쥐의 침술 치료를 위한 새로운 고정 방법

요약

여기에서는 쥐의 등에 침술과 뜸을 용이하게 하는 새로운 쥐 고정 방법에 대해 설명합니다.

초록

연구자들은 침술과 관련된 동물실험에서 동물을 통제하기 어렵다는 문제에 항상 직면한다. 동물이 치료 현장을 탈출하는 것을 방지하는 몇 가지 방법은 이미 있습니다. 그러나 이러한 고정 방법의 효과는 인간 치료 상태와 다릅니다. 따라서 우리는 치료 중에 쥐를 엎드려 조용히 깨어 있게 하기 위해 새로운 고정 방법을 발명했습니다.

이 장비는 다공성 플라스틱 구속 플랫폼, 정사각형 면직물 및 쥐를 고정하기 위한 여러 구속 스트랩으로 구성됩니다. 먼저 고정 스트랩을 고정 플랫폼에 끼웁니다. 각 스트랩에 대해 같은 줄에 있는 두 개의 구멍을 통과시켜 그 사이에 두 개의 구멍을 남겨둡니다. 첫 번째 스트랩을 배치한 후 동일한 방식으로 다른 스트랩을 플랫폼에 삽입하여 두 스트랩 사이에 4열의 간격을 확보합니다. 둘째, 쥐의 꼬리를 잡고 두 개의 구속 끈으로 형성된 통로로 안내합니다. 쥐의 머리를 사각형 면직물로 덮으십시오. 셋째, 목의 구속 스트랩을 조여 머리와 앞다리를 고정합니다. 그런 다음 쥐의 뒷다리를 잡고 다른 쪽 끈을 조여 허리와 뒷다리를 고정합니다.

이 방법은 마취가 필요하지 않습니다. 이 장치는 간단하고 작동하기 쉽습니다. 효능과 안전성을 평가하기 위해 60마리의 쥐에게 이 절차를 시행했습니다. 이들 모두 합병증 없이 침 치료를 마쳤다. 14마리의 쥐가 시술 중 짧은 기간의 투쟁을 보였지만 부작용은 관찰되지 않았습니다. 결과는 이 방법이 효과적이고 사용하기에 안전하다는 것을 보여줍니다.

서론

외과적 모델링과 체외 중재 모두 적절한 동물 고정 방법이 필요합니다. 이것은 동물이 가장 기동성이 좋고 상대적으로 편안한 위치에 있도록 합니다. 우리는 침술 중재를 위한 동물 고정 방법에 중점을 둡니다. 침술은 많은 질병을 치료하는 데 효과적이다 ^1,2. 침술 메커니즘에 대한 연구는 많은 주목을 받았습니다. 현재 침술과 뜸은 국내외에서 뜨거운 연구 주제입니다. 침 치료의 병리학적 기전을 더욱 연구할 필요가 있으며, 임상실험 외에도 기초 연구 지원도 필요하다 ^3,4. 침술과 뜸에 관한 기초 연구에서 동물 고정은 중요한 기술적 단계이다.

현재 일반적으로 사용되는 고정 방법에는 속박, 마취, 스윙, 높은 플랫폼 및 기타 고정 방법이 있습니다. 이러한 방법의 장점과 단점은 다음과 같습니다.

