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방법 논문

관절 염증 및 외상 후 골관절염을 연구하기 위한 설치류 모델의 전방십자인대 절개 및 활액 세척

3.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68713

⸱

2025년 9월 2일

 ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Surgery, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 2Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기에서는 설치류에서 무릎 골관절염을 유발하는 신뢰할 수 있는 모델로서 전방십자인대(ACL)를 횡단하는 수술 방법과 무릎 활액 채취, 무릎 부종 측정 및 골관절염 중증도 평가를 위한 방법론을 설명합니다.

초록

골관절염(OA)은 만성 통증을 특징으로 하는 관절 질환으로 현재 치료법이 없습니다. OA의 하위 집합인 외상 후 골관절염(PTOA)은 관절 손상 후에 발생할 수 있습니다. 무릎은 가장 영향을 받는 관절 중 하나이며, 무릎 부상 중 ACL 부상이 가장 흔합니다. 연골 열화 및 골극 형성과 같은 관절 변화를 동반하는 증상이 있는 OA는 초기 손상 후 몇 년 후에 발생할 수 있지만 조기 관절 변화는 얼마 지나지 않아 발견될 수 있습니다. 염증은 PTOA 발달에 기여하는 요인 중 하나로 간주되며, 손상에 대한 반응으로 생성되는 전염증 매개체는 PTOA 발달을 촉매할 수 있습니다. 동물 모델에서 무릎의 외과적 손상 구조는 OA 유도의 널리 사용되는 방법이며 일반적인 수술 기법은 ACL 절개(ACLT)입니다. 이 연구의 목적은 OA 유도를 위한 ACLT 기술과 관절 염증을 모니터링하고 OA 중증도를 정량화하는 방법을 설명하는 것입니다. 수술 후 염증을 평가하기 위해 무릎 부종을 측정하는 기술과 무릎 활액을 채취하고 분석하는 기술을 설명합니다. OA와 관련된 장기적인 관절 변화를 평가하기 위해 microCT 영상을 통해 OA 중증도를 평가하기 위해 개발한 반정량적 채점 시스템을 제시합니다.

서론

전방십자인대(ACL)는 무릎 관절의 중요한 구조로, 안정성을 제공하고 대퇴골에 비해 경골이 과도하게 전방으로 움직이는 것을 방지합니다1. ACL 부상은 특히 갑작스러운 정지, 점프 또는 방향 변경과 관련된 스포츠에서 가장 흔한 무릎 부상 중 하나입니다2. 이러한 부상은 부분적인 파열에서 완전한 파열에 이르기까지 다양하며최적의 회복을 위해 외과적 개입이 필요한 경우가 많습니다3. 그러나 외과적 치료 후에도 ACL 손상은 연골 마모, 골극 형성, 연골하 뼈의 구조적 변화 등 장기적인 관절 변화로 이어지는 경우가 많습니다. 이러한 변화는 일반적으로 외상 후 골관절염(PTOA)이라고 하는 관절 퇴행에 총체적으로 기여합니다4,5.

초기 ACL 손상에서 증상이 있는 PTOA로의 진행은 부상 후 빠르면 2년에서 길게는 20년까지 지속될 수 있지만, 초기 관절 변화는 단 몇 주 이내에 감지될 수 있습니다 6,7,8,9. 이러한 초기 변화의 주요 특징 중 하나는 염증성 사이토카인(예: 인터루킨(IL)-1, IL-6, 종양 괴사 인자(TNF)) 및 세포외 기질 파괴 마커(예: 메탈로프로테이나제(MMP) 및 CTX-II)의 존재 증가입니다. 이러한 염증 및 분해 마커에 대한 활액 평가는 관절 병리의 급성 및 만성 단계에 대한 중요한 통찰력을 제공합니다. 예를 들어, IL-1 및 IL-6 수치는 손상 후 첫 달 이내에 손상된 관절의 활액에서 최고조에 달합니다. 이러한 수준은 시간이 지남에 따라 감소하지만 치료 후 몇 년 후에도 정상적인 기준선 수준으로 거의 돌아오지 않습니다 10,11,12. 이러한 초기 전염증 반응은 활막 염증, 연골 열화 및 생체역학적 변화를 포함한 일련의 관절 손상을 유발하여 조직 파괴를 영속시키고 관절 퇴행을 가속화합니다13. 또한 ACL 손상 후 급성 염증은 종종 관절 내 부종 및 체액 축적으로 예시되는 관절 삼출액 및 무릎 부종을 초래합니다14.

