연구 논문

위암에서 공동자극분자 LLT1의 면역요법 효능 평가의 발현, 임상적 의의 및 역할

619 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68827

⸱

2025년 10월 10일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 2Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 3Jiangsu Institute of Clinical Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 4Jiangsu Key Laboratory of Clinical Immunology, Soochow University, 5Jiangsu Key Laboratory of Gastrointestinal Tumor Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University

이 논문에서

요약

본 연구에서는 다중오믹스 및 임상 분석을 통해 위암의 예측 면역요법 바이오마커로서 LLT1을 조사합니다. 이 연구는 향상된 치료 결과를 위한 정밀 면역 요법 접근법을 촉진하기 위해 면역 회피 및 종양 미세 환경 조절에서 LLT1의 역할을 평가합니다.

초록

LLT1은 새로운 면역 체크포인트 분자이자 잠재적인 치료 표적입니다. 면역 요법은 진행성 위암의 결과를 개선했습니다. 그러나 많은 환자들이 반응하지 않거나 내성을 나타내지 않으며 예측 바이오마커가 부족합니다. 위암 면역 회피에서 LLT1의 역할과 면역 요법 반응에 미치는 영향은 아직 불분명합니다. 이를 평가하기 위해 면역 세포 침윤을 정량화하기 위해 여러 알고리즘(TIMER, CIBERSORT 및 ESTIMATE)을 사용하여 TCGA(Cancer Genome Atlas) 위 선암종 데이터 세트에서 LLT1 발현을 분석했습니다. 단백질 발현은 268개의 위 선암종 샘플에서 면역조직화학(IHC)과 115개의 면역요법 후 조직에서 다중 면역형광(MIF)에 의해 검증되었습니다. 통합 전사체 및 단백질체 데이터는 종양 미세 환경 특징 및 임상 면역 요법 결과와의 연관성에 대해 분석되었습니다. 결과는 높은 LLT1 단백질 발현이 덜 진행된 종양 특성(낮은 침윤 깊이 및 결절 전이; P < 0.05) 및 더 긴 전체 생존(P = 0.012). LLT1 mRNA 및 단백질 수준은 종양 미세 환경에서 더 큰 CD8+ T 세포 및 M1 대식세포 침윤 및 증가된 PD-L1 발현과 상관관계가 있었습니다. 예후 데이터가 있는 198명의 환자로 구성된 첫 번째 코호트 중에서 LLT1 발현이 높은 환자(n=117)는 발현이 낮은 환자(n=81)에 비해 전체 생존 기간이 유의하게 더 긴 것으로 나타났습니다. 면역요법과 화학요법을 병용한 환자의 두 번째 코호트에서 LLT1 발현이 높은 종양(n=48)은 LLT1 발현이 낮은 종양(n=67)보다 무진행 생존 기간(P = 0.014)이 더 길었습니다. PD-1+CD161+ 면역 세포 집단의 유의미한 증가(P < 0.05)는 치료 저항성 환자(n=53)에 비해 면역요법 효과 환자(n=62)에서 관찰되었습니다. 결론적으로, LLT1 발현은 위암에서 유리한 예후의 유망한 바이오마커입니다. 우리가 아는 한, 이것은 LLT1 발현이 위암에서 화학 요법과 면역 요법의 병용 요법에 대한 반응 개선을 예측하여 면역 치료 전략을 안내하는 잠재력을 뒷받침한다는 것을 입증한 최초의 연구입니다.

서론

위식도암, 특히 위암(GC)은 전 세계적으로 5번째로 흔한 암 형태이자 5번째로 치명적인 암이라는 특징을 가지고 있습니다. 글로벌 통계에 따르면 매년 약 100만 건의 새로운 사례가 확인되며, 동아시아가 질병의 불균형적인 비중을 차지하여 전 세계 발병률의 절반 이상을 차지합니다1. 초기 GC 진단을 받은 환자의 경우 생존 전망이 상당히 유리하며, 내시경적 점막하 박리술(ESD) 또는 근치적 외과적 개입 후 90% 이상이 5년 생존율을 달성합니다2. 그러나 초기 증상의 미묘한 표현은 종종 국소 진행성 또는 전이성 단계의 진단으로 이어집니다 3,4. 이러한 진행 단계의 환자의 전망은 암울하며, 치료받지 않은 환자의 전체 생존(OS) 중앙값은 겨우 6개월에 불과합니다. 플루오로우라실과 백금을 기반으로 한 병용 화학요법을 투여하더라도 OS 중앙값은 약5년으로 연장됩니다.