마취 고정 방법을 수행하는 첫 번째 단계는 쥐를 마취시키는 것입니다. 이 방법을 사용할 때 연구자들은 쥐가 죽을 수 있는 위험에 직면합니다. 마취 후 구속 없이 직접 수술하는 것도 가능하다⁵. 양말-토끼 플랫폼 고정 방법을 사용할 때 연구자들은 손질된 양말에 쥐의 머리를 삽입하고 구멍을 통해 앞다리를 뻗은 다음 고무 밴드로 토끼 플랫폼에 다리를 고정합니다. 이 방법은 팔다리의 경혈 선택을 용이하게 합니다. 연구자들은 침술 부위에 따라 양말을 다듬어야 하지만, 그 과정은 다소 복잡하다⁶. 일부 연구자들은 고정 시트, 고정 클립 및 뜸 스틱 홀더의 세 부분으로 구성된 뜸 고정 장치를 개발했습니다. 이 장치를 통해 연구원은 비교적 일정한 온도를 유지하면서 여러 경혈에 동시에 뜸을 수행할 수 있습니다. 그러나, 이 방법의 고정 상태는 인간의 임상 치료와 크게 다르다⁷. 쥐를 천으로 감싸고 클램프를 사용하여 매달아 놓으면 구속의 영향을 크게 줄일 수 있습니다. 그러나 매달린 천은 경혈을 노출시키기 위해 미리 절단해야 하므로 치료 부위⁸을 노출시키는 것이 불편합니다. 일부 연구자들은 끈, 밧줄, 자동 잠금 벨크로 끈이 있는 작은 재킷을 사용하여 그물 같은 케이지 덮개에 쥐를 고정합니다. 이 장치는 낮은 생산 비용, 높은 실용성 및 간단한 작동을 제공합니다. 그러나 구속 절차를 완료하기 위해서는 한 명 이상의 사람이 필요하다⁹. 일부 연구자들은 철망으로 몸을 담는 원통을 만들고, 쥐의 다리를 고정 클램프로 고정한 다음 막대기로 목을 고정합니다. 이 방법은 확고한 억제력을 제공합니다. 이 방법을 사용하면 연구자들은 몸 전체의 경혈이 노출되기 때문에 쥐를 더 잘 수술할 수 있습니다. 문제는 실린더가 쥐의 크기와 호환되지 않을 수 있다는 것입니다. 또한, 이 방법은 다른 기술에 비해 더 많은 스트레스를 가하기 때문에 쥐는 질식에 더 취약할 수 있다¹⁰. 높은 플랫폼 고정 방법은 쥐의 높은 곳에 대한 두려움을 이용합니다. 연구진은 지면에서 50cm 높이의 높은 플랫폼 페달에 쥐를 올려 놓습니다. 쥐는 추가 구속 없이 자연스럽게 엎드린 자세를 유지합니다. 이 방법을 사용하면 쥐의 머리와 등을 바늘로 찌를 수 있습니다. 이 방법은 처리 환경을 진정성 있게 시뮬레이션하므로 실험 결과는 좋은 참조 값을 갖습니다. 쥐는 높은 곳을 무서워하기 때문에 높은 곳에 놓이면 정신 상태가 비정상적이 됩니다. 이로 인해 정신 질환 연구에 적합하지 않으며 실험 결과에 영향을 미칠 수 있다¹¹. 일부 연구자들은 조정 가능한 구속 플랫폼과 스트랩을 사용하여 쥐를 고정하여 넓은 치료 영역을 노출시킵니다. 그러나 임상 시나리오를 재현하는 것은 여전히 어려운 과제이다¹².

고정 방법으로는 임상적 치료 조건을 정확하게 시뮬레이션할 수 없다는 문제를 시급히 해결해야 합니다. 우리는 인간 임상 치료의 조건을 복제하기 위해 모든 노력을 기울였습니다. 이 논문에서 설명하는 방법은 본디지 방법 범주에 속합니다. 이 방법에 사용되는 장비에는 구속 플랫폼과 구속 스트랩, 그리고 절차를 지원하는 면직물이 포함됩니다. 장비는 작동이 비교적 간단합니다. 다른 방법에 비해 이 방법은 쥐의 등에 있는 경혈을 더 잘 노출시키고 치료 효율성을 향상시킵니다.

장치의 신뢰성을 테스트하기 위해 총 60 마리의 쥐가 실험에 사용되었습니다. 60마리의 쥐는 모두 2개의 그룹으로 나뉘어졌으며, 각 그룹에는 30마리의 쥐가 포함되었다: 전기침술 그룹과 온침 그룹. 쥐는 치료 과정에서 침착함을 유지했으며 그들의 움직임은 절차에 최소한의 영향을 미쳤습니다. 전기침술군에서는 22마리의 쥐가 몸부림치지 않고 침착하게 치료를 마쳤다. 총 8마리의 쥐가 수술 중 몸부림쳤고 6마리가 바늘을 뽑았습니다. 온침 투여군에 속한 총 24마리의 쥐는 치료 중에 침착함을 유지했다. 다른 6마리의 쥐는 몸부림치는 행동을 보였지만 아무도 뜸쑥 공을 제거하지 못했습니다. 몸부림치는 이 쥐들도 덮어주고 위로해 준 후 진정할 수 있었다. 결국 모든 쥐가 치료를 성공적으로 마쳤습니다.

프로토콜

이 연구는 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, No. 82205287)의 지원을 받았다. 본 연구에 사용된 실험 프로토콜은 실험을 수행하기 전에 베이징 중의약 대학 동물 실험 및 사용 윤리 위원회(No BUCM-2024052704-2223)에서 검토 및 승인되었습니다. 입증된 모든 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받아야 합니다.

연구에 사용된 장비의 세부 정보는 재료 표에 나열되어 있습니다. 프로토콜은 실험 준비, 고정 공정, 처리 작업 및 장비 분해의 네 가지 섹션으로 나눌 수 있습니다.

