방법 논문

네트워크 약리학 및 실험용 쥐 모델을 사용하여 혈관 석회화를 위한 치료제로서의 Salidroside 평가

DOI:

10.3791/67728

⸱

2025년 1월 31일

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1Department of Encephalopathy, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Research Center of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Nephrology, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 4Scientific Research Office, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 5Rehabilitation Department, The Affiliated hospital to Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 비타민 D3(VD3)와 결합된 고지방 식단(HFD)에 의해 유도된 혈관 석회화의 쥐 모델을 확립합니다. 이 모델은 혈관 석회화를 예방하고 치료하는 살리드사이드의 치료 효능을 평가하는 데 사용되었으며, 네트워크 약리학 및 생체 내 실험을 통해 잠재적인 작용 메커니즘에 대한 통찰력을 제공했습니다.

초록

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혈관 석회화(VC)는 상당한 이환율 및 사망률과 관련된 중요한 병리학적 상태입니다. 이 연구는 네트워크 약리학과 분자 생물학의 하이브리드 접근 방식을 사용하여 VC에 대한 Rhodiola crenulata의 활성 화합물인 살리드로사이드(SAL)의 치료 메커니즘을 설명합니다. 데이터베이스 마이닝 및 네트워크 분석을 통해 2871개의 VC 관련 대상과 교차하는 388개의 SAL 대상을 식별하여 208개의 공통 대상을 도출했습니다. String 데이터베이스와 Cytoscape 3.9.1의 토폴로지 분석을 통해 구축된 단백질-단백질 상호 작용(PPI) 네트워크는 IL6, TNF, TP53, IL1B, HIF1A, CASP3 및 STAT3를 포함한 10개의 주요 표적을 정확히 찾아냈습니다. 확인된 유전자는 지질 및 죽상동맥경화 경로에 집중되어 있으며, 이는 SAL에 의한 VC의 개선이 지질 및 염증 인자의 비정상적인 발현 조절을 통해 이루어질 수 있음을 나타냅니다. 또한 SAL은 염증 인자의 비정상적인 발현을 억제하여 JAK2/STAT3 경로를 활성화하여 VC의 진행에 개입하는 것으로 밝혀졌습니다. JAK2/STAT3 경로는 SAL이 VC의 추가 악화를 방지하는 핵심 분자 메커니즘입니다. 기능적 농축 분석은 VC의 중추적 경로인 염증 반응 및 지질 대사에 이러한 표적이 관여하는 것을 밝혔습니다. 쥐를 대상으로 한 생체 내 연구에서는 이상지질혈증과 혈관 염증을 완화하는 SAL의 효능이 입증되었으며, 혈청 지질 프로필이 개선되고 혈관 칼슘 침착이 감소했습니다. 웨스턴 블롯 분석에 기반을 둔 기계론적 탐사는 JAK2/STAT3 신호 경로를 조절하는 살리드사이드의 능력을 입증했으며, 이 중요한 분자 메커니즘에서 조절제로서의 잠재력을 강조하고 VC에 대한 잠재적인 치료 표적을 제공했습니다. 이 연구의 강점은 컴퓨터 예측과 생체 내 검증을 통합하는 방법론적 엄격함에 있습니다. 이 포괄적인 접근 방식은 VC와 싸우는 데 있어 천연 화합물의 치료 메커니즘을 탐구하기 위한 강력한 프레임워크를 구축합니다.

서론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

혈관 석회화(VC)는 혈관 벽 내에 칼슘이 비정상적으로 침착되어 동맥이 굳어지고 탄력성이 감소하여 궁극적으로 혈관 기능을 손상시키는 것을 말합니다. 전통적으로 VC는 지질 축적과 관련된 내막 석회화(intimal calcification)와 내측 석회화(medial calcification)의 두 가지 유형으로 나뉩니다. 전자는 염증성 침윤과 밀접한 관련이 있으며, 혈관 평활근 세포(VSMC)가 조골세포와 같은 세포로 이동, 증식 및 분화되는 것을 특징으로 하는 혈관 벽의 골형성 변형을 유발합니다1.

VSMC가 노화, 유전적 요인, 당뇨병 및 만성 신장 질환과 같은 환경 조건의 영향을 받는 골형성 분화를 겪는 능력은 노화 관련 VC의 주요 원인입니다. 이러한 조골세포와 같은 변형은 동맥 석회화와 퇴행을 악화시킵니다1.

VC는 퇴행성 변화, 대사 불균형 및 다양한 전신 상태에 의해 유발되는 다면적인 상태입니다. 혈관 손상의 약 80%와 관상 동맥 질환 사례의 90%가 VC를 나타내며, 이는 심각한 심혈관 질환의 위험을 현저히 증가시킵니다 1,2. 따라서 이 상태를 효과적으로 완화하거나 되돌릴 수 있는 약물 치료법을 발견해야 할 긴급한 필요성이 있습니다.

현재 VC의 치료 전략에는 다양한 약물 개입이 포함되지만 이러한 목적을 위해 특별히 고안된 약물은 없습니다. 경미한 석회화가 있는 환자의 경우, 플라크를 안정화하기 위해 스타틴이 처방되는 경우가 많습니다. 그러나 지질 수치를 낮춤으로써 관상동맥 협착증을 줄일 수 있지만, 석회화에 미치는 영향은 제한적이다2.

죽상동맥경화증의 복잡성을 감안할 때, 많은 환자들이 향상된 혈소판 활성화를 보이며, 혈소판 응집을 억제하고 혈전증의 위험을 줄이기 위해 아스피린이나 클로피도그렐과 같은 항혈소판제를 사용해야 합니다. 그러나 아스피린 요법은 관상동맥 칼슘 수치가 높고 출혈 위험이 낮은 사람에게만 효과적이다3.

또한 비타민 K와 같은 보충제에 대한 연구는 VC 진행을 예방할 수 있는 잠재력을 시사합니다4. 심한 경우 침습적 개입이 고려될 수 있지만 널리 퍼진 VC5에는 적합하지 않은 경우가 많습니다. 기존 VC가 없는 개인의 경우 혈압, 지질 프로필, 생활 방식 선택과 같은 위험 요인을 관리하는 것이 여전히 중요합니다6.