ACL 손상을 복제하고 PTOA의 진행을 조사하기 위해 마우스에서 외과적으로 유도된 ACL 절개(ACLT) 모델이 널리 사용됩니다15,16. 이 모델에는 부상을 시뮬레이션하기 위해 ACL을 절단하고 그에 따른 생물학적 및 기계적 결과를 평가하는 작업이 포함됩니다. ACLT 모델은 부상 후 염증 반응, 연골 분해 및 생체역학적 변화를 연구하는 데 유용한 도구로, PTOA를 구동하는 분자 및 세포 메커니즘에 대한 통찰력을 제공합니다. 또한, 관절 퇴행을 완화하고 기능을 보존하기 위한 치료 전략을 평가할 수 있습니다. 인간의 경우 활액 분석을 통해 활액을 얻는 것이 비교적 간단하기 때문에 시간이 지남에 따라 염증 및 연골 분해를 모니터링하는 데 널리 사용됩니다17,18. 그러나 생쥐의 경우 손상 모델 후 활액을 수집하는 것이 어렵습니다. 이 원고에서 우리는 염증 및 분해 마커를 평가하기 위해 ACLT에 대한 수술 기술과 활액 수집을 위한 무릎 세척 방법에 대해 설명합니다. 또한 관절 손상 후 부종을 정량화하기 위해 무릎 크기를 측정하는 방법을 제시합니다. 또한 ACLT 후 PTOA의 중증도를 평가하기 위한 microCT 평가 방법을 설명합니다. 이러한 접근법은 전임상 환경에서 ACL 손상의 급성 및 만성 영향을 평가하기 위한 보완 도구를 제공합니다.

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프로토콜

모든 동물 연구는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에 따라 수행되었으며 Brigham and Women's Hospital의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.

1. 동물 준비

참고: ACLT가 남녀 모두에서 PTOA를 안정적으로 유도하더라도 중증도와 진행이 다를 수 있으므로 마우스 성별의 선택은 연구 목적과 일치해야 합니다.

  1. 마취 준비: 케타민-자일라진(KX) 마취액을 미리 준비합니다.
    참고: 흡입 마취(2% 이소플루란)도 사용할 수 있습니다.
  2. 외과적 대조군: 별도의 연령 일치, 가짜 수술 그룹을 외과 대조군으로 사용합니다.
    참고: 반대쪽 무릎은 동물 복지 문제를 야기할 수 있으므로 가짜 대조군 역할을 해서는 안 됩니다. 그러나 쌍을 이룬 분석에서 기본 관절 상태를 설정하기 위해 건강하고 손상되지 않은 대조군으로 사용할 수 있습니다.
  3. 동물 연령 선택: ACL 파열이 가장 흔하게 발생하는 일반적인 연령을 반영하기 위해 8주 된 마우스를 사용합니다. 그러나 골격적으로 성숙한 마우스는 이 절차를 거칠 수 있습니다.

2. 수술 전 관리

참고: 생쥐가 다른 시설에서 이송되는 경우 수술을 수행하기 전에 새로운 환경에 적응할 수 있도록 최소 1주일 동안 허용하십시오.