1. 실험 준비(그림 1)

1. 다공성 플라스틱 구속 플랫폼을 준비합니다. 구속 플랫폼은 길이 500mm, 너비 300mm, 높이 5mm입니다. 구멍의 길이는 7mm, 너비는 3.2mm입니다. 인접한 두 구멍 사이의 거리는 7mm입니다. 이 장비는 쥐를 고정하기 위한 플랫폼 역할을 합니다.
2. 구속 스트랩을 준비합니다. 각 고정 스트랩의 길이는 300mm, 너비는 4.8mm입니다. 구속 스트랩은 톱니 모양이며 끝 부분에 버클이 있어 삽입 후 잠글 수 있습니다.
3. 정사각형 면포를 준비하십시오. 사각형 면직물은 30cm 30cm를 측정합니다. 이를 사용하여 실험 동물의 시야를 차단합니다.
4. 전기 침술을 준비합니다. 이 장치를 사용하여 전기 침술 절차를 수행하십시오.
5. 침 바늘 (직경 0.25mm, 길이 25mm)을 준비합니다.
6. 실험실 등급의 라텍스 장갑을 사용할 수 있도록 하십시오. 이 장갑은 실험의 기본 보호 조치를 구성합니다.
7. 실험 중 쥐에게 물리지 않도록 연구원을 보호하기 위해 고안된 절단 방지 장갑을 준비하십시오.
8. 뜸을 사용하여 직경 5mm의 뜸쑥 공을 만들어 후속 뜸 요법에 활용합니다.
9. 쥐의 화상을 피하려면 2cm 2cm 크기의 정사각형 종이를 자릅니다.
10. 쥐의 꼬리를 감싸기 위해 멸균 거즈를 적용할 수 있도록 준비하여 전기 침술 치료 중에 전기 전도성을 보장합니다.
11. 고정 전 준비: 쥐를 다루기 전에 실험실 등급의 라텍스 장갑과 절단 방지 장갑을 착용하여 쥐에게 물리지 않도록 하십시오.

그림 1: 작업에 필요한 장치. 이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

2. 고정 공정

1. 두 개의 구속 스트랩을 구속 플랫폼에 끼웁니다. 같은 줄에 있는 두 개의 구멍을 통해 각 스트랩을 두 개의 구멍 간격으로 삽입하고 스트랩을 서로 4열 간격으로 삽입합니다. 이 간격은 쥐의 몸체 직경과 일치하여 치료 중 측면 이동을 제한합니다(그림 2). 쥐의 모양과 치료 부위에 따라 필요에 따라 거리를 조정하십시오.
2. 한 손으로 쥐의 꼬리를 잡습니다. 쥐는 본능적으로 앞으로 나아갈 것입니다(그림 3A).
3. 두 개의 구속 스트랩으로 형성된 채널 입구에 쥐를 놓습니다. 쥐는 스스로 채널을 뚫고 들어갈 것입니다(그림 3B).
4. 네모난 면직물로 쥐의 머리를 덮고 같은 손으로 쥐의 목을 잡습니다. 다른 손으로 쥐의 꼬리와 뒷다리를 잡습니다. 이 방법은 쥐의 자세가 유지되도록 합니다(그림 3C).
5. 머리 쪽을 잡고 있는 손을 사용하여 쥐의 머리와 목을 부드럽게 누릅니다. 다른 손을 사용하여 고정 스트랩을 버클에 삽입하고 조입니다. 머리의 움직임을 제한하기 위해 구속 스트랩이 머리의 꼬리 쪽과 앞다리에 있는지 확인하십시오(그림 3D, E).
6. 한 손으로 쥐의 꼬리를 잡으십시오. 구속 스트랩이 쥐의 뒷다리 앞에 있는지 확인하십시오. 그런 다음 버클을 조여 허리의 움직임을 제한합니다(그림 3F). 구속된 쥐는 그림 3G에 나와 있습니다.
7. 쥐에게 침술을 시행할 때, 이 고정 방법은 치료 중 안정성을 보장합니다. 쥐가 여전히 심하게 몸부림치면 천으로 머리를 부드럽게 덮으십시오. 전체 시야를 가리고 어두운 환경에 유지하면 쥐를 진정시킬 수 있습니다.
   1. DU20, BL17 및 BL23을 예로 선택합니다. 이 고정 거리를 선택하면 경혈이 더 잘 노출됩니다: DU20은 머리 중앙에 있고, BL17은 두 개의 구속 스트랩 사이에 있으며, BL23은 구속 스트랩의 꼬리 쪽에 있어 쥐의 허리를 조입니다.
   2. 바늘을 경혈에 끼워 넣습니다(그림 4A). 침술 치료를 완료한 쥐는 그림 4B, C에 나타나 있다.

