LC-MS/MS를 이용한 1차 ALL 세포 내 빈크리스틴 세포내 정량을 위한 외부 체외 미세법 개발 및 표준화

Adrielli  Caroline Soares; Guilherme Reis de-Oliveira; Samara de Sousa Mariano; Juliana Ronchi Corrêa; Amilcar Cardoso de Azevedo; Fábio Cesar Gozzo; José Andrés Yunes

doi:10.3791/69535

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방법 논문

LC-MS/MS를 이용한 1차 ALL 세포 내 빈크리스틴 세포내 정량을 위한 외부 체외 미세법 개발 및 표준화

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DOI:

10.3791/69535

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2026년 1월 23일

Adrielli Caroline Soares¹ , Guilherme Reis de-Oliveira² , Samara de Sousa Mariano¹ , Juliana Ronchi Corrêa¹ , Amilcar Cardoso de Azevedo³ , Fábio Cesar Gozzo² , José Andrés Yunes¹

¹Leukemia Biology Laboratory, Boldrini Children's Center, ²Mass Spectrometry Laboratory, Boldrini Children's Center, ³Boldrini Children's Center

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 소아 1차 ALL 세포에서 빈크리스틴 축적의 상대적 정량화를 위한 LC-MS/MS 방법을 확립하고 최적화하는 것을 목표로 했습니다.

초록

소아 급성 림프구성 백혈병(ALL) 원발 세포에서 빈크리스틴(VCR)을 정량화하는 것은 샘플별 약물 흡수 차이를 이해하고 희소한 환자 자료를 이용한 실험 연구를 지원하는 데 필수적입니다. 여기서는 환자 유래 이종이식(PDX)을 통해 얻은 1차 세포에 최적화된 간소화된 LC-MS/MS 미세방법을 제시하며, 제한된 세포 가용성, 작은 세포 크기, 다중 세척 후 재현 가능한 회복 필요성 등 주요 과제를 해결합니다. 1시간에서 5시간의 시간 실험 결과, 3시간의 잠복 기간이 가장 높고 일관된 세포내 VCR 농도를 제공하며, 복제 간 변동성이 낮음을 보여주었습니다. 방법 최적화 결과, 조건당 2.5 × 10⁶ 셀을 사용할 때가 반복 실험에서 더 큰 분산을 보인 1×^{6 셀보다} 분석적 견고성이 향상됨이 입증되었습니다. 추가적인 중요한 개선으로는 단백질 침전 효율을 높이기 위한 냉메탄올 사용과 절차적 변동을 모니터링하고 최소화하는 내부 표준 도입이 포함되었습니다. 이 방법은 관련 농도 범위 내에서 세포 내 VCR 의 민감하고 정밀한 정량화를 가능하게 하지만, 3시간 배양 후에는 최소 시험 용량(0.01 μM)을 정량화할 수 없었습니다. 전반적으로 이 미세방법은 1차 ALL 샘플에서 세포 내 VCR 측정을 위한 실용적이고 재현 가능하며 확장 가능한 접근법을 제공합니다. 이 설계는 비교 분석, 체외 모델 검증, 그리고 세포 내 약물 정량화를 더 넓은 약리학적 평가에 통합하는 미래 방법론적 응용을 지원합니다.

서론

급성 림프구성 백혈병(ALL)은 전체 소아암의 약 25%를 차지하며, 여전히 가장 흔한 소아 악성 종양입니다 ^1,2. 치료법의 발전으로 생존율이 현저히 향상되어 현재 90%를 넘었지만, ALL의 생물학적 복잡성은 세포 수준에서 질병을 더 잘 특성화하는 도구 개발을 위한 노력을 계속 촉진하고 있습니다^.

빈카 알칼로이드, 특히 VCR은 모든 치료 프로토콜의 핵심 구성 요소^입니다. VCR은 세포 내 세포 내 세포독성 효과를 발휘하기 때문에, 백혈병 세포에서 그 흡수와 축적을 이해하는 것은 약물 반응, 약리역학, 세포 행동 등 체외 시스템에서 연구하는 데 필수적입니다. 그러나 대부분의 세포 내 약물 농도 평가 방법은 간접 측정이나 반정량적 방법에 의존하여 재현성과 민감도를 제한합니다 ^5,6,7.