  1. 수술이 모든 표면을 멸균한 상태로 무균 방식으로 수행되고(예: 멸균 드레이프를 사용하여 수술 부위를 덮음) 멸균 기구와 적절한 수술용 개인 보호 장비(PPE)를 사용해야 합니다.
  2. 케타민(100mg/kg)과 자일라진(10mg/kg)을 복강내 주사하여 마취를 유도합니다.
  3. 마취 후 눈 윤활제를 바르고 수술할 무릎 위의 털을 면도하여 작은 이발기를 사용하여 정강이 중앙에서 허벅지 중앙까지 앞면과 측면을 덮습니다.
    참고: 뒷지 무릎의 선택은 수술의 용이성에 따라 연구원의 재량에 따릅니다
  4. 마우스가 완전히 마취되어 있고 발가락 꼬집기 반사에 반응하지 않는지 확인하십시오.
  5. 항균 피부 클렌저(예: 베타딘 및 70% 알코올)를 발라 노출된 피부를 소독합니다.
  6. 선제적 진통제를 위해 오피오이드 진통제(예: 부프레노르핀 0.05mg/kg)를 피하 투여합니다.
    참고: 진통제는 수술 후 72시간 동안 진통 효과를 제공하는 서방형 제형이거나 회복 중 통증을 완화하기 위해 이 기간 동안 정기적으로 투여해야 합니다.
  7. NSAID 투여가 관심 있는 결과를 방해하지 않는 한 권장 사항에 따라 NSAID(예: 5mg/kg 멜록시캄)를 투여합니다.
  8. 해부 현미경 아래 마우스를 등쪽에 놓습니다. 수술할 무릎이 위쪽을 향하고 있는지 확인하십시오 view 현미경의 필드.
  9. 멸균 드레이프로 마우스를 덮고 작은 열쇠 구멍 구멍을 남겨 둡니다.
  10. 슬개골이 위를 향하도록 무릎을 약 90° 구부린 상태에서 수술할 다리를 배치합니다. 수술용 테이프를 사용하여 무릎을 구부린 자세로 유지하십시오.

3. 전방십자인대 절개

  1. 슬개골에 초점을 맞추도록 현미경을 조정합니다.
  2. 겸자를 사용하여 슬개골 위의 피부를 꼬집고 수술용 가위를 사용하여 무릎 위에 작은 정중선 세로 절개를 합니다. 절개 부위를 약 1cm까지 확장하고 피부를 후퇴시켜 슬개건을 노출시킵니다(그림 1A).
  3. 무릎을 약 120°로 구부립니다. 주로 사용하지 않는 손을 사용하여 무릎 굴곡을 유지하고 피부 가장자리를 수축시켜 슬개건의 시각화를 용이하게 합니다(그림 1B).
  4. 슬개건의 내측 경계를 확인하고 이 마진을 따라 11번 칼날로 절개하여 중간점에서 슬개골의 상극까지 확장하여 관절낭을 엽니다(그림 1C-E).
    알림: 출혈이 발생하면 멸균 면봉으로 5-10초 동안 부드럽게 압력을 가하여 지혈을 조절합니다.
  5. 뭉툭한 끝 겸자를 사용하여 슬개건을 부드럽게 잡고 약간 위쪽으로 들어 올리고 측면으로 이동하여 슬개골을 탈구시키고 무릎 관절을 완전히 노출시킵니다(그림 1F).
  6. 이 단계에서 슬개골하 지방 패드(IFP)가 보입니다(그림 2A). 끝이 뭉툭한 겸자를 사용하여 IFP의 내측 부분을 부드럽게 이동하여 IFP 무결성을 유지하면서 ACL을 노출시킵니다(그림 2B).
    참고: IFP는 염증 마커를 생성하는 역할을 하므로 IFP의 완전한 제거는 피합니다. 이 모델은 PTOA로 이어지는 부상 후 염증 반응을 연구하는 데 중점을 두기 때문에 IFP를 유지하는 것이 선호됩니다. 출혈이 발생하면 멸균 면봉으로 5-10초 동안 부드럽게 압력을 가하여 지혈을 조절합니다.
  7. 무릎을 120° 굴곡으로 유지하면서 외측 대퇴골 과두의 내부 표면에서 경골 고원의 중심까지 확장되는 ACL을 식별합니다(그림 2C, D).
  8. 미세수술 가위를 사용하여 현미경 시각화 하에서 ACL을 조심스럽게 절개하여 주변 연골, 반월판 및 기타 인대가 손상되지 않도록 합니다(그림 2E). 이 단계에서 ACLT 모델이 완성되었습니다. 어떤 경우에는 횡단된 ACL의 잔해를 시각화할 수 있습니다(그림 2F).
  9. 전후방 서랍 테스트를 수행하여 ACL 절개를 확인합니다. 무릎을 약 90°로 구부리고 손가락으로 근위 경골을 안정시킨 다음 끝이 뭉툭한 겸자를 사용하여 원위 대퇴골에 후방 힘을 부드럽게 가합니다. 원위 대퇴골의 후방 번역은 성공적인 ACLT를 확인합니다(그림 3).
  10. 슬개골과 슬개건을 약간 들어 올리고 내측으로 이동하여 해부학적 위치로 재배치합니다(그림 4A, B). 흡수성 6-0 봉합사를 사용하여 한 바늘로 관절낭을 닫고 슬개골을 둘러싼 근육을 인접한 내측 근육 조직에 고정합니다. 그런 다음 흡수성 6-0 봉합사를 사용하여 2-3바늘로 피부를 봉합합니다(그림 4C).
  11. 가짜 수술의 경우 ACL을 절개하지 않고 동일한 절차를 수행합니다. 관절낭을 열고 설명된 대로 슬개골과 IFP를 탈구합니다. ACL을 절개하지 않고 시각화한 다음 슬개골과 IFP를 교체하고 관절낭과 피부를 닫습니다.

