S 배지의 무균성은 37°C에서 하룻밤 동안 배양하여 검증됩니다. 배지는 탁도가 관찰되지 않고 다음날 맑은 상태로 유지되어야 합니다.
  5. 7H9-S 배지를 직사광선을 피한 4°C에서 보관하십시오.

2. M.tuberculosis 접종물 준비

  1. Lowenstein Jensen(LJ) 고체 배지에서 성장한 M.tuberculosis 배양물로부터 접종물의 제조
    1. 멸균 접종 루프를 사용하여 갓 자란(21-28일) LJ 배지에서 M. tuberculosis 배양의 전체 루프를 수집합니다.
      알림: 오래된 콜로니를 방해할 수 있는 배지 속으로 너무 깊숙이 긁지 마십시오.
    2. 수집된 박테리아를 멸균 유리 구슬과 2.5mL의 7H9-S 국물이 들어 있는 멸균 옥석 병에 넣습니다. 유리 구슬이 소용돌이 중에 덩어리를 기계적으로 파괴하는 데 도움이 되는지 확인하십시오.
      참고: 신뢰할 수 있는 감수성 테스트 결과를 보장하려면 21-28일 사이의 신선한 배양이 필수적입니다. 일관되지 않은 결과를 초래할 수 있으므로 오래된 문화권을 사용하지 마십시오.
    3. 옥석 병을 고정하고 최소 1분 동안 세게 소용돌이치십시오. 박테리아 덩어리를 분해하기 위해 지속적인 혼합을 보장하여 상대적으로 탁한 현탁액을 생성합니다. 목표는 배지 내에서 박테리아의 균일한 분포입니다.
    4. 배양 현탁액을 신선한 옥석 병에 옮기고 15분 동안 방해받지 않고 그대로 둡니다. 이 단계를 통해 더 큰 박테리아 덩어리가 바닥에 정착할 수 있습니다.
    5. McFarland 1.0 표준을 기준으로 배양 현탁액의 탁도를 확인하고 원하는 탁도에 도달할 때까지 7H9-S 국물로 조정합니다.
      참고: 일반적으로 1.0인 McFarland 표준은 약 1.97 × 106 CFU/mL에 해당하는 탁도에 대한 기준으로 사용됩니다17. 표준물질은 1% 염화바륨 0.1mL와 1% 황산 9.9 1mL를 결합하여 제조하여 탁도를 제공하는 황산바륨의 미세한 침전물을 생성합니다. 박테리아 현탁액은 검은색 선이 있는 흰색 배경에 두 튜브를 고정하여 McFarland 표준과 시각적으로 비교됩니다. 박테리아 현탁액의 탁도는 표준에 맞게 조정됩니다.
  2. 7H9 액체 배지에서 성장한 M.tuberculosis 배양물로부터 접종물의 제조
    1. 멸균 피펫을 사용하여 2.5mL의 결핵균 배양액(2-3주)을 유리 구슬이 있는 신선한 옥석 병에 옮깁니다.
    2. 균일한 현탁액을 보장하기 위해 혼합물을 최소 1분 동안 소용돌이치게 합니다. 소용돌이 작용은 덩어리를 부수는 데 도움이 됩니다.
    3. 2.5mL의 배양 현탁액을 신선한 옥석 병에 옮기고 덩어리가 바닥에 가라앉도록 15분 동안 그대로 둡니다.
    4. 탁도를 McFarland 1.0 표준과 비교하고 7H9-S 국물을 사용하여 조정하여 필요한 농도를 달성합니다.
  3. 접종물의 희석
    1. 1:10 희석액 준비: 접종물을 희석하려면 멸균 용기에 담긴 7H9-S 국물 9mL에 박테리아 현탁액 1mL를 첨가합니다(이렇게 하면 약 1.97 × 105 CFU/mL가 생성됨).

