방법 논문

체외 분석을 이용한 위장관 선충 알에 대한 Tithonia diversifolia 추출물의 항산화 및 구충제 특성 평가

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DOI:

10.3791/67760

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2025년 8월 1일

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1Multidisciplinary Center for Technological Research, National University of Asunción (CEMIT - UNA), 2Centre of Marine Sciences (CCMAR/CIMAR LA), University of Algarve, 3Department of Food Biochemistry, Biodiversity, Food and Health Group (BIOALSA), Faculty of Chemical Sciences, National University of Asunción (FCQ - UNA), 4Carleton College

이 논문에서

요약

이 연구는 작은 반추 동물의 위장관 선충류에 미치는 영향을 평가하기 위해 라디칼 기반 방법과 시험관 내 알 부화 분석(EHA)을 사용하여 Tithonia diversifolia 추출물의 생물학적 활성을 평가했습니다. 방법론과 주요 결과를 설명하고 기생충 방제를 위한 이러한 추출물의 잠재력을 강조합니다.

초록

위장관 선충(GIN)으로 인한 기생충 질병은 동물 복지를 크게 손상시키고 생산 비용을 증가시키기 때문에 전 세계적으로 가축 생산에 중요한 제한 요인으로 간주됩니다. 수년 동안 기생충 방제는 합성 약물의 사용에만 의존해 왔습니다. 상업용 구충제에 대한 GIN의 내성이 전 세계적으로 점점 더 보고되고 있습니다. 따라서 생리 활성 잠재력을 가진 식물 탐색을 포함하여 농장 동물의 GIN을 제어하기 위한 대체 접근 방식이 등장했습니다. Tithonia diversifolia는 일년 내내 수확할 수 있으며 식물의 모든 부분은 광범위한 질병에 대한 민간 요법에 사용되었습니다. 본 연구는 라디칼 기반 방법을 사용하여 물과 잎, 가지, 꽃을 포함한 T. diversifolia 공중 부분의 수성 아세톤 추출물 70%의 시험관 내 항산화 특성을 평가하고, 물 추출물을 사용한 알 부화 분석(EHA)을 사용하여 기생충 모델을 통해 구충 가능성을 평가했습니다. 또한 추출물의 총 폴리페놀 함량을 측정했습니다. 이러한 발견은 T. diversifolia가 항산화 및 구충제 화합물의 유망한 천연 공급원임을 강조합니다.

서론

위장관 선충(GIN)으로 인한 기생충 질병은 동물 복지를 크게 손상시키고 생산 비용을 증가시키기 때문에 전 세계적으로 가축 생산에 중요한 제한 요인으로 간주됩니다1. 기생충과 가축의 관계는 숙주와 관련된 여러 요인, 즉 동물의 저항 및 회복력의 유전적 특성, 동물의 영양 상태, 기생 수준 및 관련된 기생충 개체군의 병원성에 의해 영향을 받습니다2.

수년 동안 기생충 방제는 합성 구충제에만 의존해 왔습니다. 그러나 장기간 독점적인 사용으로 인해 저항성이 나타나 효과가 감소하고 대체 전략 모색이 촉구되었습니다3. 다양한 구충제에 대한 선충류의 내성은 전 세계적으로 점점 더 많이 설명되어 왔으며, 특히 열대 지역에서 우려되는 시나리오를 제시하고 있습니다4. 또한 소비자들은 동물성 고기와 환경에 잔류되는 구충제를 줄여야 할 필요성을 점점 더 인식하고 있습니다5. 따라서 농장 동물의 선충 기생충을 방제하기 위한 대체 접근법이 등장했습니다6.

Tithonia diversifolia 는 중앙 아메리카가 원산지인 열대 관목으로 반추 동물 생산 시스템에 귀중한 독특한 특성을 가지고 있습니다. 일년 내내 수확할 수 있으며 식물의 모든 부분은 전통적으로 원주민 공동체에서 다양한 질병을 치료하기 위해 민간 요법에 사용되어 왔습니다. 국소적으로 복통, 상처, 피부병, 근육 질환 완화에 적용되었으며, 경구 투여는 감염, 말라리아, 발열, 간염 및 당뇨병을 관리하는 데 사용되었습니다. 이러한 다양한 치료 응용은 광범위한 의학적 잠재력을 강조합니다7.