홍경천(Rhodiola crenulata)은 Crassulaceae과의 다년생 허브로, 전통적으로 중국 의학에서 사용되어 왔습니다. 주요 생리 활성 성분인 살리드로사이드(salidroside)는 주목할만한 생물학적 활성으로 인해 상당한 관심을 받고 있습니다. Salidroside는 세포사멸을 억제하고, 강력한 항산화 특성을 나타내며, 항염증 특성을 소유하는 능력으로 유명합니다 7,8. 이러한 특성은 혈관 기능을 향상시키고 혈관 노화를 지연시키며 혈관 내피를 보호할 수 있는 잠재력에 기여합니다. VC의 잠재적인 치료제로서 살리드로사이드는 연구에 상당한 가치를 지닙니다. 그러나, 살리드로사이드가 VC를 개선하는 정확한 메커니즘은 완전히 밝혀지지 않았으며, VC 치료에서 그 치료 잠재력을 활용하기 위한 추가 조사가 필요합니다.

이러한 메커니즘을 탐구하기 위해 본 연구는 약리학, 생물정보학 및 컴퓨터 과학을 결합하여 생물학적 시스템을 분석하고 약물 메커니즘을 밝히는 혁신적인 방법론인 네트워크 약리학을 활용합니다. 기존의 단일 표적 약물 연구와 비교했을 때, 네트워크 약리학은 여러 생물학적 표적 및 신호 경로에 대한 약물의 효과를 분석하여 보다 포괄적인 접근 방식을 제공합니다. 현대 약물 개발의 핵심 도구로서 약물, 표적 및 경로의 네트워크를 구축하여 약물 작용의 기본 메커니즘을 밝힙니다 9,10. 치료 메커니즘을 탐구하는 데 광범위하게 사용되었음에도 불구하고 생물정보학 및 네트워크 약리학의 관점에서 살리드로사이드와 VC 간의 상호 작용 메커니즘에 대한 연구는 제한적이었습니다.

이 연구는 광범위한 데이터베이스 마이닝을 통해 주요 표적을 식별하고 분석하여 VC에 대한 살리드로사이드의 잠재적 영향에 대한 분자 네트워크 맵을 구성합니다. 단백질-단백질 상호작용(PPI) 네트워크가 생성되고 토폴로지 분석이 적용되어 석회화 공정에서 중요한 노드를 강조 표시합니다.

컴퓨터 예측을 확인하기 위해 VC의 쥐 모델은 비타민 D3(VD3)가 함유된 고지방 식단을 투여하여 개발되었습니다. 이 모델은 인간 VC의 병리학적 특징을 복제합니다. 조직학적 기법을 통해 혈관 손상을 평가하고, 혈청 지질 프로필 및 염증 마커를 평가하여 살리드사이드의 전신 효과를 조사하고, SAL 항-VC 관련 단백질의 발현을 웨스턴 블로팅을 사용하여 측정하여 실험적으로 유도된 VC에 대한 살리드로사이드의 영향을 탐구하며, 이 연구는 VC와 싸우기 위한 치료 전략으로서 이 화합물의 잠재력에 대한 귀중한 통찰력을 제공하는 것을 목표로 합니다.

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프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜은 장춘중의과대학 실험동물위원회(Experimental Animals Committee)의 승인을 받았습니다(승인 번호 2023091). 이 연구는 유럽 공동체 지침(European Community Guidelines)과 1986년 EEC 지침(EEC Directive of 1986)을 포함한 국제 지침을 준수하여 연구 전반에 걸쳐 동물에 대한 윤리적 대우를 보장합니다. 수컷 Wistar 쥐(8-10주, 체중 200-220g)를 연구에 사용했습니다. 사용된 시약 및 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 잠재적인 살리드로사이드-VC 표적의 네트워크 약리학 예측

참고: 네트워크 약리학은 계산 방법과 대규모 데이터 분석을 활용하여 유기체 내 경로, 유전자 및 단백질과 같은 약물 분자와 생물학적 표적 간의 복잡한 상호 작용을 조사합니다11,12. 이 접근 방식은 연구된 개체의 생물학적 기능과 관계를 해독하는 데 도움이 됩니다. 이 방법론은 데이터베이스 활용, 화학 정보 처리, 생체 활성 데이터 수집, 단백질 데이터 검색, 유전자 발현 프로파일 분석, 상호 작용 네트워크 구축 및 경로11의 농축 분석을 포함합니다. 그림 1은 살리드로사이드와 혈관 석회화 사이의 핵심 표적의 상호 작용 네트워크를 보여줍니다.