3. 항생제의 준비 및 보관

  1. 스톡 및 작업 용액의 준비: 표 1에 요약된 대로 예제 실험에 사용된 약물을 스톡 및 작업 용액 준비 방법과 함께 준비합니다.
    1. 이소니아지드(INH 또는 I): 이소니아지드의 1mg/mL 원액을 준비하려면 2mg의 이소니아지드 분말을 증류수 2.0mL에 녹입니다. 0.22μm 주사기 필터를 사용하여 용액을 멸균합니다.
    2. 목시플록사신(MOX 또는 M): 목시플록사신의 1mg/mL 원액을 준비하려면 목시플록사신 분말 2mg을 증류수 2.0mL에 녹입니다. 0.22μm 주사기 필터를 사용하여 용액을 멸균합니다.
    3. 베다퀼린(BDQ 또는 J): 베다퀼린은 물에 잘 녹지 않습니다. 1mg/mL 원액을 준비하려면 2mg의 베다퀼린 분말을 2.0mL의 DMSO에 녹입니다. 0.22μm 주사기 필터를 사용하여 용액을 멸균합니다.
    4. 델라마니드(DEL 또는 D): 베다퀼린과 유사하게 델라마니드는 수용성이 좋지 않습니다. 1mg/mL 원액을 준비하려면 2mg의 델라마니드 분말을 2.0mL의 DMSO에 녹입니다. 0.22μm 주사기 필터를 사용하여 용액을 멸균합니다.
  2. 보관: 각 약물 원액 100μL를 멸균 냉동 바이알에 분취하고 -20°C에서 최대 3개월 동안 보관합니다. 해동되면 남은 용액을 버리십시오. 다시 얼리지 마십시오.

4. 레사주린 용액의 제조 및 보관

  1. 레사주린을 증류수에 최종 농도 0.01% 또는 0.02%로 용해시킵니다. 멸균을 위해 0.2μm 필터를 통해 용액을 여과합니다.
  2. 멸균된 레사주린 용액을 4°C에서 최대 1-2주 동안 보관하고 분해를 방지하기 위해 빛으로부터 보호합니다.

5. REMA 플레이트 준비

참고: REMA 96웰 마이크로타이터 플레이트 설정에 대한 시각적 가이드는 그림 1 을 참조하십시오. 96웰 플레이트는 6개의 2배 희석으로 각 약물에 대해 이중으로 약물 분석을 실행할 수 있는 충분한 공간을 제공합니다.

  1. 7H9-S 국물 추가: 다중 채널 피펫을 사용하여 100μL의 7H9-S 국물을 열 2-11, 행 B-G에 추가합니다. 모든 우물에 걸쳐 분포가 균일한지 확인하십시오.
  2. 약물 용액 추가: 작업 INH 용액 100μL를 웰 B2 및 B6에 추가합니다. 마찬가지로 MOX, DEL 및 BDQ 작업 용액을 해당 웰(B3 및 B7, B4 및 B8, B5 및 B9)에 추가합니다.
  3. 약물 농도 희석: 다중 채널 피펫을 사용하여 행 B에서 G(열 2-9)까지 2배 연속 희석을 수행하고 행 G에서 혼합한 후 최종 100μL를 폐기합니다.
  4. 성장 조절 웰: 성장 조절을 위해 웰 B10 및 C10에 7H9-S 국물 100μL를 추가합니다.
  5. 음성 및 무균 대조군: 200μL의 7H9-S 국물을 웰 B11 및 C11에 첨가하여 음성 및 무균 대조군으로 사용합니다.
  6. 증발 방지: 배양 중 증발을 최소화하기 위해 모든 외부 웰에 멸균 증류수 200μL를 추가합니다.
  7. 플레이트 접종: 음성 대조군 웰을 제외하고 각 웰에 100μL의 1:10 희석 배양 현탁액을 접종합니다. 모든 우물에 균일한 접종을 보장합니다.
  8. 밀봉 및 배양: 플레이트를 비닐 봉지에 밀봉하여 멸균 상태를 유지하고 37°C에서 7일 동안 배양합니다.

6. REMA 바둑판 적정 분석

참고: 약물 조합(예: BDQ 및 DEL)에 대한 REMA 바둑판 적정 분석 템플릿에 대한 시각적 가이드는 그림 2A, B 를 참조하십시오.