산화 스트레스는 숙주 유기체와 생존을 위해 고군분투하는 기생충 유기체 모두에서 기생충 감염의 발생 및 진행에 중요한 역할을 합니다8. 이러한 이유로 항산화 활성을 검출하는 것은 구충 가능성이 있는 약용 식물 추출물의 생물학적 활성을 평가하는 데 중요합니다. 기생충 감염으로 인해 숙주의 항산화제 농도는 감소하는 반면 세포 성분의 산화 생성물 농도는 증가합니다. 기생충의 경우, 숙주와의 상호 작용을 연장하고 숙주 유기체에서 생성된 산화 스트레스로부터 방어하기 위해서는 산화 균형을 유지하는 것이 필수적입니다9.

구충제에 대한 내성이 발달하고 급속히 확산되었다는 증거는 일반적으로 사용되는 치료법이 효과가 없을 수 있다는 우려를 불러일으킵니다. 따라서 위장관 선충에서 벤즈이미다졸(BZ)에 대한 감수성 또는 내성을 평가하기 위해 EHA(Egg Hatch Assay)라는 시험관 내 테스트를 사용합니다. 이 테스트는 일반적으로 계란에 대한 식물 추출물의 구충 활성을 평가하고 용량의 함수로 활성을 비교하는 데 사용됩니다. 이 분석의 주요 한계 중 하나는 테스트 간 알 부화의 가변성입니다. 난자의 생존력은 최대 3시간으로 제한되므로 빠른 회복과 신속한 시작이 필요합니다. 그럼에도 불구하고 부화 비율은 다를 수 있습니다. 이러한 이유로 결과가 유효한 것으로 간주되기 위해서는 대조군에서 알의 최소 70%가 부화해야 한다는 것이 확립되었습니다10,11. 저렴하고, 빠르고, 쉽고, 재현 가능한 테스트입니다 12,13,14.

GIN 제어를 위한 대안을 모색하기 위해 식물 추출물을 사용하는 것은 2차 대사 산물의 존재와 생리 활성 잠재력을 기반으로 합니다. 이 연구 분야의 과제 중 하나는 2차 대사산물의 양과 안정성인데, 이는 생물학적 및 비생물적 요인뿐만 아니라 추출 공정에 의해 유도된 화학적 스트레스로 인해 달라지기 때문입니다15,16,17.

이 연구는 추출에 사용되는 용매의 유형에 따라 생물학적 활성(항산화 및 구충제 효과)의 차이가 발생할 수 있으며, 이는 폴리페놀의 구성과 결과적으로 생체 활성에 영향을 미칠 수 있다는 가설을 세웠습니다. 이 원고의 목적은 쉽게 복제할 수 있는 시험관 내 모델을 사용하여 추출물 평가에서 취한 단계를 간략하게 설명하는 것이었습니다.

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프로토콜

CEMIT 동물 윤리 위원회는 동물 조작과 관련된 모든 실험을 승인합니다. 난자 기증 동물은 예방 진단 목적으로 대변 샘플을 제공하여 CEMIT와 협력하는 농장에 속합니다. 이 동물은 성별을 불문하고 1세 이상의 양 또는 염소(특정 품종 없음)이며 샘플 수집 전 15일 이내에 구충을 한 적이 없어야 합니다. 모든 참여 농장은 연구 목적으로 샘플을 사용하는 것에 대해 알리고 연구에 참여하는 데 동의합니다. 난자 채취를 위해서는 먼저 인근 시설에 통보하고, 허가를 받으면 현장 방문을 통해 신선한 대변 샘플을 채취하여 3시간 이내에 처리됩니다. 본 연구에 사용된 시약 및 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 식물 재료의 준비

  1. 식물 종을 수집하기에 적합한 위치를 선택하십시오.
  2. 분류학적 식별 및 식물 표본 준비를 위해 Tithonia diversifolia 의 표본 2개 이상을 수집합니다.
  3. 최소 1000g의 T. diversifolia 공중 부분을 수집하십시오.
  4. 수집된 바이오매스를 실온(약 26°C, 그림 1 참조)에서 건조시킵니다.
  5. 전기 분쇄기를 사용하여 건조된 바이오매스를 분쇄합니다.
  6. 분쇄된 재료를 4°C의 냉장고에 보관합니다.