  1. "Ingredient" 타겟 데이터베이스 구축
    1. HERB, TCMSP, PubChem, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA 및 STITCH와 같은 데이터베이스13 ( 보충 표 1 참조)를 검색하기 위한 성분의 키워드로 "Salidroside"를 사용한다.
    2. 관련 문헌을 검토하여 호모 사피엔스(Homo sapiens)로 설정된 종과 함께 살리드사이드와 관련된 표적을 식별합니다. 중복을 제거한 후 UniProt( 보충 표 1 참조)을 사용하여 표적 단백질을 표준화하고 포괄적인 Salidroside 표적 데이터베이스를 구축합니다14.
  2. "질병" 대상 데이터베이스 구축
    1. "혈관 석회화(Vascular calcification)"를 키워드로 사용하여 GeneCards, OMIM, PharmGkb, DrugBank를 포함한 데이터베이스15 ( 보충 표 1 참조)를 검색하고, 종은 호모 사피엔스(Homo sapiens)로 설정된다. 중복 제거 후 혈관 석회화 대상 데이터베이스를 만듭니다.
  3. 잠재적 치료 표적 예측
    1. 살리드로이드(salidroside) 및 혈관 석회화(vascular calcification)에 대한 표적을 입력하여( 보충 표 1 참조) 공통 표적을 식별합니다. 벤 다이어그램을 생성하여 혈관 석회화 치료에서 살리드로사이드의 잠재적인 치료 표적을 시각화합니다.
  4. "Salidroside-Vascular Calcification" 단백질-단백질 상호 작용(PPI) 네트워크 구축
    1. 잠재적 표적을 Multiple Proteins List로 컴파일하고 유기체를 Homo sapiens로 설정하고 상호 작용 점수를 중간 신뢰도(>0.4)16로 설정하여 STRING(보충 표 1 참조)을 사용하여 분석합니다. 추가 분석을 위해 PPI 데이터를 TSV 형식으로 추출합니다.
      참고: 쥐 유전자의 85%가 인간 유전자와 상동하고 유사한 생물학적 기능을 수행한다는 점을 감안할 때, 쥐는 혈관 석회화에 대한 살리드로사이드의 효과를 검증하기 위한 실험 대상으로 선택되었습니다17.
  5. 핵심 대상의 선택 및 네트워크 구축
    1. CytoNCA 플러그인을 사용하여 BC(Betweenness), CC(Closeness), DC(Degree), EC(Eigenvector), LAC(Local Average Connectivity) 및 NC(Network Centrality)와 같은 매개변수를 평가하기 위해 분석을 위해 PPI 네트워크 데이터를 Cytoscape 3.9.1( 보충 표 1 참조)로 가져옵니다. CC=1 로 키 대상을 선택하여 'SAL-VC'에 대한 핵심 대상 동작 스펙트럼 맵을 구성합니다.
    2. CytoHubba 플러그인을 사용하여 MCC(Maximal Clique Centrality), MNC(Maximum Neighborhood Component) 및 Degree 계산을 기반으로 상위 10개 허브 유전자를 식별하여 허브 유전자 스펙트럼 맵을 생성합니다.
  6. GO 및 KEGG 경로 농축 분석
    1. DAVID( 보충 표 1 참조)를 사용하여 유전자 ID 변환을 수행하고, 종 정보를 위해 유전자 유형-9606에 대한 ENSEMBL_GENE_ID 선택합니다. GO 기능 및 KEGG 경로 농축에 대한 Omicshare( 보충 표 1 참조)를 사용하여 변환된 유전자 목록을 분석하며, 유의성은 P 값 < 0.0518로 설정되었습니다.
      참고: GO 기능 분석에는 분자 기능(MF), 생물학적 과정(BP) 및 세포 구성 요소(CC)가 포함됩니다. KEGG 경로 분석에는 경로 강화(pathway enrichment)와 경로 분류 강화(pathway classification enrichment)가 포함된다19. 농축 분석 결과는 그림 2에 나와 있습니다.

2. 동물 실험

  1. 순응
    1. Wistar 쥐는 12시간의 라이트/다크 사이클을 가진 특정 병원체가 없는(SPF) 조건에서 적응합니다. 실험을 시작하기 전에 건강을 유지하기 위해 음식과 물에 대한 자유가 있는지 확인하십시오. 1주일 동안 적응형 수유를 수행합니다.
  2. 모델 수립
    1. 쥐를 환경 조건에 적응시키고 대조군(Ctrl, ND + Vehicle), 모델 그룹(Model, HFD + Vehicle), SAL 저용량 그룹(SAL-L, HFD + SAL 5mg/kg), SAL 고용량 그룹(SAL-H, HFD + SAL 10mg/kg) 및 Simvastatin(SIM) 그룹(HFD + SIM 5mg/kg)의 5개 그룹으로 무작위로 할당합니다.
    2. 전체 실험 기간 동안 Ctrl 그룹에게는 일반 식단(ND)을, 나머지 그룹에는 고지방 식단(HFD)을 투여합니다. HFD 투여 첫날, Ctrl 그룹20,21을 제외한 모든 그룹에 600,000 IU/kg VD3의 단일 피하 용량을 주입합니다. 이후 8주 동안 매주 100,000IU/kg VD3의 피하 주사를 합니다(그림 3).
    3. 동물의 건강 상태와 생존을 매일 모니터링하십시오. 9주차에 실험적 개입을 시작한다.
    4. 연구가 끝나면 동물을 안락사시킵니다(제도적으로 승인된 프로토콜에 따라). 혈청 샘플을 수집하여 30분 동안 그대로 두었다가 원심분리하여 혈청을 분리합니다(이전에 발표된 보고서20,21에 따름). 혈관 조직(복부 대동맥)을 절개하고 인산염 완충 식염수(PBS)로 헹구어 혈액을 제거합니다.
    5. 조직학적 검사를 위해 조직의 한 부분을 4% 파라포름알데히드에 고정하고 분자 분석을 위해 다른 부분을 액체 질소에 저장합니다.
      알림: 사용하기 전에 살리드로사이드를 따뜻한 물로 희석하십시오.

3. HE, VK, EVG 염색을 이용한 혈관 조직 손상 평가

참고: 혈관 조직(복부 대동맥)을 4% 파라포름알데히드로 고정하고 48시간 후에 에탄올에서 탈수하고 파라핀에 묻습니다. Hematoxylin-Eosin(HE), Elastica van Gieson(EVG) 및 Von Kossa(VK) 염색을 위해 포함된 파라핀 블록을 5μm 슬라이스로 절단하고 광학 현미경으로 조직학적 형태를 관찰합니다. HE 염색은 조직 형태의 변화를 평가하는 데 사용됩니다. 혈관 조직에서는 평활근 세포 증식, 무질서한 세포 배열 및 염증을 포함한 혈관 벽의 구조적 변화를 강조합니다. EVG 염색은 탄성 섬유 손상 또는 혈관 조직의 리모델링을 평가하는 데 필수적이며 석회화가 혈관 탄성에 미치는 영향을 이해하는 데 도움이 되는 탄성 섬유와 콜라겐 섬유를 시각화합니다. VK 염색은 VC의 핵심 기능인 칼슘 침전물을 검출하여 혈관 조직에서 석회화의 정도와 분포를 평가하는 데 중요합니다22,23.