최근에는 면역관문억제제라는 신약으로 인해 말기 위암 치료에 큰 변화가 있었습니다. 이는 특정 마커인 PD-L1이 나타나는 암세포에 대한 마법의 총알과 유사하며, CPS(Combined Positive Score) 척도에서 최소 1점을 받았습니다. 이러한 치료법은 또한 높은 현미부수체 불안정성(MSI-H)이라고 하는 DNA에 모두 혼합된 암에 매우 효과적입니다. 이 새로운 접근 방식은 환자에게 더 많은 시간을 제공하는 데 차이를 만듭니다 6,7. 중추적인 임상 시험에 따르면 PD-L1 양성 코호트 내에서 CPS가 10 이상인 개인은 PD-1 단클론 항체로 치료한 후 생존율이 더 뚜렷하게 증가합니다 8,9. 그럼에도 불구하고 현재의 면역요법은 일반적으로 20% 미만의 객관적 반응률(ORR), 40%-60%의 높은 2차 내성률, 불완전한 바이오마커 예측 시스템(기존 바이오마커는 잠재적 수혜자의 30%-40%만 식별할 수 있음), 면역 관련 부작용(irAE) 관리의 어려움 등 여전히 여러 가지 임상적 과제에 직면해 있습니다.10,11,12,13,14. 이중 면역 체크포인트 차단(예: PD-1/CTLA-4 억제 병용) 또는 화학면역요법 요법이 반응률을 40%-60%로 증가시킬 수 있지만 환자의 약 절반은 여전히 지속적인 임상적 이점을 달성하지 못합니다15. 따라서 다중 오믹스 특징을 기반으로 한 정밀 분류 시스템 구축, 새로운 예측 바이오마커 발견, 새로운 면역 체크포인트 식별은 GC 면역 요법의 임상 결과를 개선하기 위한 중요한 연구 방향이 되었습니다.

LLT1(Lectin-like Transcript 1)은 C형 렉틴 관련 단백질로, 식별된 결합 파트너 역할을 하는 자연 살해(NK) 세포 수용체 계열의 구성 요소인 CD161을 포함합니다. 합성을 담당하는 CLEC2D 유전자는 특정 엑손을 우회하는 선택적 스플라이싱 이벤트를 통해 5개의 별개의 이소형을 생성합니다. LLT1로 알려진 변이체 1은 세포막16,17에 존재하는 유일한 변이체로 검증되었습니다. LLT1 발현은 B 림프구, NK 세포, 수지상 세포(DC), 특정 T 세포 집단(활성화 및 조절 T 세포 포함), 단핵구 및 대식세포와 같은 다양한 면역 세포 유형에서 주로 관찰되며, 특정 악성 세포 및 염증 에피소드 동안에도 관찰됩니다18. 초기 연구 결과는 LLT1이 톨 유사 수용체(TLR) 자극 후 DC 및 B 세포에서 상향 조절된다는 것을 나타냅니다. LLT1과 CD161의 결합은 NK 세포 매개 세포독성을 억제하는 것으로 나타났으며, 이는 면역 반응 조절에 관여함을 시사합니다18. B 세포에서 LLT1 발현은 바이러스 감염 또는 염증 자극에 의해 상향 조절됩니다. 항원 제시 세포(APC)로 기능할 때 LLT1-CD161 상호작용은 T 세포 증식 또는 IFN-γ 생산을 공동 자극하면서 NK 세포 기능을 억제함으로써 이중 면역 조절 효과를 발휘합니다19.

LLT1은 삼중 음성 유방암, 교모세포종, B 세포 비호지킨 림프종을 포함한 다양한 암세포에 존재하는 것으로 알려져 있습니다. 이 단백질은 NK 세포에서 발견되는 CD161 수용체와 관여하여 암세포를 파괴하는 능력을 효과적으로 차단하여 면역 반응 회피를 돕습니다 20,21,22. HPV 음성 구인두 편평 세포 암종에서 주목할만한 관찰은 LLT1의 가변적 발현이며, 면역조직화학적 연구에 따르면 3차 림프 구조(TLS) 내에서 높게 발현될 때 긍정적인 예후 중요성을 나타내는 반면, 종양 세포에서의 존재는 더 나쁜 결과와 관련이 있습니다23. 또한, 비소세포폐암(NSCLC)의 맥락에서 LLT1은 암세포 자체에서 검출되지 않고 종양 미세환경(TME) 내에서 발견되며, mRNA 발현 수준은 더 나은 예후와 관련이 있습니다24.

Mathewson et al. 신경아교종 연구에서, CD161을 차단하면 시험관 내에서 신경아교종 세포의 T 세포 매개 사멸이 향상되고 생체 내에서 항종양 기능이 향상되어 면역 체크포인트 표적으로서의 CD161의 치료 잠재력이 강조됩니다25. LLT1이 CD161의 표준 리간드라는 점을 감안할 때18, 면역 치료 표적으로서의 역할은 진지한 고려가 필요합니다. 면역요법에서 PD-1과 PD-L1 사이의 중요한 상호작용과 유사하게 위암에서 LLT1의 생물학적 기능과 면역요법 결과와의 상관관계를 조사하는 것은 상당한 임상적 가치를 지닌다.

