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방법 논문

마우스 조기 난소 기능 부전 모델의 준비 및 평가

1.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69000

⸱

2025년 9월 19일

 , 
1The First Hospital of Anhui University of Science and Technology'

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 시클로포스파미드 주사 를 통해 조기 난소 기능 부전 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다. 이 모델은 인간 조기 난소 기능 부전의 병리학적 진행을 효과적이고 쉽고 적응 가능하게 복제하여 높은 신뢰성과 비용 효율성을 보여줍니다.

초록

조기 난소 기능 부전(POI)은 여성 불임을 유발하는 중요한 상태이므로 기계 및 치료 연구를 위한 신뢰할 수 있는 동물 모델이 필요합니다. 여기에서는 시클로포스파미드(CTX) 유도 POI 마우스 모델을 설정하고 평가하기 위한 표준화된 프로토콜을 제시합니다. 규칙적인 발정 주기를 가진 6주에서 8주 사이의 암컷 마우스를 선택하고 복강내 CTX 주사를 받았습니다: 1일에 100mg/kg의 초기 용량, 이후 14일 동안 20mg/kg의 일일 용량. 발정 주기의 동적 변화는 Wright 염색과 함께 질 도말 세포검사를 통해 모니터링되었습니다. 내분비 변화를 평가하기 위해 ELISA를 사용하여 에스트라디올(E2), 난포 자극 호르몬(FSH) 및 항뮬러관 호르몬(AMH)의 혈청 수치를 정량화했습니다. 난소 조직병리학은 난포 폐쇄증을 정량화하기 위해 파라핀 포매 절편의 헤마톡실린-에오신(H&E) 염색을 통해 평가되었으며, 과립막 세포 세포사멸을 검출하기 위해 절단된 카스파제-3의 면역조직화학적 분석을 수행했습니다. 결과는 CTX 처리된 마우스에서 발정 주기성 중단, E2 및 AMH 수치 유의한 감소, FSH 농도 상승, 난포 폐쇄증 증가 및 과립막 세포 세포사멸 강화를 입증하여 성공적인 POI 모델링을 확인했습니다. 이 모델 구축 방법은 화학 요법으로 인한 난소 손상의 메커니즘을 고도로 모방할 수 있으며 난포 예비 고갈 및 성 호르몬 장애와 같은 전형적인 병리학적 특징을 나타냅니다. 이는 화학 요법의 생식 독성 메커니즘을 밝히고, 난소 보호 약물을 스크리닝하고, 생식력 보존 전략을 최적화하기 위한 신뢰할 수 있는 실험 플랫폼을 제공합니다. 또한 이 모델은 상대적으로 작동이 간단하고 비용이 저렴하며 생산 주기가 짧아 수행 및 대중화가 용이합니다. 이 방법론은 시각화 가능한 단계별 실험 시연에 대한 JoVE 의 요구 사항과 일치합니다.

서론

여성 생식 노화 장애의 가장 흔한 형태인 조기 난소 기능 부전(POI)은 에스트로겐 결핍 증상과 생식 기능 장애를 통해 환자의 신체적, 정신적 건강을 심각하게 손상시킬 뿐만 아니라 골절, 자가면역 질환, 심혈관 질환, 당뇨병 등을 포함한 동반 질환 발병 위험을 높입니다.1. 따라서 효율적이고 안전한 치료 전략의 개발은 현대 의학에서 매우 시급한 우선 순위가 되었습니다. POI 연구와 관련된 임상 샘플의 제한된 가용성, 다인성 병인 및 높은 윤리적 위험을 감안할 때 체계적인 기계론적 조사 및 안전성 검증을 허용하는 신뢰할 수 있는 동물 모델의 확립이 필수 불가결해졌습니다.