  1. 혈관 조직 손상 감지를 위한 HE 염색
    1. 탈파라핀화(Deparaffinization) 및 재수화(rehydration)
      1. 자일렌을 두 번 갈아주어 각각 8분 동안 절편을 파라핀화하고 단계당 3분 동안 등급이 매겨진 에탄올 계열(100%, 95%, 85%, 75%)을 통해 재수화합니다. 흐르는 수돗물로 2분 동안 헹굽니다.
    2. 헤마톡실린 염색
      1. 헤마톡실린으로 섹션을 5-10분 동안 염색하고 세척하여 과도한 얼룩을 제거한 다음 흐르는 수돗물로 헹굽니다.
        참고: 세포질 색에 영향을 줄 수 있는 지나치게 어두운 염색을 피하기 위해 5분의 밝은 염색을 권장합니다.
    3. 분화
      1. 분화 용액에서 30초 동안 섹션을 구별한 다음 수돗물로 각각 3분 동안 두 번 헹굽니다.
    4. Eosin counterstaining
      1. 섹션을 에오신 염색에 1분 동안 놓습니다. 과도한 얼룩을 제거한 후 빠른 탈수를 수행하십시오.
    5. 탈수, 정화 및 장착
      1. 빠른 탈수를 위해 섹션을 75%, 85%, 95% 및 100% 에탄올에 각각 3초 동안 담근 다음 100% 에탄올을 1분 동안 담그십시오.
        참고: eosin은 물과 에탄올 구배에서 색을 잃을 수 있으므로 빠른 탈수가 권장됩니다.
  2. 칼슘 검출을 위한 VK 염색
    1. 탈파라핀화(Deparaffinization) 및 재수화(rehydration)
      1. 3.1.1단계에 따라 이 단계를 수행합니다.
    2. 질산은 반응
      1. 섹션을 닦아내고 미세한 브러시로 윤곽을 그린 다음 Von Kossa로 염색합니다( 재료 표 참조). 자외선에 4시간 동안 노출시킨 다음 흐르는 수돗물로 철저히 헹굽니다.
    3. 헤마톡실린(hematoxylin)을 이용한 대조염색
      1. 헤마톡실린으로 섹션을 5분 동안 염색하고 흐르는 수돗물로 헹구고 구별하고 다시 헹군 다음 흐르는 수돗물로 헹굽니다.
    4. Eosin counterstaining
      1. 등급이 매겨진 에탄올(각각 5분 동안 85% 및 95%)을 통해 섹션을 탈수한 다음 5분 동안 에오신으로 염색합니다.
    5. 탈수 및 장착
      1. 에탄올 수조(100% 에탄올 I, II, III 각각 5분)에서 섹션을 탈수하고 크실렌 수조(크실렌 I 및 II 각각 5분)에서 정화합니다. 그런 다음 중성 발삼으로 섹션을 장착합니다.
    6. 현미경 검사 및 이미지 캡처
      1. 광학 현미경으로 염색된 부분을 검사하고 분석을 위해 이미지를 캡처합니다.
        참고: 칼슘 침전물이 갈색-검은색에서 짙은 검은색으로 나타나고, 핵이 파란색이며, 배경이 빨간색인지 확인합니다. 사용 직전에 신선한 VK 염색을 위해 질산은 용액을 준비하십시오.
  3. 탄성 및 콜라겐 섬유를 위한 EVG 염색
    1. 탈파라핀화(Deparaffinization) 및 재수화(rehydration)
      1. 파라핀 부분을 50분 동안 열로 처리한 다음 자일렌에 20분 동안 담가 파라핀을 제거합니다. 각 섹션을 등급이 매겨진 에탄올 시리즈(100%, 95%, 85%, 75%)에 각각 5분 동안 노출시키고 흐르는 수돗물에 5분 동안 헹구는 것으로 마무리합니다.
    2. EVG 염색
      1. EVG 염색 용액( 재료 표 참조)을 10분 동안 바른 다음 흐르는 수돗물에 5초 동안 짧게 헹구어 과도한 얼룩을 제거합니다.
      2. 다음으로, Verhoeff 작업 용액( 재료 표 참조)을 5분 동안 바른 다음 흐르는 수돗물에서 5초 동안 다시 간단히 헹굽니다. 엘라스틴 섬유가 명확하게 보일 때까지 Verhoeff의 차별화 솔루션을 5초 동안 바른 다음 흐르는 수돗물로 5초 동안 헹굽니다.
        알림: 구성 요소 A, B 및 C(시판되는 키트에 제공됨)를 5:2:2 비율로 혼합하여 사용하기 전에 Verhoeff 작업 솔루션을 준비합니다. 2시간 이내에 용액을 사용하고 염색 과정에서 필요에 따라 보충하여 섹션이 건조되는 것을 방지합니다.
    3. 탈수 및 장착
      1. 등급이 매겨진 에탄올 시리즈(75%, 85%, 95%, 100%)를 통해 각 5초 동안 섹션을 탈수한 다음 각각 1분 동안 자일렌을 두 번 변경하여 설명합니다. 짧은 공기 건조 기간이 지나면 중성 발삼으로 섹션을 장착합니다.
    4. 현미경 검사 및 이미지 분석
      1. 광학 현미경으로 염색된 부분을 검사하여 탄성 섬유와 콜라겐 섬유를 시각화하고 후속 분석을 위해 이미지를 캡처합니다.

4. 알칼리성 인산가수분해효소(ALP) 분석

참고: ALP를 석회화 방지 치료의 효과를 평가하기 위한 핵심 지표로 사용하십시오.

  1. 시약 준비
    1. 발색 기질을 얼음처럼 차가운 0.05M pH 9.6 탄산염 완충액에 최종 부피 2.5mL로 용해시킵니다.
      참고: 1.59g의 탄산나트륨과 2.93g의 중탄산나트륨을 1,000mL의 이중 증류수에 용해하여 완충액을 준비합니다.
  2. 기질 희석
    1. 10μL의 p-니트로페놀 용액(10mM)을 0.05M pH 9.6 탄산염 완충액으로 0.2mL의 최종 부피로 희석하여 0.5mM의 최종 농도를 달성합니다.
  3. 시료 전처리
    1. lysis buffer에서 복부 대동맥을 균질화합니다. 균질액(4°C에서 10분 동안 ~12,000 x g)을 원심분리하고 ALP 활성 검출을 위해 상층액을 수집합니다.
      참고: 용해 완충액에 인산가수분해효소 억제제가 없는지 확인하십시오. 보류 중인 테스트 샘플을 -80°C에서 보관하여 반복적인 동결-해동 주기를 피하십시오.
  4. 분석을 위한 마이크로플레이트 준비
    1. 블랭크 웰, 표준 웰 및 샘플 웰이 있는 96웰 플레이트를 준비합니다. 50 μL의 표준 용액을 표준 웰에 추가하고 50 μL의 보류 중인 테스트 샘플을 샘플 웰에 추가합니다. 플레이트를 37°C에서 10분 동안 배양합니다.
  5. 반응 종결 및 흡광도 측정
    1. 각 웰에 100μL의 정지 용액을 추가하여 반응을 종료합니다. 405nm에서 흡광도를 측정하고 흡광도 값을 기반으로 ALP 활성을 계산합니다(제조업체의 지침에 따라 재료 표 참조).
      알림: ALP 활성이 있는 표준 또는 샘플을 포함하는 웰은 다양한 노란색 음영을 나타냅니다. 색상은 최대 2시간 동안 안정적입니다.

