이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

연구 논문

PAK5는 전사체 프로파일링을 통해 드러나는 식도 편평세포암의 진행을 촉진합니다

349 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69085

⸱

2025년 12월 16일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Cancer Center, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, 2Department of Radiology, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, 3Department of Pathology, The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University

이 논문에서

요약

본 연구는 ESCC에서 PAK5 기능을 평가하는 방법을 제시하며, 과발현이 예후를 좋지 않게 예측하고 PAK5-GAREM1 신호 전달 축을 통한 종양 진행을 촉진함을 보여줍니다.

초록

식도 편평세포암(ESCC)은 전 세계적으로 특히 아시아에서 암 관련 사망률의 주요 원인 중 하나입니다. 초기 증상이 없기 때문에 대부분의 환자가 진행된 단계에 진단받아 치료 효과가 제한되고 예후가 악화됩니다. ESCC의 기전을 이해하고 바이오마커나 치료 표적을 식별하는 것은 환자 치료 결과를 개선하는 데 매우 중요합니다. P21 활성화 단백질 키나아제(PAK5)는 미토겐 활성화 단백질 키나아제 계열의 일원으로, 세포 주기, 이동, 침범을 조절함으로써 다양한 악성 종양과 관련이 있는 것으로 밝혀졌습니다. 그러나 ESCC에서의 역할은 여전히 불분명하다. 본 연구는 면역조직화학을 이용해 ESCC 조직과 인접한 정상 조직에서 PAK5 발현을 평가하고, PAK5와 예후 간의 연관성을 평가하기 위해 Kaplan-Meier 생존 분석을 수행하였습니다. PAK5 과발현 및 넉다운을 가진 ESCC 세포 모델이 구축되었고, CCK-8, 콜로니 형성, 트랜스웰 분석 등 기능적 분석도 수행되었습니다. 더 나아가 mRNA 시퀀싱을 수행하여 PAK5에 의해 조절되는 하위 표적과 신호 전달 경로를 식별하였습니다. 이 결과는 정상 조직에 비해 ESCC 조직에서 PAK5 발현이 유의하게 높았으며, 예후가 좋지 않음을 보여주었습니다. 기능적 분석 결과 PAK5는 ESCC 세포 증식, 집락 형성, 이동 및 침범을 촉진했으며, 전사체 분석에서는 GAREM1이 주요 하류 효과자임을 강조했습니다. 이 결과는 PAK5가 ESCC 진행에 기여하며 예후 바이오마커 및 치료 표적 역할을 할 수 있음을 시사합니다.

서론

전 세계적으로 식도암은 가장 치명적인 악성 종양 중 하나입니다. 중국에서는 식도 편평세포암(ESCC)이 주요 조직학적 아형입니다. 치료적 진전이 이루어졌음에도 불구하고, ESCC 환자의 예후는 여전히 암울하여 5년 생존율이 10%에서 25%에 불과합니다. 이는 주로 조기 발견의 어려움과 효과적인 분자 표적 치료제의 제한된 가용성때문입니다. 표적 치료가 상당한 가능성을 보인 다른 고형 종양과 달리, ESCC에서의 이러한 접근법은 아직 초기 단계에 있으며, 실행 가능한 분자 표적이 부족하다는 점에서 제약을 받고 있습니다.

PAK5는 그룹 II PAK로, 세포골격 역학과 생존 촉진 신호를 통합하며, 3,4,5,6,7,8,9,10,11의 여러 암에서 화학요법 내성과 연관되어 있습니다. MAPK 신호가 ESCC 생물학 및 치료 반응 1,2,12에서 중요한 역할을 한다는 점을 고려하여, PAK5가 ESCC에서 상향 조절되어 MAPK 신호 전달 조절을 통해 악성 표현형을 촉진한다고 가설이 세워졌으며, GAREM1이 어댑터/조절자로 작용할 가능성이 있습니다 13,14,15,16. 이 가설을 검증하기 위해 정량적 IHC, 기능적 유전 교란, 전사체 프로파일링이 사용되었습니다.

