이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

연구 논문

비소세포폐암 세포에서 ROS 매개 고전적 세포사멸을 통한 Pileostegia tomentella 의 주요 성분의 항암 효과

450 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69008

⸱

2025년 9월 19일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1International Zhuang Medicine Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Zhuang Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, 3Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Ethnic Medicine, 4Graduate School of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 비소세포폐암(NSCLC) 세포에서 천연 화합물에 의해 유도된 활성 산소종(ROS) 매개 세포사멸을 평가하는 방법을 제시합니다.

초록

이 연구는 활성산소종(ROS) 매개 경로를 통해 H1299 비소세포폐암(NSCLC) 세포에서 고전적인 세포사멸을 유도하는 능력에 특히 초점을 맞춰 Pileostegia tomentella의 항암 잠재력을 탐구합니다. 생리활성 유도 분리 접근법을 사용하여 두 가지 활성 화합물인 umbelliferone(UMB)과 epi-Vogeloside가 주요 세포독성 성분으로 확인되었습니다. 두 화합물 모두 세포 생존력에 상당한 억제 효과를 보였고 H1299 세포에서 세포사멸 세포 사멸을 효과적으로 유발했습니다. 기계론적 조사에 따르면 UMB와 에피-보겔로사이드를 사용한 치료는 세포내 ROS 수치를 현저하게 증가시켜 산화 스트레스가 주요 매개체임을 암시합니다. 웨스턴 블롯 분석은 절단된 카스파제-3의 수치가 증가하고 항세포사멸 단백질 Bcl-2의 발현이 감소한 것으로 나타났으며, 이는 내재성 미토콘드리아 세포사멸 경로의 활성화를 나타냅니다. 또한, 전사체 프로파일링은 유전자 발현의 광범위한 변화를 보여주어 세포 항상성의 파괴를 더욱 뒷받침했습니다. 이러한 결과는 Pileostegia tomentella 와 그 활성 성분이 폐암의 잠재적인 치료제로 유망하다는 것을 시사합니다.

서론

암은 상당한 연간 사망률을 특징으로 하는 엄청난 글로벌 공중 보건 문제를 제시합니다. 비소세포폐암(NSCLC)은 폐암 발병률의 약 85%를 차지하는 암 관련 사망의 주요 전 세계 동인입니다1. 분자와 세포 과정의 본질적으로 복잡한 상호 작용인 발암은 활성 산소종(ROS) 항상성의 붕괴에 의해 결정적인 영향을 받습니다. 슈퍼옥사이드 음이온, 수산기 라디칼, 과산화수소 등 불안정한 산화제를 포함하는 ROS는 정상적인 세포 대사의 부산물이며 신호 전달, 증식, 분화 및 세포사멸에 필수적인 기능을 수행합니다2. ROS 농도의 불균형은 산화 스트레스를 촉진하여 잠재적으로 프로그램된 세포 사멸 경로, 특히 자가포식 및 세포사멸을 활성화하여 암세포 증식 및 생존을 방해할 수 있습니다3. 결과적으로, ROS는 종양학에서 종양 진행의 촉진제와 억제제 역할을 하는 이중 역할을 나타냅니다. 지난 10년 동안 NSCLC에 대한 치료 전략은 특히 활발한 연구 영역을 대표하는 ROS의 이러한 이분법적 특성을 활용하도록 설계된 새로운 항암제의 개발과 함께 크게 발전했습니다4.

아드리아마이신(독소루비신), 시스플라틴, 시클로포스파미드 등 화학적으로 합성된 수많은 항암제는 ROS 생산을 촉진하여 암세포의 세포사멸을 유도하는 것으로 알려져있다5. 표적 치료법과 면역치료 항체의 발전에도 불구하고 백금 기반 화학 요법은 계속해서 NSCLC 환자 치료의 초석이 되고 있습니다. 그럼에도 불구하고 화학 요법으로 인한 내성과 부작용의 출현으로 인해 새로운 항-NSCLC 약물의 개발이 필요합니다. 결과적으로, 항암 화합물의 천연 공급원을 탐색하는 것은 그 중요성과 잠재력에 대해 점점 더 인식되고 있습니다. 최근 연구에 따르면 특정 식물 추출물과 그 활성 성분은 낮은 독성, 높은 특이성 및 여러 경로를 표적으로 삼는 능력을 특징으로 하는 강력한 항암 특성을 나타냅니다6. 특히, 이러한 천연 화합물 중 일부는 ROS 수준과 신호 전달을 조절할 수 있습니다.7, 이로써 암세포에서 자가포식 또는 세포사멸을 유도하고 치료 효과를 발휘할 수 있습니다 8,9.