이 연구는 mRNA와 단백질 수준 조사를 모두 통합하여 위암 종양 미세 환경 내에서 LLT1 발현 패턴에 대한 포괄적인 분석을 제공합니다. 진행성 위암의 예후 바이오마커로서 LLT1의 잠재력을 체계적으로 평가하고 면역요법 효능에 대한 예측 가치를 평가합니다. 이러한 통찰력은 임상 번역 잠재력에 대한 더 깊은 이해에 기여합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

인간을 대상으로 한 연구는 수주대학교 제1부속병원 윤리위원회의 검토 및 승인을 받았습니다(승인 번호 2019026). 수주대학교 제1부속병원 윤리심사위원회는 이 데이터 사용에 대한 윤리적 심사를 승인하거나 면제했습니다. 또한 모든 참가자로부터 정보에 입각한 동의를 얻었습니다.

생물정보학 데이터 분석
TCGA 및 TIMER(Tumor IMmune Estimation Resource) 데이터베이스에 대한 철저한 범암 발현 분석 검사 후, 특히 위암에 초점을 맞춰 다양한 암 유형에 걸쳐 LLT1의 거동을 조사했습니다. TISIDB 데이터베이스는 LLT1 발현 수준과 위암의 다양한 분자 아형 사이의 상관관계를 조사하는 데 활용되었습니다. 환자의 임상적 특성과 LLT1 발현 사이의 상관관계는 R 프로그래밍을 통해 TCGA 데이터로 추가로 분석되었습니다. 위 발암에서 LLT1의 기능적 역할을 조사하기 위해 GO 및 KEGG 분석을 사용했습니다. LLT1 발현 패턴에 따라 종양 조직의 면역 및 간질 세포 침윤 수준을 정량화하기 위해 ESTIMATE(발현 데이터를 사용한 MAlignant 종양 조직에서 간질 및 면역 세포 추정) 알고리즘을 추가로 사용했습니다. 종양 미세 환경 내에서 LLT1 발현 수준과 특정 면역 세포 침윤 패턴 사이의 상관관계를 평가하기 위해 CIBERSORT 알고리즘을 활용한 추가 분석을 수행했습니다. LLT1 발현 프로필과 면역 조절 바이오마커 간의 잠재적 상관 관계를 조사하기 위해 TCGA 데이터 세트 및 R 통계 프로그래밍(v4.4.1)을 사용하여 포괄적인 생물정보학 분석을 수행했습니다. 마지막으로, TCIA(The Cancer Immunome Atlas) 데이터베이스를 활용하여 LLT1 발현이 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트 차단 요법에 대한 반응을 예측할 수 있는지 여부를 조사했습니다.

GAC 표본 및 조직 마이크로어레이(TMA) 구성
다음과 같이 두 세트의 조직 마이크로어레이 데이터가 생성되었습니다.

첫 번째 세트는 2011년에 수술을 받은 GAC 환자 268명의 표본을 후향적으로 분석했습니다. 병리학자들은 파라핀 블록을 선택하고 종양 핵심 영역을 식별한 다음 이를 조직 마이크로어레이로 구성했습니다. 모든 개별 샘플 부위에는 성별, 연령, 신생물 크기, 종양 분화 정도, 암 진행 단계, 침윤 깊이, 림프 침범 및 원격 확산 유무와 같은 관련 임상 매개변수를 꼼꼼하게 모니터링하기 위해 고유한 식별자가 할당되었습니다. 전체 생존 기간(OS)은 치료 시작부터 사망 발생 또는 2017년 12월 마감일까지의 간격으로 정의되었습니다. 포괄적인 OS 데이터는 198명의 참가자 중 일부에 대해서만 사용할 수 있다는 점을 강조해야 합니다.

두 번째 세트에는 2016년부터 2023년까지 수저우대학교 제1부속병원에서 수술/내시경 절제술을 받은 치료 경험이 없는 진행성 GC 환자 115명이 포함되었습니다. 병리학자들은 파라핀 블록을 평가하고 질병 진행을 면밀히 추적하면서 조직 마이크로어레이를 구성했습니다. 특히, 모든 검체는 수술 전 치료 전에 채취되었으며, 수술 후 치료는 주로 화학 요법과 결합된 PD-1 단클론 항체로 구성되었습니다.

모든 외과적 절제 표본은 위 전정부에서 채취되었습니다. 모든 샘플은 중성 완충 포르말린에 고정되고 파라핀에 포매되었습니다. H&E 염색 절편의 평가를 기반으로 두 명의 선임 병리학자가 파라핀 포매 표본에서 가장 대표적인 조직 영역을 독립적으로 식별했습니다. 조직 마이크로어레이(TMA)는 사전 정의된 모듈에 따라 조직 코어가 TMA 블록에 정확하게 배치된 자동화된 조직 어레이어를 사용하여 구성되었습니다. 마지막으로, 완성된 TMA 블록은 숙련된 조직기술자에 의해 4μm 두께로 절편되었습니다.