  1. 약물을 수직 및 수평으로 희석: 첫 번째 약물(BDQ)을 수직으로(행 B-H) 및 두 번째 약물(DEL)을 수평으로(열 2-8) 희석하여 다양한 두 약물 조합을 생성합니다.
    참고: 수평으로 희석된 약물을 위해 멸균 바이알(4μg/mL-0.06μg/mL)에 연속적으로 희석된 작업 용액을 준비합니다.
  2. 수직 희석을 위한 BDQ 작업 용액 추가: 작업 BDQ 용액 100μL를 웰 B2 및 B8에 추가합니다.
  3. 7H9-S 국물 추가: 다중 채널 피펫을 사용하여 50 μL의 7H9-S 국물을 컬럼 C2-H8에 추가합니다. 모든 우물에 걸쳐 분포가 균일한지 확인하십시오.
  4. 약물 농도 희석: 다중 채널 피펫을 사용하여 B-H열(2-8열)에서 2배 희석을 수행하고 H열에서 혼합한 후 최종 50μL를 폐기합니다.
  5. 수평 희석을 위한 DEL 작업 용액 추가: 4 μg/mL에서 0.06 μg/mL까지 약물의 연속적으로 희석된 작업 용액을 해당 웰에 추가합니다.
  6. 성장 제어 웰: 성장 제어를 위해 웰 B9 및 C9에 7H9-S 국물 100μL를 추가합니다.
  7. 음성 및 무균 대조군: 웰 B10 및 C10에 200 μL의 7H9-S 국물을 첨가하여 음성 및 무균 대조군으로 사용합니다.
  8. 플레이트 접종: 음성 대조군 웰을 제외하고 각 웰에 100μL의 1:10 희석 배양 현탁액을 접종합니다. 모든 우물에 균일한 접종을 보장합니다.
  9. 밀봉 및 배양: 플레이트를 비닐 봉지에 밀봉하여 멸균 상태를 유지하고 37°C에서 7일 동안 배양합니다.

7. 결과의 인큐베이션 및 해석

  1. 레사주린 염색: 배양 7일 후, 각 웰에 30μL의 레사주린(0.01%-0.02%)을 첨가합니다. 색상 개발을 위해 플레이트를 밀봉하고 밤새 배양합니다.
  2. 색상 변화를 해석합니다.
    1. 일관된 백색광 또는 일광 균형 조명 아래에서 우물을 육안으로 검사합니다.
      참고: 성장 조절제(약물 없음)는 파란색에서 분홍색으로 변해야 하며 이는 활발한 박테리아 대사를 나타냅니다. 파란색은 성장이 완전히 억제되었음을 나타냅니다. 분홍색은 활발한 성장을 나타내고 보라색(혼합 색조)은 부분적인 억제를 나타냅니다.
    2. 정확한 해석을 위해 색상의 강도를 음성 대조군(배지만) 및 양성 대조군(약물 없이 박테리아 성장)과 비교하십시오. 관찰자 편향을 최소화하려면 이중 독립 판독값 또는 플레이트 사진을 사용하십시오.
      알림: 시각적 판단은 주변 조명 조건에 따라 달라질 수 있으므로 일관된 조명이 필수적입니다.
  3. 최소 억제 농도(MIC)
    1. MIC를 우물이 완전히 파란색으로 유지되는 가장 낮은 농도의 약물로 정의하여 대사 활동의 ≥99% 억제를 나타냅니다. 부분적 또는 완전한 성장을 나타내는 보라색 또는 분홍색을 나타내는 우물을 고려하십시오.
      참고: REMA에 의한 MIC 결정은 MIC가 무약물 대조군에 비해 접종물의 ≥99%를 억제하는 가장 낮은 농도로 간주되는 고전적 비율 방법의 원리에 근접합니다. REMA는 CFU 수를 사용하지 않지만 시각적 종점은 이 비율 기반 임계값의 표현형 상관 관계를 나타냅니다. 이 해석은 이전에 확립된 비색 프로토콜11,14과 일치합니다.