2. 추출물의 준비

  1. 물 추출물을 준비합니다.
    1. 100°C에서 건조 바이오매스 10g과 증류수 100mL를 혼합합니다.
    2. 혼합물을 120rpm에서 지속적으로 흔들면서 24시간 동안 침용시킵니다.
    3. 여과지(Whatman no. 5 또는 동급)를 통해 추출물을 여과합니다.
    4. 여과된 추출물을 동결 건조합니다.
  2. 아세톤 추출물을 준비합니다.
    1. 건조된 식물 재료 10g과 70% 수성 아세톤을 1:3 비율로 혼합합니다.
    2. 혼합물을 120rpm에서 지속적으로 흔들면서 24시간 동안 침용시킵니다.
    3. 여과지(Whatman no. 5 또는 동급)를 통해 추출물을 여과합니다.
    4. 여과된 추출물을 동결 건조합니다.
      참고: 더 나은 보존을 위해 동결건조된 추출물을 -20°C에서 보관하십시오( 그림 2 참조). 최소 5g의 동결건조 추출물을 얻어야 합니다.

3. 원액의 준비

  1. 항산화 분석의 경우:
    1. 건조된 추출물을 해당 용매(증류수 또는 70% 수성 아세톤)에 최종 농도 10mg/mL로 가용화합니다.
  2. 알 부화 분석의 경우:
    1. 동결건조 추출물 12mg을 증류수 5mL에 희석하여 2.4mg/mL의 원액을 얻습니다.
    2. 1.2mg/mL, 0.6mg/mL, 0.3mg/mL 및 0.15mg/mL의 5가지 농도를 준비합니다( 그림 3 참조).
      참고: 사용된 웰과 플레이트의 수에 따라 원액의 부피를 조정하십시오. 예를 들어, 12개 대신 48개의 웰을 사용하는 경우 그에 따라 부피를 줄입니다. 5mL에 12mg 대신 2.5mL에 6mg을 준비합니다.

4. 식물화학적 조성

  1. 추출물의 총 페놀 함량(TPC)
    1. 5 μL의 샘플을 증류수에 10× 희석한 100 μL의 Folin-Ciocalteu (FC) 시약과 96웰 투명 플라스틱 플레이트에 혼합합니다.
    2. 실온(RT)에서 10분 동안 배양합니다.
    3. 탄산나트륨 용액 100μL(물에 75g/L)를 첨가합니다.
    4. RT에서 90분 동안 배양합니다.
    5. 650nm에서 흡광도를 측정합니다.
      참고: TPC를 갈산 당량물(GAE)으로 표현합니다. 최소 5가지 농도의 갈산을 사용하여 검량선을 만듭니다.
  2. 총 플라보노이드 함량(TFC)
    1. 추출물 50μL를 메탄올 내 2% 염화알루미늄 50μL와 96웰 투명 플라스틱 플레이트에 혼합합니다.
    2. RT에서 10분 동안 배양합니다.
    3. 405nm에서 흡광도를 측정합니다.
      참고: TFC를 케르세틴 등가물(QE)으로 표현합니다. 최소 5가지 농도의 케르세틴을 사용하여 검량선을 작성합니다.
  3. 총 탄닌 함량(TTC)
    1. 추출물 10μL를 메탄올 1% DMACA 200μL와 37% HCl 100μL를 96웰 투명 플라스틱 플레이트에 혼합합니다.
    2. RT에서 15분 동안 배양합니다.
    3. 640nm에서 흡광도를 측정합니다.
      참고: TTC는 카테킨의 mg/mL로 표현합니다.