현재 화학 요법으로 유발된 난소 손상 모델은 POI 연구에 널리 활용되고 있습니다. 면역억제 특성을 지닌 알킬화제인 시클로포스파미드(CTX)는 강력한 성선 독성 화합물로 확인되었습니다. 그 메커니즘은 세포 증식을 억제하기 위한 DNA 가교 손상을 포함하며2, 난소 예비 세포의 세포사멸을 유도합니다 3,4. CTX 기반 모델은 원시 난포 고갈, 저에스트로겐혈증 및 난포 자극 호르몬(FSH) 수치 상승을 포함하여 POI의 임상적 특징을 효과적으로 요약합니다. 마우스의 복강내 CTX 주사는 빠른 복막 흡수를 통한 높은 생체이용률, 최소한의 기술적 변동성을 통한 표준화된 조작성, 대규모 연구를 위한 비용 효율성 등 뚜렷한 이점을 제공합니다. 특히, 생쥐의 난소 구조는 인간과 매우 유사하여 난포 고갈과 호르몬 변화를 역동적으로 관찰할 수 있습니다. 더욱이 생쥐는 가격이 저렴하고 번식률이 빨라 대규모 샘플 연구 요구 사항을 충족합니다.

이러한 장점에도 불구하고 CTX 투여 요법(예: 단일 볼루스 대 분할 주사) 및 시간적 투여 기간의 이질성으로 인해 연구 전반에 걸쳐 일관되지 않은 모델링 결과가 발생했습니다. 이러한 격차를 해소하기 위해 우리는 마우스의 POI 유도를 위한 CTX 용량 및 투여 빈도를 최적화하는 체계적인 프로토콜을 제시합니다. 본 연구는 난소 예비력 고갈, 호르몬 조절 장애 및 조직병리학적 상관관계에 대한 정량적 평가를 통해 재현 가능한 모델을 확립하여 기계론적 탐색 및 치료 스크리닝을 위한 강력한 플랫폼을 제공하는 것을 목표로 합니다.

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프로토콜

이 프로토콜은 Anhui Shendong Biotechnology Development Co., Ltd.의 윤리 위원회(윤리 번호: SDLL202502281)의 검토 및 승인을 받았습니다. 이 연구는 모든 동물 실험 절차에서 실험실 설치류의 관리 및 사용에 관한 국립 보건원(National Institutes of Health)의 지침을 준수합니다. 이 실험에 사용된 암컷 C57BL/6 마우스는 생후 6-8주였으며 특정 병원체 없는(SPF) 조건에서 유지되었습니다. 근친 교배 계통 및 C57 계통의 하위 계통인 C57BL/6 마우스는 검은색 털이 특징입니다. 실험 전에, 마우스는 자연적인 일주기 리듬을 모방하기 위해 12시간의 빛/암 주기로 통제된 온도 및 습도 조건 하에서 동물 실험실에서 1주일 동안 적응했습니다. 적응 기간 동안 쥐는 음식과 물에 대한 자유 로운 접근을 제공받았습니다.

1. 동물 준비

참고: 정상적인 발정 주기를 가진 6-8주 된 24마리의 암컷 SPF 등급 C57BL/6 마우스를 선택합니다. 연속 10일 동안 오전 9:00에 마우스로부터 질 세척액을 수집하여 박리된 질 세포의 도말을 준비합니다. 발정기 주기를 관찰하고 적어도 하나의 연속적이고 완전한 주기를 가진 마우스를 선택하십시오.