8. 분획 억제 농도(FIC) 지수 계산

참고: 분획 억제 농도(FIC) 지수는 두 약물 간의 상호 작용(시너지 효과, 길항 또는 무관심)을 결정하는 데 도움이 됩니다. 바둑판 분석에서 얻은 MIC 값을 기반으로 계산됩니다.

  1. 각 약물 단독에 대한 MIC 식별: REMA 분석에서 개별적으로 사용할 때 각 약물에 대한 MIC를 결정합니다.
  2. 조합된 각 약물에 대한 MIC 식별: 바둑판 적정 분석에서 두 번째 약물과 함께 사용할 때 각 약물의 MIC를 식별합니다.
  3. 각 약물에 대한 FIC를 계산합니다.
    참고: FIC 및 FIC 지수를 계산하는 데 사용되는 공식은 표 2 를 참조하십시오. 표 3은 REMA 분석을 기반으로 한 통합 MIC를 보여줍니다. 대표적인 MIC 및 FIC 인덱스 값은 표 4에 나와 있습니다.
    1. FIC 지수를 다음과 같이 해석합니다.
      FIC ≤ 0.5: 시너지 효과 표시 - 약물이 함께 작용하여 두 약물 단독보다 더 효과적으로 성장을 억제합니다.
      FIC> 0.5에서 < 4.0까지: 가산성을 나타냅니다 - 결합된 효과는 개별 효과의 합과 같습니다.
      FIC ≥ 4.0: 길항 작용 표시 - 약물은 서로의 활동을 방해합니다.
  4. 예: H37Rv에서 BDQ 및 DEL에 대한 FIC 지수 계산
    1. H37Rv에 대한 BDQ의 MIC(예: 0.125μg/mL)를 결정합니다. DEL과 함께 BDQ의 MIC를 0.03μg/mL로 기록합니다.
    2. H37Rv에 대한 DEL의 MIC(예: 0.063μg/mL)를 결정합니다. BDQ와 함께 DEL의 MIC를 0.125μg/mL로 기록합니다.
    3. BDQ에 대한 FIC를 계산합니다.
      FIC(BDQ) = 결합된 BDQ의 MIC / BDQ 단독의 MIC = 0.03 / 0.125 = 0.24
    4. DEL에 대한 FIC를 계산합니다.: FIC(DEL) = DEL의 조합 MIC / DEL의 MIC 단독 = 0.125 / 0.063 = 1.98
    5. 두 FIC를 더하여 FIC 지수를 구합니다.FIC 지수 = FIC(BDQ) + FIC(DEL) = 0.24 + 1.98 = 2.26
    6. 결과를 해석합니다.
      참고: FIC 지수 2.26은 부가적 상호 작용 범위(>0.5 내지 <4.0) 내에 속하며, 이는 BDQ와 DEL의 조합이 M. tuberculosis 성장 억제에 부가적인 효과가 있음을 나타냅니다.

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결과

REMA 분석에 의한 항결핵제의 MIC 결정
Bedaquiline, Delamanid, Moxifloxacin 및 Isoniazid의 활성은 약물 민감성 H37RV 및 M. tuberculosis의 약물 내성 임상 분리주에 대해 REMA를 사용하여 평가되었습니다. Bedaquiline, Delamanid 및 Isoniazid는 (1 μg/mL 내지 0.03 μg/mL) 범위에서 사용되었고 Moxifloxacin은 (2 μg/mL 내지 0.06 μg/mL) 범위에서 사용되었다. 그런 다음 M. tuberculosis 및 H37Rv의 약물 내성 임상 분리주의 박테리아 현탁액을 접종하고 다양한 약물 농도의 존재 하에서 7일 동안 배양했습니다.

박테리아 성장의 생존력은 농도 의존적 방식으로 현저하게 억제되었으며, 약물 민감성 H37RV 및 M. tuberculosis의 약물 내성 임상 분리주에 대한 베다...

