여기에서는 실시간 형광 정량 PCR(qPCR) 기술을 사용하여 결핵 균 및 약물 내성을 검출하는 프로토콜을 제시합니다.
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방법 논문
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여기에서는 실시간 형광 정량 PCR(qPCR) 기술을 사용하여 결핵 균 및 약물 내성을 검출하는 프로토콜을 제시합니다.
결핵(TB)은 취약 계층에 불균형적으로 영향을 미치는 주요 건강 문제입니다. 약물 내성 결핵의 출현과 확산은 전 세계 공중 보건에 심각한 위협이 되고 있습니다. 도말 현미경 검사 및 배양과 같은 결핵균(MTB )에 대한 기존의 진단 방법은 상당한 한계가 있으며 종종 임상 치료가 지연되는 결과를 초래합니다. 이 문제를 해결하기 위해 실시간 형광 PCR을 기반으로 하는 효율적인 진단 체계가 개발되었습니다. 테스트 샘플에서 고품질 MTB 핵산을 추출할 수 있으며 주요 내성 부위에서 내성 상태를 식별할 수 있습니다. 기존 방법과 비교하여 이 접근 방식은 검출 시간을 단 몇 시간으로 크게 줄여 환자의 최초 방문 직후 감염 및 내성 상태를 확인할 수 있습니다. 검출 민감도는 85%를 초과하고 특이도는 95%에 이릅니다. 이 비침습적 기술은 환자의 불편함을 최소화할 뿐만 아니라 저렴한 비용과 높은 효율성으로 인해 풀뿌리 의료기관에서 정확한 진단을 지원합니다. 전반적으로 이 접근 방식은 결핵 진단의 상당한 개선을 나타냅니다.
결핵(TB)은 결핵균(Mycobacterium tuberculosis , MTB)에 의해 발생하는 만성 감염병으로, 전 세계 10대 사망 원인 중 하나입니다1. 약물 내성 결핵(DR-TB)은 결핵 통제 노력에 중대한 도전이 되고 있습니다. 중국질병통제예방센터(China CDC)가 발행한 결핵 없는 지역사회 구축을 위한 실행 계획(2022-2027)은 세균학적으로 확진된 모든 폐결핵 환자에 대한 조기 약물 내성 검사의 필요성을 강조한다2. 이 보고서는 DR-TB 검출 능력을 강화하고, 진단 일정을 단축하고, DR-TB 사례 식별을 극대화하고, 표준화된 치료 및 관리를 보장하고, 필요한 감염 통제 조치를 구현하기 위해 새로운 분자 진단 기술의 채택을 지지합니다3. 또한, DR-TB 예방 및 통제 강화에 관한 고시(2023년 제4호)는 첨단 진단 기술의 전국적 홍보를 의무화하고 있습니다. 이 보고서는 세균학적으로 확진된 모든 결핵 환자에 대해 시기적절한 내성 검사를 통해 보편적인 선별 검사를 달성하고, 진단 표준화를 개선하며, 의료 접근성을 높일 것을 촉구한다4<....
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이 연구는 신장 생산 및 건설 군단의 제 5 사단 병원 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 윤리 번호는 LLWYH2025001이며 윤리적 충돌이 없습니다. 사용된 시약과 장비는 재료 표에 나열되어 있습니다.
1. 샘플 수집
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이 연구는 실시간 형광 PCR 및 용융 곡선 분석을 활용하여 17명의 결핵 환자의 가래 샘플을 테스트했습니다. 또한 30명의 환자가 리팜피신 내성 검사를 받았고, 20명은 이소니아지드 와 에탐부톨에 대한 내성 검사를 받았습니다. 실시간 형광 PCR 방법은 Mycobacterium tuberculosis complex에 대해 88.2%의 양성 검출률을 보여주었습니다.
내성률은 리팜피신이 13.3%, 이소니아지드가 15.0%로 일부 환자에서 약물 내성 가능성이 있음을 시사했다. 상당수의 샘플(리팜피신의 경우 26.7%, 이소니아지드의 경우 20.0%)이 검출되지 않았는데, 이는 낮은 박테리아 농도 또는 분석법 민감도 문제 때문일 수 있습니다. 에탐부톨 내성은 5.0%로 상대적으로 낮았지만.......
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약물 내성 결핵 복합체(MTBC) 균주가 전 세계적으로 출현하면서 결핵(TB) 환자의 치료가 크게 복잡해졌습니다. 특히, 다제내성(multidrug-resistant, MDR) 결핵과 광범위약물내성(endestively-drug-resistant, XDR) 결핵은 결핵 통제에 만만치 않은 도전을 제기한다12. 약물 내성을 신속하게 검출하는 것은 적절한 치료 요법을 설계하고, 치료 실패를 예방하며, 내성 균주의 추가 확산을 줄이는 데 매우 중요합니다13,14. 실시간 형광 PCR과 같은 핵산 증폭 기술(NAAT) 기반 검출 방법은 안정성이 우수하고 검출 시간이 짧기 때문에 결핵 진단에 널리 채택되고 있습니다15. 그러나 결핵 진단을 위한 검증된 NAAT 방법으로 인정.......
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저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.
이 연구는 Corps Tuberculosis Project의 특별 보조금으로 자금을 지원받았습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 고속 원심분리기 | |||
| 용해 완충제 | Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd. | 24110701 | |
| Mycobacterium tuberculosis Ethambutol 내성 돌연변이 검출 키트 | Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd. | 24030801 | |
| Mycobacterium tuberculosis Isoniazid 내성 돌연변이 검출 키트 | Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd. | 24011101 | |
| Mycobacterium tuberculosis Rifampicin 내성 돌연변이 검출 Ki | Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd. | 24031001 | |
| SLAN-96P 실시간 PCR 시스템 | Shanghai Hongshi Medical Technology Co., Ltd. | SLAN-96P | |
| 가래 처리 솔루션 | Xiamen Zhishan Biotechnology Co., Ltd. | 24110701 | |
| TopPette 피펫 |
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