5. 항산화 분석 - ABTS

  1. 증류수 5mL에 과황산칼륨 0.003514g과 ABTS 0.0203g을 첨가합니다.
  2. 용액을 알루미늄 호일로 싸서 냉장고에서 4°C에서 12-16시간 동안 배양합니다.
  3. 734nm에서 흡광도를 측정하고 에탄올을 첨가하여 약 0.7로 조정합니다. 시작점으로 5μL의 ABTS 용액과 195μL의 에탄올을 혼합합니다.
  4. 96웰 투명 플라스틱 플레이트에 10μL의 추출물과 190μL의 ABTS 용액을 혼합합니다.
  5. 양성 대조군(C+)의 경우 10μL의 Trolox(샘플의 흡광도를 기반으로 표준 곡선을 사용하여 농도 결정)를 190μL의 ABTS 용액과 혼합합니다.
  6. 음성 대조군(C-)의 경우, 추출물(물 또는 수성 아세톤)을 용해시키는 데 사용되는 용매 10μL를 ABTS 용액 190μL와 혼합합니다.
  7. 플레이트를 실온(RT)에서 6분 동안 배양합니다.
  8. 734nm에서 흡광도를 측정합니다.
    참고: 그림 4 는 ABTS 분석의 예를 보여줍니다.

6. 기생충 절차

  1. 자연적으로 감염된 염소의 직장에서 직접 대변 샘플을 수집합니다.
    알림: 신선도를 보장하고 환경 오염을 피하기 위해 자연적으로 감염된 염소와 양의 직장에서 직접 대변 샘플을 수집하십시오. 스트레스를 최소화하기 위해 훈련된 직원을 사용하여 동물을 부드럽게 제지하십시오. 깨끗한 일회용 장갑을 사용하여 윤활유를 바르고 장갑을 낀 손가락을 직장에 삽입하고 약 5-10g의 대변을 회수합니다. 샘플을 깨끗하고 라벨이 붙은 플라스틱 용기에 넣고 4-8°C에서 보관합니다. 기생충 알의 생존력을 보존하기 위해 수집 후 3시간 이내에 모든 샘플을 처리하십시오. 제도적 동물 복지 지침을 따르고 농장 소유자로부터 정보에 입각한 동의를 얻으십시오.
  2. 각 샘플과 관련된 동물 종을 식별합니다.
  3. 각 대변 샘플 30g을 50mL의 포화 염 용액(밀도 = 1.2)과 혼합하여 coprology 분석을 준비합니다.
  4. McMaster 슬라이드를 사용하여 계란을 세십시오.
    1. 50mL의 포화 NaCl 용액에 3g의 대변 샘플을 균질화합니다. 무명천으로 혼합물을 걸러내고 슬라이드의 양쪽 챔버를 채우고 5분 동안 그대로 둡니다.
    2. 슬라이드를 10× 배율의 현미경으로 검사하고 스트롱게일형 알을 계산합니다. EPG = (계란 수) × 50 공식을 사용하여 그램당 계란 수(EPG)를 계산합니다. 이 방법은 작은 반추 동물에서 위장 선충의 정량화를 표준화합니다.
  5. 계란 수는 그램당 계란 수(EPG)로 표현합니다.
  6. 분변 배양 준비를 위해 EPG가 800 이상인 분변 샘플을 선택합니다.
  7. 배양에서 L3 유충을 얻고 속이나 종을 식별합니다.
    참고: 위장관 선충 알은 수명 주기 동안 풀에 침착됩니다( 그림 5 참조). 가축의 작은 반추 동물은 일반적으로 다생을 나타냅니다. 그림 6 은 coprological análisis를 수행하는 단계를 보여줍니다.