4. 수술 후 관리

  1. 수술 후 마우스를 열 패드 위에 놓고 완전히 의식이 있을 때까지 마취에서 회복되도록 합니다.
  2. 마우스가 완전히 걸을 수 있게 되면 회복을 위해 새 침구가 있는 깨끗한 케이지로 옮깁니다.
  3. 수술 후 처음 72시간 동안 체중 변화(일반적으로 5% 이하), 절개 부위 주변의 그루밍 감소 또는 과도한 그루밍, 일반적인 건강 악화의 징후(예: 구부정한 자세, 얼굴 찡그린 얼굴 또는 비정상적인 호흡) 및 상처 감염(부기 포함, 퇴전 또는 상처 열개). 멜록시캄을 사용하는 경우 48시간 동안 24시간마다 투여하십시오.
  4. 수술 후 초기 72시간 후, 연구 설계에 따라 관심 종점까지 평소와 같이 마우스를 유지합니다.

5. 무릎 크기(부종) 평가

  1. 버니어 캘리퍼스를 사용하여 무릎의 내측 너비를 측정하여 무릎 부종을 평가합니다(정확하고 제어된 측정을 위해서는 미세 조정 썸 휠이 있는 디지털 캘리퍼스를 사용하는 것이 좋습니다). 살아있는 동물 또는 사후 분석을 측정합니다. 캘리퍼스가 무릎의 내측 및 외측 경계에 부드럽게 닿을 때까지 캘리퍼스를 서서히 닫습니다.
    알림: 캘리퍼는 꼭 맞아야 하지만 과도한 압력을 가하면 무릎이 압박되고 측정된 너비가 인위적으로 줄어들어 부정확한 결과가 나올 수 있으므로 주의해야 합니다. 목표는 무릎을 눈에 띄게 압박하지 않고 캘리퍼를 적절하게 장착하는 것입니다. 무릎 크기 측정을 줄이기 위해 추가 조정이 시작되면 조임이 중단되어야 합니다(그림 5).
  2. 마취되거나 안락사된 동물을 평평한 표면에 등쪽으로 놓고 무릎이 위를 향하도록 합니다. 무릎을 약 90°로 구부리고 이 자세를 유지합니다. 무릎을 굴곡 상태로 유지하려면 수술용 테이프를 사용하거나 안락사 후 수행하는 경우 해부 핀을 사용하여 다리를 고정하십시오. 설명된 대로 캘리퍼스를 사용하여 무릎 너비를 측정합니다.
  3. 또는 마취를 선호하지 않는 경우 한 사람이 동물을 부드럽게 제지하고 다른 사람이 무릎 너비를 측정할 수 있도록 여러 사람과 함께 측정합니다.
  4. 신뢰성을 보장하려면 각 무릎을 최소 두 번 측정하십시오. 부상당한 무릎과 반대쪽(다치지 않은) 무릎 모두에 동일한 기술을 적용합니다. 데이터를 절대값이 아닌 두 무릎 사이의 차이(델타 무릎 크기)로 보고하여 측정 기술 및 개별 마우스 크기의 변화로 인한 변동성을 줄입니다.