필레오스테지아 토멘텔라 손. 미나리과에 속하는 클레마티스 속의 다년생 허브인 주크는 주로 일본, 북한, 중국과 같은 지역에서 발견됩니다. 뿌리, 줄기, 잎, 꽃 등 식물의 다양한 성분은 약효로 알려져 있으며 열 제거, 해독, 붓기 감소, 통증 완화, 항균 및 항염증 효과와 같은 이점을 제공합니다. 최근 연구에 따르면 Hoshi Hairy Vine 추출물 또는 활성 성분의 항암 활성이 밝혀져 신경아교종, 유방암, 결장암, 자궁경부암을 포함한 다양한 암에 대한 종양 억제 효과가 입증되었습니다10. 그러나 Pileostegia tomentella의 특정 항암 메커니즘, 특히 암세포에서 자가포식 또는 세포사멸을 유도하기 위해 ROS를 조절하는 잠재적인 역할은 대부분 탐구되지 않은 상태로 남아 있습니다.

암 치료를 위한 천연 화합물에 대한 관심이 높아지고 있음에도 불구하고 폐암에서 Pileostegia tomentella 의 주요 성분의 세포사멸 촉진 메커니즘은 아직 탐구되지 않은 상태로 남아 있습니다. 이 연구는 NSCLC에서 선택적 ROS 의존성 세포사멸 유도제로서 umbelliferone과 epi-Vogeloside의 식별 및 기계론적 해부를 개척합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

본 연구에 사용된 시약 및 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. Pileostegia tomentella 의 화학 성분 및 NSCLC 표적 예측

Pileostegia tomentella의 화학 성분은 선형 이온 트랩-Orbitrap 질량 분석법(HPLC-LTQ/MS)과 결합된 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분석되었습니다. 추출물을 적절한 용매에 용해시키고 주입 전에 여과했습니다. 크로마토그래피 분리는 화합물 클래스에 맞게 조정된 그래디언트 용출 프로그램 하에서 역상 컬럼을 사용하여 달성되었습니다. 질량 분석 데이터는 100-1500m/z의 질량 범위에 걸쳐 포지티브 전기분무 이온화 모드에서 수집되었습니다. 식별된 화합물의 분자 구조는 일반 화학 도면 소프트웨어를 사용하여 그려지고 SDF 형식으로 저장되었습니다. 이러한 구조 파일은 잠재적인 생물학적 표적을 식별하기 위해 온라인 표적 예측 도구에 제출되었으며, 추가 검증을 위해 상위 20개 표적이 선택되었습니다. NSCLC 관련 표적은 공개적으로 액세스할 수 있는 유전자 데이터베이스에서 검색되었습니다. 두 데이터 세트의 겹치는 표적은 Pileostegia tomentella의 잠재적 치료 표적으로 확인되었습니다.

2. 구성 요소-대상 네트워크 구축

예측된 표적에 대한 단백질-단백질 상호작용 데이터는 오픈 액세스 단백질 상호작용 데이터베이스에서 얻었습니다. 상호작용 데이터를 일반 네트워크 시각화 소프트웨어로 가져와 복합-표적 상호작용 네트워크를 구축했습니다. 차수 중심성, 중간성 및 근접성을 포함한 네트워크 토폴로지 속성은 내장된 분석 도구를 사용하여 분석되어 주요 규제 노드를 식별했습니다.