ESCC 관리는 일반적으로 식도 절제술, 화학요법, 방사선 치료의 조합으로 이루어집니다. 식도 절제술은 완치가 될 수 있지만, 이환율 위험이 높습니다 4,8. 또한 화학요법과 방사선 치료는 모든 암세포를 제거하지 못해 내성, 재발, 전이가 발생하는 경우가 많습니다 8,9. 면역치료는 최근 종양학에서 두드러진 초점으로 부상했으며, 진행성 암 치료에 효과적임을 입증하고 있습니다. 이러한 관심 증가는 ESCC 조기 진단과 치료 계획에 도움이 될 수 있는 새로운 바이오마커의 긴급한 필요성을 강조합니다. 이전 연구들은 PAK1과 PAK4와 같은 다른 PAK 계열 구성원들이 ESCC에서 증식, 침습, 치료 내성을 촉진한다는 것을 보여주어, 이 키나제 계열이 ESCC 생물학에서 얼마나 중요한지 강조합니다. 그러나 덜 연구된 그룹 II PAK인 PAK5의 역할은 여전히 불분명하여 현재 연구를 동기로 하고 있습니다17,18.

P21 활성화 키나제 5(PAK5)는 PAK II 아계통에 속하며, 2002년에 뇌 특이적 키나아제로 처음 확인되었습니다. 20p12 염색체에 위치한 PAK5는 약 80 kDa 크기의 단백질을 암호화하며, 주로 미토콘드리아와 핵에서 발견되어 세포 조절10,11,13에서 다양한 역할을 합니다. 미토콘드리아 내에서 에너지 대사와 조절을 담당하며, 핵 존재는 유전자 전사와 세포 주기 조절과 연관되어 있습니다. PAK5는 다른 것들에 비해 연구가 적지만, 신경발달, 세포 생존, 암 진행에 매우 중요한 것으로 여겨집니다10. 특히 PAK5는 세포골격 조절, 항세포자멸 기전, 세포 증식에 관여하는 것으로 알려져 있습니다12. 신생세포에서 이 세포의 상향 조절은 신발성 약물 내성과 연관되어 있으며, PAK5 과발현이 종양 세포의 화학요법 내성 증가와 연관되어 있다는 연구 결과와 일치합니다 10,11,13,14. 그러나 PAK5가 ESCC 진행에서 정확히 수행하는 기능은 여전히 밝혀지지 않았습니다. 본 연구는 PAK5가 ESCC 전사체 환경에 미치는 영향과 그 기능적 파급 효과를 조사합니다. 전사체 프로파일링을 통해 ESCC 세포에서 PAK5 활성과 관련된 유전자 발현 변화를 확인하였습니다. 또한, PAK5 조절이 제어된 ESCC 세포 모델을 생성하여 종양 성장과 전이 가능성에서의 역할을 밝혔습니다. ESCC의 기존 바이오마커 발견 전략이 주로 서부 블로팅이나 단일 모달리티 전사체 측정에 의존하는 것과 달리, 현재의 워크플로우는 정량적 면역조직화학, 전사체 프로파일링, 기능적 분석법을 통합합니다. 이 결합된 접근법은 분자 및 표현형 검증을 동시에 가능하게 하여 기전적 통찰을 제공하고 생물학적 관련성을 향상시킵니다. 또한, 프로토콜은 쌍으로 이루어진 종양 및 인접 조직 샘플, 표준화된 면역염색 절차, 고품질 RNA 입력(RNA 무결 번호 ≥ 7)을 사용하여 시퀀싱을 수행하는 실험적 재현성을 강조합니다. 이러한 특징들은 특히 ESCC 내에서 임상적으로 의미 있는 키나제 기반 조절 네트워크를 정의하려는 연구에서 검사법의 견고성과 적용성을 향상시킵니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

모든 절차는 하이난 의과대학 제2부속병원 윤리위원회의 승인을 받았습니다(승인번호 LW2022602), 그리고 헬싱키 선언에 따라 각 참가자로부터 사전 동의를 받았습니다. 이 연구에 사용된 시약과 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 환자 및 조직 샘플 수집

총 40명의 병리학적으로 확진된 ESCC 환자가 등록되었으며, 모두 수술 전 간 및 신장 기능이 정상이었다. 종양 표본(그룹 T)과 인접한 정상 조직(그룹 N; 종양 가장자리에서 ≥ 2cm)을 수술 직후 채취하였다. 조직은 파라핀 임베딩하기 전 7일간 상온에서 PBS에서 4% 파라포름알데히드(PFA)에 고정되었습니다.