7. 체외 테스트 - 계란 부화 분석(EHA)

  1. 신선한 대변 샘플을 수집합니다.
  2. 멸균 거즈를 사용하여 대변을 두 번 걸러냅니다.
  3. 결과 현탁액을 걸러내고 체로 옮깁니다.
  4. 체의 재료를 증류수로 씻으십시오.
  5. 세척된 현탁액을 15mL 튜브에 모으십시오.
  6. 스윙 버킷 로터가 장착된 탁상용 원심분리기를 사용하여 실온에서 5분 동안 ~4800 × g 에서 샘플을 원심분리합니다. 증류수로 두 번, 포화 식염수로 한 번 원심분리하여 바닥에 계란을 농축시킵니다(계란 형태는 그림 7 참조).
  7. PBS에 계란을 재현탁합니다.
  8. 분석 설정을 위해 계란 농도를 100 eggs/mL로 조정합니다.
  9. 티아벤다졸(TBZ)을 PBS에 0.025mg/mL로 용해시켜 양성 대조군을 준비합니다.
  10. PBS의 계란 현탁액을 사용하여 음성 대조군을 준비합니다.
  11. 분석에는 48웰 멀티웰 플레이트를 사용합니다.
  12. 추출물과 계란 현탁액의 50/50(v/v) 혼합물을 사용하여 각 웰에서 250μL의 최종 부피를 준비합니다.
  13. 각 웰에 약 100개의 계란/mL를 추가합니다.
  14. 각 농도를 4중(4회 반복)으로 테스트합니다.
  15. 40× 배율의 도립 현미경으로 알을 세십시오.
  16. 해치율이 ≥70%인 플레이트만 사용하십시오.
  17. 각 농도에 대해 유충(L1), 부화하지 않은 알(UnE), 유충이 포함된 알(LFE) 및 박증된 알(ME)을 계산합니다.
    참고: 계란 부화 분석 프로토콜의 대표적인 요약은 그림 8에 나와 있습니다.

8. 통계적 분석

  1. Excel을 사용하여 기술 통계 분석을 수행합니다.
  2. 일원 분산 분석(ANOVA) 및 t-테스트를 사용하여 유의 수준 0.05에서 농도 간의 차이를 평가합니다.
  3. 로그10 변환된 농도 데이터를 기반으로 Probit 분석을 사용하여 50% 유효 농도(EC50)를 계산합니다( 보충 파일 1 참조).

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결과

총 페놀 함량(TPC), 총 플라보노이드 함량(TFC) 및 총 탄닌 함량(TTC)
Tithonia diversifolia에 대한 TPC, TTC, TFC 및 ABTS의 결과는 표 1에 나와 있습니다. 값은 TPC의 경우 건물그램당 갈산당량(mg GAE/g DM), TFC의 경우 건물그램당 케르세틴 당량(mg QE/g DM), TTC의 경우 건물그램당 카테킨 당량(mg CE/g DM)으로 표시됩니다. 항산화 능력은 ABTS 분석에서 절반 최대 억제 농도(IC50, μg/mL)로 표현됩니다.

구충제 활동
알에 대한 구충 효과(AH)는 GIN 종에 따라 달랐습니다: 일부 추출물은 유충 발달을 차단한 반면(살란 효과: 더 높은 % OE/ME), 다른 추출물은 L1 유충 출현을 억제했습니다(유...

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토론

이 기사에서는 약용 식물에 대한 연구를 발전시키기 위한 몇 가지 필수 단계를 간략하게 설명합니다. EHA(Egg Hatch Assay)와 같은 시험관 내 테스트는 통제된 실험실 조건에서 수행할 수 있기 때문에 특히 매력적입니다. EHA는 선충 알에 대한 다양한 농도의 식물 추출물의 활성을 평가하고 결과를 양성 및 음성 대조군과 비교하도록 설계되었습니다. 얻은 결과는 특히 위장관 선충(GIN)18,19,20 사이에서 기존 약물에 대한 내성이 증가함에 비추어 볼 때 새로운 구충제 치료법을 개발하기 위한 식물 유래 화합물의 잠재력에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다. EHA는 특히 적절한 대조군에 대해 벤치마킹할 때 다양한 농도에 걸쳐 화합물 활성을 평가하는 효율성으로 인해 구충제 스크리닝에 널...