3. KEGG 경로 농축 분석

예측된 표적 단백질의 기능적 농축은 공개적으로 사용 가능한 농축 도구 및 통계 소프트웨어를 통해 KEGG 경로 분석을 사용하여 수행되었습니다. 조정된 p-값이 0.05 미만인 경로는 유의한 것으로 간주되었습니다. 중요한 경로를 화합물 표적 데이터와 통합하여 일반 네트워크 시각화 소프트웨어를 사용하여 "화합물-표적-경로" 상호 작용 네트워크를 구축했습니다. 네트워크 토폴로지 분석은 주요 생물학적 조절 허브를 강조하여 Pileostegia tomentella의 다중 구성 요소 및 다중 표적 메커니즘을 보여줍니다.

4. Pileostegia tomentella 성분 추출

Corydalis spinosa의 말린 덩굴 줄기를 고운 분말로 갈아서 만들었습니다. 분말 물질은 정해진 기간 동안 실온에서 초음파 처리하에 70% 에탄올로 추출되었습니다. 조추출물을 여과하고 감압하에서 농축하켰다. 액체-액체 분배는 석유 에테르, 에틸 아세테이트 및 n-부탄올을 포함하여 극성이 증가하는 용매를 사용하여 수행되었습니다. 예비 분석에서 가장 높은 생물학적 활성을 보인 에틸 아세테이트 분획물을 수집하여 농축하고 동결 건조하여 추가 사용할 때까지 -20°C에서 보관했습니다.

5. 세포주 및 치료 조건

인간 폐암 세포주 H1299를 5%CO2를 함유하는 가습 분위기에서 37°C에서 10% 태아 소 혈청이 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다. 세포를 적절한 밀도로 파종하고 처리 전에 밤새 부착하도록 했습니다. 세포는 표 1에 나열된 바와 같이 UMB 및 에피-보겔로사이드의 다양한 농도(500μg/mL, 750μg/mL 및 1,000μg/mL)에 노출되었습니다. 표준 배양 조건에서 24시간 동안 배양한 후, 화합물의 생물학적 효과를 평가하기 위한 후속 분석을 위해 세포를 수확했습니다.

6. 세포 생존율에 대한 MTT 분석

화합물의 세포독성 효과는 비색 MTT 분석을 사용하여 평가되었습니다. H1299 세포를 정의된 밀도로 96웰 플레이트에 시딩하고 밤새 부착하도록 했습니다. 그런 다음 세포를 표준 배양 조건에서 72시간 동안 시험 화합물로 처리했습니다. 처리 후, MTT 용액을 각 웰에 첨가하고 배양하여 생존 세포가 MTT를 불용성 보라색 포르마잔 결정으로 전환할 수 있도록 했습니다. 배양 후, 배지를 제거하고 포르마잔 결정을 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해시켰다. 흡광도는 마이크로플레이트 리더를 사용하여 570nm에서 측정되었습니다. 흡광도 값은 세포 생존율에 해당하여 화합물 세포독성에 대한 정량적 평가를 제공합니다.

7. LDH 방출을 통한 멤브레인 무결성 평가

세포막 무결성은 세포독성의 지표로서 젖산 탈수소효소(LDH) 방출을 측정하여 평가되었습니다. H1299 세포를 24시간, 48시간 또는 72시간 동안 시험 화합물로 처리하였다. 각 시점에서 배양 상청액을 수집하고 제조업체의 프로토콜에 따라 LDH 활성 분석을 수행했습니다. LDH는 막이 손상된 세포에서만 방출되기 때문에 측정된 흡광도 값은 시간이 지남에 따라 화합물에 의해 유도된 막 손상 정도를 반영합니다.

8. 세포사멸의 유세포 분석

세포사멸 유도는 Annexin V 및 7-Aminoactinomycin D(7-AAD) 염색을 사용한 유세포 분석법으로 평가되었습니다. 시험 화합물로 처리한 후, H1299 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 차가운 인산염 완충 식염수로 세척하고, 결합 완충액에 재현탁하였다. 그런 다음 세포를 염색 프로토콜에 따라 형광 염료 및 7-AAD에 접합된 Annexin V와 함께 배양했습니다. 샘플은 즉시 유세포 분석법으로 분석되었습니다. 이 방법은 생존 세포(염색되지 않음), 초기 세포사멸 세포(Annexin V 양성, 7-AAD 음성) 및 후기 세포사멸 또는 괴사 세포(두 염색 모두 양성) 사이의 분화를 허용했습니다.

