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방법 논문

무각증 관련 각막 질환 연구를 위한 환자 특이적 iPSC 유래 각막 오가노이드

145 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68556

⸱

2026년 7월 28일

 ,  ,  ,  , 
1Izmir Biomedicine and Genome Center, 2Izmir International Biomedicine and Genome Institute, Dokuz Eylül University, 3Department of Medical Biology and Genetics, Faculty of Medicine, Dokuz Eylül University

이 논문에서

요약

우리는 무목적 환자에서 유래한 iPSC로부터 각막 오가노이드를 생성하는 프로토콜을 설명하여, 각막 질환을 연구하기 위한 환자별 모델을 만듭니다. 이 오가노이드는 주요 구조적·기능적 특징을 모방하여 질병 기전 조사, 잠재적 치료법 검증, 전방 안과 질환에 대한 맞춤형 재생 접근법 발전을 위한 신뢰할 수 있는 시험관 내 플랫폼을 제공합니다.

초록

아니리디아는 홍채가 부분적이거나 완전히 사라지는 드문 선천성 안구 질환으로, 각막 불투명화와 변연 줄기세포 결핍과 자주 연관되어 있습니다. 주로 PAX6 유전자에 영향을 미치는 기저 유전적 돌연변이는 각막의 발달과 기능을 방해합니다. 홍채 결손 외에 가장 흔한 안구 특징으로는 안진, 중심와저형성, 백내장, 녹내장, 그리고 무의관 관련 각막병증(AAK)이 있습니다. 생 체 내 모델은 무호흡증 병리학에 대한 귀중한 통찰을 제공하지만, 환자 유도 시험 관 모델은 질병 기전 조사와 잠재적 치료법 평가에 매우 중요합니다. 본 연구에서는 환자 유도 만능줄기세포(iPSCs)를 이용한 시험관 내 AAK 모델을 제시합니다. 저희 프로토콜은 자기조립된 3차원 오가노이드 내에서 iPSC를 각막 상피 유사 세포로 단계적으로 분화하는 과정을 포함하며, 이는 원래의 각막 미세환경을 모방합니다. 분화 배양 조건의 최적화를 통해 우리는 각막 세포 집단을 가진 각막 오가노이드를 성공적으로 생성하여 인간 각막의 핵심 구조적·기능적 특성을 재현했습니다.

서론

각막은 무성하고 투명한 조직으로, 눈의 가장 바깥층을 형성하며, 주로 세 개의 층으로 구성되어 있습니다: 상피 외층, 각막세포가 채워진 콜라겐이 풍부한 세포외기질이 있는 기질층, 그리고 내피 세포층1. 각막은 내부 안구 구조를 보호하고 빛을 굴절시켜 시각에 필수적인 역할을 합니다.

아니리디아는 주로 쌍 박스 유전자 6 (PAX6)의 이형접합 돌연변이로 인해 발생하는 희귀한 선천성 안안경 질환으로, 홍채2가 부분적이거나 완전히 부재하는 것이 특징입니다. 홍채 저형성 또는 부재 외에도, 대부분의 환자들은 상피 결손, 변연 줄기세포 기능 장애, 기질 변화, 점진적인 각막 불투명화 등 진행성 각막 이상을 겪으며, 궁극적으로 시각 장애로 이어집니다. AAK는 부채증 환자의 약 78%에서 90%에 영향을 미치며, 시간이 지남에 따라 심각해지는 3. 우리는 환자 유래 유도 다능 줄기세포(iPSCs)로부터 각막 오가노이드를 생성하는 상세하고 재현 가능한 프로토콜을 구축하여 시험관 내에서 질병 관련 각막 변화를 모델링하는 것을 목표로 했습니다. 동물 모델과 체외 연구가 무생물 발병 기전에 대한 귀중한 통찰을 제공했지만, 종별 차이와 환자 조직에 대한 제한된 접근성으로 인해 번역적 관련성이 제한됩니다.