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공개 사항

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

감사의 글

동물과 함께 샘플링을 수행할 수 있도록 우리를 신뢰하는 모든 생산자들에게 감사드립니다. Luísa Custódio는 프로젝트 UIDB/04326/2020( D O I: 1 0 . 5 4 4 9 9 / U I D B / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 ), U I D P / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 (DOI:10.54499/UIDP/04326/2020), LA/P/0101/2020(DOI:10.54499/LA/P/0101/2020) 및 CEECIND/00425/2017. Rocio Avila는 저에게 재정적 지원을 제공하고 Carleton Career Center에 전문적인 지도와 지원을 제공함으로써 이 프로젝트를 가능하게 한 대가로 Nini의 기부 인턴십 기금을 받았습니다. Griselda Meza는 포르투갈로 여행하여 식물화학적 분석을 수행하기 위해 Beca de Investigacion BINV02 -52 CONACYT -2nd convocatoria를 받았습니다. Ismael Llano는 브라질에서 알 부화 분석을 수행하기 위해 BECA Movility 양식 PINV01 -306, CONACYT를 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
15 mL 튜브현장
48홀 플레이트현장
96개의 웰 플레이트VWR 734-0126
ABTS효소성A1088.0005현장
학술 광학 현미경 및 역현미경현장
아세톤효소성A/0600/17
염화알미늄 시그마 올드리치6911
DMACA 시약시그마 올드리치49825
에탄올 96%효소성VR11202
동물 배설물대학 근처 농장에서 수집됨
폴린 치오칼토시그마 올드리치F9252
갈릭산시그마 올드리치91215
HCl시그마 올드리치258148
맥마스터 카메라현장
메탄올효소성M/4000/17
PBS현장
식물 추출물현장
과황산칼륨  시그마 올드리치216224
퀘르세틴시그마 올드리치Q4951
소금현장
탄산나트륨과 nbsp;시그마 올드리치1063920500
티아벤다졸현장
트롤록스시그마 올드리치648471현장
물현장
왓트만 5호VWR WHAT97039654