9. 세포내 ROS 정량화

세포내 활성 산소종(ROS) 수준은 형광 기반 분석을 사용하여 측정되었습니다. H1299 세포를 웰당 1 × 105 세포의 밀도로 12웰 플레이트에 파종하고 약 80% 합류에 도달할 때까지 배양했습니다. 그런 다음 세포를 지정된 화합물로 72시간 동안 처리했습니다. 처리 후, 세포를 ROS 민감성 형광 프로브 2',7'-디클로로디하이드로플루오레세인 디아세테이트(DCFH-DA) 1μM와 함께 어두운 곳에서 30분 동안 37°C에서 배양했습니다. 배양 후 세포를 수확하고 형광 마이크로플레이트 리더기를 사용하여 525nm의 방출 파장에서 형광 강도를 측정했습니다. 형광 강도는 세포내 ROS 수준에 해당합니다.

10. 실시간 정량 PCR(RT-qPCR)

H1299 세포를 웰당 2 × 105 세포의 밀도로 6웰 플레이트에 파종하고 약 80% 합류에 도달할 때까지 배양했습니다. 그런 다음 세포를 지정된 화합물로 72시간 동안 처리했습니다. 총 RNA는 널리 사용되는 페놀-클로로포름 방법을 사용하여 추출되었습니다. 상보적 DNA(cDNA) 합성은 제조업체의 지침에 따라 역전사 키트를 사용하여 수행되었습니다. 정량적 실시간 PCR(qRT-PCR)은 특정 프라이머( 표 2에 나열됨)가 있는 실시간 PCR 시스템을 사용하여 수행되었습니다. 상대 유전자 발현 수준은 내부 대조군으로 사용된 하우스키핑 유전자와 함께 비교 Ct 방법을 사용하여 계산되었습니다.

11. 단백질 발현을 위한 면역블로팅

웨스턴 블롯 분석은 배양 및 처리된 H1299 세포에 대해 수행되었습니다. 적절한 용해 완충액을 사용하여 총 단백질을 추출하고, 용해물을 10,000 × g 에서 4°C에서 15분 동안 원심분리하여 정화하였다. 단백질 농도는 분광 광도법을 사용하여 결정되었습니다. 각 샘플에서 동일한 양의 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF) 멤브레인으로 옮겼습니다. 멤브레인을 실온에서 2시간 동안 5% 무지방 분유로 차단한 다음 최적화된 희석액으로 Bcl-2, caspase-3, PARP1, BAX, GAPDH 및 Tubulin에 특이적인 1차 항체와 함께 4°C에서 밤새 배양했습니다. 세척 후, 멤브레인을 실온에서 2시간 동안 적절한 2차 항체와 함께 배양했습니다. 단백질 밴드는 화학발광 기질을 사용하여 시각화되고 이미지화되었습니다. 밀도 분석은 이미지 분석 소프트웨어로 수행되었으며 밴드 강도는 부하 제어로 GAPDH 및 Tubulin으로 정규화되었습니다.

12. Caspase-3의 면역형광 현미경

핵심 세포사멸 단백질인 카스파제-3의 발현 및 세포내 국소화는 면역형광 염색에 의해 평가되었습니다. 처리 후, H1299 세포를 파라포름알데히드로 고정하고, 순한 세제 용액으로 투과화하고, 카스파제-3에 대한 1차 항체와 함께 배양하였다. 그런 다음 형광 표지된 2차 항체를 적용하여 1차 항체 신호를 검출했습니다. 세포핵은 DNA 결합 형광 염료를 사용하여 대조염색되었습니다. 염색된 세포를 형광 현미경으로 시각화했습니다. 형광 신호의 강도와 세포 분포는 카스파제-3 활성화에 대한 질적, 공간적 정보를 제공하여 화합물 유도 세포사멸 반응에 대한 관여를 뒷받침했습니다.