  1. 실험 전 1주일 동안 마우스가 환경에 적응하도록 합니다. 적응 기간 후에 귀 펀치를 사용하여 마우스를 표시합니다. 표시 직후 체중 측정값을 기록합니다.
  2. 자연적인 스트레스로 인한 배뇨가 발생할 때까지 쥐를 단단히 잡습니다. 왼손의 엄지와 검지 사이에 목 등쪽 피부를 꼬집어 고정시킵니다. 복부가 완전히 노출되도록 마우스 머리를 아래로 향하게 합니다.
  3. 멸균 피펫 팁을 마이크로 피펫에 넣습니다. 멸균 생리 식염수 10μL를 흡인합니다. 질관을 통해 세 번의 순차적 세척 주기를 수행합니다. 피펫 팁 안에 세척액을 유지합니다.
  4. 세척액을 유리 현미경 슬라이드 전체에 고르게 분배합니다. 실온에서 완전히 공기 건조 슬라이드. 보존을 위해 세포를 95% 에탄올에 담가 고정합니다. 실험 매개변수로 슬라이드에 포괄적으로 라벨을 붙이고 처리하지 않을 때는 4°C의 차광 슬라이드 상자에 보호된 보관을 유지합니다.
  5. Wright의 염색 프로토콜
    1. 슬라이드를 95% 에탄올에 담그십시오(3-10분 동안). 증류수 흐름 아래에서 철저히 헹굽니다.
    2. 95% 에탄올 수조(1분 소요)를 통해 슬라이드를 옮깁니다.
    3. 깨끗한 여과지를 사용하여 헤마목실린 용액 표면에서 산화된 필름을 긁어냅니다. 슬라이드를 여과된 헤마트실린에 담그십시오(5분 동안).
    4. 증류수로 슬라이드를 헹굽니다. 1% HCl 용액에 잠깐(<1초) 담그십시오. 증류수 헹굼으로 완성됩니다.
    5. Orange G 및 EA50 용액을 사용하여 혼합 염색을 준비합니다. 혼합물에 얼룩이 미끄러집니다(3분 동안).
    6. 슬라이드를 3개의 순차적인 95% 에탄올 수조(5초 간격)에 통과시킵니다.
    7. 자일렌으로 2단계(각각 2분)로 처리합니다.
      알림: 자일렌 증기의 흡입을 방지하기 위해 연기 후드 내에서 작동하십시오. 사용 후 즉시 용기를 닫으십시오.
    8. 중성 수지 마운팅 매체를 사용하여 시편을 영구적으로 보존합니다.
  6. 현미경으로 슬라이드를 읽을 때 옅은 분홍색 세포질과 짙은 보라색 핵을 가진 세포를 유핵 상피 세포로, 불규칙한 비늘 모양의 무핵 옅은 분홍색 세포를 각질화된 상피 세포로, 작은 둥근 파란색 세포를 백혈구로 식별합니다.
    참고: 다음 세포학적 특성에 기초하여 발정 주기 단계를 결정합니다: (1) 발정기: 우세한 유핵 상피 세포. 개별 셀과 클러스터형 시트로 모두 표시됩니다. 희박한 백혈구 존재(<5% 시야); (2) 발정기: 풍부한 무핵 각질화 상피 세포. 형질: 불규칙한 경계가 있는 크고 평평한 형태. 백혈구 및 유핵 세포가 거의 없음(<2% 결합); (3) Metestrus 단계: 각질화된 세포 집단 감소. 새로운 백혈구 침윤. 재출현 유핵 상피 세포(20%-40% 조성); (4) 발정기: 우성 백혈구 및 유핵 세포(>80%). 각질화된 세포의 사실상 부재(<1%)5. 패턴 검증을 위해 그림 1 의 표준화된 세포학적 아틀라스를 참조하십시오.
  7. 데이터를 정리 및 분석하고 정상적인 발정 주기를 가진 24마리의 마우스를 선택합니다.

2. 시클로포스파미드 주사제의 준비

알림: 시클로포스파미드는 빛에 불안정하므로 공정 내내 어둠 속에서 취급해야 합니다. 시클로포스파미드는 독성이 있으므로 수술 중에는 보호복, 이중층 니트릴 장갑, 마스크를 착용해야 합니다.

  1. 멸균 식염수 10mL에 멸균 제약 등급 시클로포스파미드 분말 200mg을 첨가합니다. 20mg/mL 시클로포스파미드 용액을 얻기 위해 완전히 혼합합니다. 즉시 사용할 수 있도록 한 부분을 예약하십시오. 나머지로 추가 농도를 준비합니다.
  2. 200 μL의 20 mg/mL 스톡을 알루미늄 호일로 감싼 1.5 mL 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 800μL의 멸균 식염수를 첨가하여 총 부피 1mL에 도달합니다. 4mg/mL 용액을 얻기 위해 30초 동안 와류 혼합합니다. 14개의 동일한 분취량(각각 1mL)을 준비합니다. 모든 분취량을 -20°C에서 수직 선반에 보관합니다.

