Method Article

장기간의 일측성 요관 폐색의 역전 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 평가하기 위한 마우스 모델

DOI:

10.3791/68492

⸱

July 18th, 2025

 , 
1Division of Nephrology, Department of Medicine, Vanderbilt University Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 논문은 연구자가 장기간의 요관 폐쇄 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 분석할 수 있는 표준화된 모델을 사용하여 마우스에서 가역적 편측 요관 폐쇄를 수행할 수 있도록 하는 자세한 지침을 제공합니다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

요로 폐쇄(UTO) 환자의 임상적 관리는 폐색의 원인을 되돌리기 위한 조기 개입이 필요하지만, 그럼에도 불구하고 UTO가 장기화된 환자는 만성 신장 질환(CKD) 및 재발성 급성 신장 손상(AKI)의 위험이 증가합니다. 그러나 폐색의 조기 회복과 CKD 진행을 지연시키기 위한 일반 요법을 제외하고는 UTO의 역전 후 장기적인 신장 결과를 크게 개선한 치료법은 없습니다. 이 문제를 해결하기 위해 많은 실험실에서 가역적 UUO(R-UUO) 모델을 개발했지만 기술적으로 까다롭고 널리 채택되지 않았습니다. 또한 R-UUO의 마우스 모델은 질병 병태생리학을 연구하기 위해 마우스 유전학의 힘을 활용하는 데 사용할 수 있다는 점에서 매력적이지만, 방해가 >3일 동안 지속되면 종종 사용 방법이 비가역적인 UUO로 이어지기 때문에 특히 어려웠습니다. 또한, 이러한 모델의 특성으로 인해, 요관 폐색의 역전의 장기적 기능적 결과를 평가한 연구는 거의 없었다. 이 문제를 해결하기 위해 우리는 최근 지연된 반대쪽 신절제술을 통한 R-UUO의 마우스 모델을 개발하여 장기간의 UTO를 역전시키는 것이 장기적인 신장 구조 및 기능 결과에 미치는 장기적인 효과를 분석할 수 있습니다. 이러한 연구는 재건 후 3개월 후 거의 완전한 조직학적 회복에도 불구하고 신장 기능의 영구적인 감소와 소변 농축 능력의 현저하고 지속적인 결함이 있음을 보여주며, 이는 신장 수질 기능의 결함을 나타냅니다. 이 모델은 세 번의 주요 생존 수술을 필요로 하지만 폐쇄 기간을 조정하여 다른 마우스 균주에서 재현할 수 있는 강력하고 재현 가능한 장기적 신장 기능 감소를 초래합니다. 이 기사에서는 이러한 수술을 수행하고, 다양한 마우스 균주에 사용하기 위한 조건을 최적화하고, 신장 기능 결과를 평가하고, 신장 조직을 채취하기 위한 자세한 지침을 제공합니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

요로 폐쇄(UTO)는 편측성일 수 있으며, 종종 무증상이거나, 만성 폐쇄성 요로병증(chronic obstructive uropathy)1을 동반하거나, 신장 산통 및/또는 혈뇨를 동반하는 급성으로 나타날 수 있다. 급성 신우신염 또는 신장 후 급성 신장 손상(AKI)2. UTO 관리의 핵심은 장애물2를 조기에 제거하는 것입니다. 그러나 만성 신장 질환(CKD)의 진행을 지연시키기 위한 효과적인 역전과 제네릭 요법의 사용에도 불구하고 영향을 받은 환자는 여전히 진행성 CKD 및 고혈압의 위험이 증가하고 있습니다 3,4. 또한, 장기 요농축량(UCC)이 손상되는 경우가 많으며,5 이는 탈수 및 재발성 AKI에 취약한 환자를 유발할 수 있으며, 이로 인해 UTO 후 신장 기능의 점진적인 저하를 가속화할 수 있다.

부분적으로, UTO 환자의 장기 결과를 개선하기 위한 치료적 접근법을 식별하지 못한 것은 UTO의 병리....

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에서는 장기 연구에 사용되는 4단계 프로토콜에 대해 설명합니다(그림 1). 이 원고의 끝에서 논의한 바와 같이, 연구자는 이 중 3개(섹션 1, 2, 4)만 수행하거나 장기 결과 연구에 관심이 있는 경우 4개 모두를 수행할 수 있습니다. 이 원고에 있는 모든 쥐 실험은 밴더빌트 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았으며 동물 사용 지침을 준수합니다.

1. 요관 클램프 배치(10 - 15분/마우스)

알림: 주변의 결합 조직 없이는 요관을 직접 볼 수 없으므로 요관을 찾기 위해 마우스 신장 해부학에 대한 지식에 의존하십시오. 요관은 신장이 노출됨에 따라 문턱 조직의 아래쪽 뒤쪽을 따라 흐릅니다(그림 2). 혈관 클램프의 선택은 중요합니다. 이들은 비용이 많이 들 수 있지만 여러 번 청소, 오토클레이브 및 재사용할 수 있습니다. 이 클램프는 문제 없이 최소 100번 이상 재사용할 수 있습니다.