13. 전사체 시퀀싱

시험 화합물에 대한 세포 전사 반응을 프로파일링하기 위해 처리된 H1299 세포에서 총 RNA를 추출하고 표준 품질 관리 방법을 사용하여 무결성을 평가했습니다. 시퀀싱 라이브러리는 확립된 프로토콜에 따라 준비되었고 차세대 시퀀싱 플랫폼을 사용하여 고처리량 시퀀싱을 거쳤습니다. 원시 시퀀싱 데이터는 품질 관리 필터링, 참조 게놈에 대한 정렬 및 전사체 풍부도의 정량화를 포함하는 기존의 생물정보학 파이프라인을 통해 처리되었습니다. 치료 후 발현에 통계적으로 유의한 변화를 보이는 유전자를 확인하기 위해 차등 유전자 발현 분석을 수행하였다. 차등적으로 발현된 유전자의 농축 및 경로 분석을 수행하여 화합물의 영향을 받는 주요 생물학적 과정을 밝히고, 이를 통해 분자 효과에 대한 포괄적인 전사체 개요를 제공했습니다.

14. 통계 분석

모든 데이터는 최소 3개의 독립적인 실험에서 평균 ± 표준 편차(SD)로 표현됩니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 적절한 경우 스튜던트 t-테스트 또는 일원 분산 분석을 포함한 표준 방법을 사용하여 결정되었습니다. 차이는 0.05 미만의 P-값에 대해 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

폐암에 대한 Pileostegia tomentella의 주요 성분 스크리닝
실험 설계의 개요는 그림 1에 나와 있습니다. HPLC-LTQ/Orbitrap MS를 사용하여 Pileostegia tomentella 에 존재하는 7가지 주요 생리 활성 성분을 특성화했습니다(표 3). 그 후, SwissTargetPrediction 데이터베이스(11)를 사용하여 이들 화합물에 대해 인실리코 표적 예측을 수행하고, 상호작용 확률이 0.1을 초과하는 것만 포함하도록 결과를 필터링하였다. 이 분석을 통해 260개의 유망 유전자 표적이 나왔습니다. 동시에 NSCLC 관련 표적은 GeneCards 데이터베이스에서 공급되었습니다. 비교 평가에서 예측된 화합물 표적과 NSCLC 관련 유전자 사...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

비소세포폐암(NSCLC)은 공격적인 생물학, 빠른 임상 진행 및 높은 전이 가능성을 특징으로 하는 시급한 글로벌 건강 문제로 남아 있으며 종종 환자 결과가 좋지 않습니다12. 외과적 절제, 방사선 요법, 화학 요법과 같은 표준 개입은 초기 질병에 치료적 이점을 제공하지만 약물 내성의 출현과 전신 독성의 부담으로 인해 진행 단계에서는 그 효과가 감소합니다. 폐암의 근본적인 발병기는 복잡하며 아직 완전히 설명되지 않았습니다13,14. 한의학(TCM)에서 NSCLC는 역사적으로 기 결핍, 가래 축적 및 독소 형성과 같은 내부 불균형과 관련이 있습니다15,16. 이러한 개념적 틀은 문화적 통찰력을 제공하지만 직접적인 분자 상관...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 국가 한의학 관리국의 한의학 고위급 핵심 분야 건설 프로젝트 - 소수민족 약국(Zhuang Pharmacy)(No. zyyzdxk-2023165)의 지원을 받았습니다. 광시 국제 장족 의료 병원의 인재 양성 프로그램 "청소년 프로젝트"(2022001호); 광시 한의학의 다학제적 교차 혁신 팀 프로젝트(No. GZKJ2309); 광시 중의학 대학의 고급 인재 양성 혁신 팀 프로그램(No. 2022A008); 광시 과학기술부의 핵심 연구 개발 프로젝트(No. 구이커AB21196057); 광시 국제 장족 의료 병원의 고위급 인재 팀 건설을 위한 2023년 3개년 행동 계획(GZCX20231203, GZCX20231202호); 광시 중의학 대학의 "Qihuang Project" 고급 인재 팀 양성 프로그램의 세 번째 배치(No. 202414).