면역조직화학(IHC) 및 다중 면역형광(mIHC)
면역조직화학적 및 다중 면역형광 분석은 구성된 조직 마이크로어레이에서 수행되었습니다. IHC 염색은 이전에 확립된 방법론(26)에 따라 수행되었습니다. 마이크로어레이 파라핀 절편의 첫 번째 세트를 유리 슬라이드에 옮기고 72°C에서 1시간 동안 구웠습니다. 절편을 자일렌으로 탈파라핀화하고 연속적으로 증가된 에탄올 희석액으로 재수화한 후, 30분 동안 과산화효소 차단 용액을 적용하여 내인성 과산화효소 활성을 차단하였다. 항원 회수는 슬라이드를 구연산염 항원 회수 용액(pH 6.0)에서 110°C에서 3분 동안 끓여서 수행하였다. 5% BSA 차단 완충액으로 차단한 후, 절편을 마우스 항인간 CLEC2D 단클론, 마우스 항인간 CD3 단클론(사용 준비), 마우스 항인간 CD4 단클론(사용 준비), 토끼 항인간 CD8 단클론(사용 준비), 마우스 항인간 CD11c 단클론(1:50), 마우스 항인간 CD19 단클론(사용 준비), 마우스 항인간 CD31 단클론(사용 준비), 마우스 항인간 CD56 단클론(즉시 사용), 마우스 항인간 CD68 단클론(즉시 사용), 토끼 항인간 Foxp3 단클론(1:50), 마우스 항인간 IL-17 단클론(1:50), 마우스 항인간 IFN-γ 단클론(1:50), 마우스 항인간 Ki67 단클론(1:50), 마우스 항인간 PD-L1 단클론(사용 준비) 4°C에서 밤새27,28. 그런 다음 슬라이드를 세척하고 양 고추냉이 과산화효소 표지 2차 항체(항-마우스 및 토끼)와 함께 실온에서 30분 동안 배양했습니다. 배양 후 샘플을 세척하고 면역 검출을 위해 EnVision 검출 시스템을 사용했습니다. 현미경으로 칩에 갈색 영역이 나타나기 시작하면 주의 깊은 관찰이 필요합니다. 갈색 영역이 더 이상 증가하지 않으면 발색 반응을 중지해야 합니다. 슬라이드는 Mayer의 헤마트실린으로 대조염색되고 중성 접착제로 장착되었습니다. 음성 대조군에서는 1차 항체 대신 마우스 또는 토끼 IgG를 사용했습니다. 양성 대조군은 인간 편도선 조직이었습니다. 마이크로어레이 절편의 두 번째 세트는 다중 면역조직화학(mIHC)에 사용됩니다. 앞서 언급한 항원 검색 및 차단 조건을 재사용하면, 항체 패널은 PD-L1 (480 nm), CD161 (520 nm), LLT1 (570 nm), PD-1 (620 nm), CD8 (690 nm) 및 PAN-CK (780 nm)와 같이 스펙트럼적으로 최적화된다. 1차 항체를 원래 프로토콜29(새로 도입된 PANCK 및 CD161 제외)와 동일한 조건에서 권장 1:100 희석으로 배양한 후 티라마이드 신호 증폭(TSA) 형광 염색을 수행했습니다. 각 형광 염색 후 항체 스트리핑을 수행한 후 다음 1차 항체를 배양하기 전에 반복적인 항원 회수, 내인성 과산화효소 차단 및 비특이적 표적 차단을 수행합니다. 다중 면역조직화학을 수행할 때 세 가지 사항이 중요합니다: 각 형광 염료에 대해 사전 실험을 수행해야 하고, 강하게 발현된 항체는 약한 형광 신호와 짝을 이루어야 하며, 약하게 발현된 항체는 강한 형광 신호와 짝을 이루어야 하며, 각 형광 마커를 염색한 후 염색 결과는 빛 보호 조건에서 현미경으로 관찰해야 합니다. 6번째 형광 염료로 염색한 후 DAPI 대계염색을 적용하여 세포핵을 표지하고 슬라이드를 장착합니다. 마지막으로 모든 조직 마이크로어레이를 디지털 병리학 스캐너를 사용하여 스캔하고 AI 기반 디지털 병리학 이미지 분석 소프트웨어로 분석했습니다.