3. 시클로포스파미드 용액 주입

참고: 컴퓨터 시스템을 사용하여 24마리의 마우스를 3개의 코호트로 무작위 배정합니다: (1) BLANK: 치료 없음(n = 8); (2) NS: 식염수 대조군(n = 8); (3) POI: 시클로포스파미드 그룹(n = 8). 매일 아침 9:00에 쥐를 주사합니다. POI군의 경우 첫날 시클로포스파미드 용액 100mg/kg을 복강내 주사한 후 다음 14일 동안 시클로포스파미드 용액 20mg/kg을 지속적으로 주입한다. NS 그룹에 같은 양의 생리 식염수를 복강 내 주입하고 BALNK 그룹은 치료하지 않은 상태로 둡니다. 매일 주사 전에 모든 쥐의 무게를 측정하고 주사 후 도말을 위해 질 박리된 세포를 수집합니다.

  1. 집게가 있는 이소플루란에 적신 면봉을 밀봉 가능한 용기에 넣습니다. 10초 흡입 마취를 위해 마우스를 용기 안에 놓습니다.
    참고: 이소플루란은 특정 독성과 자극이 있는 휘발성 마취제입니다. 수술은 기관에서 승인된 프로토콜에 따라 환기가 잘 되는 환경에서 수행되어야 합니다.
  2. 주입량 계산: 체중(g) × 5 = μL. 75% 에탄올 면봉으로 오른쪽 하부 사분면을 소독합니다. 26G 바늘을 30-45° 각도(베벨 업 방향)로 삽입합니다. "터지는" 느낌이 들 때까지 복벽을 통해 5mm 전진합니다. 50 μL/s 속도로 용액을 전달합니다.
  3. 잔류 액체와 오염된 장비를 "감광성 폐기물"이라고 표시된 차광 폐기물 용기에 넣으십시오. 이소플루란에 적신 면봉은 투명한 유해 폐기물 라벨이 부착된 지정된 밀봉 용기에 버리십시오.
  4. 냉동된 4mg/mL 분취량을 37°C 수조(3분)에서 해동합니다. 일일 복용량 재계산: 체중(g) × 5 = μL. 주사기를 로드하기 전에 용액 투명도를 확인하십시오.

4. 세럼 수집

참고: 시클로포스파미드 용액 주사 15일 후, 모든 마우스의 심장 정점에서 혈액을 채취합니다. 원심분리하여 혈청을 얻습니다. 대조군과 NS 그룹의 마우스는 디스트루스 단계 동안 샘플링되어야 합니다. POI 그룹 마우스는 대조군/NS 그룹 마우스와 쌍을 이루는 시간 일치 샘플링을 거쳤으며, 발정 상태인 것으로 확인되었습니다.