2. 면역조직화학 염색

파라핀 내재 블록은 5 μm 두께로 절단되어 60 °C에서 1시간 동안 베이킹되었습니다. 절편은 자일렌 대체물로 탈파라핀화되고, 등급 에탄올로 재수화된 후, 10 mM 시트레이트 나트륨 버퍼(pH 6.0)에서 95-98 °C에서 20분간 항원 회취를 했습니다. 내인성 과산화효소 활성은 3% 과산화수소로 10분간 소결한 후, 상온에서 5% 정상 혈청으로 30분간 차단하였다. 절편은 4°C에서 항-PAK5 1차 항체(1:100 희석, 재료표 참조)와 함께 12-16시간 동안 배큐되었다. PBS 세척 후, 슬라이드는 고추냉이 과산화효소 결합된 2차 항체와 30분간 실온에서 배양하고, 색이 나올 때까지 DAB로 현상했으며(1-5분, 과도한 염색을 방지하기 위해 현미경으로 모니터링), 헤마톡실린으로 30-60초간 카운터 염색을 했습니다. 절편은 탈수, 장착, 밝시야 현미경 촬영을 했습니다. 염색 강도와 양성 세포의 비율은 영상 분석 소프트웨어로 각 절면당 최소 5개의 무작위 필드(200× 배율)를 사용하여 정량화하였다. 정량화 방법은 H-점수 계산을 채택했으며, 공식은 다음과 같습니다: H-점수 = ∑(염색 강도 등급 × 양성 세포 비율) (강도는 0 = 음성, 1 = 약, 2 = 중간, 3 = 강함; 백분율은 0-25%, 26-50%, 51-75%, 76-100%로 분류됨). 신뢰성을 보장하기 위해 두 명의 독립 병리학자가 맹채 채점했으며, 관찰자 간 합의 κ 값은 0.75≥ 수행하였습니다. 품질 관리 기준은 엄격히 적용되었습니다: 양성 대조군(알려진 PAK5 양성 ESCC 조직)과 음성 대조군(1차 항체를 PBS로 대체)은 검증을 통과해야 합니다; 배경 염색 강도는 미리 설정된 임계값 이하여야 합니다(예: H 점수 < 50); 중복 배치 간 염색 결과의 변동 계수(CV)는 실험적 변동성을 배제하기 위해 <20%여야 합니다.

3. 세포주와 배양

KYSE-150(인간 ESCC)과 HEK-293(바이러스 포장) 세포는 단거리 연합 반복(STR) 프로파일링을 통해 인증되었으며, 마이코플라즈마가 없는 것으로 확인되었습니다. KYSE-150 세포는 RPMI-1640 배양지에 10% 태아 소 혈청(FBS)과 1% 페니실린-스트렙토마이신(100 U/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신)을 보충하여 배양하였다. HEK-293 세포는 동일한 첨가제를 보충한 DMEM에서 유지되었습니다. 세포는 70%-80% 합류율에 도달하면 0.25% 트립신-EDTA를 사용해 하부 배양하였고, 각 실험 24시간 전에는 적절한 밀도로 시딩되었습니다.