IHC/mIHC 염색 평가
염색 결과는 두 명의 전문 병리학자에 의해 이중 맹검 방식으로 해석되었습니다. 그들은 고배율 대물렌즈(200배 배율) 또는 일치하는 형광등 설정(200배)을 사용하여 염색 깊이를 측정하고 0(염색 없음)에서 3(강렬한 염색) 범위의 점수를 할당했습니다. 위암 샘플 내 LLT1 양성 세포의 분획은 0(<5%), 1(5-25%), 2(26-50%) 및 3(>50%)의 네 가지 계층화로 나뉩니다. 면역반응성 점수(IRS)는 LLT1 양성 세포의 염색 깊이와 비율의 곱에서 파생되었습니다. 점수가 0인 표본은 음성으로 간주된 반면, 1-4점은 약한 발현, 5-7은 중등도, 8-9점은 강한 발현을 나타냅니다. Ki67 및 CD3와 같은 다른 마커의 발현을 평가하기 위해 동일한 기준이 적용되었습니다. 평가 및 그룹화 방법론에 따라 샘플은 강함(IRS8-9), 중간(IRS5-7), 약함(IRS1-4) 또는 발현 없음(IRS0)으로 표시되었습니다. 점수가 가장 낮은 환자(IRS≤4)는 저발현군에, 점수가 높은 환자(IRS≥5)는 고발현군에 배정되었습니다.

그러나 PD-L1 마커의 경우 CPS를 사용하여 다른 접근 방식이 채택되었습니다. 이 점수는 100배 증가한 생존 가능한 종양 세포의 총 수에 대한 PD-L1 양성 세포(종양, 면역 및 간질 세포 포함)의 비율에 의해 결정되었습니다. CPS가 5를 초과하는 개인은 고발현 코호트에 배치되었고, CPS가 5 이하인 개인은 저발현 코호트로 그룹화되었습니다.

면역요법 반응 그룹화
고형 종양 버전 1.1(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors) 버전 1.1(RECIST 1.1)에 따라 환자의 표적 병변 평가는 네 가지 범주로 나뉩니다. (a) 완전 반응(CR): 모든 표적 병변이 완전히 사라졌으며 모든 병리학적 림프절의 단축(표적 및 비표적 모두)은 10mm 미만이어야 합니다. (b) 부분 반응(PR): 측정 가능한 모든 표적 병변의 누적 직경이 기준선 측정값에서 최소 30% 감소했습니다. (c) 진행성 질환(PD): 이 범주는 표적 병변의 누적 직경이 연구 중 기록된 가장 작은 값에 비해 최소 20% 증가한 경우에 적용할 수 있습니다(가장 작은 값을 나타내는 경우 기준선을 기준으로 사용), 절대 증가는 5mm 이상입니다. 또한 새로운 병변의 출현도 진행성 질환(PD)으로 분류됩니다. (d) 안정 질환(SD): 표적 병변의 누적 직경은 연구 전반에 걸쳐 PR에 대한 감소 기준이나 PD에 대한 증가 기준을 달성하지 못합니다. 두 가지 계층화 기술이 구현되었습니다. 첫 번째 방법은 반응 상태에 따라 환자를 분리하는 것이었는데, 여기서 PD(n=53) 및 SD(n=46) 환자는 무반응자 그룹(n=99)을 구성하고 PR(n=15) 및 CR(n=1) 환자는 반응자 그룹(n=16). 두 번째 접근법은 질병 진행에 따라 환자를 분류하는 것을 수반했으며, CR, PR 및 SD 환자는 면역요법 효과 코호트(n=62)로, PD 환자는 면역요법 비효과 코호트(n=53)로 분류되었습니다.

통계 분석
경험적 평가는 R 컴퓨팅 플랫폼(버전 4.4.1) 및 SPSS Statistical 소프트웨어 패키지(버전 27.0)를 사용하여 수행되었습니다. 연구 코호트 간의 격차는 카이제곱 분할표 분석을 적용하여 조사되었습니다. Spearman의 비모수 상관 기법은 변수 간 연관성의 강도와 방향을 조사하는 데 사용되었습니다. 생존 시간 변화는 유의성에 대한 로그 순위 테스트로 보완된 Kaplan-Meier 추정기의 구성을 통해 분석되었습니다. 그 후, Cox 비례 위험 회귀 모델을 사용하여 환자 생존 결과에 잠재적으로 영향을 미치는 요인을 식별했습니다. 통계적 유의성은 <0.05의 양측 p-값 임계값으로 미리 정의되었습니다. 결과의 견고성을 보장하기 위해 포괄적인 민감도 분석을 수행하여 잠재적인 교란 변수를 평가하고 그에 따라 다변량 모델을 조정했습니다. 또한, 임상적 이해를 촉진하기 위해 위험비에 대한 명시적인 해석이 제공되었으며, 확인된 위험 요인이 환자 예후에 미치는 실질적인 의미를 강조했습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