  1. 마우스 마취
    1. 이소플루란 포화 면봉이 들어 있는 투명하고 밀폐된 챔버에 마우스를 넣습니다.
    2. 마우스의 동작을 관찰하십시오. 교정 반사의 상실(부드럽게 누운 자세를 돌렸을 때 자세를 자가 교정하지 못함)은 적절한 마취 유도를 나타냅니다. 이 프로세스는 일반적으로 2-3분이 필요합니다.
    3. 컨테이너에서 마우스를 제거합니다. 왼손으로 머리를 고정하고 검지로 윗눈꺼풀을 부드럽게 누릅니다. 오른손에 멸균 면봉을 들고 에리스로마이신 안구 연고에 담가 직경 1-2mm의 양을 채취합니다.
      1. 연고를 안구 표면과 안쪽 눈꺼풀에 고르게 바릅니다. 눈꺼풀을 감은 다음 손가락 끝으로 10초 동안 부드럽게 마사지하여 연고가 균일하게 분포되도록 합니다. 마른 면봉을 사용하여 눈 주위의 여분의 연고를 닦아냅니다.
  2. 폼 보드 위에 마우스를 바로 누운 자세로 놓습니다. 수술용 가위를 사용하여 가슴털을 다듬습니다. 75% 에탄올로 흉부 및 복부 부위를 소독합니다.
    1. 정중선을 따라 피부와 피하 조직을 절개합니다. 흉골의 왼쪽을 따라 늑간근을 세로로 절단합니다. 마음을 드러내십시오.
  3. 주사기(바늘 경사가 위를 향하도록 함)를 심장 정점에 약 30° 각도로 삽입합니다. 바늘을 천천히 전진시키고 부드럽게 흡인합니다. 채취한 혈액을 1.5mL 원심분리기 튜브에 주입합니다.
  4. 얻은 혈액을 원심분리기에 넣습니다. 원심분리기를 850 × g 에서 4°C에서 10분 동안 설정합니다. 피펫을 사용하여 상층 혈청을 꺼내 0.5mL 원심분리기 튜브에 넣습니다. -80°C에서 보관하십시오.

5. 혈청 에스트로겐, FSH 및 AMH의 검출

  1. 냉동 세럼을 4°C의 냉장고에 하룻밤 넣어 천천히 해동합니다.
  2. ELISA 키트를 냉장고에서 30분 전에 꺼내 시약이 실온으로 돌아갈 수 있도록 합니다.
  3. 키트의 지침에 따라 표준 희석제를 사용하여 표준의 연속 희석을 수행합니다. 일반적으로 0, 10, 20, 40, 80, 160pg/mL 등과 같은 여러 농도 구배를 설정합니다.
  4. 희석된 표준물질과 테스트할 혈청 샘플을 ELISA 플레이트의 해당 웰에 웰당 100μL씩 추가합니다. 동시에 블랭크 컨트롤 웰을 설정하고 100μL의 샘플 희석액을 추가합니다.
  5. ELISA 플레이트를 37°C 인큐베이터에 1-2시간 동안 넣어 항원과 항체가 완전히 결합할 수 있도록 합니다.
  6. 배양이 끝나면 우물에 있는 액체를 조심스럽게 흡인하십시오. 세척액으로 ELISA 플레이트를 3-5회 세척합니다. 매번 세척 후 ELISA 플레이트를 가볍게 두드려 건조시켜 잔여 세척액을 제거합니다.
  7. 효소 표지 항체 작동 용액을 웰당 100 μL씩 추가합니다. 37°C 인큐베이터에서 1시간 동안 계속 배양합니다.
  8. 위의 세척 단계를 반복하고 3-5회 세척한 다음 ELISA 플레이트를 두드려 말립니다.
  9. 각 웰에 100μL의 기질 용액을 첨가합니다. 흔들어 부드럽게 섞습니다. 투명한 파란색이 나타날 때까지 37°C에서 15-30분 동안 어두운 곳에서 배양합니다.
  10. 반응을 중지하기 위해 각 웰에 100μL의 종결 용액을 첨가합니다. 파란색에서 노란색으로 색상이 변하는 것을 관찰하십시오.
  11. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450nm 파장에서 각 웰의 흡광도 값(A 값)을 읽고 데이터를 기록합니다.
  12. 표준의 농도를 가로 좌표로 하고 해당 흡광도 값을 세로 좌표로 하여 표준 곡선을 그립니다. 일반적으로 다항식 피팅을 사용하여 표준 곡선의 상관 계수 r²가 0.99보다 크도록 합니다.
    1. 표준 곡선에 따라 테스트할 혈청 샘플의 흡광도 값을 표준 곡선 방정식으로 대체하여 샘플의 호르몬 농도를 계산합니다.