5. 칼슘 함량 측정

참고: 칼슘 함량 측정은 생물학적 조직의 광물화 정도를 평가하는 데 중요합니다.

  1. 조직 준비
    1. 조직을 작은 조각으로 다지고 용해 완충액에서 균질화합니다.
  2. 시료 희석 및 원심분리
    1. 용해 완충액에서 조직을 1:10의 비율로 희석합니다. 혼합물을 균질화하고 4°C, 12,000 x g 에서 5분 동안 원심분리합니다. 분석을 위해 상층액을 수집합니다.
      알림: 0mM 칼슘 표준 용액을 사용하여 칼슘 표준 희석액(1.0-5mM)을 준비합니다( 재료 표 참조).
  3. 플레이트 설정 및 배양
    1. 50μL의 표준 또는 테스트 샘플을 96웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 150μL의 분석 작업 용액을 추가하고 완전히 혼합한 후 10분 동안 실온의 암흑 속에서 플레이트를 배양합니다. 575nm에서 흡광도를 측정하고 표준 곡선을 구성합니다.
  4. 칼슘 함량 계산
    1. 표준 곡선을 사용하여 희석 계수, 시료 부피 및 칼슘의 원자량을 통합하여 칼슘 함량을 계산합니다.

6. 염증성 사이토카인(IL-6, TNF-α, IL-1β)에 대한 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)

참고: IL-6, IL-1β 및 TNF-α는 염증 반응의 존재 및 중증도를 나타내는 주요 전염증성 사이토카인입니다. 이러한 사이토카인을 측정하는 것은 염증 과정을 이해하고 항염증 치료의 효과를 평가하는 데 필수적입니다.

  1. 시료 채취
    1. 쥐의 복부 대동맥에서 혈청을 수집합니다. 실온에서 2시간 동안 응고시킵니다. 3,000 x g에서 4°C에서 10분 동안 시료를 원심분리하고 상층액을 수집합니다.
  2. 분석을 위한 마이크로플레이트 준비
    1. 표준물질 및 테스트 샘플용으로 지정된 웰이 있는 96웰 플레이트를 준비합니다. 다양한 농도의 50μL의 표준물질( 재료 표 참조)을 적절한 웰에 추가합니다.
  3. 시료 전처리
    1. 테스트 샘플용으로 지정된 각 웰에 40μL의 샘플 희석액을 추가합니다. 10μL의 시료를 동일한 웰에 첨가하여 5배 희석합니다.
  4. 효소 표지 시약을 사용한 배양
    1. IL-6, TNF-α 또는 IL-1β에 특이적인 효소 표지 시약 100μL를 블랭크를 제외한 모든 웰에 추가합니다. 플레이트를 37°C에서 60분 동안 배양합니다.
  5. 세탁
    1. 블랭크를 제외한 모든 웰에서 액체를 버리십시오. 1x 세척 용액(증류수에 20배 희석으로 준비)으로 우물을 씻습니다. 이 세척 단계를 5회 반복하고 우물을 말리십시오.
  6. 색상 개발 및 종료
    1. 50μL의 기질 용액 A 및 B(시판되는 키트에서 제공, 재료 표 참조)를 각 웰에 추가합니다. 부드럽게 섞고 37°C의 어두운 곳에서 15분 동안 플레이트를 배양합니다. 각 웰에 50μL의 정지 용액을 추가하여 반응을 종료합니다.
  7. 흡광도 측정 및 데이터 분석
    1. 블랭크 웰을 0으로 설정합니다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정합니다. OD 값과 표준 농도를 기반으로 표준 곡선을 생성합니다. 보간법을 사용하여 시료 농도를 계산하고 희석 계수를 조정합니다.

7. 지질 프로필 분석

참고: 지질 프로필 분석은 비정상적인 지질 수치를 감지하며, 지질 수치가 상승하거나 불균형하면 혈관 석회화의 위험을 가속화할 수 있습니다.

  1. 총 콜레스테롤 및 트리글리세리드(TC 및 TG)
    1. 혈청을 수집하고 블랭크, 보정 및 보류 중인 테스트 샘플을 위해 지정된 웰이 있는 96웰 플레이트를 준비합니다. 각 웰에 2.5μL의 혈청, 검량 표준물질 또는 블랭크 용액을 추가합니다.
    2. 각 웰에 250μL의 작업 용액을 추가합니다. 부드럽게 섞고 플레이트를 37°C에서 10분 동안 배양합니다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 500nm에서 흡광도를 측정합니다.
  2. 저밀도 지단백질 및 고밀도 지단백질(LDL-C 및 HDL-C)
    1. 혈청을 수집하고 블랭크, 보정 및 보류 중인 테스트 샘플용으로 지정된 웰이 있는 96웰 플레이트를 준비합니다. 2.5μL의 혈청, 검량 표준물질 또는 블랭크 용액을 각 웰에 추가합니다.
    2. 분석 키트 지침에 명시된 대로 각 웰에 적절한 시약(180 μL의 경우 1번 시약 또는 60 μL의 경우 2번 시약, 재료 표 참조)을 추가합니다. 온도(37°C)에서 각 시약에 권장되는 시간(시약 1은 5분 또는 시약 2는 10분) 동안 배양합니다.
    3. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 LDL-C 또는 HDL-C에 대해 표시된 특정 파장(600nm)에서 흡광도를 측정합니다.

8. 웨스턴 블로팅

참고: 웨스턴 블롯(WB)은 주요 단백질의 발현 수준을 평가하는 데 중요한 역할을 하며, 총 형태와 인산화 형태를 모두 검출할 수 있습니다.