4. 렌티바이럴 벡터 구성 및 감염

렌티바이러스 벡터는 PAK5(pLV-EF1α-PAK5-PGK-Puro) 과발현 또는 PAK5를 침묵시키도록 설계되었다(pLV-U6-shRNA-PAK5-PGK-Puro). HEK-293 세포는 10cm 접시에 시딩되어 70%-80% 비율로 전이 플라스미드와 합류하여 4:3:1 비율로 플라스미드(gag/pol 및 rev), 그리고 외피 플라스미드(VSV-G)를 패키징하여 지질 기반 형질전환 시약을 사용했으며, 총 DNA 양은 10cm 접시당 ~20 μg였습니다. 배지는 형질염 후 6-8시간 후에 교체되었습니다. 바이러스 상청액은 48시간과 72시간에 채취되어, 500 × g 에서 10분간 원심분리하여 이물질을 제거하고, 0.45 μm 필터를 통해 필터링한 후 농축 또는 −80 °C에서 저장되었습니다. 전달을 위해 감염 하루 전에는 KYSE-150 세포를 시딩하고, 8 μg/mL 폴리브렌 존재 하에 감염 배수(MOI)가 5-10인 바이러스 상정액에 노출시켰습니다. MOI는 감염 단위와 표적 세포 수의 비율로 정의되었습니다. GFP 카운팅 또는 qPCR을 이용한 MOI를 추정하기 위한 사전 실험이 수행되었고, MOI는 5-10으로 선정되었습니다. 배양지는 12-16시간 후에 교체되었고, 0-4 μg/mL 범위의 비형질 세포를 72-96시간 동안 푸로마이신 농도로 처리하여 최소 치명적 농도를 결정하여 푸로마이신 킬 곡선을 확립하였다. 선발 농도는 1-2 μg/mL였고, 유지 농도는 0.5-1 μg/mL였습니다. 세포는 48시간 후 퓨로마이신(1-2 μg/mL)으로 선별되었습니다. PAK5의 과발현 또는 침묵은 RT-qPCR을 통해 PAK5(순방향 5′-CCAAGCCTATGGTGGGACCC-3′, 역방향 5′-AGGCCGTGTGAGGAGGTTTC-3′)와 GAPDH(순방향 5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′, 역방향 5′-AAAGGGTGTAACGCAACTA-3′)에 대한 특정 프라이머를 사용하여 검증되었습니다. PAK5의 상대 발현은 2−ΔΔCt 방법으로 계산되었습니다. 모든 실험은 최소 세 개의 생물학적 복제체로 수행되었습니다.

5. CCK-8 세포 생존성 검사

세포 생존 가능성은 세포 탈수소효소에 의한 WST-8 시약의 환원을 기반으로 한 Cell Counting Kit-8(CCK-8)을 사용하여 평가되었습니다. 로그 성장 방향으로 성장하는 KYSE-150 세포는 100 μL 완전 배지의 96웰 플레이트에 웰당 2,000 세포를 시딩했습니다. 0시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간마다 각 웰에 10μL CCK-8 시약(WST-8 포함)이 첨가되었다. 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션한 후, 마이크로플레이트 리더기로 450 nm(A450) 흡광도를 측정했습니다. 매질만 담긴 빈 우물도 포함되었습니다. 각 실험 그룹은 최소 세 개의 생물학적 복제본을 포함했으며, 각 측정은 다섯 개의 기술적 복제로 수행되었습니다.

6. 군체 형성 분석

KYSE-150의 단일 세포 현탁액은 6웰 플레이트에 1,000 세포를 시딩하고 14일간 배양했으며, 배양지는 2-3일마다 교체했습니다. 군락은 4% PFA로 15분간 고정하고, 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 20% 메탄올에 15분간 염색한 뒤, 물로 헹군 후 자연 건조시켰습니다. 50개 이상의 세포를 포함하는 집단은 이미지 분석 소프트웨어를 사용해 집단 형성률을 계산했습니다.

7. 트랜스웰 침입 분석

8 μm 기공을 가진 인서트는 기저막 매트릭스(인서트당 50 μL, 희석 1:8)로 미리 코팅되어 37 °C에서 1시간 배양했습니다; 시딩 세포 시딩 전에 품질 관리가 수행되었으며, 세포 없는 빈 삽입물과 화학유인제 없는 음성 대조 삽입물을 설치하여 검사 타당성을 검증했고, 기저막 매트릭스 층의 균일성은 육안 검사(또는 더 엄격한 통제를 위한 무게 측정)로 확인되었습니다. 세포는 1% FBS 배지에서 6-12시간 동안 혈청 결핍 상태에 넣었고, 상부 챔버에 2개의 × 10⁵ 세포/mL(삽입물 당 200 μL)를 시딩했습니다. 하부 챔버에는 20% FBS가 화학유인제로 포함된 600μL 매체가 들어 있었습니다. 24시간 배양 후, 상면의 침입되지 않은 세포를 제거하고, 하부 표면의 침입된 세포는 10분간 메탄올로 고정한 후 0.1% 결정 바이올렛으로 15분간 염색했습니다. 염색된 세포는 밝은 필드 현미경으로 촬영되어 인서트당 최소 5개의 무작위 현미경 필드(200× 배율)로 세어졌으며; 카운팅은 주관적 편향을 피하기 위해 블라인드 방식으로 수행되었으며(카운팅 인력은 그룹 배정을 알지 못했습니다).