인간 iPSC 유래 오가노이드는 인간 발달과 질병 모델링을 위한 강력한 시험관 내 시스템으로 부상했습니다 4,5. 특히 각막 오가노이드는 공간적 조직, 생리적 세포-세포 상호작용, 미세환경 복잡성이 없는 기존 2차원 단층 배양과 달리, 층화된 상피 조직, 기질-상피 상호작용, 세포외 기질 침착 등 원래의 각막 구조와 더 유사한 3차원 조직 유사 구조를 생성할 수 있게 합니다 4,5. SEAM 기반 및 안구 전구세포 기반 접근법 등 여러 차별 전략이iPSCs 6에서 각막 유사 조직을 생성하는 것으로 보고되었습니다. 이러한 접근법은 일반적으로 초기 안구 계통 유도 단계를 거쳐 점진적인 조직 전문화 및 이질적인 안구 전구세포 집단에서 선별하는 과정을 포함합니다. 각막 오가노이드 생성은 각막 조직에 존재하는 다양한 세포 유형을 연구할 기회를 제공합니다 7,8. 더불어, 부채증 환자의 iPSC 유래 각막 오가노이드는 질병의 유전적 배경을 연구할 수 있게 하며, 무채질을 연구할 수 있는 독특한 기회를 제공합니다.

본 프로토콜에서는 야생형과 무리질 유래 iPSC 라인 모두가 분화(DM), 망막 분화(RDM), 각막 분화 배지(CDM)에 대한 순차적 노출을 포함하는 동일한 다단계 분화 전략을 장기간 수주에 걸쳐 적용합니다. 중요한 실험 단계는 부착 배양에서 현탁 상태로 전환하는 과정으로, 이 과정에서 선택된 각막 유사 영역을 유지하여 상피 자기조직화를 촉진합니다.

이 접근법은 비교 질병 모델링에 적합한 각막 유사 상피 구조의 재현 가능성을 지원하지만, 신경 신경 지배나 완전한 림계 지위 조직과 같은 복잡한 생 체 내 특징을 완전히 재현하지는 못하므로, 이 점은 방법의 적용 가능성 평가 시 고려해야 합니다.

이 맥락에서, 우리는 PAX6 돌연변이를 가진 환자 유래 iPSC로부터 각막 오가노이드를 생성하는 표준화된 프로토콜을 설명합니다. 중요한 점은, 야생형과 무리암 유래 계통 간에 구분 전략 자체가 변경되지 않는다는 것이다; 대신, 질병 특이적 표현형은 환자 특이적 유전적 배경에서 일관된 실험 틀 내에서 나타납니다.

전반적으로 이 방법은 각막 발생과 무폐증 관련 질환 기전을 연구할 수 있는 견고하고 재현 가능한 기반을 제공하며, 향후 기전 및 중개 연구의 기초가 될 수 있습니다.

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프로토콜

모든 절차는 윤리위원회의 지침에 따라 진행되었습니다. 이 연구는 인간 다능 줄기세포 등록부(hPSCreg) 데이터베이스에 등록되었으며, 윤리적 승인은 프랑스 고등연구혁신부(MESRI)에 의해 문서화되었습니다. IE-2018-967)9. iPSC는 AAKIPSi001-A(AAK1), AAKIPSi002-A(AAK2), AAKIPSi003-A(AAK3), WT(건강 기증자로부터 명칭)로 지정됩니다. 더욱이, 하세테페 대학교 윤리위원회는 참조 번호 16969557-1213에 따라 이 연구의 사용을 승인했습니다. 이 연구에 사용된 인간 세포주는 획득 시 국가 규제 승인이 필요했습니다. 이 승인은 저자 중 한 명이 참여한 컨소시엄 프레임워크 하에 이루어졌습니다. 본 원고는 해당 컨소시엄 프로젝트와 직접적으로 관련이 없으나, 사용된 생물학적 재료는 해당 윤리적 틀 내에서 획득 및 승인되었습니다. 따라서 이 대학의 승인은 완전한 규제 투명성을 보장하기 위해 적절히 인용되었습니다. 이 프로토콜에서 사용된 재료, 시약 및 장비와 관련된 모든 세부 사항은 재료표에 나열되어 있습니다. 모든 실험 절차는 멸균 환경을 유지하기 위해 층류 캐비닛(BSL-2) 내에서 수행되었습니다. 이 장치는 연구에 사용된 모든 재료와 장비가 적절히 멸균되도록 보장하여 오염 위험을 최소화하고 실험 결과의 무결성을 보장합니다.