CLEC2D mRNA 발현과 위암 하위 분류/임상 매개변수 사이의 연관성
TIMER 데이터베이스에 의해 촉진된 TCGA 데이터 세트를 활용한 초기 종합 암 검사에서는 그림 1A에 표시된 바와 같이 다양한 암 조직에서 CLEC2D 전사체 수준이 눈에 띄게 상승한 것으로 나타났습니다. 이 관찰은 CLEC2D가 다양한 암의 병인 및 진화와 관련된 일반적인 발암성 인자 역할을 할 수 있음을 의미합니다. 암성 위조직과 비암성 위 조직 간의 CLEC2D mRNA 수준을 세심하게 비교한 결과 TCGA-STAD 데이터 세트를 사용하여 수행되었습니다. 408개의 일치하지 않는 샘플을 평가한 결과 정상 표본에 비해 종양 표본에서 CLEC2D mRNA 발현이 통계적으로 유의미하게 증가한 것으로 나타났습니다(P < ...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

우리의 연구는 정상 조직보다 종양 조직에서 더 높은 CLEC2D mRNA 발현을 보여주었습니다. 위암의 면역조직화학적 결과는 종양 조직에서 높은 LLT1 단백질 발현이 더 나은 예후와 관련이 있으며 종양 미세 환경에서 면역 세포 침윤과 양의 상관관계가 있는 것으로 나타났습니다. 면역요법을 받는 위암 환자의 조직을 분석한 결과 LLT1 발현이 높을수록 더 나은 면역치료 반응이 예측되는 것으로 나타났습니다. 본 연구는 위암 조직에서 LLT1의 발현과 임상적 의의를 탐구하여 위암의 임상면역요법에 대한 새로운 평가 마커를 제공했습니다

CLEC2D mRNA 발현 수준과 해당 단백질 수준 사이의 불일치가 관찰되었습니다. 이러한 불일치는 CLEC2D 유전자의 5개의 선택적으로 접합된 변이체의 존재에 기인할 수 있으며, 그 중 하나만이 기능적 LLT1 단백질을 암호화합니다. 다른 4개의...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 잠재적인 이해 상충을 보고하지 않았습니다.

감사의 글

데이터 지원을 제공하기 위해 TCGA 데이터베이스로 감사의 표시가 확장됩니다. 이 연구는 중국 국가자연과학재단(보조금 번호 81974375)과 쑤저우 과학기술발전계획(SKY2022129) 보조금의 지원을 받았습니다. 이 연구는 ARRIVE 지침을 준수합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
5% BSA 차단 버퍼베이징 솔라바이오 사이언스 & 기술 유한 회사, 중국SW3015
항-CD11c ZSGB-BIO, 중국5D11
항-CD161Abcam,케임브리지, 영국AB302564
항-CD19   ZSGB-BIO, 중국EPl69
항-CD3 ZSGB-BIO, 중국LNl0
항-CD31ZSGB-BIO, 중국  우맙30
항-CD4ZSGB-BIO, 중국우맙64
항-CD56 ZSGB-BIO, 중국우맙83
항-CD68 ZSGB-BIO, 중국KP1
안티 CD8ZSGB-BIO, 중국334 회
안티 CLEC2DAbcam,케임브리지, 영국AB197341
안티 Foxp3R& D Systems, 미국1054씨
항-IFN-&감마;  산타크루즈 생명공학SC-74108
항-IL-17R& D Systems, 미국  MAB317 
안티 Ki67 ZSGB-BIO, 중국8H5
안티 팬 사이토케라틴 Abcam,케임브리지, 영국AB7753
안티 PD-1Abcam,케임브리지, 영국AB137132
안티 PD-L1DAKO,덴마크22C3
자동화된 조직 어레이 장비Estigen OU, 타르투, 에스토니아비처 ATA 27이 기기는 주로 조직 마이크로 어레이 (tissue microarray) 의 구성에 사용됩니다.
구연산염 항원 회출 용액Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd , 중국C752119
DAB 발색제 키트 AiFang 생물학, 중국AFIHC004
디지털 병리학 스캐너Ningbo Jiangfeng Bio-Information Technology Co., Ltd, 중국KF-FL-020이 기기는 주로 면역조직화학 및 다중 면역조직화학 칩을 스캔하는 데 사용됩니다.
그래프패드 프리즘 10GraphPad 소프트웨어, 미국버전 10.0.3이 소프트웨어는 Kaplan-Meier 곡선 플로팅(로그 순위 통계 분석 포함), 과학적 데이터 시각화 및 그림 준비를 위한 것입니다.
PBSAladdin Biochemical Technology Co., Ltd , 중국P743267
과산화효소 차단 용액AiFang 생물학, 중국AFIHC012
폴리머-HRP 접합 염소 항마우스/토끼 2차 항체AiFang 생물학, 중국AFIHC001
6색 7마커 멀티플렉스 면역형광 염색 키트AiFang 생물학, 중국AFIHC037이 시약 키트는 다중 면역조직화학(mIHC)용으로 설계되었습니다.
스프스IBM Corporation, 미국IBM SPSS 통계 27이 소프트웨어는 데이터의 통계 분석에 활용되었습니다.
R 프로젝트R 핵심팀버전 4.4.1모든 R 패키지, 관련 코드 및 원본 파일이 공용 데이터베이스에 업로드되었습니다.
VISIOPHARM 소프트웨어Visiopharm, 덴마크2025.02.2.18022 x64이 소프트웨어는 주로 병리학적 이미지의 정량적 분석을 위해 설계되었습니다.