  1. 조직 준비
    1. 조직 0.05g의 무게를 측정하고 PBS로 철저히 헹구어 과도한 이물질을 제거합니다. 1x phosphatase 및 protease 억제제를 함유한 500μL의 lysis buffer를 추가합니다. 조직을 4°C에서 10분 동안 배양하고 조직 분쇄기를 사용하여 균질화합니다.
  2. 단백질 추출
    1. 균질화된 샘플을 1분 동안 그대로 둔 다음 4°C 및 12,000 x g 에서 15분 동안 원심분리합니다. 단백질 분석을 위해 상층액을 수집합니다. 제조업체의 지침에 따라 BCA 방법을 사용하여 단백질 농도를 측정합니다( 재료 표 참조). 표준 곡선을 사용하여 농도를 계산합니다.
      알림: 사용하기 전에 원심분리기를 4°C로 예냉각하십시오. 562nm에서 단백질 농도를 측정합니다.
  3. 시료 전처리
    1. 단백질 샘플을 β-메르캅토에탄올과 SDS가 4:1 비율로 함유된 5x loading buffer와 혼합합니다. 혼합물을 100°C에서 5분 동안 가열하여 단백질을 변성시킵니다.
      참고: 1x 로딩 버퍼가 필요한 경우 5x 버퍼를 용해 버퍼로 희석합니다.
  4. SDS-PAGE 젤 준비
    1. 12% SDS-PAGE 겔을 준비하여 전기영동 장치에 넣습니다. 지침에 따라 중간 표시까지 1x 전기영동 버퍼를 추가합니다( 보충 표 2 참조).
  5. 전기영동
    1. -20 °C에서 단백질 샘플을 검색합니다. 웰당 60μg의 단백질을 로드하고 겔을 실행합니다.
    2. 스태킹 겔에 대해 전류를 20분 동안 50mA로 설정한 다음 염료 전면이 바닥에 도달할 때까지 분리 젤에 대해 60분 동안 100mA로 높입니다.
  6. 멤브레인 전달
    1. 메탄올의 PVDF 멤브레인을 5분 동안 활성화합니다.
    2. 전사 샌드위치를 여과지 → SDS-PAGE 젤 → PVDF 멤브레인 → 여과지 순서로 조립합니다. 300mA에서 60분 동안 단백질을 전달합니다.
      알림: SDS-PAGE 젤과 PVDF 멤브레인 사이에 기포가 끼지 않도록 하십시오.
  7. 블로킹
    1. PVDF 멤브레인을 실온에서 5% BSA(1x TBST로 준비)에 넣고 60분 동안 부드럽게 흔들어 배양합니다. 1x TBST로 멤브레인을 각각 5분 동안 3회 세척합니다.
  8. 1차 항체 배양
    1. 차단 완충액에 희석한 적절한 1차 항체(예: p-JAK2, JAK2, p-STAT3, STAT3, p-NF-κB p65, NF-κB p65, IκBα) 5mL에 멤브레인을 실온에서 2.5시간 동안 배양합니다.
  9. 2차 항체 배양
    1. 1차 항체 배양 후 각각 5분 동안 1x TBST로 멤브레인을 3회 세척합니다. 적절한 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 1x TBST로 멤브레인을 각각 5분씩 3회 다시 세척합니다.
  10. 탐지
    1. ECL 화학발광 검출24 를 사용하여 단백질 띠를 시각화합니다( Table of Materials(재료표 참조).
  11. 밀도 측정 분석
    1. ImageJ 소프트웨어를 사용하여 단백질 밴드를 정량화합니다. ImageJ: Image → 8-bit → Process → Subtract Background(배경 빼기)에서 이 워크플로우를 따릅니다. 분석 → 측정값 설정 → 분석 → 척도 설정. → 결과를 편집→ 반전→ 분석 → 측정합니다. 파일 → IntDen→ 다른 이름으로 저장합니다.
    2. 그래프 작성 및 통계 분석 소프트웨어를 사용하여 통계 그래프를 생성합니다.
      참고: 결과를 검증하기 위해 반복 실험 전반에 걸쳐 결과가 일관되는지 확인합니다.

9. 통계 분석

  1. GraphPad Prism 9.0을 사용하여 데이터를 수집하고 구성합니다.
  2. 원시 데이터의 평균 ± SD를 사용하여 오차 막대를 계산하고 플로팅합니다.
  3. 일원분산분석(One-Way ANOVA)을 사용하여 통계 분석을 수행한 후 다중 비교를 위한 Tukey의 사후 검정을 수행합니다.
  4. P < 0.05에서 통계적 유의성을 확인하며, P-값이 작을수록 결과의 차이가 더 크다는 것을 나타냅니다.

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결과

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네트워크 약리학 분석

HERB, TCMSP, Pubmed, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA 및 STITCH와 같은 데이터베이스를 사용하여 살리드로사이드에 대한 388개의 잠재적 표적 유전자를 확인했습니다. 또한 VC와 관련된 2871개의 잠재적 표적 유전자를 GeneCards, OMIM, PharmGkb 및 DrugBank와 같은 데이터베이스에서 검색했습니다. VENN 다이어그램을 통한 교차 분석은 VC에 대한 살리드로사이드의 개입을 위한 주요 타겟으로 간주되는 208개의 중첩 타겟을 보여주었습니다(그림 1A).

PPI 네트워크 분석

STRING 플랫폼을 사용하여 상위 100개의 노드를 선택한 208개의 ...

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토론

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VC는 혈관 세포와 조직의 퇴행성 변화를 특징으로 하며, 혈관 내 병리학적 미네랄 침전물이 혈관 벽을 굳게 하거나 죽상경화성 플라크를 형성하여 폐쇄성 혈관 질환을 유발할 수 있습니다25. 연구에 따르면 VC 플라크의 약 85%가 급성 심혈관 발작을 유발할 수 있는 혈전증으로 발전할 수 있습니다. 또한, VC는 잠재적인 급성 심혈관 질환, 뇌졸중 및 말초 혈관 질환의 중요한 지표이다26. 현재의 치료법은 주로 항응고제, 지질 저하제, 혈관 긴장 조절에 초점을 맞추고 있지만, 이러한 치료법은 특히 석회화가 진행된 단계에서 효과가 제한적이고 부작용이 있는 경우가 많습니다.

p-하이드록시페네틸-베타-D-글루코피라노사이드로 확인된 화합물인 살리드로사이드(SAL)는 신경계, 심혈관 및 면역 체계에 영향을 미치는 다양한 혈관 상태뿐만 아니라 만성 ...