저자 기여:

Wen Zhong, Leimin Jiang 및 Bing Qing은 이 작업에 동등하게 기여했으며 제1저자를 공유했습니다. 그들은 주로 실험 설계, 데이터 수집 및 결과 해석을 담당했습니다. Xiumei Ma는 데이터 분석을 수행하고 원고 준비에 기여했습니다. Shi Xianyi, Deng Qingmei 및 Zhou Guangyun은 연구 설계, 데이터 수집 및 문헌 연구에 참여했습니다. 교신저자인 Jiangcun Wei는 데이터 분석 및 해석을 감독하고 원고 초안 작성 및 수정에 주도적인 역할을 했습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Annexin V– PE / 7-AAD 세포사멸 검출 키트BD 바이오사이언스556547유세포 분석 기반 세포사멸 검출
항체: BAX아브캠AB32503세포사멸 촉진 단백질에 대한 웨스턴 블롯
항체: Bcl-2아브캠AB182858웨스턴 블롯/면역형광
항체: Cleaved Caspase-3아브캠AB32042웨스턴 블롯 / IF
항체: GAPDH아브캠AB8245웨스턴 블롯의 내부 통제
항체: PARP1아브캠AB32064세포사멸 마커에 대한 웨스턴 블롯
항체: 튜불린아브캠AB78078웨스턴 블롯의 내부 통제
켐드로우PerkinElmer 정보학CCG821391소분자의 구조 도면
화학발광 이미징 시스템타논 사이언스 & 기술타논 5200단백질 밴드 시각화용
사이토스케이프Cytoscape.orghttps://cytoscape.org네트워크 구축 및 분석
DAPI 핵 염색시그마 디9542IF용 파란색 핵 대조염색
다윗NIHhttps://david.ncifcrf.gov기능적 주석 및 KEGG 경로 농축
DMSO시그마 
MFCD00002089		포르마잔 결정을 용해하는 데 사용됩니다.
에탄올(추출용)시그마MFCD00003568초음파 보조 추출 용매
에틸 아세테이트시그마MFCD00009171생리활성 분획에 사용
FITC 접합 2차 항체아브캠AB6785면역형광에 사용
유세포 분석기써모 사이언티픽A29001세포사멸 및 ROS 검출에 사용
형광 현미경올림푸스 주식회사BX53F이미징 면역형광 슬라이드용
동결 건조기랩콘코 코퍼레이션7670520샘플 동결건조 및 보존용
유전자 카드바이츠만 연구소https://www.genecards.org질병 관련성을 위한 유전자 데이터베이스
HPLC-LTQ-Orbitrap 질량 분석법써모 사이언티픽IQLAAEGAAVFACZMAIKMS에 의한 화합물 식별
Illumina NovaSeq 시퀀싱 플랫폼일루미나 주식회사20012850RNA-seq에 사용
LDH 세포독성 분석 키트비요타임C0016세포독성 지표로서 LDH 방출 측정용
마이크로플레이트 리더써모 사이언티픽VL0000D0MTT 및 LDH 분석의 흡광도 측정용
MTT 세포 생존율 분석 키트비요타임 C0009S세포 생존력을 평가하기 위한 MTT 분석에 사용
qPCR 기계써모 사이언티픽4485701유전자 발현 분석용
R 소프트웨어R 재단https://www.r-project.org통계 계산 및 경로 플로팅
역전사 키트(RT 키트)바지메미스터201cDNA 합성용
RNA-seq 라이브러리 준비 키트일루미나 주식회사20020594시퀀싱을 위한 라이브러리 준비
스위스 타겟 예측스위스 인스티튜트http://www.swisstargetprediction.ch복합 표적 예측 도구
SYBR 그린 qPCR 믹스바지메질문311-02정량적 PCR용
TRIzol 시약(RNA 추출)시그마 T3934총 RNA 추출용
초음파 세척기브 랜 슨M1800-CPXH초음파 보조 추출용
웨스턴 블롯 장치써모 사이언티픽A56727겔 전기영동 및 단백질 전달