6. 활액 채취(무릎 관절 세척)

  1. 국가 면허 규정, 현지 지침 및 실험 프로토콜에 따라 승인된 방법을 사용하여 동물을 안락사시킵니다. 본 연구에서는 CO2 질식 후 자궁경부 탈구를 이용하여 안락사를 시행하였다.
  2. 무릎 위로 전방 세로 절개를 하고 피부와 밑에 조직을 해부하여 슬개건과 슬개골을 완전히 노출시켜 무릎 관절을 노출시킵니다.
  3. 11번 블레이드를 사용하여 슬개골의 중간점에서 슬개골의 위쪽 가장자리까지 연장되는 슬개인대의 내측을 따라 관절낭을 엽니다(그림 6A, B).
  4. 슬개골을 옆으로 부드럽게 움직여 관절 공간에 접근하고 주변 구조물이 손상되지 않도록 주의하십시오.
  5. 무릎을 약 120°로 구부려 관절강이 활액 수집을 용이하게 하기 위해 세척을 위한 적절한 위치에 있는지 확인합니다(그림 6C).
  6. 100μL의 실온 인산염 완충 식염수(PBS)로 튜브를 미리 채웁니다.
  7. P10 피펫을 사용하여 2.5μL의 실온 PBS(그림 6D-F)로 연속 무릎 세척을 수행하고 미리 채워진 튜브에 추가하여 총 8회 반복합니다. 무릎 세척액의 누적 부피는 120μL에 도달해야 합니다.
  8. 무릎 세척액을 4°C에서 240g에서 5분 동안 원심분리하여 상청액에서 세포 성분을 분리합니다.
    참고: 세포 성분은 세포 계수, CytoSpin 분석 또는 유세포 분석에 사용할 수 있습니다. 유세포 분석의 경우, 정확한 분석을 위해 충분한 세포를 얻기 위해 여러 동물의 샘플을 풀링해야 할 수 있습니다.
  9. 향후 분석을 위해 상청액을 -80°C에서 보관하십시오.
    참고: 이 연구에서 상청액은 전염증성 사이토카인 및 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP)의 다중 분석에 사용되었습니다.

7. MicroCT 분석(원위 대퇴골의 PTOA 중증도)

  1. 샘플 준비: 활액을 채취한 후 원위 대퇴골과 근위 경골을 조심스럽게 해부하여 경골 대퇴 관절을 채취하여 관절 무결성이 보존되도록 합니다.
    알림: 무릎 주변의 과도한 근육 조직을 제거하되 뼈 구조의 무결성을 보존하기 위해 주의하십시오. 활막염이 조직학으로 분석되는 경우 활막 조직을 보존합니다. 전염증 마커가 qPCR을 통해 평가되는 경우 독립적으로 수확합니다.
  2. 샘플을 4°C에서 4% 파라포름알데히드(PFA)에 5일 동안 고정합니다. 70% 에탄올에 옮기고 4°C에서 보관합니다.
  3. 7μm 등방성 복셀 크기, 55kVp X선관 전압, 0.145mA 전류, 투영당 600ms 적분 시간과 같은 매개변수를 사용하여 고해상도 microCT 스캔을 수행합니다.
  4. 스캔 후 추가 분석을 위해 microCT 데이터를 DICOM 파일로 내보냅니다.
  5. 시각화, 3D 재구성 및 분석을 위해 DICOM 파일을 이미지 처리 소프트웨어에 로드합니다.
  6. 3D 재구성 도구를 사용하여 무릎의 모든 영역을 평가하고 원위 대퇴골의 시상 보기에서 점수를 매기기 위해 후방에서 전방까지 4개의 관심 영역(ROI)을 식별합니다(그림 9)19 성장판의 후방 골, 성장판 피크의 후방, 성장판 피크의 전방, 및 성장판의 앞쪽 골짜기.
  7. ROI가 식별되면 관상 보기에서 해당 이미지를 선택합니다. 각 경골 대퇴 관절에 대해 총 4개의 이미지에 대해 각 ROI에 대해 반복합니다.
  8. 편견 없는 분석을 위해 이미지를 블라인드 파일로 저장합니다.
  9. 이전에 보고된 관상 microCT 이미지의 등급 PTOA 중증도19. 간단히 말해서, 이 반정량적 채점 시스템은 대퇴골 비대칭, 골극의 존재와 크기, 4개의 해부학적 위치에서 대퇴골 과두 편평화를 평가합니다. 그런 다음 각 부위를 0-6의 척도로 점수를 매기고 6이 가장 심각하여 총 점수는 24점입니다. 최소 두 명의 독립적인 맹검 심사관이 사이트에 점수를 매기고 최종 점수에 대한 평균을 내도록 합니다.
    참고: 두 명의 독립적인 검사관이 microCT 이미지를 평가해야 하며, 검사관은 편향을 줄이기 위해 실험 조건에 대해 눈이 멀어야 합니다. 최종 PTOA 점수는 두 시험관의 점수를 평균하여 결정됩니다.