8. 세포자사멸사의 유동 세포 검사

세포(떠다니는 세포 포함)를 채취하고, PBS로 두 번 세척한 후 결합 버퍼에 1×10 6 세포/mL로 재현탁했습니다. Annexin V-FITC(5 μL)와 프로피듐 요오다이드(5 μL)를 100 μL의 현탁액에 첨가한 후, 실온에서 15분간 어두운 상태로 배양했습니다; 배양 후에는 각 샘플에 400 μL 결합 버퍼를 첨가했습니다. 유세포분석 이전에는 형광 누출을 제거하기 위해 단일 염색 대조군(Annexin V-FITC 단일 염색 세포 및 PI 단일 염색 세포)을 사용하여 보상 조정이 수행되었으며, FSC/SSC 게이트는 세포 잔해 및 집합체 제외 단일 세포를 선택하도록 설정되었습니다. 샘플은 488nm 레이저가 장착된 유세포계로 1시간 이내에 분석되었으며, 샘플당 최소 10,000건의 사건이 획득되었습니다. 세포자멸 지수는 유세포분석 소프트웨어를 사용하여 정량화되었으며, 모든 샘플에 균일한 게이팅 임계값이 적용되어 일관성을 보장했고, 초기 세포자멸 세포(Annexin V⁺/PI⁻)와 후기 세포자사멸성 세포(Annexin V⁺/PI⁺)의 비율을 별도로 보고하여 각 그룹의 세포자멸사 프로필을 특성화하였습니다.

9. RNA 시퀀싱 및 생물정보학 분석

총 RNA를 추출하여 순도(A260/280 1.8에서 2.1 사이)와 무결성(RIN ≥7)을 품질 관리 기준으로 평가하였습니다. mRNA는 올리고(dT) 구슬로 정제한 후 94 °C에서 5-7분간 분해한 후 역전사하여 cDNA로 전사했습니다. 라이브러리는 엔드 리페어, 어댑터 리게이션, PCR 증폭(8-12 사이클)을 통해 준비되었고, Illumina 플랫폼에서 시퀀싱되어 샘플당 3천만에서 5천만 쌍 읽기 쌍으로 150 bp 리드를 생성했습니다. STAR 또는 HISAT2를 사용하여 리드를 절단하여 인간 참조 게놈과 정렬하였습니다. 유전자 수는 featureCounts를 사용해 얻었고, DESeq2로 차별 발현 분석이 수행되었으며, FDR < 0.05 및 |log2 배 변화를 적용했습니다. ≥ 1. 차별 발현 유전자의 기능 풍부 분석은 유전자 온톨로지와 KEGG 경로에 대한 clusterProfiler(벤자미니-호흐버그(BH) 교정 FDR < 0.05를 사용)를 사용하여 수행되었으며, STRING 데이터베이스를 이용해 단백질-단백질 상호작용 네트워크를 구축하였습니다.

10. 통계 분석

연속 데이터는 최소 세 개의 독립 실험에서 ± 평균 표준편당수(SD)로 표현되었습니다. 두 그룹 간 비교는 양측 무쌍 t-검정으로 수행되었고, 세 그룹 이상은 일원 ANOVA 후 Tukey 사후 검정으로 수행되었습니다. 적절한 경우 비모수 검정이 적용되었습니다. 생존 분포는 로그 랭크 검정을 이용한 Kaplan-Meier 분석으로 추정하였다. RNA-seq 데이터의 경우, Benjamini-Hochberg 방법을 사용하여 다중 검사 보정이 수행되었습니다. 정확한 p-값은 그림 범례로 보고되며; 통계적 유의성은 p < 0.05에서 고려되었으며, *는 p < 0.05를, **는 p < 0.01을 나타냅니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

PAK5는 ESCC에서 많이 발현되어 있으며 예후가 좋지 않은 것과 관련이 있습니다
그림 1은 PAK5의 임상 검증부터 기능 및 전사체 분석에 이르기까지의 전체 워크플로우를 보여주며, 이를 통해 GAREM1을 하류 표적으로 식별합니다. PAK5가 GAREM1 을 통해 MAPK 경로를 조절하여 ESCC 진행을 촉진한다는 가설을 검증하기 위해, ESCC 조직에서 PAK5의 발현 패턴과 임상 예후와의 연관성을 조사하였다. 첫째, 유전자 발현 데이터셋 GSE269447은 유전자 발현 옴니버스(GEO) 데이터베이스에서 가져온 것으로, ESCC와 정상 조직 간 유의미하게 차별화된 유전자(DEGs)를 선별하는 데 사용되었다19. 이후 열지도와 화산 도표가 생성되었습니다(그림 2A<...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