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공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

모든 저자가 모든 이해 상충을 공개했는지 확인합니다.

감사의 글

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이 작업은 길림성 과학기술부 프로젝트(YDZJ202301ZYTS460)와 길림성 교육부 프로젝트(JJKH20230991KJ)의 재정 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
30%(29:1) 아크릴아미드/비스 솔루션Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, 중국A1010
4% 파라포름알데히드 수정 용액Beyotime Biotech Inc(Beyotime), 중국P0099
5*로딩 버퍼Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, 중국P1040
알칼리성 인산가수분해효소 분석 키트Beyotime Biotech Inc(Beyotime), 중국P0321S
AlphaView 소프트웨어Proteinsimple Inc.USAAlphaView SA
BCA 단백질 분석 키트Beyotime Biotech Inc(Beyotime), 중국P0012
블루잉 솔루션Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, 중국G1866
칼슘 비색 분석 키트Beyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국S1063S
콜라겐 섬유 및 탄성 섬유 염색 키트(EVG-Verh eff 방법)Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, 중국G1597
탈수기Diapath Biosciences  Ltd, 이탈리아Donatello
임베딩 기계Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd, 중국JB-P5
효소 라벨링 기기 Biotek Co., Ltd, 미국Epoch
Ethanol absoluteGHTECH  Co., Ltd, China64-17-5
Goat Anti-Mouse IgG (H+L) HRPBioworld technology, co, Ltd., 중국BS20242-Y
GraphPad Prism SoftwareGraphPad Software., USAGraphPad Prism 9.0
Hematoxylin-Eosin Stain KitBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, 중국G1120
고밀도 지단백 콜레스테롤 분석 키트Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, 중국A112
HRP 표지 염소 안티 토끼 IgG(H+L)Guangzhou saiguo biotech Co., LTDA0208
Image J SoftwareNational Institutes of Health(NIH), USAImage J 
나&카파; B 알파 다클론 항체Proteintech Group, Inc.A, 미국10268-1-AP
JAK2 항체친화도 Biosciences Co., Ltd, 중국AF6022
저밀도 지단백 콜레스테롤 분석 키트Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, 중국A113
NF-κ B p65 항체Proteintech Group, Inc.A, 미국10745-1-AP
병리학 마이크로톰Leica Biosystems, 미국RM2016
인산가수분해효소 억제제 칵테일 테이블F. Hoffmann-La Roche, Ltd, 스위스04906845001
Phospho-JAK2 (Tyr931) 항체친화도 Biosciences Co., Ltd, 중국AF3024
Phospho-NF-κ B p65(Ser276) 항체친화력 Biosciences Co., Ltd, 중국AF2006
Phospho-STAT3(S727) 항체Abways  과학 & Technology Co., Ltd, 중국CY5291
프로테아제 억제제 칵테일 F. Hoffmann-La Roche, Ltd, 스위스11873580001
PVDF 멤브레인F. Hoffmann-La Roche, Ltd, 스위스3010040001
쥐 IL-1β ELISA KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국PI303
쥐 IL-6 ELISA 키트Beyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국PI328
쥐 TNF-&알파; ELISA KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국PT516
RIPA 용해 완충액Beyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국P0013B
SalisorosideShanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd, 중국S25475
SDSGuangzhou saiguo biotech Co., LTD, China3250KG001
탄산나트륨China National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , 중국1001921933
탄산수소China National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , 중국10018960
티오황산나트륨China National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , 중국20042518
STAT3 항체Proteintech Group, Inc.A, 미국10253-2-AP
TBST (10×)Beyotime Biotech Inc (Beyotime), 중국ST673
총 콜레스테롤 분석 키트Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, 중국A111
트리글리세리드 분석 키트Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, 중국A110
Tris BaseGuangzhou saiguo biotech Co., LTD1115GR500
Upright optical 현미경Nikon Corporation, 일본Eclipse E100
Von Kossa 솔루션  무한 servicebio technology CO., LTD, 중국G1043
웨스턴 블로팅 루미놀 시약Santa Cruz Biotechnology, Inc. , 미국SC-2048
β-Actin 항체  세포 신호 기술, Inc., 미국E4967
나트륨