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결과

ACLT 시술은 설치류 무릎에 골관절염을 유발하는 효과적이고 재현 가능한 수술 방법입니다. 무균 상태에서 ACLT 시술을 시행한 후, 생쥐는 절개 부위에 고통이나 감염의 징후를 보이지 않았으며 수술 사지에 파행의 징후 없이 자유롭게 움직였습니다.

ACLT 후 무릎 부종을 모니터링하기 위해 무릎 크기를 측정했습니다(그림 7A). 마우스 크기의 변화를 제어하기 위해 손상된 무릎의 너비를 반대쪽 무릎의 너비로 정규화했습니다. ACLT 후 무릎 크기는 기준선으로 향해 점차 감소하기 전에 크게 증가했습니다. 무릎의 활막액은 손상 후 염증 반응을 모니터링하기 위해 ACLT 후 다양한 시점에서 무릎 세척을 통해 채취되었습니다(그림 7B-F). 활액의 세포를 수동으로 계산하여 결정된 무릎 활막에서 백혈구 모집이 증가했으며 이는 ...

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토론

이 기술 설명은 ACL을 절개하여 마우스에서 ACL 손상을 유도하는 상세한 수술 방법을 제공하여 PTOA 연구를 위한 통제된 모델을 제공합니다. ACLT 수술 모델은 PTOA 유도를 위해 널리 사용되는 전임상 접근법이며 변경된 관절 생체 역학, 활막 염증 및 연골 분해를 포함하여 인간 ACL 손상에서 관찰되는 주요 병리학적 특징을 효과적으로 복제합니다(그림 7 및 그림 8)15,16,17,18,19. 또한, ACLT 후 염증 반응은 세포외 기질 ...

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1x 인산염 완충 식염수(PBS)사이티바SH30256.02
4% 파라포름알데히드피셔 사이언티픽AAJ19943K2
70% 에탄올피셔 사이언티픽BP82031GAL
흡수성 6-0 봉합사패터슨 수의학 공급07-893-1916
뭉툭한 끝 겸자 정밀 과학 도구11051-10
면봉피셔 사이언티픽22-029-685
해부 현미경라이카 마이크로시스템즈M165 FC
전기 면도기브레인트리 사이언티픽 CLP-9961
에탄올 물티슈피셔 사이언티픽22-246073
에티카 XR(부프레노르핀 SR)코버투스721171.3 mg/mL
눈 윤활제패터슨 수의학 공급NC1701236 
가는 가위정밀 과학 도구14061-10
히트 패드피셔 사이언티픽NC1061604
호로스호로스horosproject.org
이소플루란 패터슨 수의학 공급07-890-8115
케타민패터슨 수의학 공급07-890-8598
멜록시캄패터슨 수의학 공급07-893-75655 밀리그램/mL
멀티플렉스 분석메조스케일디스커버리K15069M-1
바늘 홀더코드맨36-2000
11번 메스 정밀 과학 도구10011-00
P10 피펫길슨F144055M
P10 피펫 팁피셔 사이언티픽02-707-439
포비돈-요오드 면봉메드라인MDS093901ZZ
Scanco 의료 및 마이크로; CT-35 시스템스캔코https://www.scanco.ch/systems-overview.html7  µ m 복셀 크기, 55kVp, 0.145  mA, 600  MS
멸균 드레이프맥케슨 종합 의료NC2032042
수술용 안면 마스크피셔 사이언티픽18-048-010
수술용 장갑앙코르7823PF
수술용 테이프패터슨 수의학 공급07-888-0614
주사기BD3096231 mL
Vannas 스프링 가위세계 정밀 기기5017783mm 블레이드
버니어 캐필러네이코 01407A
자일라진 패터슨 수의학 공급07-893-8424

참고문헌

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