본 연구는 임상 샘플, 기능 검사, 전사체 분석을 결합하여 식도 편평세포암(ESCC) 진행에서 PAK5의 역할을 심층적으로 조사합니다. 이 발견들은 PAK5가 ESCC에서 얼마나 관여하고 있는지에 대한 이해를 넓히며, 예후 표지자이자 치료 표적으로서의 잠재력을 강조합니다.

ESCC 조직에서 PAK5의 현저한 과발현과 환자 생존율 저하와의 연관성은 다른 암에서 PAK5가 종양 진행과 예후 악화와 연관된 결과와 일치한다10,11. PAK5를 ESCC 진행의 조절 인자로 규명함으로써, 우리 연구는 키나제 매개 암발생에 대한 더 넓은 이해에 기여하고, 식도암에서 MAPK 경로 조절에 대한 새로운 통찰을 제공합니다. 특히, PAK5만이 ESCC 발병 기전과 관련된 PAK 계열 중 유일한 구성원이 아니며, 이전 연구들은 이 질...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자들은 이 논문에서 보고된 연구에 영향을 미칠 수 있는 상반된 재정적 이해관계나 개인적 관계가 없다고 밝혔다.

감사의 글

이 연구는 중국 하이난성 자연과학기금(보조금 번호 822QN474)의 지원을 받았습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Annexin V-FITC 세포자멸사 검출 키트비요타임 바이오테크놀로지컬C1062S세포자멸증 감지 염색 키트
항-PAK5 항체앱캠AB110069IHC에 대한 1차 항체, 희석 비율 1:100
자동 전기영동 시스템애질런트2100 바이오분석기RNA 무결성 평가
cDNA 합성 키트인비트로젠1896649역전사 키트
크리스탈 바이올렛 용액시그마-올드리치C3886식민지 및 침입용 염료
DMEM 미디엄깁코 (써모피셔)11965092세포 배양 배지
태아 소 혈청 (FBS)깁코 (써모피셔)16000044세포 배양 보충제
유세포계BD 생명과학FACSCanto II세포 분석을 위한 기기
그래프패드 프리즘그래프패드 소프트웨어버전 8통계 분석 및 그래프 작성 소프트웨어
H& E 스테인 키트솔라비오G1120헤마톡실린 및 에오신 염색 용액
HRP 결합 항쥐 IgG앱캠AB150165IHC에 대한 2차 항체
일루미나 노바세쿼 시퀀서일루미나노바세쿼터 6000고처리량 시퀀싱 플랫폼
KYSE-150 세포주리켄 셀 뱅크RCB2057인간 식도 편평암 세포주
리포펙타민 3000서모피셔L3000008트랜스펙션 시약
마이크로플레이트 리더바이오텍 인스트루먼츠ELx808흡광도 측정 기기
DynabeadTM Oligo(dT)25s써모피셔 사이언티브61005mRNA 정제를 위해
페니실린-스트렙토마이신깁코 (써모피셔)15140122세포 배양용 항생제
프로피듐 요오다이드 (PI)시그마-올드리치P4864DNA 염색 염료
RPMI-1640 미디엄깁코 (써모피셔)11875093세포 배양 배지
분광광도계써모피셔나노드롭 ND-1000RNA 농도 및 순도 측정
SPSS 소프트웨어IBM버전 23통계 분석 소프트웨어
트랜스웰 인서트코닝3422세포 침범 분석 삽입물