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토론

약물내성 결핵(DR-TB)이 제기하는 세계적인 위협은 시급한 문제가 되었습니다 1,19. 이로 인해 약물 감수성 검사(DST), 특히 2차 및 최신 항결핵 약물에 대한 개선되고 신속한 방법을 개발해야 할 시급한 필요성이 생겼습니다. 이러한 방법은 치료 전략을 강화하고, 항결핵제를 효과적으로 관리하며, 질병 진행 및 추가 내성 위험을 줄이는 데 필수적입니다20. 약물 감수성과 상호 작용 프로필을 모두 평가하는 방법은 이러한 맥락에서 상당한 이점을 제공하여 치료 결과를 개선하고 보다 효과적인 결핵 통제 전략을 지원할 것입니다.

산화환원에 민감한 염료인 Resazurin은 대사 활동의 지표로 박테리아 생존력 분석에 광범위하게 사용됩니다21

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
뚜껑이 있는 250mL 정사각형 병쇼트 듀란218203655미디어 준비
7H9 국물벡턴 디킨슨271310결핵균 성장 배지 (실온)
뚜껑이 있는 96웰 플레이트코 닝359696웰 투명 평평한 바닥 폴리스티렌 TC 처리 마이크로플레이트, 개별 포장, 뚜껑 포함, 멸균(실온)
ART-팁(1000 & L)타슨스528106소수성 폴리에틸렌 필터  폴리프로필렌 랙형 필터 팁-멸균(실온)
ART-팁(200 & L)타슨스528104소수성 폴리에틸렌 필터  폴리프로필렌 랙형 필터 팁-멸균(실온)
염화바륨 이수화물머 크217565McFarland 표준 준비(실온)
베다퀼린(BDQ)잰센과 잰센Jansen과 Jansen의 선물항결핵제(4 &g; C)
카시톤벡턴 디킨슨225930세균 배양 보충제(실온기)
델라마니드(DEL)오츠카 제약오츠카 제약의 선물항결핵제(4 &g; C)
디메틸 설폭사이드시그마-알드리치67-68-5약물 스톡 준비(실온)
필터 0.2 & mu; m밀리포어SLGVR33RS0.22  &무; m PVDF, 일회용, 멸균 주사기 필터(실내 온도)
글리세롤머 크356350배양 배지에 첨가(실온기)
접종 루프시그마-알드리치I8263배양 현탁액 준비용(실온기)
이소니아지드(INH)시그마-알드리치I3377-5G항결핵제(4 &g; C)
LJ 미디엄 슬랜트BD 마이코박토셀221414M. tuberculosis에 대한 성장 배지(4 ° C)
McCartney Bijou 좁은 입 병, 14 mL슈퍼텍12.124.0014배양 현탁액 준비용(실온기)
McCartney Bijou 좁은 입 병, 7 mL슈퍼텍12.124.0007배양 현탁액 준비용(실온기)
마이크로피펫(1000 & L)길슨F144059M정밀한 액체 취급용(실온기)
마이크로피펫(200 & L)길슨FA10005M정밀한 액체 취급용(실온기)
목시플록사신(MOX)시그마-알드리치SML1581-50MG항결핵제(4 &g; C)
다중 채널 피펫(20– 200 & 무; L)VWR849070024웰을 가로지르는 동시 피펫팅용
OADC벡턴 디킨슨211886세균 배양용 보충제(4 &g; C)
피펫 필러머 크Z333980정밀한 액체 취급용(실온기)
레사주린 나트륨염시그마-알드리치62758-13-8REMA 분석용 산화환원 지표(실온기)
혈청학적 피펫, 10mL코 닝CLS4100멸균된 폴리스티렌 일회용 피펫을 사용했습니다(실온기)
고체 유리 비드, 직경 6mm시그마-알드리치Z265950배양 현탁액 준비용(실온기)
황산 95– 97%머 크100731McFarland 표준 준비(실온)
필터용 주사기디스포 밴100032주사기 필터와 함께 사용
와류 믹서레미CM-101 플러스배양 현탁액 준비용
지퍼 탑 폴리 백시그마-알드리치Z162949

참고문헌

  1. Global tuberculosis report 2023. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/i/item/9789240083851 (2023).
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