참고문헌

  1. Fan, D., Yu, S., Yang, Y., Qu, S. Pyoluteorin induces apoptosis and autophagy in NSCLC cells. Biol Pharm Bull. 44 (7), 976-983 (2021).
  2. Cui, Q., et al. Modulating ROS to overcome multidrug resistance in cancer. Drug Resist Updat. 41, 1-25 (2018).
  3. Wang, Y., et al. The double-edged roles of ROS in cancer prevention and therapy. Theranostics. 11 (10), 4839-4857 (2021).
  4. Sahoo, B. M., Banik, B. K., Borah, P., Jain, A. Reactive oxygen species (ROS): Key components in cancer therapies. Anticancer Agents Med Chem. 22 (2), 215-222 (2022).
  5. Perillo, B., et al. Ros in cancer therapy: The bright side of the moon. Exp Mol Med. 52 (2), 192-203 (2020).
  6. Luo, H., et al. Naturally occurring anticancer compounds: Shining from Chinese herbal medicine. Chin Med. 14, 48(2019).
  7. Han, X., et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 44, 102010(2021).
  8. Lv, C., et al. Ainsliadimer a induces ROS-mediated apoptosis in colorectal cancer cells via directly targeting peroxiredoxin 1 and 2. Cell Chem Biol. 30 (3), 295-307.e5 (2023).
  9. Jiaqi, L., et al. Andrographolide promoted ferroptosis to repress the development of non-small cell lung cancer through activation of the mitochondrial dysfunction. Phytomedicine. 109, 154601(2023).
  10. Liu, Y., et al. Total coumarins of Pileostegia tomentella induces cell death in SCLC by reprogramming metabolic patterns, possibly through attenuating β-catenin/AMPK/sirt1. Chin Med. 18 (1), 1(2023).
  11. Daina, A., Michielin, O., Zoete, V. Swisstargetprediction: Updated data and new features for efficient prediction of protein targets of small molecules. Nucleic Acids Res. 47 (W1), W357-W364 (2019).
  12. Catania, C., et al. New options and open issues in the management of unresectable stage III and in early-stage NSCLC: A report from an expert panel of Italian medical and radiation oncologists - interaction group. Crit Rev Oncol Hematol. 190, 104108(2023).
  13. Guo, H., et al. Biomarker-targeted therapies in non-small cell lung cancer: Current status and perspectives. Cells. 11 (20), 3200(2022).
  14. Mcnamee, N., Da Silva, I. P., Nagrial, A., Gao, B. Small-cell lung cancer update on targeted and immunotherapies. Int J Mol Sci. 24 (9), 8129(2023).
  15. Jiang, R., et al. The sodium new houttuyfonate suppresses NSCLC via activating pyroptosis through tcons-14036/mir-1228-5p/prkcdbp pathway. Cell Prolif. 56 (7), e13402(2023).
  16. Chen, P., Liu, Y., Wen, Y., Zhou, C. Non-small cell lung cancer in China. Cancer Commun (Lond). 42 (10), 937-970 (2022).
  17. Amorim, R., et al. Mitochondriotropic antioxidant based on caffeic acid antioxcin(4) activates Nrf2-dependent antioxidant defenses and quality control mechanisms to antagonize oxidative stress-induced cell damage. Free Radic Biol Med. 179, 119-132 (2022).
  18. Long, K., et al. Small-molecule inhibition of ape1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell Death Dis. 12 (6), 503(2021).
  19. Lin, Z., Cheng, X., Zheng, H. Umbelliferon: A review of its pharmacology, toxicity and pharmacokinetics. Inflammopharmacology. 31 (4), 1731-1750 (2023).
  20. Cruz, L. F., et al. Umbelliferone (7-hydroxycoumarin): A non-toxic antidiarrheal and antiulcerogenic coumarin. Biomed Pharmacother. 129, 110432(2020).
  21. Zheng, S., et al. Systematic review of lonicerae japonicae flos: A significant food and traditional Chinese medicine. Front Pharmacol. 13, 1013992(2022).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

ROS 매개 세포사멸엄벨리페론에피-보겔로사이드세포 생존율산화적 스트레스미토콘드리아 세포사멸 경로웨스턴 블럿
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.