참고문헌

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  2. Suzuki, H., et al. Long-term survival after endoscopic resection for gastric cancer: Real-world evidence from a multicenter prospective cohort. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (2), 307-318.e2 (2023).
  3. Ma, S., et al. Clinical application and detection techniques of liquid biopsy in gastric cancer. Mol Cancer. 22 (1), 7(2023).
  4. Ugai, T., et al. Is early-onset cancer an emerging global epidemic? Current evidence and future implications. Nat Rev Clin Oncol. 19 (10), 656-673 (2022).
  5. Wagner, A. D., et al. Chemotherapy for advanced gastric cancer. Cochrane Database Syst Rev. 8 (8), Cd004064(2017).
  6. Chao, J., et al. Assessment of pembrolizumab therapy for the treatment of microsatellite instability-high gastric or gastroesophageal junction cancer among patients in the keynote-059, keynote-061, and keynote-062 clinical trials. JAMA Oncol. 7 (6), 895-902 (2021).
  7. Lee, K. W., et al. Association of tumor mutational burden with efficacy of pembrolizumab±chemotherapy as first-line therapy for gastric cancer in the phase III Keynote-062 study. Clin Cancer Res. 28 (16), 3489-3498 (2022).
  8. Wainberg, Z. A., et al. Efficacy of pembrolizumab monotherapy for advanced gastric/gastroesophageal junction cancer with programmed death ligand 1 combined positive score ≥10. Clin Cancer Res. 27 (7), 1923-1931 (2021).
  9. Zhao, J. J., et al. Low programmed death-ligand 1-expressing subgroup outcomes of first-line immune checkpoint inhibitors in gastric or esophageal adenocarcinoma. J Clin Oncol. 40 (4), 392-402 (2022).
  10. Zhu, Q., Zhang, R., Zhao, Z., Xie, T., Sui, X. Harnessing phytochemicals: Innovative strategies to enhance cancer immunotherapy. Drug Resist Updat. 79, 101206(2025).
  11. Khosravi, G. R., et al. Immunologic tumor microenvironment modulators for turning cold tumors hot. Cancer Commun (Lond). 44 (5), 521-553 (2024).
  12. Gibney, G. T., Weiner, L. M., Atkins, M. B. Predictive biomarkers for checkpoint inhibitor-based immunotherapy. Lancet Oncol. 17 (12), e542-e551 (2016).
  13. Sharma, P., Hu-Lieskovan, S., Wargo, J. A., Ribas, A. Primary, adaptive, and acquired resistance to cancer immunotherapy. Cell. 168 (4), 707-723 (2017).
  14. Naidoo, J., et al. Toxicities of the anti-PD-1 and anti-PD-L1 immune checkpoint antibodies. Ann Oncol. 27 (7), 1362(2016).
  15. Yang, M., Lin, W., Huang, J., Mannucci, A., Luo, H. Novel immunotherapeutic approaches in gastric cancer. Precis Clin Med. 7 (4), pbae020(2024).
  16. Germain, C., et al. Characterization of alternatively spliced transcript variants of clec2d gene. J Biol Chem. 285 (46), 36207-36215 (2010).
  17. Boles, K. S., Barten, R., Kumaresan, P. R., Trowsdale, J., Mathew, P. A. Cloning of a new lectin-like receptor expressed on human NK cells. Immunogenetics. 50 (1-2), 1-7 (1999).
  18. Rosen, D. B., et al. Cutting edge: Lectin-like transcript-1 is a ligand for the inhibitory human nkr-p1a receptor. J Immunol. 175 (12), 7796-7799 (2005).
  19. Germain, C., et al. Induction of lectin-like transcript 1 (llt1) protein cell surface expression by pathogens and interferon-γ contributes to modulate immune responses. J Biol Chem. 286 (44), 37964-37975 (2011).
  20. Marrufo, A. M., et al. Blocking llt1 (clec2d, ocil)-nkrp1a (cd161) interaction enhances natural killer cell-mediated lysis of triple-negative breast cancer cells. Am J Cancer Res. 8 (6), 1050-1063 (2018).
  21. Germain, C., et al. Lectin-like transcript 1 is a marker of germinal center-derived B-cell non-Hodgkin's lymphomas, dampening natural killer cell functions. Oncoimmunology. 4 (8), e1026503(2015).
  22. Roth, P., et al. Malignant glioma cells counteract antitumor immune responses through expression of lectin-like transcript-1. Cancer Res. 67 (8), 3540-3544 (2007).
  23. Sanchez-Canteli, M., et al. Lectin-like transcript 1 (llt1) checkpoint: A novel independent prognostic factor in hpv-negative oropharyngeal squamous cell carcinoma. Biomedicines. 8 (12), 535(2020).
  24. Braud, V. M., et al. Expression of llt1 and its receptor CD161 in lung cancer is associated with better clinical outcome. Oncoimmunology. 7 (5), e1423184(2018).