1. 인간 유도 다능성 줄기세포(hiPSC) 유래 각막 오가노이드 생성

  1. 무급식 조건 배지 하에서 무호흡기 환자 유도 다능성 줄기세포(AAK1, AAK2, AAK3)10의 유지 및 초기 배양
    1. 사전에 다음 사항을 준비하세요: 6웰 플레이트의 한 웰에 0.1 mg/mL 농도의 얼음처럼 차가운 세포외기질(ECM) 용액 1mL를 코팅합니다. 이 코팅 절차는 ECM을 굳히기 위해 하지 않고 얼음 위에서 처리해야 하며, 제조사의 지침에 따라 최소 30분 동안 37°C에서 배양해야 합니다.
    2. 1 x 106 hiPSC (WT, AAK1, AAK2, AAK3) 냉동 보존 알리코트를 해동합니다. 냉동 세포를 완전히 녹이지 마세요; 대신, 냉동체 내 냉동 세포 부탁액을 녹여 약 절반 정도 부피가 얼어붙은 상태로 남도록 하세요.
    3. 부분적으로 해동된 현탁물을 즉시 15mL 튜브에 미리 할당한 10 μM Rho 관련 단백질 키나제(ROCK) 억제제가 포함된 상온(RT) 완전 유지 배지 1mL에 옮깁니다. 이송 중에는 피펫을 사용하지 마세요.
    4. 300 x g 에서 원심분리기를 5분간 사용한 후 상원액을 버립니다.
    5. 그 후 세포를 10 μM ROCK 억제제가 포함된 완전 유지 배지 1mL에 재현탁합니다.
    6. 트리판 블루 배제로 세포 밀도를 결정합니다. 트리판 블루로 생존성 염색 후 혈구계를 이용해 세포를 개수하세요. 간단히 말해, 세포 현탁액 20 μL를 1:1 비율로 20 μL 혼합한 후 PBS 60 μL을 추가하여 원래 세포 현탁액을 최종 1:5로 희석합니다. 이 혼합물에서 10 μL를 혈구계 챔버에 주입합니다. 네 개의 큰 칸으로 생존 가능한 (트리판 블루-음성) 세포를 세어. 제곱당 평균 세포 수를 계산하고, 5(세포 현탁 희석 계수)와 10,000을 곱하여 최종 세포 농도(세포/mL)를 구합니다.
      세포/mL = (제곱당 평균 세포 수) x 5 x 104
    7. 셀을 6웰 플레이트의 사전 코팅된 ECM 웰에 씨앗 뿌려, 웰당 2 x 104 셀/cm 2 의 셀 밀도를 보장합니다.
    8. 10배 배율의 위상 차이 현미경으로 세포 형태와 부착 상태를 관찰하세요. 그 후 6웰 플레이트를 37°C에서 5% CO₂로 배양하여 최적의 성장 조건을 확보합니다.
      참고: ROCK 억제제는 세포를 통과시키거나 해동하는 동안에만 밤새 사용해야 합니다. 매일 매체 교체 시 우물 벽을 따라 부드럽게 매각지를 넣으세요. 전체 유지 매체를 물욕에서 가열하는 것을 피하세요; 대신 사용 전에 15분간 실온에서 매지를 평형으로 유지하세요.
  2. 자발적 분화 단계 (0일차 – 2일차)
    1. 분화 배지(DM)는 다음 혼합물로 준비합니다: 8% 녹아웃 혈청 대체(KSR), 1x 비필수 아미노산(NEAA), 1x 글루타맥스, 1x 페니실린-스트렙토마이신, 그리고 Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient 혼합물 F-12 햄(DMEM/F-12).
    2. hiPSC 배양이 약 70%–80% 합류율에 도달하면 자연분화를 유도하기 위해8, 배지를 부드럽게 흡인하여 완전히 버린 후, 3일째까지 매일 1mL의 신선한 DM으로 교체하여 3일째에 실험 일정에 따라 망막 분화 단계가 시작됩니다.
  3. 망막 분화 단계 (3일차 – 47일차)
    참고: 망막 분화 배지는 이질적인 안구 전구세포 집단의 형성을 위해 장기간 사용됩니다.