그림 2: 구속 플랫폼 및 구속 스트랩의 조립. 구속 스트랩이 삽입된 구속 플랫폼이 그림과 같습니다. 각 스트랩은 같은 줄에 있는 두 개의 구멍을 통해 삽입되며, 두 개의 구멍 간격이 떨어져 있으며 스트랩은 서로 4열 떨어져 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3: 쥐의 고정 과정. (A) 쥐의 꼬리를 잡습니다. (B) 쥐가 수로로 앞으로 도망가게 한다. (C) 쥐의 머리를 면직물로 덮는다. 목을 누르고 꼬리와 뒷다리를 잡습니다. (디,이) 뒷면의 스트랩을 조입니다. (여,지) 허리에 끈을 조입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4: 쥐에 대한 침 수술. DU20, BL17 및 BL23이 이 침술 시술을 위한 경혈로 선택되었습니다. (A) 바늘을 경혈에 돌립니다. (B,C) 치료를 완료한 쥐가 여기에 나와 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

3. 전기 침술 치료

1. 침술을 마친 후 전기침술을 연결합니다. 전기 침술 장치를 켜고 연속파 버튼을 눌러 전기 자극의 형태를 선택하고 손잡이를 돌려 전류 강도를 1mA로, 주파수를 2Hz로 조정합니다(그림 5A).
2. DU20, BL17 및 BL23을 예로 들어 그림 5와 같이 세 쌍의 전극을 연결합니다. 특히 BL17과 BL23을 같은 쪽에 한 쌍으로 연결합니다(그림 5B, C). 식염수에 적신 거즈로 감싼 꼬리를 머리의 DU20에 연결합니다(그림 5D, E). 전류 흐름의 방향은 세 쌍의 전극 모두에서 일관됩니다.
3. 시간 설정 노브를 돌려 치료 시간을 15분으로 설정합니다.

그림 5: 쥐에 대한 전기침술 수술. (A) 매개변수를 연속파로 설정하고 전류 강도와 주파수를 조정합니다. (B,C) BL17과 BL23을 같은 쪽에 페어링합니다. (디,이) 꼬리를 식염수에 적신 거즈로 감싸 DU20에 연결합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

4. 온난침 치료

1. 따뜻한 침 치료가 필요한 경우 뜸쑥, 침침(0.25mm × 25mm, 이전에 사용한 것과 동일), 정사각형 종이 몇 장을 준비하십시오. 또한 트리트먼트가 시작되기 전에 미리 뜸쑥 볼을 준비하십시오(그림 1).
2. 네모난 종이 한 장을 가지고 조심스럽게 바늘을 사용하여 종이의 중심점에 구멍을 뚫습니다(그림 6A). 그런 다음 지정된 경혈에 바늘을 삽입합니다(그림 6B).
   참고: 설명을 위해 이 연구에서는 경혈 BL23을 선택했습니다.
3. 뜸쑥 볼을 바늘에 조심스럽게 놓고 불을 붙입니다(그림 6C-E).

그림 6: 쥐에 대한 온열 침술.(A) 네모난 종이를 가져다가 바늘로 중앙을 뚫는다. (B) 경혈에 바늘을 삽입합니다. (C) 뜸쑥 볼을 바늘에 끼웁니다. (디,이) 치료를 완료한 쥐가 여기에 나와 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

5. 장비 분해

1. 전기 침술 장비의 분해
   1. 전기 침술 치료가 완료되면 전기 침술 기구의 전원을 끕니다. 그런 다음 침술에서 전극 클립을 조심스럽게 분리합니다. 마지막으로 치료 부위에서 침을 부드럽게 빼냅니다.
2. 온열 침술 장비의 분해
   1. 따뜻한 침 치료 후 뜸볼의 재를 조심스럽게 제거하고 물에 넣어 버립니다. 그런 다음 바늘을 부드럽게 빼내고 첨부된 종이를 모두 제거합니다.
3. 고정 장비의 분해
   1. 쥐의 머리를 사각형 면직물로 덮는 동시에 구속 끈을 이완합니다. 처음에는 쥐의 허리를 조여 구속 스트랩을 풉니다. 다음으로 한 손으로 쥐의 뒷다리와 엉덩이 부위를 단단히 잡습니다.
   2. 다른 손으로 쥐의 목을 조이고 있는 끈을 풀고 꼬리를 잡고 쥐를 구속 끈에서 부드럽게 당겨 빼냅니다.