  25. Mathewson, N. D., et al. Inhibitory CD161 receptor identified in glioma-infiltrating T cells by single-cell analysis. Cell. 184 (5), 1281-1298.e26 (2021).
  26. Guo, L., et al. Association of increased B7 protein expression by infiltrating immune cells with progression of gastric carcinogenesis. Medicine (Baltimore). 98 (8), e14663(2019).
  27. Quan, Q., et al. Expression and clinical significance of PD-L1 and infiltrated immune cells in the gastric adenocarcinoma microenvironment. Medicine (Baltimore). 102 (48), e36323(2023).
  28. Varaden, D., Moodley, J., Onyangunga, O. A., Naicker, T. Morphometric image analysis of placental c-type lectin domain family 2, member d (clec2d) immuno-expression in hiv associated pre-eclampsia. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol X. 3, 100039(2019).
  29. Chen, S., et al. B7-h3 and CD47 co-expression in gastric cancer is a predictor of poor prognosis and potential targets for future dual-targeting immunotherapy. J Cancer Res Clin Oncol. 149 (18), 16609-16621 (2023).
  30. Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma. Nature. 513 (7517), 202-209 (2014).
  31. Cristescu, R., et al. Molecular analysis of gastric cancer identifies subtypes associated with distinct clinical outcomes. Nat Med. 21 (5), 449-456 (2015).
  32. Thorsson, V., et al. The immune landscape of cancer. Immunity. 48 (4), 812-830.e14 (2018).
  33. Tumeh, P. C., et al. Pd-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance. Nature. 515 (7528), 568-571 (2014).
  34. Lopez De Rodas, M., et al. Biological and clinical significance of tumour-infiltrating lymphocytes in the era of immunotherapy: A multidimensional approach. Nat Rev Clin Oncol. , (2025).
  35. Myojin, Y., et al. Multiomics analysis of immune correlatives in hepatocellular carcinoma patients treated with tremelimumab plus durvalumab. Gut. , (2025).
  36. Marvel, D., Gabrilovich, D. I. Myeloid-derived suppressor cells in the tumor microenvironment: Expect the unexpected. J Clin Invest. 125 (9), 3356-3364 (2015).
  37. Sautès-Fridman, C., Petitprez, F., Calderaro, J., Fridman, W. H. Tertiary lymphoid structures in the era of cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 19 (6), 307-325 (2019).
  38. Ye, Z., et al. Gastric cancer-derived exosomal let-7 g-5p mediated by serpine1 promotes macrophage m2 polarization and gastric cancer progression. J Exp Clin Cancer Res. 44 (1), 2(2025).
  39. Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. X. Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment. Nat Immunol. 14 (10), 1014-1022 (2013).
  40. Vivier, E., et al. Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science. 331 (6013), 44-49 (2011).
  41. Xiong, S., Dong, L., Cheng, L. Neutrophils in cancer carcinogenesis and metastasis. J Hematol Oncol. 14 (1), 173(2021).
  42. Mantovani, A., Locati, M. Tumor-associated macrophages as a paradigm of macrophage plasticity, diversity, and polarization: Lessons and open questions. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1478-1483 (2013).
  43. Niu, X., et al. Autophagy in cancer development, immune evasion, and drug resistance. Drug Resist Updat. 78, 101170(2025).
  44. Ikeda, H., et al. Immune evasion through mitochondrial transfer in the tumour microenvironment. Nature. 638 (8049), 225-236 (2025).
  45. Gabrilovich, D. I., Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system. Nat Rev Immunol. 9 (3), 162-174 (2009).
  46. Pan, Y., et al. The protective and pathogenic role of Th17 cell plasticity and function in the tumor microenvironment. Front Immunol. 14, 1192303(2023).
  47. Smyth, M. J., et al. Perforin-mediated cytotoxicity is critical for surveillance of spontaneous lymphoma. J Exp Med. 192 (5), 755-760 (2000).
  48. Galon, J., et al. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. Science. 313 (5795), 1960-1964 (2006).
  49. Galon, J., Bruni, D. Approaches to treat immune hot, altered, and cold tumours with combination immunotherapies. Nat Rev Drug Discov. 18 (3), 197-218 (2019).
  50. Chen, D. S., Mellman, I. Elements of cancer immunity and the cancer-immune set point. Nature. 541 (7637), 321-330 (2017).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

LLT1PD L1CD8 T

관련 논문