참고문헌

  1. Chen, W., et al. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 66 (2), 115-132 (2016).
  2. Pennathur, A., Gibson, M. K., Jobe, B. A., Luketich, J. D. Oesophageal carcinoma. Lancet. 381 (9864), 400-412 (2013).
  3. Zhang, D. G., et al. P21-activated kinase 5 potentiates the chemoresistant phenotype of liver cancer. Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 47(2021).
  4. Kumar, R., Sanawar, R., Li, X., Li, F. Structure, biochemistry, and biology of PAK kinases. Gene. 605, 20-31 (2017).
  5. Wang, X. X., et al. PAK5-EGR1-MMP2 signaling controls the migration and invasion in breast cancer cell. Tumour Biol. 34 (5), 2721-2729 (2013).
  6. Li, D., Yao, X., Zhang, P. The overexpression of p21-activated kinase 5 (PAK5) promotes paclitaxel-chemoresistance of epithelial ovarian cancer. Mol Cell Biochem. 383 (1-2), 191-199 (2013).
  7. Zhang, D. G., et al. P21-activated kinase 5 affects cisplatin-induced apoptosis and proliferation in hepatocellular carcinoma cells. Tumour Biol. 36 (5), 3685-3691 (2015).
  8. Li, T. T., et al. Microrna-138-1-3p sensitizes sorafenib to hepatocellular carcinoma by targeting PAK5 mediated β-catenin/ABCB1 signaling pathway. J Biomed Sci. 28 (1), 56(2021).
  9. Huo, F. C., Pan, Y. J., Li, T. T., Mou, J., Pei, D. S. PAK5 promotes the migration and invasion of cervical cancer cells by phosphorylating satb1. Cell Death Differ. 26 (6), 994-1006 (2019).
  10. Zhang, Y. C., et al. PAK5-mediated phosphorylation and nuclear translocation of nf-κb-p65 promotes breast cancer cell proliferation in vitro and in vivo. J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 146(2017).
  11. Chen, S., et al. Vaccinia-related kinase 2 blunts sorafenib's efficacy against hepatocellular carcinoma by disturbing the apoptosis-autophagy balance. Oncogene. 40 (19), 3378-3393 (2021).
  12. Cao, J. X., Lu, Y. Targeting CDC7 improves sensitivity to chemotherapy of esophageal squamous cell carcinoma. Onco Targets Ther. 12, 63-74 (2019).
  13. Blagoev, B., Ong, S. E., Kratchmarova, I., Mann, M. Temporal analysis of phosphotyrosine-dependent signaling networks by quantitative proteomics. Nat Biotechnol. 22 (9), 1139-1145 (2004).
  14. Kratchmarova, I., Blagoev, B., Haack-Sorensen, M., Kassem, M., Mann, M. Mechanism of divergent growth factor effects in mesenchymal stem cell differentiation. Science. 308 (5727), 1472-1477 (2005).
  15. Olsen, J. V., et al. Global, in vivo, and site-specific phosphorylation dynamics in signaling networks. Cell. 127 (3), 635-648 (2006).
  16. Tashiro, K., et al. a novel adaptor protein for growth factor receptor-bound protein 2, contributes to cellular transformation through the activation of extracellular signal-regulated kinase signaling. J Biol Chem. 284 (30), 20206-20214 (2009).
  17. Zou, X., et al. PRMT5-PAK1 signaling participates in metastasis and is associated with poor prognosis in human esophageal carcinoma. Anticancer Res. 44 (2), 593-604 (2024).
  18. Wei, Y., et al. Nuplazid suppresses esophageal squamous cell carcinoma growth in vitro and in vivo by targeting PAK4. Br J Cancer. 126 (7), 1037-1046 (2022).
  19. Nakagawa, S., et al. An organoid library of human esophageal squamous cell carcinomas (ESCCs) uncovers the chemotherapy-resistant ESCC features. Commun Biol. 8 (1), 507(2025).
  20. Huang, H., et al. P21-activated kinase 4 promotes the progression of esophageal squamous cell carcinoma by targeting lasp1. Mol Carcinog. 60 (1), 38-50 (2020).
  21. Zhong, H., et al. Overexpression of microrna-19a-3p promotes lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma via the rAC1/CDC42-PAK1 pathway. Transl Cancer Res. 10 (6), 2694-2706 (2021).
  22. Yu, G., Wang, L. G., Han, Y., He, Q. Y. Clusterprofiler: An R package for comparing biological themes among gene clusters. Omics. 16 (5), 284-287 (2012).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

PAK5 발현예후 바이오마커치료 표적세포 증식세포 이동면역조직화학염색카플란-마이어 분석mRNA 시퀀싱
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.