6. 난소 조직의 수집

  1. 자궁경부 탈구에 의해 아직 마취된 마우스를 안락사시킨 다음(기관에서 승인된 프로토콜에 따름) 수술용 가위를 사용하여 마우스의 복부를 엽니다.
  2. 난소는 신장 아래에 위치하며 흰색 지방 패드로 싸여 있습니다. 집게로 지방 패드를 부드럽게 들어 올려 난소와 나팔관을 노출시킵니다. 가위를 사용하여 난소를 주변 결합 조직에서 분리합니다.
  3. 제거된 난소 조직을 4% 파라포름알데히드에 넣어 24시간 동안 고정합니다.

7. 파라핀 절편의 준비

  1. 탈수: 난소를 꺼내 다양한 농도(75%, 85%, 95%, 100%)의 에탄올 용액에 순차적으로 통과시키며 각 단계는 1시간 동안 지속됩니다.
  2. 투명 처리: 먼저 자일렌과 에탄올의 혼합물로 난소를 15분 동안 치료합니다. 그런 다음 자일렌 I과 자일렌 II에 각각 15분 동안 담급니다.
  3. 왁스 함침: 자일렌과 파라핀의 혼합물에 난소를 담급니다. 그런 다음 파라핀 I, 파라핀 II 및 파라핀 III에 각각 0.5시간 동안 옮깁니다.
  4. 포매: 왁스를 함침시킨 난소를 포매 몰드에 넣습니다. 조직의 방향을 조정합니다(절단면이 아래를 향하도록 함). 녹인 파라핀을 틀에 붓고 식히고 굳힙니다.
  5. 절편화: 마이크로톰을 사용하여 파라핀 블록을 5μm 두께의 절편으로 자릅니다. 연속 절편을 수행하고 브러시로 리본을 부드럽게 옮겨 수조에 떠 있을 때 뒤틀림 없이 평평하게 놓이는 균일하고 반투명한 밴드를 형성합니다

8. H&E 염색

  1. 탈랍: 파라핀 포매 절편을 자일렌 I에 10분 동안 담급니다. 그런 다음 절편을 자일렌 II로 옮기고 10분 더 담가둡니다.
  2. 재수화: 100% 에탄올, 95% 에탄올, 85% 에탄올 및 75% 에탄올과 같은 다양한 농도의 일련의 에탄올 용액을 순서대로 통과시키고 각각 5분의 침지 시간을 갖습니다. 마지막으로 증류수로 1분 동안 절편을 헹굽니다.
  3. 헤마트실린 염색: 절편을 헤마트실린 염색 용액에 5분 동안 담급니다. 흐르는 물에 섹션을 30초 동안 헹굽니다.
  4. 분화: 절편을 1% 염산-에탄올 용액에 1-3초 동안 담급니다. 흐르는 물에 1-2분 동안 섹션을 헹굽니다.
  5. 세포질 염색: 에오신 Y 용액에 담그십시오(1분). 여과지로 여분의 얼룩을 닦아냅니다.
  6. 탈수: 85% 에탄올, 95% 에탄올 및 100% 에탄올(2회)과 같은 일련의 에탄올 용액을 통해 절편을 통과시키고 각각 5초의 침지 시간을 갖습니다.
  7. 클리어링: 절편을 자일렌 I에 5분 동안 담그십시오. 그런 다음 절편을 자일렌 II로 옮기고 5분 더 담가둡니다.
  8. 장착: 얼룩진 부분에 중성 수지를 떨어뜨립니다. 섹션 위에 커버슬립을 조심스럽게 놓습니다.
  9. 난포 계수: 현미경으로 염색된 부분을 관찰합니다. 다양한 발달 단계에서 난포의 수를 세고 기록합니다.