참고문헌

  1. Vineer, H. R., et al. Increasing importance of anthelmintic resistance in European livestock: Creation and meta-analysis of an open database. Parasite. 27, 69(2020).
  2. Ribeiro, W. L. C., Vilela, V. L. R. Editorial: Alternatives for the control of parasites to promote sustainable livestock. Front Vet Sci. 9, 1097432(2023).
  3. Hodgkinson, J. E., et al. Refugia and anthelmintic resistance: Concepts and challenges. Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 10, 51-57 (2019).
  4. Molento, M. B. Parasite control in the age of drug resistance and changing agricultural practices. Vet Parasitol. 163 (3), 229-234 (2009).
  5. Morgan, E. R., van Dijk, J. Climate and the epidemiology of gastrointestinal nematode infections of sheep in Europe. Vet Parasitol. 189 (1), 8-14 (2012).
  6. Hoste, H., Torres-Acosta, J. F. J. Non-chemical control of helminths in ruminants: Adapting solutions for changing worms in a changing world. Vet Parasitol. 180 (1-2), 144-154 (2011).
  7. Mabou Tagne, A., Marino, F., Cosentino, M. Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray as a medicinal plant: A comprehensive review of its ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacotoxicology and clinical relevance. J Ethnopharmacol. 220, 94-116 (2018).
  8. Pawłowska, M., Mila-Kierzenkowska, C., Szczegielniak, J., Woźniak, A. Oxidative stress in parasitic diseases-reactive oxygen species as mediators of interactions between the host and the parasites. Antioxidants. 13 (1), 38(2024).
  9. Maldonado, E., Rojas, D. A., Morales, S., Miralles, V., Solari, A. Dual and opposite roles of reactive oxygen species (ROS) in Chagas disease: Beneficial on the pathogen and harmful on the host. Oxid Med Cell Longev. 2020, 8867701(2020).
  10. Adamu, M., Naidoo, V., Eloff, J. N. Efficacy and toxicity of thirteen plant leaf acetone extracts used in ethnoveterinary medicine in South Africa on egg hatching and larval development of Haemonchus contortus. BMC Vet Res. 9, 38(2013).
  11. Molan, A. L. Effect of purified condensed tannins from pine bark on larval motility, egg hatching and larval development of Teladorsagia circumcincta and Trichostrongylus colubriformis (Nematoda: Trichostrongylidae). Folia Parasitol. 61 (4), 371-376 (2014).
  12. Eguale, T., Tadesse, D., Giday, M. In vitro anthelmintic activity of crude extracts of five medicinal plants against egg-hatching and larval development of Haemonchus contortus. J Ethnopharmacol. 137 (1), 108-113 (2011).
  13. von Samson-Himmelstjerna, G., et al. Standardization of the egg hatch test for the detection of benzimidazole resistance in parasitic nematodes. Parasitol. Res. 105, 825-834 (2009).
  14. Robles-Pérez, D., Martínez-Pérez, J. M., Rojo-Vázquez, F. A., Martínez-Valladares, M. Screening anthelmintic resistance to triclabendazole in Fasciola hepatica isolated from sheep by means of an egg hatch assay. BMC Vet Res. 11, 5(2015).
  15. War, A. R., Paulraj, M. G., War, M. Y., Ignacimuthu, S., Sharma, H. C. Mechanisms of plant defense against insect herbivores. Plant Signal Behav. 7, 1306-1320 (2012).
  16. Veeresham, C. Natural products derived from plants as a source of drugs. J Adv Pharm Technol Res. 3, 200-201 (2012).
  17. Barthwal, R., Mahar, R. Exploring the significance, extraction, and characterization of plant-derived secondary metabolites in complex mixtures. Metabolites. 14, 119(2024).
  18. Vargas-Magaña, J. J., et al. Anthelmintic activity of acetone-water extracts against Haemonchus contortus eggs: Interactions between tannins and other plant secondary compounds. Vet Parasitol. 206, 199-206 (2014).
  19. Gertrude, M., et al. In vitro anthelmintic activity of Bidens pilosa Linn. (Asteraceae) leaf extracts against Haemonchus contortus eggs and larvae. Eur J Med Plants. 4, 1325-1333 (2014).
  20. Castañeda-Ramírez, G. S., et al. Bio-guided fractionation to identify Senegalia gaumeri leaf extract compounds with anthelmintic activity against Haemonchus contortus eggs and larvae. Vet Parasitol. 270, 13-19 (2019).
  21. Chan-Pérez, J. I., et al. In vitro susceptibility of ten Haemonchus contortus isolates from different geographical origins towards acetone:water extracts of two tannin-rich plants. Vet Parasitol. 217, 53-60 (2016).
  22. Alonso-Díaz, M. A., Torres-Acosta, J. F. J., Sandoval-Castro, C. A., Hoste, H. Comparing the sensitivity of two in vitro assays to evaluate the anthelmintic activity of tropical tannin-rich plant extracts against Haemonchus contortus. Vet Parasitol. 181 (2-4), 360-364 (2011).
  23. Meza Ocampos, G., et al. Two in vitro anthelmintic assays of four Paraguayan medicinal plants for proof of concept of the role of polyphenols in their biological activities and LC-HRMS analysis. J Ethnopharmacol. 312, 116453(2023).
  24. Babják, M., Königová, A., Urda Dolinská, M., Vadlejch, J., Várady, M. Anthelmintic resistance in goat herds-In vivo versus in vitro detection methods. Vet Parasitol. 254, 10-14 (2018).
  25. Elfawal, M. A., et al. High-throughput screening of more than 30,000 compounds for anthelmintics against gastrointestinal nematode parasites. ACS Infect Dis. 11 (1), 1-11 (2025).
  26. de Araújo Sanchez, C., et al. In vivo anthelmintic activity of hydroethanolic extract of Piper cubeba fruits in sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes. Vet Parasitol. 333, 110348(2025).
  27. Hördegen, P., Cabaret, J., Hertzberg, H., Langhans, W., Maurer, V. In vitro screening of six anthelmintic plant products against larval Haemonchus contortus with a modified methyl-thiazolyl-tetrazolium reduction assay. J Ethnopharmacol. 108 (1), 85-89 (2006).

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