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sutton, N. R., et al. Molecular mechanisms of vascular health: Insights from vascular aging and calcification. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 43 (1), 15-29 (2023).
  2. Henein, M. Y., Owen, A. Statins moderate coronary stenoses but not coronary calcification: Results from meta-analyses. Int J Cardiol. 153 (1), 31-35 (2011).
  3. Ajufo, E., et al. Value of coronary artery calcium scanning in association with the net benefit of aspirin in primary prevention of atherosclerotic cardiovascular disease. JAMA Cardiol. 6 (2), 179-187 (2021).
  4. Vossen, L. M., Kroon, A. A., Schurgers, L. J., De Leeuw, P. W. Pharmacological and nutritional modulation of vascular calcification. Nutrients. 12 (1), 100(2019).
  5. Kereiakes, D. J., et al. Principles of intravascular lithotripsy for calcific plaque modification. JACC Cardiovasc Interv. 14 (12), 1275-1292 (2021).
  6. Demer, L. L., Watson, K. E., Boström, K. Mechanism of calcification in atherosclerosis. Trends Cardiovasc Med. 4 (1), 45-49 (1994).
  7. Chen, F., et al. Network pharmacology analysis combined with experimental validation to explore the therapeutic mechanism of salidroside on intestine ischemia-reperfusion. Biosci Rep. 43 (8), BSR20230539(2023).
  8. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer ags cells through the pi3k/akt/MTOR pathway. Biomed Pharmacother. 122, 109726(2020).
  9. Zhang, P., et al. Network pharmacology: Towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518(2023).
  10. Jiao, X., et al. A comprehensive application: Molecular docking and network pharmacology for the prediction of bioactive constituents and elucidation of mechanisms of action in component-based Chinese medicine. Comput Biol Chem. 90, 107402(2021).
  11. Li, S., Zhang, B. Traditional Chinese medicine network pharmacology: Theory, methodology and application. Chin J Nat Med. 11 (2), 110-120 (2013).
  12. Wang, X., Hu, Y., Zhou, X., Li, S. Editorial: Network pharmacology and traditional medicine: Setting the new standards by combining in silico and experimental work. Front Pharmacol. 13, 1002537(2022).
  13. Huang, Z., Yang, Y., Fan, X., Ma, W. Network pharmacology-based investigation and experimental validation of the mechanism of scutellarin in the treatment of acute myeloid leukemia. Front Pharmacol. 13, 952677(2022).
  14. Zhang, R., Zhu, X., Bai, H., Ning, K. Network pharmacology databases for traditional Chinese medicine: Review and assessment. Front Pharmacol. 10, 123(2019).
  15. Wang, C., Liu, X., Guo, S. Network pharmacology-based strategy to investigate the effect and mechanism of alpha-solanine against glioma. BMC Complement Med Ther. 23 (1), 371(2023).
  16. Li, X., et al. Network pharmacology prediction and molecular docking-based strategy to explore the potential mechanism of Huang Lian jiedu decoction against sepsis. Comput Biol Med. 144, 105389(2022).
  17. Holmes, R. S., et al. Recommended nomenclature for five mammalian carboxylesterase gene families: Human, mouse, and rat genes and proteins. Mamm Genome. 21 (9-10), 427-441 (2010).
  18. Geng, J., Zhou, G., Guo, S., Ma, C., Ma, J. Underlying mechanism of traditional herbal formula Chuang-ling-ye in the treatment of diabetic foot ulcer through network pharmacology and molecular docking. Curr Pharm Des. 30 (6), 448-467 (2024).
  19. Chen, X., et al. Puerarin inhibits emt induced by oxaliplatin via targeting carbonic anhydrase xii. Front Pharmacol. 13, 969422(2022).
  20. Herrmann, J., Babic, M., Tolle, M., Van Der Giet, M., Schuchardt, M. Research models for studying vascular calcification. Int J Mol Sci. 21 (6), 2204(2020).
  21. Zhou, H., X, W., Yuan, Y., Qi, X. Comparison of methods for establishing a rat model of atherosclerosis using three doses of vitamin D3 and atherogenic diet. Chin J Arterioscler. 20 (11), 995-998 (2012).
  22. Zhang, Y., et al. Il-18 mediates vascular calcification induced by high-fat diet in rats with chronic renal failure. Front Cardiovasc Med. 8, 724233(2021).
  23. Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic verhoeff-van gieson staining in dermatopathology. J Cutan Pathol. 40 (2), 211-225 (2013).
  24. Tang, X., et al. Underlying mechanism and active ingredients of tianma gouteng acting on cerebral infarction as determined via network pharmacology analysis combined with experimental validation. Front Pharmacol. 12, 760503(2021).
  25. Lee, S. J., Lee, I. K., Jeon, J. H. Vascular calcification-new insights into its mechanism. Int J Mol Sci. 21 (8), 2685(2020).
  26. Magdic, J., et al. Intracranial vertebrobasilar calcification in patients with ischemic stroke is a predictor of recurrent stroke, vascular disease, and death: A case-control study. Int J Environ Res Public Health. 17 (6), 2013(2013).
  27. Zhou, L., et al. Salidroside-pretreated mesenchymal stem cells contribute to neuroprotection in cerebral ischemic injury in vitro and in vivo. J Mol Histol. 52 (6), 1145-1154 (2021).
  28. Hutcheson, J. D., Goettsch, C. Cardiovascular calcification heterogeneity in chronic kidney disease. Circ Res. 132 (8), 993-1012 (2023).
  29. Zhang, X., et al. Salidroside: A review of its recent advances in synthetic pathways and pharmacological properties. Chem Biol Interact. 339, 109268(2021).
  30. Zhang, P., Li, Y., Guo, R., Zang, W. Salidroside protects against advanced glycation end products-induced vascular endothelial dysfunction. Med Sci Monit. 24, 2420-2428 (2018).
  31. Li, Y., et al. Salidroside promotes angiogenesis after cerebral ischemia in mice through shh signaling pathway. Biomed Pharmacother. 174, 116625(2024).
  32. Gao, X. F., Shi, H. M., Sun, T., Ao, H. Effects of radix et rhizoma Rhodiolae kirilowii on expressions of von Willebrand factor, hypoxia-inducible factor 1 and vascular endothelial growth factor in myocardium of rats with acute myocardial infarction. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 7 (5), 434-440 (2009).
  33. Li, X., Liu, C., Li, Y., Xiong, W., Zuo, D. Inflammation promotes erythropoietin induced vascular calcification by activating p38 pathway. Bioengineered. 13 (3), 5277-5291 (2022).
  34. Bessueille, L., Magne, D. Inflammation: A culprit for vascular calcification in atherosclerosis and diabetes. Cell Mol Life Sci. 72 (13), 2475-2489 (2015).
  35. Li, R., et al. Salidroside prevents tumor necrosis factor-alpha-induced vascular inflammation by blocking mitogen-activated protein kinase and nf-kappa B signaling activation. Exp Ther Med. 18 (5), 4137-4143 (2019).
  36. Xing, S. S., et al. Salidroside attenuates endothelial cellular senescence via decreasing the expression of inflammatory cytokines and increasing the expression of sirt3. Mech Ageing Dev. 175, 1-6 (2018).
  37. Hopkins, A. L. Network pharmacology. Nat Biotechnol. 25 (10), 1110-1111 (2007).
  38. Xin, P., et al. The role of jak/stat signaling pathway and its inhibitors in diseases. Int Immunopharmacol. 80, 106210(2020).
  39. Fu, X., et al. Glycosides from buyang huanwu decoction inhibit atherosclerotic inflammation via jak/stat signaling pathway. Phytomedicine. 105, 154385(2022).
  40. Macri, F., et al. High phosphate-induced jak-stat signalling sustains vascular smooth muscle cell inflammation and limits calcification. Biomolecules. 14 (1), 107328(2023).

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