  1. 수술 전에 모든 수술 기구를 121°C에서 30분 동안 오토클레이브합니다. 여러....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

장기 연구의 경우, 일반적으로 의식이 있는 마우스에서 순차적 혈액 요소 질소(BUN) 및 경피 사구체 여과율(tGFR)을 측정하여 신장 기능을 평가하고(이26을 설명하는 이전에 발표된 논문 참조), 18시간 수분 부족 후 채취한 현물 소변 샘플에서 소변 삼투압을 평가하여 요 농축 용량(UCC)을 측정합니다. 우리는 항상 BUN 연구를 수행하지만, 이는 신장 절제술 후 초기 시점에서 부상의 심각성을 평가하는 데 가장 유용합니다(논의 참조). 그러나 장기 연구의 경우, BUN(및 혈청 크레아티닌) 측정은 발생하는 신장 기능의 미묘한 변화를 감지할 만큼 충분히 민감하지 않습니다. 이는 일반적으로 신장 절제술 후 다른 시점에서 수행됩니다(그림 1A). UCC 분석은 신장 수질 기능에 대한 간단한 측정을 제공하며 일반적으로 같은 시점에서 신장 절제술 대조군 마우스보다 현저히 낮은 요삼투압 수치를 보여줍니다.

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

마우스에서 연장된 UUO의 역전을 연구하는 데 사용된 일부 접근 방식과 비교하면 다음과 같습니다.6,7,8,9,10,11,12,13,14, 여기에 설명된 프로토콜은 비교적 간단하며 높은 수준의 사전 수술 전문 지식이 필요하지 않습니다. 이 검사는 비교적 적은 수의 생존 수술(최대 3회)을 포함하며 장기적인 기능적 결과를 평가하는 데 사.......

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Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 NIDDK(National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases)의 지원을 받아 수상 번호 RO1DK128823 및 UC2DK126122로 선정되었습니다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% 염화나트륨VUMC 약국배수
흡수성 봉합사 Vicryl 6-0Med Vet International- ETHICON제이492G
알코올 면봉BD 브랜드 이소프로필 알코올 면봉BD 326895
베타딘 용액한나 제약 공급 주식회사67618015017
집게를 적용하는 클램프: S& 티 CAF-4정밀 과학 도구00071-14
델타페이즈 등온 패드브레인트리 사이언티픽DPIP
전기 트리머오스터배수
ENCORE 라텍스 질감 수술용 장갑안셀5785003
에티카 XR 부프로페노르(CIII) VI 1.3 mg/mL패터슨 수의학 - 에티카86084010030
EZ 클립 9mm브레인트리 사이언티픽EZC-CS또는 7mm
EZ 클립 어플라이어 9mm 브레인트리 사이언티픽EZC-APL또는 7mm
EZ 클립 리무버 9mm 브레인트리 사이언티픽EZC-RMV또는 7mm
거즈 스펀지 2 & 급성; 2피셔 사이언티픽22-362178
Graefe 각진 또는 곡선 톱니 모양 팁정밀 과학 도구11049-10
Graefe 직선 톱니 모양 팁정밀 과학 도구11050-10
가열 하드 패드 15 및 급성; 24브레인트리 사이언티픽HHP 2
가열식 하드 패드 펌프 커넥터브레인트리 사이언티픽HHP Gaymar 커넥터
핫 비드 살균기정밀 과학 도구18000-45
인슐린 주사기 0.5mL 29g엑셀 인터내셔널26028
이소플루란 패터슨 수의학 - Pivetal78949580
케타민 100 mg/mLVUMC 약국
비 흡수 봉합사 실크 4-0Med Vet International- ETHICON683G
Olsen Hegar 바늘 홀더: 봉합사 절단기 포함정밀 과학 도구12002-12
옵틱스케어 아이 윤활유 20gMed Vet International포틱스케어
가위 - 무딘 렉서 - 아기정밀 과학 도구14078-10
가위 - 날카로운 곡선정밀 과학 도구14005-12
멸균 면 팁 어플리케이터청교도25806 2화장실
멸균 거즈 스펀지 4 & 급성; 4피셔 사이언티픽22-415-469
멸균 수술용 일회용 드레이프 18 및 급성; 26Med Vet International20001
살균 기구 파우치 5 및 급성; 10피셔 사이언티픽01-812-54
T/펌프 난방 냉각 펌프브레인트리 사이언티픽TP-700 시리즈
테일러 집게는 곡선, 매끄럽습니다.정밀 과학 도구11017-17
혈관 클램프: S& T 5-15g 프레스정밀 과학 도구00396-01
자일라진 100mg/mL패터슨 수의학 - 크로노스CR04305

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, A. K., Tran, T. C., Sorensen, M. D., Durack, J. C., Stoller, M. L. Relative renal function does not improve after relieving chronic renal obstruction. BJU Int. 109 (10), 1540-1544 (2012).
  2. Tseng, T. Y., Stoller, M. L. Obstructive uropathy. Clin Geriatr Med. 25 (3), 437-443 (2009).

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Mouse ModelUreteric ObstructionRenal FunctionReversible UUOContralateral NephrectomyKidney InjuryUrinary Concentrating CapacityHydronephrosisBlood Urea NitrogenGlomerular Filtration Rate

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