종양 및 질병 연구를 위한 접착제 기반 조직 마이크로어레이 구축

요약

이 프로토콜은 접착제 기반 TMA 구성을 위한 저비용 생산 및 효율적인 검증 방법을 설명하여 종양 및 질병 연구를 위한 편리한 병리학적 진단 플랫폼을 제공합니다.

초록

조직 마이크로어레이 기술(TMA)은 여러 조직 샘플을 동시에 검출하고 분석할 수 있는 고처리량 플랫폼으로, 효율적인 종양 및 질병 바이오마커 연구를 촉진합니다. 그러나 기존의 TMA 구축 방법은 운영 복잡성, 시간 소모적인 절차, 다양한 정확도 등의 한계에 직면하는 경우가 많습니다. 이러한 문제를 극복하기 위해 접착제 기반 TMA 구성 방법이 개발되어 조직 코어 고정이 개선되고 구조적 안정성이 향상되었습니다. 체계적인 검증에는 조직학적 평가(HE 염색), 표적 단백질의 면역조직화학적 프로파일링 및 형광 제자리 혼성화(FISH) 분석이 포함되었습니다. 결과는 접착제 기반 분석법이 우수한 슬라이스 무결성을 유지하고 신호 대 잡음비를 개선하며 일관된 배치 간 재현성을 보장한다는 것을 보여주었습니다. 이 접근 방식은 수동 작업으로 제한되지만 중간 처리량의 TMA 생산을 위한 안정적이고 비용 효율적인 옵션을 제공합니다. 이 방법은 대규모 자동화보다 유연성과 샘플 다양성을 중시하는 연구 환경에 특히 적합하며 학술 및 진단 환경에서 TMA의 유용성을 확장합니다.

서론

TMA(Tissue Microarray)는 조직 샘플 ^1,2,3을 분석하기 위한 고처리량 기술입니다. 다중 기증자 조직 코어를 얻고, 이론적으로 동일한 성능 조건 ^2,4에서 동시 차등 및 비교 분자 분석을 위해 기증자 파라핀 블록을 수혜자 조직 블록으로 옮깁니다. 조직 마이크로어레이(TMA)를 구성하는 고전적인 방법은 홀 펀치를 사용하여 기증자 조직 샘플에서 조직 코어를 추출하고 이를 수혜자 파라핀 블록으로 순차적으로 배열하는 것입니다. 이 방법은 유사한 깊이의 기증자 파라핀 블록에 적합하며 단일 슬라이스에서 여러 샘플을 효율적으로 분석할 수 있어 연구의 효율성과 데이터의 일관성을 크게 향상시킵니다 ^5,6,7. 그럼에도 불구하고 이 방법은 포매 과정에서 조직 코어의 부적절한 취급을 포함하여 여전히 ....

프로토콜

모든 기증자 블록은 2016년에서 2018년 사이에 난징 의과대학 부속 화이안 제1 인민병원에서 수집된 보관 병리학적 표본에서 얻었습니다. 샘플은 사용 전에 비식별화되었으며 승인된 프로토콜(난징 의과대학 부속 화이안 제1 인민병원 윤리위원회, KY-2024-250-01)에 따라 처리되었습니다.

1. 기증자 조직의 평가 및 태깅

1. 두께가 ≥5mm이고 면적이 ≥15mm× 15mm인 조직 블록을 선택합니다. 가장자리에 2mm의 안전 여유를 확보하고 조직 무결성을 유지하기 위해 괴사, 출혈 또는 석회화를 보이는 영역을 제외합니다.
2. 대상 영역 식별 및 표시
   1. 광학 현미경을 사용하여 H&E 염색 절편을 평가합니다. 저전력 스캐닝을 통해 표적 영역을 찾은 다음 고출력으로 전환하여 세포 형태학적 특성을 확인합니다. 슬라이드에 대상 영역 경계를 표시합니다.
   2. 선택한 영역의 좌표를 파라핀 블록의 표면에 매핑하여 마킹 변환을 완료합니다.

2. 조직 코어 추출

1. 천자 ....

결과

본 연구에서는 접착제 방법을 사용하여 고품질 조직 마이크로어레이를 구성했습니다. 이 방법의 효과를 검증하기 위해 H&E 염색, 특정 단백질의 면역조직화학적 검출, 형광 제자리 혼성화(FISH) 분석 등 일련의 실험이 수행되었습니다. 구성 과정의 중요한 구성 요소는 예상 위치와 서로 떨어져 있는 위치에 조직 코어 점이 존재하는지 여부이며, 이는 육안 검사로 평가됩니다. TMA 블록을 육안으로 검사하면 코어가 각 TMA에 존재하고 규칙적으로 간격을 두고 있음을 알 수 있습니다(그림 2A). H&E 염색은 모든 조직 코어가 균일한 간격, 일관된 크기 및 풍부한 표적 조직으로 깔끔하게 배열되어 있음을 보여주었습니다(그림 2B). 면역조직화학적 염색 결과는 TMA에서 10개의 전립선암 관련 단백질(ZCCHC24, SMAD9, TARBP1, CDHR4, CRTAC1, DNASE1L3, GPR146, IG.......

토론

조직 마이크로어레이(TMA)를 구축하는 혁신적인 방법인 접착제 방식은 시공 절차가 쉽고 비용 효율성이 뛰어나 상당한 이점을 보여주었습니다. 정교한 기구^(14,15)에 의존하는 전통적인 바늘 배열 방식과 비교하여, 접착제 방식은 접착에 의한 샘플 고정이 가능하며, 이는 기본 도구만으로 수행할 수 있어 기술적 임계값을 크게 낮춥니다. 전통적인 매립 방법과 달리 접착 방법은 국소 분배에 의해 고정되어 조직 코어의 국소화 시간을 크게 단축하고 고온에 의한 민감한 항원의 파괴를 방지합니다^16,17 (표 2).

그러나 실제 시공 절차에는 복잡하고 섬세한 단계가 많이 있습니다. 이러한 단계는 많.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
유방암 HER2 검출 키트	Anbiping	2502001	유방암 HER2 검출 키트
CDHR4 항체	Abcam	ab166914	CDHR4 항체
CDK1 항체	Abcam	ab265590	CDK1 항체
CRTAC1 항체	Abcam	ab254691	CRTAC1 항체
DNASE1L3 항체	Abcam	ab203669	DNASE1L3 항체
포매기	P.S.J MEDICAL	BM450A	포매기
전자동 조직 탈수기	Leica Biosystems	ASP3005	전자동 조직 탈수기
유리 현미경 슬라이드	Citotest	250124A1	유리 현미경 슬라이드
접착제	TIZO	200	접착제
GPR146 항체	Abcam	ab117104	GPR146 항체
IGSF10 항체	Abcam	ab197671	IGSF10 항체
ITIH1 항체 Abcam	ab233032	ITIH1 항체
로우 프로파일 마이크로톰 블레이드 Thermo	Fisher	3052835	로우 프로파일 마이크로톰 블레이드
마커 펜	델리	SK109	마커 펜
마이크로톰	라이카 바이오시스템즈	HistoCore BIOCUT	마이크로톰
파라핀 왁스	Solarbio	YA0012	파라핀 왁스
SMAD9 항체	Abcam	ab262940	SMAD9 항체
TARBP1 항체	Abcam	ab115896	TARBP1 항체
ZCCHC24 항체	Abcam	ab88756	ZCCHC24 항체