    1. 망막 분화 배지(RDM)는 다음 혼합물로 준비합니다: 8% KSR, 1x NEAA, 1x 글루타맥스, 2% B27, 1x 페니실린-스트렙토마이신, 그리고 DMEM/F-12.
    2. 자발적 분화 2일 후, 매일 배양지를 신중하게 흡인하여 각 웰당 1mL의 신선한 RDM 배지를 교체합니다. 이 상태를 총 30일 동안 계속하세요.
      참고: 이 30일 기간 동안 세포 밀도가 크게 증가할 것으로 예상됩니다. 각 웰의 다양한 구역에서 세포 밀도를 현미경으로 관찰하는 것이 필수적입니다. 셀 리프트를 방지하기 위해서는 세척을 피해야 하며, 배지 교체 시 주의가 필요합니다. 매체를 우물 벽을 통해 추가하세요. 사용 전에 15분간 RT 온도에서 배지를 평형으로 유지하세요.
    3. 32일째에는 세포들이 겉보기에 합류 상태에 도달하여 다층 2.5D 집합체를 형성합니다. 이 단계에서 1000 μL 피펫 팁을 사용해 전체 웰을 부드럽게 긁어 현탁 배양으로 전환합니다. 이 과정에서 세포층을 작은 군집으로 분해합니다.
      참고: 모든 세포는 배양 표면에서 방출되지만, 다층 2.5D 골집체는 우선적으로 수집되어 현탁 배양으로 옮겨집니다(보충 그림 1). 이는 이들의 농축이 단일 세포나 단일층 조각에 비해 더 빠른 자기 조립과 더 큰 오가노이드 형성을 촉진하기 때문입니다.
    4. 스크레이팅 직후 생성된 세포 클러스터를 수집하여 RDM이 포함된 저부착 6웰 배양판에 옮겨 현탁 배양 조건을 확립합니다.
    5. 세포를 추가로 15일간 현탁 배양 상태로 유지하며, 웰당 2mL의 신선한 RDM을 매일 배지 교체합니다. 현탁 배양 첫 이틀 동안은 작은 세포 군집 손실을 방지하기 위해 배지 교환을 피하세요. 현탁 배양 과정에서 세포는 점차 자기 조직화되어 3D, 투명하고 각막과 유사한 구조를 형성하며, 4배 및 10배 배율의 위상 차이 현미경으로 정기적으로 관찰됩니다.
  4. 각막 분화 단계 (48일째 – 90일째)
    1. 각막 분화 배지(CDM)는 다음 혼합물로 준비합니다: 8% KOSR, 1x NEAA, 1x 글루타맥스, 1x N2-MAX, 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄, 5 ng/mL FGF2, 10 ng/mL EGF, 그리고 DMEM/F-12.
    2. 저부착 플레이트(37 °C, 5% CO₂)에서 현탁 배양 초기 15일(32일차부터 47일차까지)을 마친 후, 47일째에 집합체를 현탁 상태로 유지하면서 RDM을 CDM으로 교체합니다. CDM은 격일로 웰당 2mL로 갱신하며, 오가노이드가 항상 배양지에 완전히 잠겨 있도록 합니다. 이 기간 동안 투명하고 거품 같은 각막 원시(CP) 구조가 점차 나타납니다.
    3. CDM에서 90일째까지 현탁 배양을 계속하여 투명한 CP 영역과 더 불투명한 조직 구획의 공간적 분리를 추가로 성숙시키십시오.
    4. 90일째에 CP 특이적 하위 분석을 의도할 때는 멸균된 겸자와 핀셋을 사용해 투명한 CP 영역과 불투명한 조직 구획을 기계적으로 분리합니다.
      참고: CP 영역의 기계적 분리는 분석이 특히 CP 농축 구조가 필요할 때 수행됩니다. 다른 조직 구획이나 전체 오르가노이드 구조에 관심이 있다면, 구조적 이질성을 유지하기 위해 오르가노이드를 온전하게 유지할 수 있습니다.
    5. 실험 목적에 따라 분리된 CP 구조 또는 온전한 오가노이드에 대해 CDM에서 현탁 배양을 계속할 수 있습니다.