9. 난소 조직에서 Caspase-3에 대한 면역조직화학

  1. 항원 회수: 탈랍 및 재수화된 절편을 구연산나트륨 완충액(pH 6.0)에 넣습니다. 전자레인지에서 고출력으로 5분 동안 절편을 가열합니다. 그런 다음 꺼내서 식히십시오.
    1. 가열 과정을 2회 더 반복하여 총 3번의 가열 주기를 수행합니다. 자연 냉각 후 PBS로 절편을 3회, 매번 5분 동안 세척합니다.
  2. 내인성 과산화효소 제거: 3% H₂O₂를 절편에 적방울 첨가합니다. 섹션을 어두운 곳에서 실온에서 10분 동안 배양합니다. PBS로 절편을 3회, 매번 3분 동안 세척합니다.
  3. 혈청 차단 및 항체 배양: 토끼 항-카스파제-3 1차 항체를 절편에 적방울 추가합니다. 절편을 4°C의 습식 상자에서 밤새 배양합니다. 다음날 절편을 실온으로 되돌려 30분 동안 둡니다. PBS로 절편을 3회, 매번 5분 동안 세척합니다.
  4. 발색, 카운터 스테인팅 및 장착: 발색에는 DAB를 사용하며 일반적으로 약 1-5분이 소요됩니다. 2분 동안 헤마트실린으로 절편을 대조염색합니다. 대조염색 후 절편을 5분 동안 세척합니다.
    1. 그런 다음 절편을 암모니아수에 1분 동안 넣어 파란색으로 바꿉니다. 마지막으로 에탄올의 구배를 통해 탈수를 수행하고 섹션을 제거하고 장착합니다.

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결과

POI 마우스 모델을 설정하는 프로세스는 그림 2에 나와 있습니다. 마우스의 체중과 발정주기는 약물 주사 첫날부터 기록되었습니다. CTX 주사 15일 후, POI군 마우스의 평균 체중 감소율(3.717% ± 1.463%)은 BLANK군(0.2526% ± 0.1469%) 및 NS군(0.4305% ± 0.2494%)보다 유의하게 높았습니다(p < 0.0001). NS군과 BLANK군 사이에는 체중에 통계적으로 유의한 차이가 없었다(p > 0.05). (그림 3A).

마우스의 발정 주기는 질 박리 세포 도말을 기반으로 모니터링되었습니다. 결과는 POI 그룹에서 마우스의 발정 주기가 무질서했으며 장기간의 diestrus 또는 질 박리 세포의 지속적인 불규칙한 변화로 나타나는 것으로 나타났습니다. BLANK군과 NS군 사이에는 발정주기의 규...

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토론

조기 난소 기능 부전(POI)은 여성의 신체 건강과 삶의 질에 심각한 영향을 미치며 전 세계적으로 유병률이 해마다 증가하고 있습니다. 그러나 현재 POI에 대한 안전하고 효과적인 치료 방법은 여전히 부족합니다. 신뢰할 수 있고 재현 가능한 동물 모델을 구축하는 것은 POI에 대한 연구를 발전시키는 데 매우 중요합니다. 임상적으로 POI의 원인은 다양하며 화학 요법 약물은 중요한 알려진 병원성 인자입니다8. 알킬화제 화학요법제인 CTX는 주로 산화 스트레스와 과립막 세포 세포사멸을 통해 난소 독성을 일으켜 난포 폐쇄증을 가속화합니다9. 알킬화제인 시클로포스파미드를 사용하여 동물 모델을 구성하면 화학 요법으로 인한 난소 손상을 시뮬레이션할 수 있어 POI 연구를 더욱 표적화할 수 있습니다.

기존 연구에는 시클로포스파미드의 다양한 주사 요법...

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공개 사항

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

저자는 임상 연구 특별 자금 지원 프로그램(보조금 번호 320.6750.17067)을 통해 Wu Jieping Medical Foundation으로부터 받은 재정적 지원에 감사드립니다. 또한 Anhui Shendong Biotechnology Development Co., Ltd가 제공한 연구 플랫폼과 기술 지원에 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
4% 파라포름알데히드상곤 바이오 엔지니어링 Co., LtdA500684-0500
알코올 75%산동 Dexinkang 의료 기술 Co., Ltd200603
무수 에탄올벵부 화학 시약 공장
원심분리기 튜브바이오샤프BS-15-M
콜드 테이블취안린 메디컬QL-LT20230003
코튼 볼산동 브릴리언스 Co., Ltd20241008
커버슬립장쑤성 Shitai 실험 장비 Co., Ltd80312-3412
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