결과

고정법의 효과를 평가하기 위해 총 60마리의 쥐를 대상으로 전기침술 그룹의 쥐 30명과 온침 그룹의 쥐 30마리의 두 그룹으로 나누어 시험을 진행했다. 치료 수술에는 각각 전기 침술과 온찜 침술이 포함되었습니다.

경혈에 바늘을 삽입한 후, 침술사는 각 바늘을 들어 올리고, 찌르고, 회전시키는 조작을 수행하여 deqi를 달성했습니다. 시술 중에 20마리의 쥐에서 몸부림이 관찰되었으며 그 중 7마리가 바늘을 털어냈습니다. 가벼운 몸부림을 가진 쥐는 면직물 덮개와 결합된 편안함을 통해 더 빨리 평온을 회복했습니다. 격렬한 몸부림을 보이는 쥐의 경우, 침술은 평온을 되찾을 때까지 5분 동안 중단한 후 절차를 재개했다.

전기침술 과정에서 22마리의 쥐가 침착함을 유지하며 치료를 성공적으로 마쳤다. 이 중 8마리의 쥐가 몸부림치는 행동을 보였고, 그 결과 6마리가 바늘을 빼냈습니다...

토론

쥐는 어두운 환경에 서식하는 경향이 있습니다. 그들은 보호받을 때 안정감을 느끼고 자극에 침착하게 반응하여 낮은 스트레스 수준을 보입니다. 여기에 설명된 방법은 이러한 쥐의 특성을 활용합니다. 이 고정 방법의 장점은 다음과 같이 요약할 수 있습니다: (i) 이 방법은 실험 동물이 경험하는 스트레스 반응과 통증을 최소화할 수 있습니다. 이는 동물 윤리의 3R 원칙, 즉 Reduction(감소), Refinement(정제), 교체(Replacement)¹³과 일치합니다. (ii) 보호소는 쥐의 스트레스를 줄이고 안전한 구속을 보장하여 작업자에게 쥐에 물리는 것을 효과적으로 방지합니다. (iii) 이 방법은 쥐의 머리와 등을 완전히 노출시켜 침술 절차를 더 쉽게 접근할 수 있도록 합니다. 노출 영역이 넓기 때문에 연구원은 여러 영역에서 동시에 작업할 수 있습니다. (iv) 쥐에서 엎드린 자세를 유지함으로써, 이 방법은 인간의 침술...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
침술 바늘	베이징 ZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., Ltd.	20222200133	침술의 사양은 직경 0.25mm, 길이 25mm입니다.
절단 방지 장갑	린이시 란산 구에 있는 Lvdazhou 노동 보호 제품 공장 H0315103941		실험 중 쥐에 물린 연구원을 보호하기 위해 설계되었습니다.
전기 침술 기구	쑤저우 의료 기기 공장 주식 회사.	20172200675	이 장치는 전기 침술 절차를 수행하는 데 사용됩니다.
실험실 등급 라텍스 장갑	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	이 장갑은 실험의 기본 보호 조치를 구성합니다.
Moxa	Beijing Tongrentang Xing'an Health Technology Co., Ltd. (영문	152200000000613	뜸쑥은 직경이 5mm인 뜸쑥 공을 만들기 위한 재료로 사용되며, 이는 후속 뜸 요법에 사용됩니다.
다공성 플라스틱 구속 플랫폼	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	구속 플랫폼은 길이 500mm, 너비 300mm, 높이 5mm입니다. 구멍의 길이는 7mm, 너비는 3.2mm입니다. 인접한 두 구멍 사이의 거리는 7mm입니다. 이 장비는 쥐를 고정하기 위한 플랫폼 역할을 합니다.
구속 스트랩	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	각 고정 스트랩의 길이는 300mm, 너비는 4.8mm입니다. 구속 스트랩은 톱니 모양이며 팁에 버클이 있어 삽입 후 잠글 수 있습니다.
사각 면직물	MUJI (SHANGHAI) Company Limited	WYLP20241105_1	사각 면직물은 30cm &급성; 30cm를 측정합니다. 실험 동물의 시야를 차단하는 데 사용됩니다.
광장 서류	DELI 그룹 Co., Ltd.	7752-1114	쥐의 화상을 피하기 위해, reseachers는 2cm & 2cm를 측정하는 사양의 정사각형 종이를 자릅니다.
멸균 거즈	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	멸균 거즈를 적용하여 쥐의 꼬리를 감싸 전기 침술 치료 중 전기 전도성을 보장합니다.

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