2. 각막 오가노이드의 특성

  1. 오가노이드의 형태학적 및 구조적 평가
    1. 각막 오가노이드는 4배 및 10배 배율의 밝방야 현미경을 이용해 정기적으로 관찰하세요. 정의된 시점에서 크기, 투명도, 전체 형태를 평가하고 이미지 획득을 통해 구조 변화를 기록합니다.
  2. 면역형광 기반 특성 분석
    1. 각막 오가노이드 고정
      1. 고정 전에 4% PFA와 30% 자당 용액을 준비하세요. 오토클레이드 스쿠퍼로 배양 각막 오가노이드를 채취하세요. 오가노이드를 1.5mL 튜브 내 4% PFA에 옮기고 실온에서 20분간 배양합니다.
      2. 배양 후에는 각막 오가노이드를 손상시키지 않도록 조심스럽게 튜브에서 제거합니다. 튜브에 30% 자당 용액 1mL를 넣고 4 °C에 두세요. 24시간 후에는 OCT 고정을 위해 5mL 튜브와 액체 질소를 준비하고 라벨링하세요.
      3. 자당 용액은 튜브에서 조심스럽게 버리세요. 오가노이드를 멸균 스쿠퍼로 옮기세요. 20 μL 피펫으로 오가노이드에서 과도한 자당 용액을 조심스럽게 제거하세요.
      4. OCT를 5mL 튜브 캡에 붓고, 오가노이드를 OCT에 넣습니다. 다른 멸균 스쿠퍼를 사용해 OCT가 포함된 캡에 오르가노이드를 옮기세요.
      5. 각막 오가노이드 표면을 덮기 위해 OCT를 추가하세요. 바늘로 풍선을 OCT에 넣어 오가로이드의 깨끗한 부분을 얻으세요.
      6. 5mL 튜브 뚜껑을 닫고 핀셋으로 액체 질소에 담가세요. 샘플을 -20 °C에서 보관하다가 절단 작업을 하세요.
      7. 5 μm 두께로 크라이오스탯을 사용해 절단하고, 염색할 때까지 -20 °C에서 보관합니다. 재현 가능한 염색을 위해 일정한 절면 두께와 조직 방향을 유지하세요.
    2. IF 염색
      1. 단속성 염색을 위해 각막 오가노이드 절편을 준비하려면, 슬라이드를 PBS-T(0.3% Triton X-100)로 RT에서 3회 세척하여 10분간 세척합니다.
      2. 슬라이드를 휴지로 닦고 PAP 펜으로 테두리를 만드세요. 조직 절편을 완전히 덮을 적절한 양의 블로킹 용액(일반적으로 PAP 펜 경계에 따라 100 – 200 μL)을 추가하고 RT에서 1시간 배양합니다.
      3. 차단 용액을 흡입하고 PAP 펜으로 테두리를 만드세요. 1차 Ab(PAX6, p63, OCT3/4, NANOG, Na+/K+-ATPase, AQP1, CK3, CK5, CK14, CK19, N-cad, KERA, COLIV, 희석 비율은 재료표에 표에 표기됨) 용액 150μl을 슬라이드에 추가하고 RT에서 1시간 배양합니다.
      4. RT에서 PBS-T(0.3% Triton X-100)로 2번 세척하세요. PAP 펜으로 다시 경계를 만드세요.
      5. 150μl 2차 Ab 용액(Anti Rabbit-488, Anti Mouse-594, 희석 비율은 재료표에 표에 표 표에 표 있음)을 슬라이드에 추가하고, RT에서 어두운 환경에서 2시간 배양합니다. PBS-T(0.3% Triton-X)로 RT에서 2번 세척해 10분간 하세요. 슬라이드와 마운트를 DAPI 용액으로 청소하세요.
      6. 미분화 iPSC의 경우, 고정 후 블로킹과 투과화를 수행하고 동일한 프로토콜로 염색을 진행합니다. 형광 또는 공초점 현미경을 4배 및 10배 배율로 염색된 샘플을 시각화하세요.

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결과

인간 유도 다능성 줄기세포(hiPSCs)의 줄기성

실험에 사용된 인간 iPSC의 줄기 성향을 평가하기 위해 밝은 시야 영상, 면역염색, qRT-PCR 분석을 수행했습니다. 우리는 OCT3/4, SOX2, NANOG를 포함한 주요 다능성 표지자의 발현을 평가했으며, 이들은 인간 다능성 줄기세포에서 다능성 유지와 자기 갱신에 필수적인 핵심 전사 인자입니다11.

밝은 필드 영상은 경계가 뚜렷한 조밀한 집단이 특징인 전형적인 다능성 줄기세포 형태를 보여주었다(그림 2A). 면역형광 염색은 대조군과 환자 유래 iPSC 모두에서 OCT3/4와 NANOG의 강한 핵 위치 확인을 보여주었으며(

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토론

대조군 오가노이드와 무리증 환자에서 유래한 오가노이드 간의 비교 분석에서는 상피 층화, 비정상적인 세포외기질 침착, PAX6 유전자의 발현 조절 이상이 드러났습니다.

다양한 무생물 환자 샘플, 특히 AAK1, AAK2, AAK3 계통에서 유래한 iPSC의 성장 속도는 변이성을 보이며, 이는 주로 PAX6 유전자의 돌연변이에 의해 발생하는 기저 유전적 다양성을 반영할 수 있습니다. 이는 각 환자의 고유한 세포 특성에 따라 세포 재프로그래밍 효율성과 줄기세포 행동에 차이를 초래할 수 있습니다17. 이러한 성장률 차이는 식단의 질병 기전에 대한 귀중한 통찰을 제공하고 개인 맞춤형 치료 전략 개발을 안내할 수 있습니다9.

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공개 사항

저자들은 공개하지 않았다.

감사의 글

이 연구는 TÜBİTAK 121N276과 유럽 희귀질환 공동 프로그램의 지원을 받으며, 유럽연합(Horizon 2020 ERA 의장 프로그램, RareBoost 프로젝트 보조금 번호: 952346)의 일부 지원을 받고 있습니다. A.C.K.는 YÖK 100/2000 박사 장학금과 TÜBİTAK-BİDEB 2211A 펠로우십의 지원을 받고 있습니다.

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재료

```html
이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10 mL 혈청학적 피펫ZA 바이오테크노Labselect SP-003-10
15 mL 원추형 튜브 Labselect CT-002-15A
2 mL 혈청학적 피펫Labselect Labselect SP-003-2
5 mL 혈청학적 피펫CleanteksBiofil GSP010005
50 mL 원추형 튜브Golden Gate CT-002-50
50 mL 혈청학적 피펫BIOFILLGSP020050
Anti Mouse 594Jackson Immuno715-585-150희석 범위: 1:100 - 1:800
Anti Rabbit 488 Jackson Immuno711-545-152희석 범위: 1:100 - 1:800
자동 오븐 VAPOUR-Line liteVWR chemicalsVAPOUR-Lineeco 25
B27 보충제GIBCO12587010비타민 A 포함
벤치톱 원심분리기Eppendorf5702
벤치톱 현미경 DMI1OlympusCKX41
생물학적 안전 캐비닛 Class IIThermoSafe 2020
우청 알부민 (BSA)Sigma-AldrichA8806
CellBanker 1Worthington IndustriesLABS-20K
커버슬립 24 mm x 50 mmISOLAB280
Cryomatrix, OCTFisher Healthcare30226281
CryovialBioSigmaN403522
DAPINEOFROXX 1322
DAPINEOFROXX 15390.5 ug/mL
DMEM/F12 배지GIBCO 31330-038
Dulbecco's Phosphate-buffered Saline (DPBS)Gibco141901441X
EGFGIBCOPHG0311
Ethanol 100%Sigma64-17-5
Ethanol 70%Sigma64-17-5Ethanol 희석
세포외 기질 (ECM)Corning354277LDEV-free
FGF2GIBCOPHG0024
GlutaMaxGIBCO35050061
GoTaq Master MixPromegaM7123
배양기Memmert INCO 153 med44043
인슐린-셀레늄-트랜스페린GIBCO41400045
KnockOut 혈청 (KOSR)GIBCO10828028
마이크로토믹 RM2235LeicaRM2235
마운팅 매체abcamab104135
mTSER 배지STEMCELL85850
Mutiwell 배양 플레이트 (6-웰)CORNING   3516
N2 보충제R&DAR003
비필수 아미노산 (NEAA)LONZABE13-114E
P20, P200 및 P1000 피펫GilsonF167350
파라핀VWR chemicals10048502
파라포름알데히드 Sigma-AldrichF8775
Primer 항체 Aquaporin mAbabcamab9566희석 범위: 1:50-1:200
Primer 항체 CK14Santa Cruz Biotechnology sc-53253희석 범위: 1:50-1:500
Primer 항체 CK19ProteinTech14965-1-AP희석 범위: 1:150-1:600
Primer 항체 CK3NOVUSNBP2-91997 0.1 ML희석 범위: 1:50-1:200
Primer 항체 CK5Thermo MA517057희석 범위: 1:200-1:1000
Primer 항체 Collagen Type IVabcamab6586희석 범위: 1:100-1:500
Primer 항체 KeratocanBiossbs-11054R희석 범위: 1:50-1:200
Primer 항체 Na/K - ATPaseSanta Cruz Biotechnologysc-21712희석 범위: 1:50-1:500
Primer 항체 N-Cadherinabcamab76011희석 범위: 1:50-1:500
Primer 항체 p63SANTACRUZ   sc-25268희석 범위: 1:50-1:500
Primer 항체 Pax6NovusNBP2-44576희석 범위: 1:50-1:200
RNA 분리 키트Macherey–Nagel 740984.50
Rock 저해제 (Y

참고문헌

  1. Hassell, J. R., Birk, D. E. The molecular basis of corneal transparency. Exp Eye Res. 91 (3), 326-335 (2010).
  2. Daruich, A., et al. Congenital aniridia beyond black eyes: From phenotype and novel genetic mechanisms to innovative therapeutic approaches. Prog Retin Eye Res. 95, 101133(2023).
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